RU2377295C1 - Питательная среда для культивирования клеток млекопитающих - Google Patents
Питательная среда для культивирования клеток млекопитающих Download PDFInfo
- Publication number
- RU2377295C1 RU2377295C1 RU2008124177/13A RU2008124177A RU2377295C1 RU 2377295 C1 RU2377295 C1 RU 2377295C1 RU 2008124177/13 A RU2008124177/13 A RU 2008124177/13A RU 2008124177 A RU2008124177 A RU 2008124177A RU 2377295 C1 RU2377295 C1 RU 2377295C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nitrogen
- content
- vitamins
- hydrolyzate
- amino acids
- Prior art date
Links
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 28
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title abstract description 16
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 title abstract 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 66
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims abstract description 50
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 40
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 33
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims abstract description 32
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims abstract description 32
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims abstract description 30
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims abstract description 30
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims abstract description 30
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims abstract description 30
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 21
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims abstract description 17
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 6
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 claims abstract 3
- 241000209094 Oryza Species 0.000 claims description 30
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 claims description 30
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 30
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 19
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 17
- 239000001763 2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium Substances 0.000 claims description 15
- 235000019743 Choline chloride Nutrition 0.000 claims description 15
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims description 15
- 239000004158 L-cystine Substances 0.000 claims description 15
- 235000019393 L-cystine Nutrition 0.000 claims description 15
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 15
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 claims description 15
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229960003178 choline chloride Drugs 0.000 claims description 15
- SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M choline chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCO SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 claims description 15
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 claims description 15
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 claims description 15
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 15
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 claims description 15
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 claims description 15
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 15
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 claims description 15
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 11
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 10
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 claims description 10
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 claims description 10
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 10
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 claims description 10
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 claims description 10
- ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229960004172 pyridoxine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 10
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 claims description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 235000000638 D-biotin Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000011665 D-biotin Substances 0.000 claims description 9
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 claims description 9
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 claims description 9
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims description 9
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 claims description 9
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 claims description 9
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 claims description 9
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 claims description 7
- FDJOLVPMNUYSCM-UVKKECPRSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2,7, Chemical compound [Co+3].N#[C-].C1([C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)[N-]\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O FDJOLVPMNUYSCM-UVKKECPRSA-L 0.000 claims description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical compound N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 claims description 6
- FAPWYRCQGJNNSJ-CTWWJBIBSA-L calcium;3-[[(2s)-2,4-dihydroxy-3,3-dimethylbutanoyl]amino]propanoate Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-CTWWJBIBSA-L 0.000 claims description 6
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 6
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Natural products CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- FCHXJFJNDJXENQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O FCHXJFJNDJXENQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 claims description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229940045999 vitamin b 12 Drugs 0.000 claims 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 abstract description 23
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 abstract description 6
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 abstract description 6
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 abstract 2
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 abstract 2
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 abstract 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 70
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 16
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 9
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 8
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 6
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 5
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 101000993347 Gallus gallus Ciliary neurotrophic factor Proteins 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- -1 papain Chemical compound 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical class OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 1
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 244000037640 animal pathogen Species 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 238000013452 biotechnological production Methods 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Chemical class 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 229960003581 pyridoxal Drugs 0.000 description 1
- 235000008164 pyridoxal Nutrition 0.000 description 1
- 239000011674 pyridoxal Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Питательная среда для культивирования клеток млекопитающих включает сбалансированный солевой раствор, источник питательных веществ и ростстимулирующих факторов в виде растительного гидролизата, аминокислоты и витамины. В качестве растительного гидролизата она содержит ферментативный гидролизат рисовой муки с рН 6,2-6,7, содержанием аминного азота 2,2-2,8 мас.%, остаточного азота 3,0-4,2 мас.% и/или соевой муки с рН 6,2-6,7, содержанием аминного азота 2,9-3,5 мас.%, остаточного азота 5,6-6,6 мас.% при следующем содержании компонентов: ферментативный гидролизат рисовой и/или соевой муки 3-20 г/л, аминокислоты 0,11-0,86 г/л, витамины 0,55-22,5 мг/л, сбалансированный солевой раствор до 1 л. Это обеспечивает стандартизованность и удешевление питательной среды специально для культивирования клеток MDCK и Vero, используемых в производстве культуральных противогриппозных вакцин. 3 з.п. ф-лы, 3 табл.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к питательным средам, пригодным для роста и пролиферации клеток млекопитающих и для репродукции в них вирусов, например вируса гриппа.
Питательные среды для культур клеток предназначены для поддержания необходимых для их роста физико-химических условий и обеспечения клеток питательными веществами, необходимыми для наработки клеточной биомассы. Развитие биотехнологии, и ее выход на промышленный уровень привело к увеличению потребности и расширению ассортимента питательных сред для культур клеток. Конструирование питательных сред на основе гидролизатов растений позволяет существенно уменьшить риск контаминации препаратов животными патогенами, а также заметно снизить стоимость среды.
Известна питательная среда Axcevir для культивирования клеток MDCK. Среда полностью синтетическая содержит аминокислоты, витамины, глюкозу, минеральные соли и некоторые другие вещества. Среда обеспечивает высокие индексы пролиферации культуры клеток MDCK и степень стандартности исследования (Питательная среда Axcevir-MDCK, производства фирмы Stem Alpha, Франция. Информация о фирме в Интернете: http://www.stemalpha. fr/).
Однако в связи с тем, что указанная среда изготавливается во Франции и импортируется в Российскую Федерацию, в условиях биотехнологического производства, где требуется большое количество питательной среды для получения клеточной биомассы, использование среды нерентабельно. При применении данной среды резко возрастает стоимость вирусных вакцин и других препаратов, сырьем для которых она является.
Известна питательная среда на основе среды Игла MEM с добавлением 5-10% фетальной сыворотки и трипсина в количестве (0,05-1,0 мкг/мл) для культивирования аттестованных перевиваемых линий клеток (Vero, MDCK) для наработки высокопродуктивных штаммов вируса гриппа (патент США №6344354, МПК С12N 5.00, C12N 7/00, опубл. 05.02.2002).
Однако использование для культивирования клеток питательной среды Игла MEM с добавлением 5-10% фетальной сыворотки приводит к внесению в конечный продукт (вакцину) компонентов сырья животного происхождения, которые могут являться источником посторонних вирусов, микоплазм, прионов, а также вызывать дополнительную аллергизацию иммунизируемого организма.
Наиболее близким аналогом (прототипом) является питательная среда для культивирования клеток млекопитающих, включающая сбалансированную синтетическую среду DMEM/F12, 199 или RPMI, источник питательных веществ и ростстимулирующих факторов в виде растительного гидролизата, аминокислоты и витамины (патент РФ №2266325, МПК C12N 5/00, опубл. 20.12.2005). Питательная среда DMEM/F12 содержит 20 аминокислот и 11 витаминов, среда 199 - 21 аминокислоту и 17 витаминов, RPMI - 20 аминокислот и 11 витаминов.
Однако данная питательная среда предназначена для культивирования клеток животных СНО и ВНК. Данных по культивированию животных клеток MDCK и Vero в описании к патенту не имеются. Растительные гидролизаты в жидкой форме получены путем температурного на них воздействия с получением бульона. Данная технология не позволяет обеспечить глубокое расщепление субстрата, что обуславливает низкий выход аминокислот и витаминов.
Техническим результатом изобретения является создание более стандартизованной и дешевой питательной среды специально для культивирования клеток MDCK и Vero, используемых в производстве культуральных противогриппозных вакцин.
Указанный технический результат достигается тем, что в питательной среде для культивирования клеток млекопитающих, включающей сбалансированный солевой раствор, источник питательных веществ и ростстимулирующих факторов в виде растительного гидролизата, аминокислоты и витамины согласно изобретения в качестве растительного гидролизата она содержит ферментативный гидролизат рисовой и/или соевой муки при следующем содержании компонентов:
| ферментативный гидролизат рисовой | |
| и/или соевой муки | 3-20 г/л |
| аминокислоты | 0,11-0,86 г/л |
| витамины | 0,55-22,5 мг/л |
| сбалансированный солевой раствор | до 1 л |
В качестве сбалансированного солевого раствора она содержит раствор Хенкса, в качестве растительного гидролизата она содержит ферментативный гидролизат соевой муки, в качестве аминокислот она содержит L-глутамин, L-цистин и в качестве витаминов - холин хлорид, фолиевая кислота, никотинамид, кальция пантотенат, пиридоксаль гидрохлорид, тиамин гидрохлорид, мио-инозитол и рибофлавин при следующем содержании компонентов:
| ферментативный гидролизат соевой муки | 3-10 г/л |
| аминокислоты: | |
| L-глутамин | 0,1-0,3 г/л |
| L-цистин | 0,01-0,04 г/л |
| витамины: | |
| холин хлорид | 0,2-1,0 мг/л |
| фолиевая кислота | 0,2-1,0 мг/л |
| никотинамид | 0,2-1,0 мг/л |
| кальция пантотенат | 0,2-1,0 мг/л |
| пиридоксаль гидрохлорид | 0,2-1,0 мг/л |
| тиамин гидрохлорид | 0,2-1,0 мг/л |
| мио-инозитол | 0,2-1,0 мг/л |
| рибофлавин | 0,02-0,1 мг/л |
| сбалансированного солевого раствора Хенкса | до 1 л |
В качестве сбалансированного солевого раствора она содержит раствор Эрла, в качестве растительного гидролизата она содержит ферментативный гидролизат рисовой муки, в качестве аминокислот: L-глутамин, L-цистин, L-аргинин, триптофан и в качестве витаминов: Д-биотин, холин-хлорид, фолиевая кислота, никотинамид, никотиновая кислота, кальция пантотенат, пиридоксин гидрохлорид, тиамин гидрохлорид, рибофлавин, мио-инозитол, витамин B12 при следующем содержании компонентов:
| ферментативный гидролизат рисовой муки | 3-10 г/л |
| аминокислоты: | |
| L-глутамин | 0,1-0,3 г/л |
| L-цистин | 0,01-0,04 г/л |
| L-аргинин | 0,01-0,5 г/л |
| триптофан | 0,002-0,02 г/л |
| витамины: | |
| D-биотин | 0,01-0,5 мг/л |
| холин-хлорид | 0,2-5 мг/л |
| фолиевая кислота | 0,01-0,5 мг/л |
| никотинамид | 0,02-1,0 мг/л |
| никотиновая кислота | 0,02-1,0 мг/л |
| кальция пантотенат | 0,01-0,5 мг/л |
| пиридоксин гидрохлорид | 0,02-1,0 мг/л |
| тиамин гидрохлорид | 0,01-0,5 мг/л |
| рибофлавин | 0,01-0,5 мг/л |
| мио-инозитол | 0,04-2,0 мг/л |
| витамин В12 | 0,2-10 мг/л |
| сбалансированный солевой раствор Эрла | до 1 л |
В качестве сбалансированного солевого раствора она содержит раствор Эрла, в качестве растительного гидролизата она содержит ферментативный гидролизат рисовой муки и ферментативный гидролизат соевой муки, в качестве аминокислот - L-глутамин, L-цистин, L-аргинин, триптофан, а в качестве витаминов - D-биотин, холин-хлорид, фолиевая кислота, никотинамид, никотиновая кислота, кальция пантотенат, пиридоксин гидрохлорид, тиамин гидрохлорид, рибофлавин, мио-инозитол, витамин В12 при следующем содержании компонентов:
| ферментативный гидролизат соевой муки | 1-10 г/л |
| ферментативный гидролизат рисовой муки | 3-10 г/л |
| ферментативный гидролизат соевой муки | 1-10 г/л |
| аминокислоты: | |
| L-глутамин | 0,1-0,3 г/л |
| L-цистин | 0,01-0,04 г/л |
| L-аргинин | 0,01-0,5 г/л |
| триптофан | 0,002-0,02 г/л |
| витамины: | |
| Д-биотин | 0,01-0,5 мг/л |
| холин-хлорид | 0,2-5 мг/л |
| фолиевая кислота | 0,01-0,5 мг/л |
| никотинамид | 0,02-1,0 мг/л |
| никотиновая кислота | 0,02-1,0 мг/л |
| кальция пантотенат | 0,01-0,5 мг/л |
| пиридоксин гидрохлорид | 0,02-1,0 мг/л |
| тиамин гидрохлорид | 0,01-0,5 мг/л |
| рибофлавин | 0,01-0,5 мг/л |
| мио-инозитол | 0,04-2,0 мг/л |
| витамин B12 | 0,2-10 мг/л |
| сбалансированный солевой раствор Эрла | до 1 л |
Заявляемая питательная среда содержит ферментативный гидролизат растительных белков, который включает компоненты с высокой питательной ценностью, в частности ферментативный гидролизат рисовой и/или соевой муки, в который дополнительно добавляют не более 4 аминокислот и до 11 витаминов, что позволяет снизить цену конечного продукта. Среды обладают высокой ростстимулирующей активностью по отношению к клеточным культурам Vero и MDCK, используемым в производстве культуральных противогриппозных вакцин. Кроме того, настоящее изобретение позволяет снизить содержание сыворотки в питательной среде. Заявляемая среда для культивирования клеток млекопитающих, содержащая ферментативные гидролизаты рисовой и соевой муки, с пониженной концентрацией сыворотки крови КРС, способна поддерживать жизнеспособность и пролиферацию клеток также эффективно, как и среда, содержащая сыворотку.
Пример 1. Получение ферментативного гидролизата
Указанный результат достигается тем, что ферментативный гидролизат соевой муки и рисовой муки получают при следующих условиях:
Соотношение субстрат: вода 1:8.
Соотношение фермент: субстрат от 0,05 г до 0,2 г фермента на 1 г субстрата (оптимально 0,15).
Температура гидролиза 38-40°С.
рН гидролиза от 7,6 до 8,0 ед. рН (оптимально 7,6-7,8 ед. рН).
время гидролиза от 5 до 24 ч, (оптимально 15 ч).
Получение ферментативного гидролизата.
К обезжиренной и промытой подкисленной водой для удаления окрашенных пигментов соевой (рисовой) муке, добавляют очищенную воду и протеолитический фермент, например папаин, устанавливают необходимые для гидролиза температуру и величину рН. Критерием окончания процесса гидролиза служит постоянство величины аминного азота. После окончания процесса гидролиза смесь прогревают для инактивации фермента при температуре не более 100°С в течение 5-10 мин, затем охлаждают и фильтруют через картон для фильтрации биологических жидкостей, а затем микропористые капроновые фильтры. Приготовленный таким образом жидкий раствор гидролизата лиофильно высушивают.
Полученный ферментативный гидролизат имеет следующие физико-химические характеристики:
Концентрация водородных ионов 1%-ного раствора гидролизата, рН в пределах 6,2-6,7 ед. рН.
Растворимость 5 г гидролизата в 100 мл очищенной воды, не более 3 мин.
Массовая доля влаги, не более 3%.
Массовая доля общего азота, в пределах 3,2-4,6% для гидролизата рисовой муки и для гидролизата соевой муки 5,8-7,6%.
Массовая доля аминного азота, в пределах 2,2-2,8% для гидролизата рисовой муки и для гидролизата соевой муки 2,9-3,5%.
Массовая доля остаточного азота в пределах 3,0-4,2% для гидролизата рисовой муки и для гидролизата соевой муки 5,6-6,6%.
Строгое соблюдение условий гидролиза и регулярный контроль физико-химических параметров в процессе гидролиза позволяет получать в достаточной степени стандартный продукт, имеющий разброс количественных показателей аминокислот не более 20%.
Пример 2. Составы питательных сред
Подобраны концентрации ферментативных гидролизатов, обеспечивающие оптимальные условия для роста и жизнедеятельности клеточных культур культуры (от 3 до 10 г/л), что соответствует содержанию аминного азота в традиционных средах (Игла MEM -120 мг/л, 199 М - 80 мг/л).
Среды для культивирования клеточных культур готовят следующим образом.
1. Питательная среда на основе ферментативного гидролизата соевой муки: в 1 л сбалансированного раствора Хенкса растворяют ферментативный гидролизат в количестве от 3 до 10 г (оптимально 5 г), L-глутамин в количестве 0,1-0,3 г/л среды), L-цистин в количестве 0,01-0,04 г/л среды и следующие 8 витаминов:
холин хлорид от 0,2 до 1,0 мг/л среды,
фолиевая кислота от 0,2 до 1,0 мг/л,
никотинамид от 0,2 до 1,0 мг/л,
кальция пантотенат от 0,2 до 1,0 мг/л,
пиридоксаль гидрохлорид от 0,2 до 1,0 мг/л,
тиамин гидрохлорид от 0,2 до 1,0 мг/л,
мио-инозитол от 0,2 до 1,0 мг/л,
рибофлавин от 0,02 до 0,1 мг/л.
2. Питательная среда на основе ферментативного гидролизата рисовой муки: в 1 л сбалансированного раствора Эрла растворяют ферментативный гидролизат в количестве от 3 до 10 г (оптимально 5 г), добавляют аминокислоты: L-глутамин в количестве 0,1-0,3 г/л среды, L-цистин в количестве 0,01-0,04 г/л среды, L-аргинин в количестве 0,01-0,5 г/л среды, триптофан в количестве 0,002-0,02 г/л среды, и следующие 11 витаминов:
D-биотин от 0,01 до 0,5 мг/л среды,
холин-хлорид от 0,2 до 5 мг/л среды,
фолиевая кислота от 0,01 до 0,5 мг/л среды,
никотинамид от 0,02 до 1,0 мг/л среды,
никотиновая кислота от 0,02 до 1,0 мг/л среды,
кальция пантотенат от 0,01 до 0,5 мг/л среды,
пиридоксин гидрохлорид от 0,02 до 1,0 мг/л среды,
тиамин гидрохлорид от 0,01 до 0,5 мг/л среды,
рибофлавин от 0,01 до 0,5 мг/л среды,
мио-инозитол от 0,04 до 2,0 мг/л среды
витамин В12 от 0,2 до 10 мг/л среды.
3. Питательная среда на основе смеси ферментативных гидролизатов рисовой и соевой муки: в 1 л сбалансированного раствора Эрла растворяют ферментативный гидролизат рисовой муки в количестве от 3 до 10 г (оптимально 5 г), ферментативный гидролизат соевой муки в количестве от 1 до 10 г (оптимально 2 г), и добавляют аминокислоты: L-глутамин в количестве 0,1-0,3 г/л среды, L-цистин в количестве 0,01-0,04 г/л среды, L-аргинин в количестве 0,01-0,5 г/л среды, триптофан в количестве 0,002-0,02 г/л среды, и следующие 11 витаминов:
D-биотин от 0,01 до 0,5 мг/л среды,
холин-хлорид от 0,2 до 5 мг/л среды,
фолиевая кислота от 0,01 до 0,5 мг/л среды,
никотинамид от 0,02 до 1,0 мг/л среды,
никотиновая кислота от 0,02 до 1,0 мг/л среды,
кальция пантотенат от 0,01 до 0,5 мг/л среды,
пиридоксин гидрохлорид от 0,02 до 1,0 мг/л среды,
тиамин гидрохлорид от 0,01 до 0,5 мг/л среды,
рибофлавин от 0,01 до 0,5 мг/л среды,
мио-инозитол от 0,04 до 2,0 мг/л среды,
витамин B12 от 0,2 до 10 мг/л среды.
Пример 3. Данные по оценке ростстимулирующих свойств питательной среды (ПС)
Проведена оценка ростстимулирующих свойств ПС в процессе пассирования на ней перевиваемых линий клеток Vero и MDCK. В качестве контроля для сравнительного анализа ростовых свойств для клеточной культуры Vero использовали синтетическую среду Игла MEM с добавлением 10% сыворотки крови КРС. Пролиферативная активность клеток Vero, культивируемых на питательных средах представлена в таблице 1.
| Таблица 1 | |||
| Пролиферативная активность клеток Vero | |||
| Индексы пролиферации клеток Vero, выращенных на средах | |||
| Среда Игла MEM +10% сыворотки крови КРС - контроль | Среда на основе гидролизата соевой муки +5% сыворотки крови КРС | Среда на основе гидролизата рисовой муки +5% сыворотки крови КРС | Среда на основе смеси гидролизатов рисовой и соевой муки +5% сыворотки крови КРС |
| 4,1±0,1 | 3,9±0,2 | 4,0±0,2 | 4,2±0,2 |
Клетки Vero, выращенные в экспериментальных средах, имели форму, характерную для данного вида клеток, с четко выраженными границами, без признаков дегенерации и морфологически не отличались от клеток, выращенных в контрольной среде.
Пролиферативная активность клеток MDCK, культивируемых на мало сывороточных питательных средах представлена в таблице 2.
| Таблица 2 | ||
| Пролиферативная активность клеток MDCK | ||
| Индексы пролиферации клеток MDCK, выращенных на средах | ||
| Среда Игла MEM +5% фетальной сыворотки - контроль | Среда Axcevir-MDCK +2% фетальной сыворотки - контроль | Среда на основе гидролизата рисовой муки +2% фетальной сыворотки |
| 4,0±0,1 | 5,4±0,2 | 4,5±0,1 |
Культура клеток MDCK, пассируемая на питательной среде Игла MEM с добавлением 5% сыворотки крови плодов коров (контрольная культура клеток), состоит из эпителиоподобных клеток с крупными ядрами разнообразной формы, содержащими крупные ядрышки от одного до нескольких. Цитоплазма иногда ячеистая с включениями. Культура клеток MDCK формирует монослой на 2-3 сутки роста. Индекс пролиферации культуры после I пассажа составил 4,0.
При пассировании клеточной культуры на питательной среде для культивирования клеток MDCK (Axcevir-MDCK) с добавлением 2% сыворотки крови плодов коровы (вторая контрольная клеточная культура) клетки имеют типичную для данной линии морфологию, формируют монослой на 2-3 сутки, сохраняют высокую пролиферативную активность (индекс пролиферации клеточной культуры после I пассажа составил 5,4).
При пассировании клеток MDCK на экспериментальной среде на основе ферментативных гидролизатов рисовой муки с добавлением 2% сыворотки крови плодов коровы отмечаются незначительные изменения морфология клеток, клетки несколько удлиненной веретенообразной формы, при этом наложения слоев клеток не наблюдается. Несмотря на незначительные отличия морфологии клеток, пассируемых в экспериментальной среде по сравнению с пассируемыми в контрольных средах ростстимулирующая активность питательной среды на основе гидролизата рисовой муки сопоставима с контролем (индекс пролиферации клеток после I пассажа составлял 4,5).
Таким образом, описываемый способ получения ПС на основе ферментативных гидролизатов рисовой и соевой муки позволяет получить среды с высокими росстимулирующими свойствами для некоторых перевиваемых клеточных культур млекопитающих, что позволяет применять ее для получения большого количества клеточной биомассы в биотехнологических производствах.
Пример 4. Данные по оценке репродукция холодоадаптированных реассортантных вакцинных штаммов вируса гриппа H1N1, H3N2 и В
Проведена оценка репродукции холодоадаптированных реассортантных вакцинных штаммов вируса гриппа H1N1, H3N2 и В, выращенных на клетках MDCK в различных средах. Изучение размножения реассортантных штаммов, выращенных при использовании экспериментальных сред на основе ферментативных гидролизатов рисовой и соевой муки показало, что все вирусные са+-штаммы хорошо размножаются с максимальным титром 108,5-109,0 ЭИД50/мл при оптимальной множественности заражения 0,001 ЭИД50/кл, что совпадает с максимальными титрами при использовании контрольных сред - Игла MEM и Axcevir-MDCK.
Результаты размножения реассортантных штаммов, выращенных при использовании экспериментальных сред на основе ферментативных гидролизатов рисовой муки представлены в таблице 3.
| Таблица 3 | ||||
| Динамика накопления ca+ -штаммов вируса гриппа на клетках MDCK при оптимальной множественности заражения | ||||
| Множественность заражения (ЭИД50/кл) | Дни учета | Титр вируса в lg ЭИД50 /мл для са+-штамма | ||
| А/47/Шандон/93/1 (H1N1) | А/47/Иоганнесбург/94/2 (H3N2) | В/60/Петербург/95/20 | ||
| 0,001 | 1 | 3,5±0,1 | 2,5±0,1 | 1,5±0,1 |
| 2 | 5,5±0,1 | 6,5±0,1 | 3,5±0,1 | |
| 3 | 8,7±0,2 | 9,0±0,2 | 6,5±0,1 | |
| 4 | 8,5±0,2 | 9,0±0,1 | 8,5±0,2 | |
| 5 | 8,5±0,1 | 9,0±0,2 | 8,5±0,1 | |
Claims (4)
1. Питательная среда для культивирования клеток млекопитающих MDCK и Vero, используемых в производстве противогриппозных вакцин млекопитающих, включающая сбалансированный солевой раствор в виде раствора Хенкса или раствора Эрла, источник питательных веществ и ростстимулирующих факторов в виде растительного гидролизата рисовой муки с рН 6,2-6,7, содержанием аминного азота 2,2-2,8 мас.%, остаточного азота 3,0-4,2 мас.%, и/или соевой муки с рН 6,2-6,7, содержанием аминного азота 2,9-3,5 мас.%, остаточного азота 5,6-6,6 мас.%, аминокислоты и витамины при следующем содержании компонентов:
ферментативный гидролизат рисовой муки с рН 6,2-6,7,
содержанием аминного азота 2,2-2,8 мас.%,
остаточного азота 3,0-4,2 мас.% и/или соевой муки с рН 6,2-6,7, содержанием
аминного азота 2,9-3,5 мас.%, остаточного 3-20 г/л
азота 5,6-6,6 мас.%,
аминокислоты 0,11-0,86 г/л
витамины 0,55-22,5 мг/л
раствор Хенкса или раствор Эрла 1 л
2. Среда по п.1. отличающаяся тем, что в качестве сбалансированного солевого раствора она содержит раствор Хенкса, в качестве растительного гидролизата она содержит ферментативный гидролизат соевой муки с рН 6,2-6,7, содержанием аминного азота 2,9-3,5 мас.%, остаточного азота 5,6-6,6 мас.%, в качестве аминокислот она содержит L-глутамин, L-цистин и в качестве витаминов - холин хлорид, фолиевую кислоту, никотинамид, кальция пантотенат, пиридоксаль гидрохлорид, тиамин гидрохлорид, миоинозитол и рибофлавин при следующем содержании компонентов:
ферментативный гидролизат соевой муки с рН 6,2-6,7, содержанием аминного азота 2,9-3,5 мас.%,
остаточного азота 5,6-6,6 мас.% 3-10 г/л
аминокислоты:
L-глутамин 0,1-0,3 г/л,
L-цистин 0,01-0,04 г/л
витамины:
холин хлорид 0,2-1,0 мг/л
фолиевая кислота 0,2-1,0 мг/л
никотинамид 0,2-1,0 мг/л
кальция пантотенат 0,2-1,0 мг/л
пиридоксаль гидрохлорид 0,2-1,0 мг/л
тиамин гидрохлорид 0,2-1,0 мг/л
миоинозитол 0,2-1,0 мг/л
рибофлавин 0,02-0,1 мг/л
солевой раствор Хенкса 1 л
3. Среда по п.1, отличающаяся тем, что в качестве сбалансированного солевого раствора она содержит раствор Эрла, в качестве растительного гидролизата она содержит ферментативный гидролизат рисовой муки с рН 6,2-6,7, содержанием аминного азота 2,2-2,8 мас.%, остаточного азота 3,0-4,2 мас.%, в качестве аминокислот L-глутамин, L-цистин, L-аргинин, триптофан и в качестве витаминов: Д-биотин, холин-хлорид, фолиевую кислоту, никотинамид, никотиновую кислоту, кальция пантотенат, пиридоксин гидрохлорид, тиамин гидрохлорид, рибофлавин, миоинозитол, витамин В 12 при следующем содержании компонентов:
ферментативный гидролизат рисовой муки с рН 6,2-6,7,
содержанием аминного азота
2,2-2,8 мас.%, остаточного азота 3,0-4,2 мас.% 3-10 г/л
аминокислоты:
L-глутамин 0,1-0,3 г/л
L-цистин 0,01-0,04 г/л
L-аргинин 0,01-0,5 г/л
триптофан 0,002-0,02 г/л
витамины:
Д-биотин 0,01-0,5 мг/л
холин-хлорид 0,2-5 мг/л
фолиевая кислота 0,01-0,5 мг/л
никотинамид 0,02-1,0 мг/л
никотиновая кислота 0,02-1,0 мг/л
кальция пантотенат 0,01-0,5 мг/л
пиридоксин гидрохлорид 0,02-1,0 мг/л
тиамин гидрохлорид 0,01-0,5 мг/л
рибофлавин 0,01-0,5 мг/л
миоинозитол 0,04-2,0 мг/л
витамин В12
0,2-10 мг/л
солевой раствор Эрла 1 л
4. Среда по п.1, отличающаяся тем, что в качестве сбалансированного солевого раствора она содержит раствор Эрла, в качестве растительного гидролизата она содержит ферментативный гидролизат рисовой муки с рН 6,2-6,7, содержанием аминного азота 2,2-2,8 мас.%, остаточного азота 3,0-4,2 мас.% и ферментативный гидролизат соевой муки с рН 6,2-6,7, содержанием аминного азота 2,9-3,5 мас.%, остаточного азота 5,6-6,6 мас.%, в качестве аминокислот -:
L-глутамин, L-цистин, L-аргинин, триптофан, а в качестве витаминов - Д-биотин, холин-хлорид, фолиевую кислоту, никотинамид, никотиновая кислота, кальция пантотенат, пиридоксин гидрохлорид, тиамин гидрохлорид, рибофлавин, миоинозитол, витамин В 12 при следующем содержании компонентов:
ферментативный гидролизат рисовой муки с рН
6,2-6,7, содержанием аминного азота
2,2-2,8 мас.%, остаточного азота 3,0-4,2 мас.% 3-10 г/л
ферментативный гидролизат соевой муки с рН 6,2-
6,7, содержанием аминного азота
2,9-3,5 мас.%, остаточного азота 5,6-6,6 мас.%, 1-10 г/л
аминокислоты:
L-глутамин 0,1-0,3 г/л
L-цистин 0,01-0,04 г/л
L-аргинин 0,01-0,5 г/л
триптофан 0,002-0,02 г/л
витамины:
Д-биотин 0,01-0,5 мг/л
холин-хлорид 0,2-5 мг/л
фолиевая кислота 0,01-0,5 мг/л
никотинамид 0,02-1,0 мг/л
никотиновая кислота 0,02-1,0 мг/л
кальция пантотенат 0,01-0,5 мг/л
пиридоксин гидрохлорид 0,02-1,0 мг/л
тиамин гидрохлорид 0,01-0,5 мг/л
рибофлавин 0,01-0,5 мг/л
миоинозитол 0,04-2,0 мг/л
витамин B12
0,2-10 мг/л
солевой раствор Эрла 1 л
L-глутамин, L-цистин, L-аргинин, триптофан, а в качестве витаминов - Д-биотин, холин-хлорид, фолиевую кислоту, никотинамид, никотиновая кислота, кальция пантотенат, пиридоксин гидрохлорид, тиамин гидрохлорид, рибофлавин, миоинозитол, витамин В 12 при следующем содержании компонентов:
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008124177/13A RU2377295C1 (ru) | 2008-06-11 | 2008-06-11 | Питательная среда для культивирования клеток млекопитающих |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008124177/13A RU2377295C1 (ru) | 2008-06-11 | 2008-06-11 | Питательная среда для культивирования клеток млекопитающих |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2377295C1 true RU2377295C1 (ru) | 2009-12-27 |
Family
ID=41642995
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008124177/13A RU2377295C1 (ru) | 2008-06-11 | 2008-06-11 | Питательная среда для культивирования клеток млекопитающих |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2377295C1 (ru) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2558253C1 (ru) * | 2014-02-10 | 2015-07-27 | Федеральное Казенное Предприятие " Щелковский Биокомбинат" | Питательная среда для суспензионного культивирования клеток млекопитающих |
| RU2575797C2 (ru) * | 2014-01-09 | 2016-02-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Биодобавка в питательную среду для культивирования клеток животных и репродукции на них вирусов |
| RU2588666C1 (ru) * | 2015-03-23 | 2016-07-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности" | Компонент питательной среды для культивирования клеток млекопитающих |
| RU2673718C1 (ru) * | 2018-01-22 | 2018-11-29 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Питательная среда для культивирования перевиваемых клеточных линий млекопитающих |
| RU2709378C1 (ru) * | 2016-04-05 | 2019-12-17 | Пфайзер Инк. | Методика культивирования клеток |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996015231A2 (en) * | 1994-11-10 | 1996-05-23 | Immuno Aktiengesellschaft | Method for producing biologicals in protein-free culture |
| US6344354B1 (en) * | 1994-08-23 | 2002-02-05 | St. Jude Children's Research Hospital | Influenza virus replicated in mammalian cell culture and vaccine production |
| RU2266325C2 (ru) * | 1999-09-28 | 2005-12-20 | Бакстер Акциенгезелльшафт | Среда для культивирования клеток без белков и без сыворотки |
-
2008
- 2008-06-11 RU RU2008124177/13A patent/RU2377295C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6344354B1 (en) * | 1994-08-23 | 2002-02-05 | St. Jude Children's Research Hospital | Influenza virus replicated in mammalian cell culture and vaccine production |
| WO1996015231A2 (en) * | 1994-11-10 | 1996-05-23 | Immuno Aktiengesellschaft | Method for producing biologicals in protein-free culture |
| RU2266325C2 (ru) * | 1999-09-28 | 2005-12-20 | Бакстер Акциенгезелльшафт | Среда для культивирования клеток без белков и без сыворотки |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| GHENDON Y.Z., MARKUSHIN S.G., AKOPOVA I.I. et al. Development of cell culture (MDCK) live cold-adapted (CA) attenuated influenza vaccine. Vaccine, 2005, v.23, p.4678-4684. * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2575797C2 (ru) * | 2014-01-09 | 2016-02-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Биодобавка в питательную среду для культивирования клеток животных и репродукции на них вирусов |
| RU2558253C1 (ru) * | 2014-02-10 | 2015-07-27 | Федеральное Казенное Предприятие " Щелковский Биокомбинат" | Питательная среда для суспензионного культивирования клеток млекопитающих |
| RU2588666C1 (ru) * | 2015-03-23 | 2016-07-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности" | Компонент питательной среды для культивирования клеток млекопитающих |
| RU2709378C1 (ru) * | 2016-04-05 | 2019-12-17 | Пфайзер Инк. | Методика культивирования клеток |
| RU2673718C1 (ru) * | 2018-01-22 | 2018-11-29 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Питательная среда для культивирования перевиваемых клеточных линий млекопитающих |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102115729B (zh) | 无血清培养bhk21细胞的方法和制备疫苗的方法 | |
| CN102268403A (zh) | 适于幼仓鼠肾细胞大规模单细胞悬浮培养的无血清培养基 | |
| CN101864393B (zh) | 一种用于Vero细胞微载体培养的无动物来源成分无血清培养基 | |
| PT2213724E (pt) | Meios sem proteínas animais para a cultura de células | |
| CN101603020A (zh) | 无哺乳动物源成分的溶组织梭菌生长培养基 | |
| RU2377295C1 (ru) | Питательная среда для культивирования клеток млекопитающих | |
| EP4039796A1 (en) | Production method for composition for cell culturing, composition for cell culturing obtained by same, and cell culturing method using same | |
| CN101914485A (zh) | 一种无血清大豆蛋白肽动物细胞培养基的配制方法 | |
| CN102115728B (zh) | 无血清动物细胞培养基干粉、液体培养基及其制备方法 | |
| CN117431220A (zh) | 一种无血清培养人二倍体细胞制备狂犬病毒抗原的方法和应用 | |
| AU2022219484B2 (en) | Nutrient media for cell culture containing plant protein hydrolysates | |
| RU2245362C2 (ru) | Питательная среда для культивирования вакцинного штамма чумного микроба | |
| CN105154389A (zh) | 一种适于pk-15细胞生长的低血清无蛋白培养基及其制备方法 | |
| WO2004110484A1 (en) | Method for producing a live tissue-cultural vaccine against influenza virus | |
| CN108753736A (zh) | 制取水痘病毒原液的方法及其应用 | |
| KR20040088169A (ko) | 동물세포 배양용 무혈청 배지 | |
| JP2024071406A (ja) | ベロ細胞培養用低血清培地組成物およびその利用 | |
| RU2260620C1 (ru) | Питательная среда (жидкая) для культивирования чумного микроба вакцинного штамма ев | |
| RU2301256C1 (ru) | Питательная среда жидкая для культивирования холерного вибриона | |
| CN105441376B (zh) | 一种用于培养病毒的无血清培养基及其制备方法 | |
| CN115058354A (zh) | 一种化学成分明确的猪肺炎支原体培养基及其制备方法 | |
| RU2703826C1 (ru) | Бессывороточная питательная среда для культивирования клеток MDCK или Vero или вакцинных штаммов вирусов кори или гриппа | |
| RU2360962C2 (ru) | Способ получения питательной основы и питательная среда для культивирования микроорганизмов рода yersinia и vibrio | |
| RU2270856C2 (ru) | Питательная среда для глубинного культивирования чумного микроба вакцинного антибиотико-резистентного штамма eb р2 | |
| RU2673718C1 (ru) | Питательная среда для культивирования перевиваемых клеточных линий млекопитающих |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160612 |