RU2376604C2 - Способ выявления антигена или антитела в иммуноферментном анализе - Google Patents
Способ выявления антигена или антитела в иммуноферментном анализе Download PDFInfo
- Publication number
- RU2376604C2 RU2376604C2 RU2007140911/13A RU2007140911A RU2376604C2 RU 2376604 C2 RU2376604 C2 RU 2376604C2 RU 2007140911/13 A RU2007140911/13 A RU 2007140911/13A RU 2007140911 A RU2007140911 A RU 2007140911A RU 2376604 C2 RU2376604 C2 RU 2376604C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- emulsion
- antibody
- enzyme
- pfos
- antigen
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 15
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 15
- 238000009585 enzyme analysis Methods 0.000 title abstract 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims abstract description 31
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 19
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- YFSUTJLHUFNCNZ-UHFFFAOYSA-N perfluorooctane-1-sulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F YFSUTJLHUFNCNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 13
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 10
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 5
- IYVCXLAGSZWAEQ-UHFFFAOYSA-N 1,1,2,2,3,3,4,4,4a,5,5,6,6,7,7,8,8,8a-octadecafluoronaphthalene;1-[1,2,2,3,3,4,5,5,6,6-decafluoro-4-(trifluoromethyl)cyclohexyl]-2,2,3,3,4,4,5,5,6,6-decafluoropiperidine Chemical compound FC1(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C2(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C21F.FC1(F)C(F)(F)C(C(F)(F)F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C1(F)N1C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C1(F)F IYVCXLAGSZWAEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 206010059193 Acute hepatitis B Diseases 0.000 description 3
- 208000006154 Chronic hepatitis C Diseases 0.000 description 3
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000037628 acute hepatitis B virus infection Diseases 0.000 description 3
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Substances CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000003633 blood substitute Substances 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WFNJCXSSBWWIHI-UHFFFAOYSA-N 2,2,3,3,4,4,5,5,6-nonafluoro-6-(trifluoromethyl)-1-(1,2,2,3,3,4,4,5,5,6,6-undecafluorocyclohexyl)piperidine Chemical compound FC1(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(C(F)(F)F)(F)N1C1(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C1(F)F WFNJCXSSBWWIHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000012502 diagnostic product Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- -1 organofluorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229950011087 perflunafene Drugs 0.000 description 1
- UWEYRJFJVCLAGH-IJWZVTFUSA-N perfluorodecalin Chemical compound FC1(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)[C@@]2(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)[C@@]21F UWEYRJFJVCLAGH-IJWZVTFUSA-N 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 208000008128 pulmonary tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к иммунологии. Сущность способа заключается в том, что сенситин иммобилизуют на носителе, представляющем собой субмикронную (0,1 мкм) монодисперсную стабильную эмульсию перфторорганических соединений (ПФОС) 10 об.% 0,5 мл. ПФОС перед иммобилизацией предварительно освобождают от солей и глюкозы промыванием десятикратным объемом 0,15 М физиологического раствора рН 6,8. Сенситин иммобилизуют на поверхность капель очищенной эмульсии ПФОС. Способ по изобретению упрощает постановку иммуноферментного анализа (ИФА), обеспечивая при этом высокую чувствительность способа.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и, в частности, может быть использовано для выявления различных антигенов и антител в иммуноферментном анализе в биологических жидкостях организма, объектах окружающей среды и др.
Из практики медицины известен способ выявления антигенов и антител в радиоиммунном анализе (РИА) с использованием пластмасс, целлюлозы, сефадекса в качестве твердых носителей гомологичных антител или антигенов (Фримель Г. Иммунологические методы. - М.: Медицина, 1987. - 472 с.).
Однако известный способ имеет следующие недостатки: необходимость использования радиоактивных изотопов, представляющих определенную опасность для персонала и окружающей среды, ограниченное время жизни реагентов. Кроме того, для учета результатов реакции требуется дорогостоящая регистрирующая γ-излучение аппаратура.
Таким образом, изложенные недостатки не дают возможность получить технический результат - упрощение способа.
Известен также способ выявления антигенов и антител в гомогенном иммуноферментном анализе - EMIT-анализ, состоящий в том, что иммунологическую реакцию взаимодействия антигенов с антителами и детекцию ее протекания осуществляют в гомогенном растворе. В этих условиях отсутствует необходимость в методах физического разделения связавшегося и несвязавшегося с антителами антигена. Основными принципами данного анализа являются механизмы стерического исключения субстрата, модуляция антителами действия субстратов или ингибиторов, индуцированные антителами конформации активного центра фермента (Гаврилова Е.М. Журнал Всесоюзного химического общества им. Д.И.Менделеева, том XXVII, 4, 1982. - с.90-97).
Однако известный способ имеет следующие недостатки: необходимость использования высокочувствительных ферментативных систем, существенное влияние физико-химической характеристики антител на возможность способа (равновесные и кинетические константы реакции антиген-антитело), содержание небольшой примеси свободного гаптена или фермента может значительно повысить фоновый сигнал, значительное снижение чувствительности способа, если присутствуют примеси в препарате фермента и образце, такие как эндогенный фермент или субстрат, перекрестно-реагирующие антигены, в случае использования макромолекулярных субстратов (эритроциты, микробные клетки) чувствительность способа составляет лишь 0,5-2 мкг/мл.
Таким образом, изложенные недостатки не дают возможность получить технический результат - упрощение способа.
Наиболее близким способом к предлагаемому является способ выявление антигенов и антител в иммуноферментном анализе с использованием полистироловых планшетов, пробирок, бус и т.д. в качестве твердого носителя сенситинов (Нго Т., Ленхофф Г. Иммуноферментный анализ. - М.: Мир, 1988. - 446 с.).
Однако недостатками данного способа являются:
- сложность процесса подготовки сенсибилизированной поверхности твердого носителя;
- необходимость изготовления твердых полимерных носителей сенситинов (планшеты, бусы, пробирки и т.д.);
- использование специальных дозирующих устройств в процессе массовой сенсибилизации твердых носителей;
- для конкретных сенситинов, ввиду различной связывающей способности, необходим обязательный подбор твердого носителя;
- ограниченная площадь контактной поверхности твердого носителя;
- низкая емкость твердых носителей, вследствие чего для определения содержания антигена необходимо брать большое количество антительного иммуносорбента либо иммобилизовывать на нем только высокоаффинную фракцию антител;
- негомогенность материала твердых носителей (неконтролируемый фактор).
Указанные недостатки не дают возможность получить технический результат - упрощение способа.
Сходство предлагаемого способа с известным состоит в том, что они оба относятся к иммунологии и основаны на использовании иммобилизованных сенситинов на носителе.
Предлагаемое изобретение решает основную задачу - упрощение способа. Сущность изобретения выражена совокупностью существенных признаков, достаточных для обеспечиваемого изобретением технического результата.
Решение поставленной задачи заключается в том, что субмикронную монодисперсную стабильную эмульсию перфторорганических соединений (ПФОС) 10 об.% 0,5 мл освобождают от солей и глюкозы промыванием 5 раз с помощью центрифугирования 6000 об/мин в течение 5 мин десятикратным объемом 0,15М физиологического раствора рН 6,8, затем иммобилизуют соответствующий сенситин на поверхность капель эмульсии.
Промышленный выпуск в России эмульсии ПФОС как кровезаменителя с газотранспортной функцией осуществляет ОАО НПО «Перфторан». Образующими ее компонентами являются перфтордекалин и перфторметилциклогексилпиперидин с добавлением в качестве эмульгатора поверхностно-активного вещества проксанола, глюкозы и набора солей. Диаметр капель эмульсии около 0,1-0,15 мкм. Она стабильна, химически инертна, общая поверхность 1 мл составляет около 60 м2. Нежелательным эффектом эмульсии как кровезаменителя является способность капель связывать на своей поверхности белки, липиды и другие вещества. Это свойство эмульсии использовано авторами для создания капель - сорбентов антигенов или антител, примененных в иммуноферментном анализе.
Предлагаемый способ дает возможность упростить процесс выявления антигена или антитела в иммуноферментном анализе за счет отсутствия трудоемкой процедуры приготовления сенсибилизированной поверхности твердого носителя. Эмульсия ПФОС является универсальным носителем сенситинов и снижает стоимость исследования.
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.
Субмикронную монодисперсную стабильную эмульсию ПФОС 10 об.% 0,5 мл освобождают от солей и глюкозы промыванием 5 раз с помощью центрифугирования при 6000 об/мин в течение 5 мин десятикратным объемом 0,15М физраствора рН 6,8, затем иммобилизуют соответствующий сенситин на поверхность капель эмульсии.
Предлагаемый способ прошел успешную апробацию на базе лабораторий НИИ краевой инфекционной патологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Астраханская государственная медицинская академия Росздрава и Федерального государственного учреждения НИИ по изучению лепры Росздрава г.Астрахани.
Пример №1. С целью выявления поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) подготовленный осадок эмульсии ПФОС ресуспендируют в 1 мл глицинового буфера рН 8,8.
Приготовление буфера: 46,7 мл 2М глицина (15 г на 100 мл дистиллированной воды) смешивают с 10 мл 1М NaOH (4 г на 100 мл дистиллированной воды) и добавляют равный объем физиологического раствора.
В уравновешенную глициновым буфером эмульсию ПФОС вносят 150 мкг козьих антител к HBsAg, произведенных предприятием «ИмБиО», г.Нижний Новгород, с содержанием белка 1 мг/мл, титр 1:128 в двойной иммунодиффузии по Оухтерлони. Полученную смесь инкубируют 2 часа при комнатной температуре и 16 часов в условиях бытового холодильника при температуре 8°С, после чего следовала пятикратная промывка глициновым буфером 5 мл рН 8,8 центрифугированием при 3000 об/мин в течение 10 мин до Е280=0 для удаления несвязавшегося белка. Осадок ресуспендируют в 4 мл глицинового буфера рН 8,8. Сенсибилизированную эмульсию ПФОС используют в качестве сорбента HBsAg. Положительным и отрицательным контролями, иммунопероксидазным конъюгатом к HBsAg служат компоненты коммерческого набора «Вектогеп B-HBs-антиген-стрип » (комплект 3), производства ЗАО «Вектор-Бест», г.Новосибирск. В качестве исследуемых образцов используют сыворотки 34 больных острым гепатитом В, находившихся на лечении в Областной инфекционной клинической больнице г.Астрахани. Диагноз острого гепатита В подтвержден в иммуноферментном анализе на HBsAg по общепринятой методике. Кроме этого протестированы сыворотки доноров крови - 18 чел., отбракованные по результатам иммуноферментного анализа на наличие HBsAg. Для проверки специфичности реакции проведено исследование сывороток крови здоровых лиц - 11 чел., и больных хроническим гепатитом С - 8 чел.
Перед постановкой иммуноферментного анализа для каждого исследуемого образца берут 0,1 мл сенсибилизированной антителами эмульсии и после центрифугирования при 6000 об/мин в течение 5 мин в пробирках Эппендорф к осадку вносят положительный и отрицательный на HBsAg контроли, а также образцы сывороток крови в объеме 100 мкл с добавлением 50 мкл фосфатно-солевого раствора 0,05 М рН 7,2, содержащего твин-20 0,05% (ФСРТ). Содержимое пробирок перемешивают одноканальным дозатором со сменными наконечниками, после чего штатив с пробирками помещают в термостат на 2 часа при температуре 37°С. Во время инкубации через каждые 20-30 мин проводят встряхивание пробирок в течение 7-10 сек. По окончании инкубации пробирки с содержимым центрифугируют при 5000 об/мин в течение 5 мин. Надосадок удаляют одноканальным дозатором и проводят трехкратную промывку эмульсии перемешиванием с ФСРТ. Затем в каждую пробирку вносят 150 мкл иммунопероксидазного конъюгата, разведенного согласно инструкции к набору. После 1-часовой инкубации пробирок при температуре 37°С и периодического перемешивания эмульсии, как описано выше, следует четырехкратная промывка ФСРТ. Результаты реакции оценивают после добавления и перемешивания 100 мкл субстрат-хромогенной смеси с содержимым пробирок. Через 20 мин инкубации при комнатной температуре в темноте реакцию останавливают добавлением 50 мкл стоп-реагента. Пробирки вновь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 5 мин и полученный надосадок в объеме 100 мкл переносят в 96-луночный планшет для регистрации оптической плотности продуктов ферментативной реакции при 450 нм.
Проведенное тестирование образцов сыворотки крови больных острым гепатитом В и потенциальных доноров крови, у которых был обнаружен HBsAg, показывает полное совпадение результатов ИФА с использованием в качестве носителя антител полистироловых планшетов и предлагаемой авторами эмульсии ПФОС. Величина ОП450 отрицательного контроля сывороток здоровых лиц и больных хроническим гепатитом С (ХГС) не превышает 0,15 оптических единиц (о.е.). Показатель ОП450 образцов сывороток крови, содержащих HBsAg, составляет 0,315 о.е. и выше.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет выявить HBsAg в сыворотках крови в иммуноферментном анализе с использованием сенсибилизированной антителами эмульсии перфторорганических соединений.
Пример №2. К отмытой центрифугированием 0,5 мл эмульсии ПФОС при 6000 об/мин в течение 5 мин десятикратным по объему 0,15М физиологическим раствором рН 6,8 от глюкозы и солей, входящих в состав «Перфторана», вносят 3000 ТЕ в 1 мл забуференного физиологического раствора 0,1М рН 7,2 (ЗФР) сухого туберкулина, производства Санкт-Петербургского института вакцин и сывороток. Сенсибилизацию ПФОС проводят при комнатной температуре в течение 3 часов и при температуре 8°С 48 часов. По ее окончании следует промывка центрифугированием десятикратным по объему ЗФР при 3000 об/мин в течение 10 мин до Е280=0. После последнего центрифугирования осадок эмульсии растворяют в 4 мл того же буфера и используют для постановки ИФА в пробирках Эппендорф в объеме 100 мкл с предварительным центрифугированием при 5000 об/мин в течение 5 мин на 1 пробу. Материалом для исследований служат образцы сывороток крови от 13 здоровых лиц и от 17 больных туберкулезом легких, диагноз у которых подтвержден бактериологически. Все образцы сывороток крови предварительно тестируют в ИФА согласно инструкции к набору «ИФА-Анти-Туб», производства Санкт-Петербургского НИИ вакцин и сывороток им. Л. Пастера. При постановке ИФА с сенсибилизированной эмульсией «Перфторан» используют иммунопероксидазный конъюгат и субстрат-хромогенную смесь из набора «ИФА-Анти-Туб». Исследуемые сыворотки разводят 1:10 ФСРТ и вносят по 100 мкл в каждую пробирку. После одночасовой инкубации в термостате при температуре 37°С следует трехкратная промывка эмульсии центрифугированием при 5000 об/мин в течение 5 мин 200 мкл ФСРТ. Процедуру инкубации иммунопероксидазного конъюгата и последующую промывку эмульсии ПФОС проводят при тех же условиях и параметрах, что и сывороток. Результаты реакции оценивают по величине ОП450 продуктов ферментативной реакции. Сопоставление величин ОП450, полученных по данным ИФА с использованием 96-луночных планшетов и эмульсии «Перфторан», показывает их совпадение. Величина отрицательных результатов на наличие антител в сыворотке крови к туберкулину составляла не более 0,2 о.е. Показатели ОП450, превышающие 0,5 о.е., свидетельствуют о наличии антител к туберкулину.
Предложенным способом выявляют антитела к туберкулину в иммуноферментном анализе в сыворотках крови больных туберкулезом и здоровых лиц с применением эмульсии перфторорганических соединений, сенсибилизированной сухим туберкулином.
Таким образом, авторами представлен способ, в котором используют субмикронную эмульсию ПФОС, никем ранее не предложенную в качестве носителя сенситинов для выявления антигена или антитела в ИФА.
Хранение диагностических препаратов в течение шести месяцев не снижает их эффективности (срок наблюдения).
Предлагаемый способ упрощает процесс приготовления сенсибилизированных капель-сорбентов, обеспечивает высокую чувствительность способа, стандартность и стабильность препаратов, сравнительно низкую стоимость эмульсии ПФОС. Эмульсия ПФОС обладает большой площадью реакционно-способной поверхности. Осуществление предлагаемого способа безопасно для персонала, не требует использования дорогостоящего оборудования.
Предложенный способ может быть рекомендован для использования иммунологическими лабораториями противотуберкулезных и инфекционных учреждений системы здравоохранения.
Claims (1)
- Способ выявления антигена или антитела в иммуноферментном анализе (ИФА), предусматривающий использование иммобилизованных сенситинов на носителе и учет результатов ИФА, отличающийся тем, что в качестве носителя используют субмикронную монодисперсную стабильную эмульсию перфторорганических соединений (ПФОС) 10 об.% 0,5 мл, освобожденную от солей и глюкозы промыванием десятикратным объемом 0,15М физиологического раствора рН 6,8, и соответствующий сенситин иммобилизуют на поверхность капель эмульсии ПФОС.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007140911/13A RU2376604C2 (ru) | 2007-11-02 | 2007-11-02 | Способ выявления антигена или антитела в иммуноферментном анализе |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007140911/13A RU2376604C2 (ru) | 2007-11-02 | 2007-11-02 | Способ выявления антигена или антитела в иммуноферментном анализе |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2007140911A RU2007140911A (ru) | 2009-05-10 |
| RU2376604C2 true RU2376604C2 (ru) | 2009-12-20 |
Family
ID=41019614
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007140911/13A RU2376604C2 (ru) | 2007-11-02 | 2007-11-02 | Способ выявления антигена или антитела в иммуноферментном анализе |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2376604C2 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2468371C2 (ru) * | 2010-11-23 | 2012-11-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт по изучению лепры" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИЛ" Минздрава России) | Способ выявления антител к mycobacterium leprae на твердом носителе |
| RU2533272C1 (ru) * | 2013-07-23 | 2014-11-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт экологии и генетики микроогранизмов Уральского отделения РАН | Способ оценки напряженности поствакционального иммунитета к вирусу гриппа |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2051111C1 (ru) * | 1992-07-06 | 1995-12-27 | ЕФИМОВ Андрей Николаевич | Способ очистки воды от органических соединений и взвешенных частиц |
| RU2259817C2 (ru) * | 2000-10-13 | 2005-09-10 | Кембридж Байостэбилити Лтд. | Композиция для доставки стабильных инъецируемых жидкостей и способ доставки |
-
2007
- 2007-11-02 RU RU2007140911/13A patent/RU2376604C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2051111C1 (ru) * | 1992-07-06 | 1995-12-27 | ЕФИМОВ Андрей Николаевич | Способ очистки воды от органических соединений и взвешенных частиц |
| RU2259817C2 (ru) * | 2000-10-13 | 2005-09-10 | Кембридж Байостэбилити Лтд. | Композиция для доставки стабильных инъецируемых жидкостей и способ доставки |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| НТО Т., ЛЕНХОФФ Г. Иммуноферментный анализ. - М.: Мир, 1988, с.446. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2468371C2 (ru) * | 2010-11-23 | 2012-11-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт по изучению лепры" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИЛ" Минздрава России) | Способ выявления антител к mycobacterium leprae на твердом носителе |
| RU2533272C1 (ru) * | 2013-07-23 | 2014-11-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт экологии и генетики микроогранизмов Уральского отделения РАН | Способ оценки напряженности поствакционального иммунитета к вирусу гриппа |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2007140911A (ru) | 2009-05-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4332783A (en) | Process for immunologic determination tests | |
| US5187065A (en) | Method and materials for detecting lyme disease | |
| JP2901296B2 (ja) | カンピロバクター・ピロリの高分子型細胞関連蛋白の調製法とカンピロバクター・ピロリ感染の血清学的検出のための用法 | |
| KR100209072B1 (ko) | 숙신이미드함유 중합체로 생물학적 활성 시약을 제조하는 방법, 분석 요소 및 이것의 사용방법 | |
| US4474878A (en) | Sandwich EIA for antigen associated with hepatitis | |
| US4642285A (en) | Sandwich EIA for antigen | |
| JPS63229367A (ja) | 免疫反応性試薬、その製造法及び免疫反応性種を測定するためのその用途 | |
| EP0468585A2 (en) | Biologically active reagent, analytical element and methods for use of the reagent | |
| CN114859055A (zh) | 特定亚型细胞外囊泡分离和检测试剂盒及其使用方法 | |
| JP2824794B2 (ja) | 固相法により赤血球抗体を探索し、同定する方法 | |
| US3562384A (en) | Immunological indicator and test system | |
| RU2376604C2 (ru) | Способ выявления антигена или антитела в иммуноферментном анализе | |
| JP7144039B2 (ja) | 重症熱性血小板減少症候群ウイルス抗体検出キット及び重症熱性血小板減少症候群ウイルス抗体検出方法 | |
| JP2553852B2 (ja) | サンプル中の生物学的物質の免疫学的測定法 | |
| EP2126576B1 (en) | Reagent for detection of analyte and processes thereof | |
| US20080206790A1 (en) | Assay for determining the presence or amount of newly synthesized antibodies | |
| JP2682697B2 (ja) | 免疫測定試薬および免疫測定法 | |
| JPH11500226A (ja) | 抗体産生の検出 | |
| RU2200327C2 (ru) | Способ диагностики сифилиса (варианты) | |
| JPH0232258A (ja) | ヒトの体液中の抗体力価の測定法及びクラス特異性抗体の測定法 | |
| JPH10339731A (ja) | 腸管出血性大腸菌感染の検出方法 | |
| JP2004069672A (ja) | 酸化アポリポタンパク質ａｉ及びそれを含有する酸化リポタンパク質の測定法及びキット | |
| JPH03103195A (ja) | 血栓及び凝固亢進状態の診断及び検査のための生物学的試料からのｄ―ダイマーの直接化学結合的方法 | |
| RU2468371C2 (ru) | Способ выявления антител к mycobacterium leprae на твердом носителе | |
| Wienecka et al. | Detection of Giardia antigen in stool samples by a semi-quantitative enzyme immunoassay (EIA) test |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20131103 |