[go: up one dir, main page]

RU2366451C2 - Стабилизированные твердые композиции полипептидов фактора vii - Google Patents

Стабилизированные твердые композиции полипептидов фактора vii Download PDF

Info

Publication number
RU2366451C2
RU2366451C2 RU2005101340/15A RU2005101340A RU2366451C2 RU 2366451 C2 RU2366451 C2 RU 2366451C2 RU 2005101340/15 A RU2005101340/15 A RU 2005101340/15A RU 2005101340 A RU2005101340 A RU 2005101340A RU 2366451 C2 RU2366451 C2 RU 2366451C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
composition
factor vii
fvii
sucrose
polypeptide
Prior art date
Application number
RU2005101340/15A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2005101340A (ru
Inventor
Майкл Бех ЕНСЕН (DK)
Майкл Бех ЕНСЕН
Бирте Люккегор ХАНСЕН (DK)
Бирте Люккегор Хансен
Троэльс КОРНФЕЛЬТ (DK)
Троэльс КОРНФЕЛЬТ
Original Assignee
Ново Нордиск Хелт Кэр Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=34178323&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RU2366451(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ново Нордиск Хелт Кэр Аг filed Critical Ново Нордиск Хелт Кэр Аг
Publication of RU2005101340A publication Critical patent/RU2005101340A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2366451C2 publication Critical patent/RU2366451C2/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21021—Coagulation factor VIIa (3.4.21.21)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Изобретение относится к химически и физически стабильным композициям, включающим фактор VII или полипептид, родственный фактору VII, так что такие композиции могут храниться, быть пригодными для работы с ними и применяться при комнатной температуре. Композиция содержит эффективное количество полипептида фактора VII и сочетание сахарозы и полиола, при влажности композиции не более чем около 3%. Изобретение также относится к способу получения стабильного полипептида фактора VII, который включает стадии введения указанного полипептида фактора VII, раствор, содержащий сочетание сахарозы и полиола как стабилизатора, и обработку указанного раствора с получением твердой композиции. В сочетании с сахарозой и полиолом может быть добавлен и антиоксидант, представляющий собой, например, гомоцистеин, цистеин, цистатионин, метионин или глютатион. Полиол представляет собой, например, маннит, сорбит или ксилит. Предложен также способ лечения реактивного синдрома фактора VII, включающий введение индивиду композиции фактора VII с сахарозой и полиолом. Предложено также применение полипептида фактора VII для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения реактивного синдрома фактора VII. Изобретение относится к стабильным композициям полипептида фактора VII, не содержащим продуктов деградации и не проявляющим снижения активности полипептидов фактора VII после хранения в условиях окружающей среды в течение по меньшей мере 6 месяцев. 4 н. и 44 з.п. ф-лы, 9 табл., 4 ил.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Изобретение относится к химически и физически стабильным композициям, включающим фактор VII или полипептид, родственный фактору VII, так что в отношении указанных композиций возможны хранение, работа и использование при комнатной температуре.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Фактор VII представляет собой полипептид, участвующий в процессе свертывания крови. В настоящее время фактор VIIа может быть получен по рекомбинантным методикам (rFVIIa) и образованный по такому варианту фактор широко используется как про-гемостатическое средство. Фактор VII (человеческий фактор дикого типа) описан в патенте США No. 4 784 950. Используемый в настоящее время rFVIIa позволяет добиваться быстрого и высокоэффективного про-гемостатического ответа у индивидуумов с гемофилией, имеющих кровотечение. Рекомбинантный фактор VIIa может также с успехом применяться для лечения индивидуумов с гемофилией, которых нельзя лечить другими продуктами, созданными на основе коагулирующих факторов, из-за образования у них антител. Кроме того, указанное средство rFVIIa может с успехом применяться для лечения индивидуумов, страдающих от недостаточности фактора VII, или индивидуумов, имеющих нормальную систему коагуляции, но у которых тем не менее имеется обширное кровотечение.
При разработке лекарственного средства, включающего полипептид, такой как, например, фактор VIIа, должны приниматься во внимание ряд параметров. В качестве примера, следует указать, что такое лекарственное средство должно быть эффективным, безопасным и комфортным для принимающего его пациента. Кроме того, данное лекарственное средство может быть введено в состав композиции, применяемой для парентерального введения с использованием фармацевтически приемлемых наполнителей, которые должны удовлетворять критериям, утвержденным различными медицинскими регламентирующими учреждениями во всем мире. Для целей парентерального введения может быть весьма желательно, чтобы композиция была почти изотонической и чтобы pH такой композиции находился в физиологически приемлемом диапазоне при инъекции/инфузии, в противном случае ее применение может привести к развитию болевых и других дискомфортных ощущений у пациента. Общий обзор белковых композиций содержится, например, в работе Клеланда с соавт. и Ванга с соавт. (Cleland et al.: The development of stable protein formulations: A closer look at protein aggregation, deamidation and oxidation, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 1993, 10(4): 307-377; и Wang et al., Parenteral formulations of proteins and peptides: Stability and stabilizers, Journal of Parenteral Science and Technology 1988 (supplement), 42(25)).
Существенно, что для случая лекарственных средств, включающих полипептиды, безопасность может иметь непосредственное отношение к физической и химической стабильности полипептида. Будучи полипептидом, фактор VII или полипептид, родственный фактору VII, чувствителен к физическому разрушению, включая денатурацию и агрегацию, такую как образование растворимых или нерастворимых агрегатов в виде димеров, олигомеров и полимеров, или к химической деградации, включающей, например, гидролиз, дезаминирование и окисление. Впоследствии указанная физическая и химическая нестабильность может приводить к потере активности полипептида фактора VII, образованию токсичных и иммуногенных продуктов деградации, серьезному риску образования и развития тромбоза при инъекции таких разложившихся полипептидов фактора VII, закупорке игл, используемых для инъекции, и к риску негомогенного эффекта, если назвать лишь несколько следствий такой нестабильности.
Таким образом, существенно важно разработать композицию, включающую полипептиды фактора VII, которые были бы стабильны в отношении физического и химического разложения.
К настоящему времени получаемый по рекомбинантным методикам полипептид FVII предлагается в виде лиофилизированного продукта, который хранится при температуре от примерно 2 до примерно 8°С. Потребность в охлаждении создает дополнительную трудность и неудобства как для производителя или поставщика, так и для конечного пользователя (пациента).
Используемым в настоящее время рекомбинантным продуктом фактора VII является препарат НовоСэвен® (NovoSeven®) (Novo Nordisk A/S, Дания), который состоит из 1,2 мг рекомбинантного человеческого фактора VIIа, 5,84 мг NаCl, 2,94 мг CaCl2×2H2O, 2,64 мг глицилглицина, 0,14 мг полисорбата 80 и 60,0 мг маннита. При восстановлении в 2,0 мл воды для инъекций (ВДИ) достигается pH 5,5 и полученный таким образом содержащий FVII раствор характеризуется достаточной стабильностью в течение 24 часов при комнатной температуре.
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что при хранении лиофилизированного продукта НовоСэвен® в течение 6 месяцев при температуре 25°С примерно от 6 до 7 мас.% от исходного содержания rFVIIa присутствует в виде агрегатов.
Таким образом, композиции, включающие полипептиды фактора VII, должны быть стабилизированы, с тем, чтобы обеспечить возможность их хранения и работы с такими препаратами при температурах окружающей среды. Однако нестабильность полипептида определяется несколькими факторами и невозможно предсказать заранее подходящий способ стабилизации фактора VIIa или полипептида, родственного фактору VII.
Один подход к стабилизации белков относится к удалению воды из белка, например, такой как подход, который связан с получением белка в виде лиофилизированной лепешки в качестве окончательного продукта процесса сушки при замораживании. Однако процесс сушки при замораживании сам по себе также вреден для белков, поскольку во время сушки при замораживании белковый раствор вначале охлаждают до соответствующего уровня и имеющаяся вода в белковом растворе на данной стадии образует лед. В этой связи, белок подвергается стрессу, вызванному замораживанием, который приводит к деформации и осаждению. На следующей стадии, так называемой стадии первичной сушки, лед сублимируется и на второй стадии сушки адсорбированная или связанная вода удаляется при повышенных температурах. В процессе удаления воды белки могут терять свойственную им конформацию, которая обеспечивается главным образом за счет водородных связей.
В этой связи, для сохранения конформации белка, его активности и стабильности в процессе сушки при замораживании к раствору полипептида необходимо внести добавки достаточных количеств соответствующих наполнителей с криопротекторными и/или лиопротекторными свойствами, так чтобы защитить белок от стресса, вызванного замораживанием, и/или от стресса, связанного с удалением воды, соответственно.
Дополнительно, при получении лиофилизированного продукта основное внимание уделяется свойствам лиофилизированной лепешки. Указанная лиофилизированная лепешка должна обладать хорошими свойствами с точки зрения ее формы и структуры, то есть она не должна подвергаться слеживанию, поскольку такие слежавшиеся лепешки будут твердыми или даже не пригодными к растворению (восстановлению) перед использованием. И наоборот, физическая структура лиофилизированной лепешки не должна быть слишком рыхлой и мягкой. В этой связи, к белковому раствору перед проведением сушки замораживанием добавляют один или более так называемых объемных наполнителей.
Ниже приведены другие публикации, относящиеся к стабилизации полипептида:
U.S. 20010031721 A1 (American Home Products) относится в основном к высококонцентрированным, лиофилизированным жидким композициям фактора IX;
WO 97/26909 (Институт генетики) относится к лиофилизированным препаратам фактора IX, пригодным для хранения и введения. Указанные препараты могут включать сахарозу или маннит в качестве криопротектора.
WO 95/28954 (Институт генетики) относится к препаратам фактора IX, пригодным для хранения и введения. Указанные препараты могут включать сахарозу в качестве криопротектора.
Целью настоящего изобретения является создание стабильных композиций полипептида фактора VII, которые по существу не содержат продуктов деградации и не демонстрируют снижения активности полипептидов фактора VII, предпочтительно после увеличенного периода хранения в условиях окружающей среды, например, в течение по меньшей мере 6 месяцев. Кроме того, объектом настоящего изобретения являются стабильные композиции, которые пригодны для парентерального введения, не создавая при этом какого-либо дискомфорта для пациента.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Авторами настоящего изобретения было показано, что полипептиды фактора VII могут быть изготовлены в виде композиции, которая является достаточно стабильной, так что создается возможность хранить ее при комнатной температуре в течение по меньшей мере 8 месяцев. Авторы обнаружили также, что достижение такой стабилизации имеет отношение к соответствующему объединению в составе композиции некоторых фармацевтически приемлемых наполнителей.
Соответственно, настоящее изобретение в первом своем аспекте относится к стабилизированным композициям, которые имеют содержание влаги не более чем примерно 3%, и включают полипептиды фактора VII и по меньшей мере одно средство, способствующее стабильности, выбранное из группы, состоящей из компонентов: а) - е)
а) сочетание антиоксиданта и маннита;
b) сочетание метионина и полиола;
c) сочетание сахарида и маннита;
d) сочетание сахарозы и полиола и
e) метионин.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения стабильного полипептида фактора VII, включающему стадии:
i) Создание указанного полипептида фактора VII в растворе, включающем по меньшей мере одно средство, способствующее стабильности, выбранное из группы, состоящей из компонентов а) - е):
а) сочетание антиоксиданта и маннита;
b) сочетание метионина и полиола;
c) сочетание сахарида и маннита;
d) сочетание сахарозы и полиола и
e) метионин.
ii) Обработка указанного раствора с получением твердой композиции, характеризующейся содержанием влаги не более чем примерено 3 мас.%.
Как указывалось выше, достичь стабилизации полипептидов фактора VII необходимо для минимизации риска развития побочных реакций, а также для повышения безопасности и эффективности процесса введения полипептида фактора VII с терапевтической целью. В этой связи, еще один аспект настоящего изобретения относится к использованию полипептида фактора VII для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения фактор VII-реактивного синдрома, причем указанное лекарственное средство содержит композицию, включающую:
полипептид фактора VII и по меньшей мере одно средство, способствующее стабильности, выбранное из группы, состоящей из:
а) сочетания антиоксиданта и маннита;
b) сочетания метионина и полиола;
c) сочетания сахарида и маннита;
d) сочетания сахарозы полиола и
e) метионина,
где указанная композиция характеризуется содержанием влаги не более чем примерно 3%.
И, наконец, настоящее изобретение относится к введению указанных полипептидов фактора VII для лечения фактор VII-реактивного синдрома, включающему введение субъекту, при необходимости, эффективного количества композиции, содержащей полипептид фактора VII и по меньшей мере одно средство, способствующее стабильности, выбранное из группы, состоящей из:
а) сочетания антиоксиданта и маннита;
b) сочетания метионина и полиола;
c) сочетание сахарида и маннита;
d) сочетание сахарозы полиола и
e) метионина,
где указанная композиция характеризуется содержанием влаги не более чем примерно 3%.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к стабильным при хранении композициям, включающим полипептиды фактора VII. Композиции могут храниться при комнатной температуре в течение увеличенных периодов времени без проявления признаков существенной деградации полипептида фактора VII. Под комнатной температурой следует понимать температуру окружающей среды в комнате, в норме указанная температура варьирует от примерно 5°С до примерно 40°С и включает, например, диапазон температур от примерно 10°С до 30°С или от 15°С до 25°С.
Путем предварительного определения соответствующего сочетания конкретных фармацевтически приемлемых носителей авторы настоящего изобретения создали стабилизированные композиции, включающие полипептиды фактора VII, что позволяет хранить такие композиции в условиях комнатной температуры в течение увеличенных периодов времени, по меньшей мере примерно 8 месяцев. Преимуществом изобретения является тот факт, что стабилизированные композиции не нужно хранить в условиях охлаждения, таких как в диапазоне температур от 2 до 8°С.
Настоящее изобретение также относится к стабильным при хранении композициям, которые остаются стабильными в течение по меньшей мере примерно 8 месяцев при хранении в условиях температуры примерно 30°С. Композицию предпочтительно хранят в темноте. Таким образом, настоящее изобретение делает возможным хранение таких композиций при комнатной температуре без повышения риска развития побочных реакций у пациентов после введения таких композиций. Преимуществом является тот факт, что использование композиции с улучшенной стабильностью приводит к снижению стоимости, поскольку не требуется специальных условий охлаждения для хранения, что также сказывается на большем удобстве при работе с композицией в процессе ее использования.
Термин “полипептид фактора VII” в контексте настоящего описания обозначает любой полипептид фактора VII, который эффективен в плане предупреждения или лечения кровотечения. Указанный термин включает полипептиды фактора VII, полученные из крови или плазмы, или изготовленные рекомбинантными методами.
В контексте настоящего описания термин "полипептид фактора VII" включает, без ограничения, фактор VII, а также полипептиды, родственные фактору VII. Термин "фактор VII" в контексте настоящего описания включает, без ограничения, полипептиды, имеющие аминокислотную последовательность 1-406 человеческого фактора VII дикого типа (описанную в патенте США 4 784 905), а также фактора VII дикого типа, полученного из других видов живых организмов, например, из быка, свиньи, собаки, мыши и лосося, при этом указанный фактор VII получают из крови или плазмы или создают рекомбинантными методами. Настоящее изобретение также относится к природным аллельным вариациям фактора VII, которые могут существовать и обнаруживаться у одного или другого индивидуума. Кроме того, степень и локализация гликозилирования или других пост-трансляционных модификаций могут варьировать, в зависимости от выбранных клеток-хозяев и от природы окружения клетки-хозяина. Термин "фактор VII" в контексте настоящего описания относится также к полипептидам фактора VII в их нерасщепленной форме (в форме зимогена), а также к таким полипептидам, которые были обработаны протеолитическими ферментами с образованием соответствующих биоактивных форм, обозначенных как фактор VIIа. В типичном случае фактор VII подвергается расщеплению между остатками 152 и 153 с образованием фактора VIIа.
Как указывалось выше, термин "полипептиды фактора VII" в контексте настоящего описания также обозначает термин "полипептиды, родственные фактору VII". Термин "полипептиды, родственные фактору VII" в контексте настоящего описания обозначает такие полипептиды в их нерасщепленной форме (форме зимогена), а также те полипептиды, которые были получены путем протеолитической обработки с образованием соответствующих биоактивных форм. В контексте настоящего описания термин "полипептиды, родственные фактору VII" включает, без ограничения, полипептиды, демонстрирующие по существу ту же или усиленную биологическую активность относительно человеческого фактора VII дикого типа. Указанные полипептиды включают, без ограничения, фактор VII или фактор VIIа, которые были химически модифицированы, и варианты фактора VII, в которые введены специфические изменения аминокислотной последовательности, которые в некоторой степени модифицируют или улучшают биологическую активность полипептида.
Кроме того, полипептиды, родственные фактору VII, включающие варианты фактора VII, которые проявляют по существу ту же или усиленную биологическую активность, что и фактор VII дикого типа, включают, без ограничений, полипептиды, имеющие аминокислотную последовательность, которая отличается от последовательности фактора VII дикого типа за счет инсерций, делеций или замещений одной или более аминокислот.
Полипептиды, родственные фактору VII, включающие варианты, имеющие по существу ту же или усиленную биологическую активность, что и фактор VII дикого типа, относятся к таким полипептидам, которые демонстрируют по меньшей мере примерно на уровне 25%, предпочтительно по меньшей мере примерно на уровне 50%, более предпочтительно по меньшей мере примерно на уровне 75%, более предпочтительно по меньшей мере примерно на уровне 100%, более предпочтительно по меньшей мере примерно на уровне 110%, более предпочтительно по меньшей мере примерно на уровне 120% и наиболее предпочтительно по меньшей мере примерно на уровне 130% от удельной активности фактора VIIа дикого типа, который был получен в клетках того же типа при исследовании в одном или большем числе тестов, включающих тест на свертываемость, тест на протеолиз или тест на связывание с TФ, как описано в настоящем изобретении.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения полипептиды фактора VII представляют собой полипептиды, родственные фактору VII, причем те конкретные варианты, где соотношение между активностью указанного полипептида фактора VII и активностью нативного человеческого фактора VIIа (FVIIa дикого типа) составляет по меньшей мере примерно 1,25 при анализе в тесте на гидролиз in vitro (см. пример 9, приведенный ниже). В других вариантах осуществления настоящего изобретения указанное соотношение составляет по меньшей мере примерно 2,0 и в других вариантах указанное соотношение составляет по меньшей мере примерно 4,0. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения полипептиды фактора VII представляют собой полипептиды, родственные фактору VII, в частности такие варианты, в которых соотношение между активностью указанного полипептида фактора VII и активностью нативного человеческого фактора VIIа (FVIIa дикого типа) составляет по меньшей мере примерно 1,25 при анализе в тесте на протеолиз in vitro (см. пример 9, приведенный ниже); в других вариантах осуществления настоящего изобретения указанное соотношение составляет по меньшей мере примерно 2,0, а в других вариантах указанное соотношение составляет по меньшей мере примерно 4,0, и в дополнительных вариантах указанное соотношение составляет по меньшей мере примерно 8,0.
Не ограничивающие примеры вариантов фактора VII, обладающие по существу той же или улучшенной биологической активностью, что и фактор VII дикого типа, включают S52A-FVII, S60A-FVII (Lino et al., Arch.Biochem. Biophys. 352; 182-192, 1998); L305V-FVII, L305V/M306D/D3095-FVII, L305I-FVII, L305T-FVII, F374P-FVII, V158T/M298Q-FVII, V158D/E296V/M298Q-FVII, K337A-FVII, M298Q-FVII, V158D/M298Q-FVII, L305V/К337A-FVII, V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII, V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII, K157A-FVII, E296V-FVII, E296V/M298Q-FVII, V158D/E296V-FVII, V158D/M298Q-FVII и S336G-FVII; варианты FVIIа, проявляющие повышенную протеолитическую активность, описанные в патенте США Nо. 5 580 560; фактор VIIа, который был протеолитически расщеплен между остатками 290 и 291 или между остатками 315 и 316 (Mollerup et al., Biotechnol. Bioeng. 48:501-505, 1995); окисленные формы фактора VIIа (Kornfelt et al., Arch. Biochem. Biophys. 363:43-54, 1999); варианты FVII, описанные в PCT/DK02/00189; варианты FVII, демонстрирующие повышенную протеолитическую активность, описанные в WO 02/38162 (Scripps Research Institute); варианты FVII, содержащие модифицированный Gla-домен и демонстрирующие повышенный уровень связывания с мембраной, описанные в WO 99/20767 (Университет Миннесоты); варианты FVII, описанные WO 01/58935 (Maxygen ApS); варианты FVII, обладающие повышенной биологической активностью в сравнении с FVIIа дикого типа, описанные в WO 01/83725, WO 02/22776, WO 02/077218, PCT/DK02/00635, в заявке на патент Дании PA 2002 01423, в заявке на патент Дании PA 2001 01627; в WO 02/38162 (Scripps Research Institute) и варианты FVIIа с повышенной активностью, описанные JP 2001061479 (Chemo-Sero-Therapeutics Res Inst).
Примеры полипептидов фактора VII или полипептидов, родственных фактору VII, включают, без ограничения, фактор VII дикого типа, L305V-FVII, L305V/M306D/D309S-FVII, L305I-FVII, L305T-FVII, F374P-FVII, V158T/M298Q-FVII, V158D/E296V/M298Q-FVII, K337A-FVII, M298Q-FVII, V158D/M298Q-FVII, L305V/K337A-FVII, V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII, V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII, K157A-FVII, E296V-FVII, E296V/M298Q-FVII, V158D/E296V-FVII, V158D/M298K-FVII и S336G-FVII, L305V/K337A-FVII, L305V/V158D-FVII, L305V/E296V-FVII, L305V/M298Q-FVII, L305V/V158T-FVII, L305V/K337A/V158T-FVII, L305V/K337A/M298Q-FVII, L305V/K337A/E296V-FVII, L305V/K337A/V158D-FVII, L305V/V158D/M298Q-FVII, L305V/V158D/E296V-FVII, L305V/V158T/M298Q-FVII, L305V/V158T/E296V-FVII, L305V/E296V/M298Q-FVII, L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII, L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII, L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII, L305V/V158T/E296V/K337A-FVII, L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII, L305V/V158D/E296V/K337A-FVII, L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII, S314E/K316H-FVII, S314E/K316Q-FVII, S314E/L305V-FVII, S314E/K337A-FVII, S314E/V158D-FVII, S314E/E296V-FVII, S314E/M298Q-FVII, S314E/V158T-FVII, K316H/L305V-FVII, K316H/K337A-FVII, K316H/V158D-FVII, K316H/E296V-FVII, K316H/M298Q-FVII, K316H/V158T-FVII, K316Q/L305V-FVII, K316Q/K337A-FVII, K316Q/V158D-FVII, K316Q/E296V-FVII, K316Q/M298Q-FVII, K316Q/V158T-FVII, S314E/L305V/K337A-FVII, S314E/L305V/V158D-FVII, S314E/L305V/E296V-FVII, S314E/L305V/M298Q-FVll, S314E/L305V/V158T-FVII, S314E/L305V/K337A/V158T-FVII, S314E/L305V/K337A/M298Q-FVII, S314E/L305V/K337A/E296V-FVII, S314E/L305V/K337A/V158D-FVII, S314E/L305V/V158D/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158D/E296V-FVII, S314E/L305V/V158T/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158T/E296V-FVII, S314E/L305V/E296V/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII, S314E/L3O5V/V158T/E296V/K337A-FVII, S314E/L3O5V/V158D/K337A/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII, S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII, K316H/L305V/K337A-FVII/K316H/L305V/V158D-FVII, K316H/L305V/E296V-FVII, K316H/L305V/M298Q-FVH, K316H/L305V/V158T-FVII, K316H/L305V/K337A/V158T-FVIl, K316H/L305V/K337A/M298Q-FVII, K316H/L305V/K337A/E296V-FVII, K316H/L305V/K337A/V158D-FVII, K316H/L305V/V158D/M298Q-FVII, 6H/L305V/V158D/E296V-FVII, K316H/L305V/V158T/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158T/E296V-FVII, K316H/L305V/E296V/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII, K316H/I305V/V158T/K337A/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII, K316H/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII, 6H/L305V/V158D/E296V/K337A -FVII, 6H/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII, K316Q/L305V/K337A-FVII, 6Q/L305V/V158D-FVII, K316Q/L305V/E296V-FVII, K316Q/L305V/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158T-FVII, K316Q/L305V/K337A/V158T-FVII, K316Q/L305V/K337A/M298Q-FVII, K316Q/L305V/K337A/E296V-FVII, K316Q/L305V/K337A/V158D-FVII, K316Q/L305V/V158D/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158D/E296V-FVII, K316Q/L305V/V158T/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158T/E296V-FVII, K316Q/L305V/E296V/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q-FV1I, K316Q/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII, K316Q/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII, K316Q/L305VAA158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII, F374Y/K337A-FVII, F374Y/V158D-FVII, F374Y/E296V-FVII, F374Y/M298Q-FVII, F374Y/V158T-FVII, F374Y/S314E-FVII, F374Y/L305V-FVII, F374Y/L305V/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158D-FVII, F374Y/L305V/E296V-FVII, F374Y/L305V/M298Q-FVII, F374Y/L305V/V158T-FVII, F374Y/L305V/S314E-FVII, F374Y/K337A/S314E-FVII, F374Y/K337A/V158T-FVII, F374Y/K337A/M298Q-FVII, F374Y/K337A/E296V-FVII, F374Y/K337A/V158D-FVII, F374Y/V158D/S314E-FVII, F374Y/V158D/M298Q-FVII, F374Y/V158D/E296V-FVII, F374Y/V158T/S314E-FVII, F374Y/V158T/M298Q-FVII, F374Y/V158T/E296V-FVII, F374Y/E296V/S314E-FVII, F374Y/S314E/M298Q-FVII, F374Y/E296V/M298Q-FVI!, F374Y/L305V/K337A/V158D-FVII, F374Y/L305V/K337A/E296V-FVII, F374Y/L305V/K337A/M298Q-FVII, F374Y/L305V/K337A/V158T-FVII, F374Y/L305V/K337A/S314E-Pyil,F374Y/l305V/V158D/E296V-FVII, F374Y/L305V/V158D/M298Q-FVII, F374Y/l305V/V158D/5314E-FVII, 374Y/IJ05V/E296V/M298Q-FVII, F374Y/L305V/E296V/V158T-FVII, F374Y/L305V/E296V/S314E-FVII, F374Y/L305V/M298Q/V158T-FVII, F374Y/L305V/M298Q/S314E-FVII, F374Y/G05V/V158T/S314E-FVII, F374Y/K337A/S314E/V158T-FVII, F374Y/K337A/S314E/M298Q-FVII, F374Y/K337A/S314E/E296V-FVII, F374Y/K337A/S314E/V158D-FVII, F374Y/K337A/V158T/M298Q-FVII, F374Y/K337A/V158T/E296V-FVII, F374Y/K337A/M298Q/E296V-FVII, F374Y/K337A/M298Q/V158D-FVII, F374Y/K337A/E296V/V158D-FVII, F374Y/V158D/S314E/M298Q-FVII, F374Y/V158D/S314E/E296V-FVII, F374Y/V158D/M298Q/E296V-FVII, F374Y/V158T/S314E/E296V-FVII, F374Y/V158T/5314E/M298Q-FVII, F374Y/V158T/M298Q/E296V-FVII, F374Y/E296V/5314E/M298Q-FVII, F374Y/L305V/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/K337A/S314E-FVII, F374Y/E296V/M298Q/K337A/5314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q/S314E-FVII, F374Y/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, F374Y/V158D/E296V/M298Q/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/K337A/5314E-FVII, F374Y/V158D/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/V158D/E296V/K337A/5314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII, F374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158D/M298Q/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/5314E-FVII, F374Y/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII, F374Y/V158T/E296V/M298Q/5314E-FVII, F374Y/L305V/V158T/K337A/5314E-FVII, F374Y/V158T/M298Q/K337A/5314E-FVII, F374Y/V158T/E296V/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII, F374Y/L305V/V158T/M298Q/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158T/M298Q/5314E-FVII, F374Y/L305V/V158T/E296V/S314E-FVII, F374Y/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII, F374Y/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/5314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q/V158T/5314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/V158T-FVII, F374Y/L305V/E296V/K337A/V158T/5314E-FVII, F374Y/L305V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/K337A/S314E-FVII, F374Y/B05V/V158D/M298Q/K337A/S314E-FVII, 374Y/B05V/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII, S52A-Фактор VII, S60A-ФакторVII и P11Q/K33E-FVII, T106N-FVII, K143N/N145T-FVII, V253N-FVII, R290N/A292T-FVII, G291N-FVII, R315N/V317T-FVII, K143N/N145T/R315N/V317T-FVII; FVII, имеющий замещения, добавки или делеции аминокислотной последовательности от 233Thr до 240Asn, FVII, имеющий замещения, добавки или делеции в аминокислотной последовательности от 304Arg до 329Cys, а также FVII, имеющий замещения, делеции или добавки аминокислотной последовательности на участке Ile153-Arg223.
Для целей настоящего изобретения биологическая активность полипептидов фактора VII ("биологическая активность фактора VII") может быть количественно определена путем оценки способности препарата ускорять свертывание крови с использованием дефицитной по фактору VII плазмы и тромбопластина, как описано в патенте США Nо. 5 997 864. В данном тесте биологическая активность выражается в виде снижения времени свертывания относительно контрольного образца и переводится в единицы фактора VII при сравнении с объединенной человеческой сывороткой в качестве стандарта, содержащей 1 единицу/мл активности фактора VII. Альтернативно, биологическая активность фактора VII может быть количественно определена посредством
(i) измерения способности фактора VIIа или полипептида, родственного фактору VIIа способствовать образованию активированного фактора Х (фактора Ха) в системе, включающей TФ, погруженный в липидную мембрану, и фактор Х (Persson et al., J. Biol. Chem. 272:19919-19924, 1997);
(ii) определения уровня гидролиза фактора Х в водной системе (тест на протеолиз in vitro, см. пример 12, приведенный ниже);
(iii) определения уровня физического связывания фактора VIIа или полипептида, родственного фактору VIIа с TФ с использованием инструмента, функционирующего на основе поверхностного резонанса плазмонов (Persson, et al., FEBS Letts. 413:3590363, 1997):
(iv) определения уровня гидролиза синтетического субстрата фактора VIIа фактора и/или полипептида, родственного фактору VIIа (тест на гидролиз in vitro, см. пример 12, приведенный ниже); и
(v) определения уровня образования тромбина в TФ-независимой системе in vitro.
Термин "биологическая активность фактора VII" или "активность фактора VII" в контексте настоящего описания обозначает способность образовывать тромбин; данный термин также включает способность образовывать тромбин на поверхности активированных тромбоцитов в отсутствие тканевого фактора.
В примере 12 в данном описании подробно описывается тест, используемый для анализа биологической активности фактора VII.
Кроме того, используемые в данном описании термины имеют описанные ниже значения:
Термин "стабилизация" в контексте настоящего описания относится к минимизации образования агрегатов (нерастворимых и/или растворимых) и/или химической деградации, а также к обеспечению условий поддержания pH и соответствующей конформации белка при хранении или при изготовлении композиции, так что достигается существенное удержание биологической активности и стабильности белка. Кроме того, стабилизация также относится к процессам лиопротекции и криопротекции белка в ходе изготовления композиции в условиях сушки при замораживании.
Термины "структурная стабилизация" или "структурная стабильность" в контексте настоящего описания обозначают способность образовывать лиофилизированный/ую сгусток или лепешку с явно выраженными свойствами и внешней формой, так что указанные сгусток или лепешка не слеживается и легко растворяется перед использованием.
Термин "стабильный при хранении" в контексте настоящего описания обозначает продукт, который стабилизируется при хранении в условиях температуры от 5°С до 40°С и остается, в течение приемлемого периода времени - часто в течение нескольких месяцев, в пределах значений, разрешенных в спецификации на данный продукт.
Термин "физическая стабильность" полипептидов фактора VII относится к образованию нерастворимых и/или растворимых агрегатов в виде димерных, олигомерных или полимерных форм полипептидов фактора VII, а также к любой структурной деформации и денатурации молекулы.
Термин "химическая стабильность" в контексте настоящего описания относится к появлению любых химических изменений в полипептидах фактора VII при хранении, после растворения или в твердом состоянии в условиях ускоренного старения композиции. В качестве соответствующих примеров можно указать на процессы гидролиза, дезамидирования и окисления. В частности, серосодержащие аминокислоты имеют тенденцию к окислению с образованием соответствующих сульфоксидов.
Термин "криопротекторы" в контексте настоящего описания в основном включает средства, которые обеспечивают поддержание стабильности белка в условиях стрессов, вызванных замораживанием. Примеры криопротекторов включают полиолы, такие как маннит, и включают также сахариды, такие как, например, сахароза, а также поверхностно-активные вещества, такие как, например, полисорбат, полоксамер или полиэтиленгликоль, а также другие вещества. Криопротекторы могут также способствовать приданию нужных тонизирующих свойств композиции.
Термин "лиопротекторы" в контексте настоящего описания включает средства, которые придают стабильность белку в процессе удаления воды при лиофилизации. Например, данный результат достигается за счет поддержания соответствующей конформации белка. Примеры лиопротекторов включают сахариды, в частности ди- или трисахариды. Криопротекторы могут также оказывать лиопротекторный эффект.
Фраза "средство, подходящее для поддержания pH в диапазоне значений от 3 до 9°С" относится к тем средствам, которые позволяют поддерживать pH раствора в приемлемом диапазоне значений от 3,0 до 9,0. Типичные примеры средств, способных поддерживать pH в диапазоне значений от 3 до 9, включают кислую форму или соли лимонной кислоты, уксусной кислоты, гистидина, яблочной кислоты, фосфорной кислоты, винной кислоты, янтарной кислоты, MES, HEPES, PIPES, имидазола, TРИС, молочной кислоты, глютаровой кислоты и глицилглицина. Следует понимать, что в настоящем изобретении может использоваться также сочетание средств, если такое сочетание средств пригодно для поддержания pH в указанном диапазоне.
Термин "лиофилизированная лепешка" в контексте настоящего описания обозначает твердую композицию, получаемую при обработке растворенной или по меньшей мере частично растворенной композиции в условиях, включающих по меньшей мере одну стадию охлаждения указанной растворенной/частично растворенной композиции на льду с последующей по меньшей мере одной стадией вакуумной сушки.
Термин "лиофилизация" и "сушка при замораживании" в контексте настоящего описания обозначает процесс, в ходе которого удаляется жидкость из растворенной или по меньшей мере частично растворенной композиции в условиях, включающих введение по меньшей мере одной стадии охлаждения растворенного или по меньшей мере частично растворенного раствора на льду с последующей вакуумной сушкой. Лиофилизация, или сушка при замораживании представляет собой самый обычный процесс, осуществляемый при изготовлении твердых белковых фармацевтических средств. Указанный процесс состоит из двух основных стадий: замораживания белкового раствора и сушки замороженного твердого вещества в вакууме. Стадия сушки также подразделяется на две фазы: первичная и вторичная сушки. Первичная сушка позволяет удалить замороженную воду (сублимирование льда), а вторичная сушка удаляет незамороженную "связанную" воду (десорбция воды). Более подробный анализ каждой из стадий лиофилизации содержится, например, в работе Ванга с соавт. (Wang et al., International Journal of Pharmaceutics 293 (2000): 1-60 (см. раздел 4, страница 16ff)).
В типичном случае композицию подвергают сушке при замораживании путем распределения по флаконам, замораживания на полках в аппарате для лиофильной сушки, после чего создают вакуум и полки нагревают для осуществления первичной сушки (или сублимации льда). Далее, проводят вторичную сушку (или десорбцию сорбированной воды) при повышенной температуре до завершения процесса, то есть до такого состояния, при котором композиция содержит достаточно низкое количество влаги (воды). Способы сушки при замораживании в основном известны в данной области технике (см., например, Wang et al., International Journal of Pharmaceutics 293 (2000): 1-60). Любой практикующий в данной области специалист в состоянии без труда оптимизировать условия сушки при замораживании, в частности, в том, что касается выбора температур, времени обработки при каждой температуре, а также уровня давления, который следует использовать в данном процессе для данной конкретной композиции.
Термин "содержание влаги" в контексте настоящего описания обозначает воду, связанную с данным продуктом, и включает, без ограничения, воду в адсорбированной форме, такую как не замороженная вода, захваченная или адсорбированная на замороженной растворенной фазе и/или объединенная с аморфной фазой или адсорбированная на кристаллическом твердом веществе. Термин "содержание воды" используется взаимозаменяемо с термином "содержание влаги". Желательный уровень остаточной влажности (содержание влаги) представляет собой функцию длительности и температуры на стадии вторичной сушки. В данной области известны несколько способов определения уровня остаточной влаги в процессе лиофилизации, например, может использоваться электронный гигрометр или анализатор остаточного газа. Содержание влаги в лиофильно высушенных композициях может быть определено несколькими известными в технике методами, такими как, например, определение потери веса при сушке, титрование по методу Карла Фишера, тепловой гравиметрический анализ (TГA), газовая хроматография (ГХ) или анализ в инфракрасном спектре (см, например, Wang et al., International Journal of Pharmaceutics 293 (2000): 1-60). Способы определения содержания воды (содержания влаги) также описаны в руководствах по Европейской Фармакопее и Фармакопее США. Например, определение содержания воды может быть осуществлено по методике кулонометрического титрования Карла Фишера, описанной в руководстве по Фармакопее США (USP<921, lc>) или в руководстве по Европейской Фармакопее (EP<2.5.32>).
В общих чертах указанная методика включает следующую процедуру:
Определение содержания воды путем кулонометрического титрования: используют реакцию Карла Фишера в методике кулонометрического определения воды, основанную на количественной реакции воды с двуокисью серы и иодом в безводной среде. Иод образуется электрохимически в реакционной ячейке при окислении иодида. Образуемый на аноде иод вступает сразу же в реакцию с водой и двуокисью серы, содержащимися в реакционной ячейке. Количество воды в веществе прямо пропорционально количеству электричества, необходимого для титрования до конечной точки. После потребления всей воды в ячейке достигается конечная точка и появляется избыток иода, который выявляется электрохимически, что позволяет определить конечную точку. Затем вычисляют процентное содержание воды.
Содержание влаги может быть определено на основании веса образца во флаконе на момент анализа (то есть твердое вещество плюс содержащаяся в нем вода, так называемый сырой вес) или может быть определено в условиях, когда возможна коррекция на количество имеющейся в образце воды (то есть по сухому весу). В случае лиофилизированных продуктов с низким содержанием влаги оба измерения (определение влажного веса и сухого веса) должны давать очень близкие результаты. В контексте настоящего описания содержание влаги определяют в терминах твердое вещество плюс содержащаяся в нем вода (то есть на основе влажного веса).
Термин "объемный наполнитель " в контексте настоящего описания включает средства, которые обеспечивают образование лиофилизированных лепешек с явно выраженными свойствами, на основе которых возможно получить фармацевтический продукт, удовлетворяющий эстетическим требованиям, а также преодолеть различные стрессы, которым подвергается белок, например, сдвиг при перемешивании/замораживании, например, сопряженные с процессом лиофилизации, и которые позволяют сохранять уровень белковой активности в процессе лиофилизации и последующего хранения. Типичные примеры таких наполнителей включают маннит, глицин, сахарозу и лактозу. Указанные средства могут также способствовать поддержанию тоничности композиции.
Термин "модификатор тоничности" в контексте настоящего описания обозначает любое средство, способное корректировать тонус композиции таким образом, что при растворении композиции на момент ее использования получаемая композиция будет иметь тонус в физиологическом диапазоне крови, перитонеальной жидкости или других соответствующих жидкостей организма. Очевидно, что тонус будет зависеть от того, включает ли используемый для восстановления раствор средство, модифицирующее тонус.
Термин "поверхностно-активное вещество" в контексте настоящего описания включает в основном те средства, которые защищают белок от стрессов, вызванных действием сил на границе воздух/раствор, и стрессов, вызванных действием сил на границе раствор/поверхность. Например, поверхностно-активные вещества могут препятствовать агрегации белка. Подходящие поверхностно-активные вещества могут включать, например, полисорбаты, полиоксиэтиленалкильные эфиры, такие как Бридж 35®, или полоксамер, такой как Твин 20, Твин 80 или Полоксамер 188. Предпочтительные детергенты относятся к полоксамерам и включают, например, Полоксамер 188, Полоксамер 407: полиоксиэтиленалкильные эфиры, например Бридж 35®, Кремофор А22, Симпатены ALM/230, а также и полисорбаты/твины, например, Полисорбат 20, Полисорбат 80. Более предпочтительными являются полоксамеры, например, Полоксамер 188, и твины, например, Твин 20 и Твин 80.
Термин "исходное содержание" относится к количеству полипептидов фактора VII, добавляемому в композицию в момент приготовления. Приведенная в описании концентрация (мг/мл) относится к концентрации в растворе полипептида фактора VII перед удалением влаги (например, перед лиофильной сушкой) или в восстановленной композиции, либо выражается мас.%, которая затем пересчитывается относительно концентрации в твердой композиции, например, в лиофилизированной лепешке.
В контексте настоящего описания приведенные количества следует понимать как данное количество ±10%; так, величина 50 мМ включает 50 мМ±5 мМ, 4%, включает 4% ±0,4% и т.п.
Как указывалось выше, авторы настоящего изобретения сделали открытие в настоящей области, относящееся к стабилизации полипептидов фактора VII, что позволило увеличить срок хранения без риска и неудобства для пользователя.
Так, авторы настоящего изобретения обнаружили, что для стабилизации полипептидов фактора VII необходимо корректировать множество важнейших параметров. Один такой важный параметр относится, по меньшей мере частично, к содержанию влаги, например, воды. Содержание влаги должно быть ограничено. Вторым существенным параметром является тот факт, что композиция должна по меньшей мере включать одно средство, способствующее стабильности. В соответствии с настоящим изобретением, такое средство, способствующее стабильности, включает сочетание по меньшей мере двух групп фармацевтически приемлемых наполнителей, выбираемых из группы, состоящей из антиоксидантов, сахаридов и полиолов. Сахариды и полиолы обладают лиопротекторными и/или криопртекторными свойствами, которые могут быть важны, по меньшей мере частично, в процессах, происходящих при лиофильной сушке композиции. В целом, улучшенная стабильность может быть частично достигнута за счет введения соответствующего сочетания по меньшей мере двух наполнителей из указанных групп. Однако, более конкретно было обнаружено, что в том случае, когда указанные композиции включают сахарид (сахарозу) или антиоксидант (метионин), стабилизирующий эффект может быть еще более значительным. Кроме того, неожиданно было обнаружено, что метионин препятствует окислительной деградации полипептидов фактора VII.
Соответственно, первый аспект настоящего изобретения относится к композиции, включающий полипептид фактора VII и по меньшей мере одно средство, способствующее стабильности, выбранное из группы, состоящей из;
а) сочетания антиоксиданта и маннита;
b) сочетания метионина и полиола;
c) сочетания сахарида и маннита;
d) сочетания сахарозы и полиола и
e) метионина,
где указанная композиция характеризуется содержанием влаги не более чем примерно 3%.
Иными словами, можно сказать, что первый вариант осуществления настоящего изобретения включает сочетание антиоксиданта и маннита; второй вариант осуществления настоящего изобретения включает сочетание метионина и полиола; другой вариант осуществления настоящего изобретения включает сочетание сахарида и маннита; в еще одном варианте осуществления настоящего изобретения указанная композиция включает сочетание сахарозы и полиола; и наконец, в еще одном подходящем варианте осуществления настоящего изобретения указанная композиция включает метионин.
Как указывалось выше, средство по настоящему изобретению, способствующее стабильности, включает объединение представителей по меньшей мере из двух групп фармацевтически приемлемых наполнителей. В подходящих вариантах осуществления настоящего изобретения средство, способствующее стабильности, включает также третью группу наполнителей. В этой связи, в одном варианте осуществления настоящего изобретения сочетание антиоксиданта и маннита также включает сахарид. Во втором варианте осуществления настоящего изобретения сочетание метионина и полиола также включает сахарид. В других интересных вариантах осуществления настоящего изобретения сочетание сахарида и маннита также включает антиоксидант, а сочетание сахарозы и полиола также включает антиоксидант. В одном варианте осуществления настоящего изобретения указанное сочетание включает маннит и сахарозу, в другом варианте композиция включает маннит, сахарозу и метионин, в еще одном варианте композиция включает маннит и трегалозу, и в другом варианте композиция включает маннит, трегалозу и метионин.
Согласно настоящему изобретению, полипептид фактора VII в контексте настоящего описания относится к указанным выше полипептидам. В подходящих вариантах осуществления настоящего изобретения полипептид фактора VII выбирают из группы, состоящей из человеческого фактора VIIа, рекомбинантного человеческого фактора VIIа и варианта последовательности фактора VII. Предпочтительно, полипептид фактора VII представляет собой человеческий фактор VIIа или рекомбинантный человеческий фактор VIIа, или полипептид, родственный фактору VII, где коэффициент соотношения между активностью указанного полипептида, родственного фактору VII, и активностью фактора VII дикого типа составляет по меньшей мере 1,25 при тестировании в рамках одного или более теста на протеолиз in vitro и теста на гидролиз in vitro, описанных в настоящей спецификации.
Как указывалось выше, содержание влаги должно быть ограничено. Для целей настоящего изобретения полипептиды фактора VII, в случае их предложения в объемном виде, могут иметь твердую или жидкую форму. Однако, в типичном варианте полипептиды фактора VII, в случае их предложения в объемном виде, имеют жидкую форму. Таким образом, для дальнейшей обработки объемной массы белков с целью получения композиций по настоящему изобретению требуется введение стадий добавления соответствующих наполнителей и удаления жидкости из объемной массы компонентов, при этом указанное добавление наполнителей может проводиться до или после удаления жидкости. Один такой способ удаления жидкости из белка включает сушку при замораживании, или лиофильную сушку. В этой связи, в предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения композиция имеет вид лиофилизированной лепешки. Однако настоящее изобретение не отвергает других способов, подходящих для удаления жидкости из массы полипептидов, которые приводят к получению твердой композиции с содержанием влаги не более чем примерно 3 мас.%.
Кроме того, согласно настоящему изобретению, содержание влаги предпочтительно не превышает примерно 2,5 мас.%, более предпочтительно, не превышает примерно 3 мас.%, и наиболее предпочтительно, не превышает примерно 1,5 мас.%.
Как следует понимать, изобретение относится, частично, к ограничению деградации полипептида фактора VII в процессе изготовления, например, в ходе смешивания с наполнителями и удаления жидкости, с целью достижения в указанной композиции содержания влаги максимум 3 мас.% и ограничения указанной деградации в период от даты производства твердой композиции до момента использования, например, до того момента, когда композиция вводится пациенту.
В этой связи, еще один параметр, связанный со стабилизацией композиций, включающих полипептид фактора VII, а именно, величина pH, должна поддерживаться в диапазоне значений pH от 3 до 9 при растворении в водном растворителе, таком как, например, чистая вода или водный буфер. Иными словами, можно сказать, что в полипептидном растворе к моменту, предшествующему удалению влаги, например, перед лиофильной сушкой, должен поддерживаться уровень рН в диапазоне значений от примерно 3 до примерно 9. С успехом указанный диапазон pH может находиться в желательном физиологическом интервале, что позволяет не причинить вреда пользователю при введении композиции в парентеральном режиме. Предпочтительно, pH раствора составляет от примерно 4,0 до примерно 9,0, характеризуясь такими значениями, как, например, 4,0 - 8,0, 4,0 - 7,5, 4,0 - 7,0, 4,5 - 7,0, 4,5 - 6,8, 4,5 - 6,5, 5,0 - 7,0, 5,0 - 6,5, 5,0 - 6,0, 5,5 - 6,5, или от примерно 5,5 до примерно 6,0, и имеет такие значения, как примерно 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9 или 6,0.
В этой связи, интересные варианты осуществления настоящего изобретения включают дополнительно также средство, пригодное для поддержания pH указанной композиции в диапазоне значений от 3 до 9 при растворении в водном растворе (например, в воде). Соответственно, в подходящих вариантах осуществления настоящего изобретения средство, пригодное для поддержания уровня pH указанной композиции в диапазоне значений от 3 до 9, выбирают из группы, состоящей из кислоты или солей лимонной кислоты, уксусной кислоты, гистидина, яблочной кислоты, фосфорной кислоты, винной кислоты, янтарной кислоты, MES, HEPES, имидазола, TРИС, молочной кислоты, глютаровой кислоты, PIPES и глицилглицина.
Кроме того, средство, подходящее для подержания уровня pH указанной композиции в диапазоне значений от 3 до 9, может представлять собой смесь по меньшей мере двух таких перечисленных средств, где указанная смесь способна обеспечивать достижение уровня pH в указанном диапазоне. Концентрация подходящих средств включает диапазон значений от примерно 0,1 мМ до 100 мМ, от примерно 0,2 мМ до 50 мМ, от примерно 0,5 мМ до 25 мМ, от примерно 1 мМ до 20 мМ или от примерно 1 мМ до 10 мМ.
Как можно видеть из примеров 5 и 6, авторы настоящего изобретения предлагают композиции с низким содержанием окисленных форм и агрегатов, присутствующих на конечной стадии процессов производства, то есть к концу процесса лиофильной сушки, за счет объединения соответствующих количеств маннита (полиола), сахарозы (сахарида) и антиоксиданта (метионина). Таким образом, композиции по настоящему изобретению характеризуются низким исходным содержанием окисленных форм и агрегатов перед началом хранения.
Деградация полипептида фактора VII путем окисления, а также за счет образования агрегатов является слабым звеном стабильности.
В типичном случае, композиции стабилизируют за счет завершения процесса лиофильной сушки таким образом, чтобы менее чем 5 мас.%, в частности, менее чем например, 4, 3 или 2 мас.% от исходного содержания полипептида фактора VII превращались в окисленные формы. Исходное содержание указанного полипептида фактора VII представляет собой то количество, которое добавляют к композиции в процессе изготовления композиции, перед стадией лиофильной сушки. Кроме того, менее, чем примерно 5 мас.%, в частности, менее чем 4,0 мас.%, 3,0 мас.%, 2,5 мас. %, 2 мас.%, 1,5 мас.% или менее чем 1 мас.% от исходного содержания полипептида фактора VII превращается в агрегатные формы, что может быть определено обычными аналитическими методами (такими как, например, описанные в настоящей заявке далее в разделе «Примеры»).
Авторы настоящего изобретения показали, что дальнейшая деградация (например, подсчитанная за период времени от даты завершения процесса производства до окончания 8 месяцев хранения при температуре 30°С) полипептида фактора VII является минимальной при хранении в условиях окружающей среды. Как можно видеть из примера 5, при хранении в условиях 30°С в течение 8 месяцев указанное повышение стабильности таково, что менее чем 10 мас.%, от исходного содержания полипептида фактора VII превращается в окисленные формы полипептида фактора VII, дополнительно к уровню окисленных форм, уже присутствовавших на момент завершения лиофильной сушки. Особенно важным является тот факт, что, как было показано, композиции, включающие антиоксидант (метионин), демонстрируют большую стабильность в отношении окислительной деградации полипептида фактора VII.
В этой связи, пригодные согласно настоящему изобретению композиции характеризуются ограниченным повышением уровня окисленных форм при хранении в течение по меньшей мере 8 месяцев в условиях окружающей среды. Иными словами, следует отметить, что в еще более интересных вариантах осуществления настоящего изобретения композиция стабильна настолько, что не более чем примерно 6 мас.% от исходного содержания полипептида фактора VII подвергается дополнительной деградации в окисленные формы при хранении композиции в течение 8 месяцев в условиях 30°С после завершения процесса производства, то есть процесса лиофильной сушки. В других подходящих вариантах осуществления настоящего изобретения не более чем примерно 5, 4, 3, 2 или 1,5 мас.% от исходного содержания полипептида фактора VII превращается в окисленные формы, при подсчете за период времени от даты завершения процесса производства до окончания 8 месяцев хранения при температуре 30°С. В указанных вариантах осуществления настоящего изобретения композиции настолько стабильны, что не более чем примерно 5 мас.% (4, 3, 2 или 1,5 мас.%) от исходного содержания полипептида фактора VII дополнительно превращается в окисленные формы при хранении указанной композиции в течение 8 месяцев в условиях температуры 30°С. Как указывалось выше, исходное содержание относится к количеству полипептида фактора VII, добавляемого в композицию в процессе изготовления композиции, перед стадией лиофильной сушки.
Как указывалось выше, деградация полипептида фактора VII за счет образования агрегатных форм также может рассматриваться как существенный параметр, определяющий стабильность. Авторы настоящего изобретения показали, что дальнейшая деградация (например, подсчитанная за период времени от даты завершения процесса производства до окончания срока хранения в течение 8 месяцев при температуре 30°С) полипептида фактора VII является минимальной при хранении в условиях окружающей среды. Как можно видеть из примера 6, не более чем примерно 5 мас.%, в частности, не более чем примерно 4, 3, 2,5, 2,0, 1,5 или 1,0 мас.% от исходного содержания полипептида фактора VII дополнительно превращается в агрегатные формы при хранении указанной композиции в течение 8 месяцев в условиях температуры 30°С. Особенно важными являются результаты, согласно которым композиции, включающие сахарид (сахарозу), демонстрируют большую стабильность в отношении образования агрегатов.
Таким образом, интересные варианты осуществления настоящего изобретения относятся к композициям, которые стабильны настолько, так что не более, чем примерно 5 мас.% от исходного содержания полипептида фактора VII превращается в агрегатные формы при хранении указанной композиции в течение 8 месяцев при температуре 30°С. Как указывалось выше, исходное содержание полипептида фактора VII представляет собой то количество, которое добавляют к композиции в процессе изготовления композиции, перед стадией лиофильной сушки. Путем соответствующей оптимизации, по меньшей мере частично, содержания сахаридов, полиолов и антиоксидантов можно получить композицию с таким уровнем стабильности, что не более чем примерно 4,0 мас.%, 3,0 мас.%, в частности, 2,5, 2,0, 1,5 или 1,0 мас.% от исходного содержания полипептида фактора VII превращается в агрегатные формы при хранении указанной композиции в течение 8 месяцев при температуре 30°С.
Таким образом, достоинством настоящего изобретения является тот факт, что прелагаемые композиции имеют низкое содержание окисленных форм и агрегатов к моменту завершения процесса производства, то есть к моменту окончания процесса лиофильной сушки и, таким образом, композиции по настоящему изобретению характеризуются низким исходным содержанием окисленных форм и агрегатов перед началом хранения, то есть не более чем примерно 5 мас.%, в частности, не более чем 4 мас.%, 3 мас.% или 2 мас.% от исходного содержания полипептида фактора VII превращается в окисленные формы и менее чем примерно 5 мас.%, в частности, не более чем примерно 4,0 мас.%, 3,0 мас.%, 2,5 мас.%, 2 мас.%, 1,5 мас.%, или не более чем примерно 1 мас.% превращается в димерную или полимерную формы более высокого порядка к моменту завершения процесса производства.
Кроме того, и это является преимуществом настоящего изобретения, предлагаемые в нем композиции являются стабильными при хранении, то есть менее, чем 10 мас.%, в частности, такие количества, как 6 мас.%, 5 мас.%, 4 мас.%, 3 мас.%, 2 мас.% или 1,5 мас.% от исходного содержания полипептида фактора VII превращаются в окисленные формы и менее чем 5 мас.%, в частности 4 мас.%, 3 мас.%, 2,5 мас.%, 2 мас.%, 1,5 мас.% или 1 мас.% превращаются в димерные формы или полимерные формы более высокого порядка при хранении в условиях 30°С в течение 8 месяцев в темноте.
Как указывалось выше, приведенные значения стабильности относятся к использованию соответствующего сочетания определенных наполнителей. Согласно настоящему изобретению, наполнители могут выбираться из группы, включающей сахариды, полиолы и антиоксиданты, в связи с тем, что сахариды и полиолы проявляют лиопротекторные и/или криопротекторные свойства. Более конкретно, в подходящих вариантах осуществления настоящего изобретения интересуемые сахариды представляют собой ди- и трисахариды, а также полисахариды, так что указанные сахариды могут быть выбраны из группы, состоящей из сахарозы, декстрозы, лактозы, мальтозы, трегалозы, циклодекстринов, мальтодекстринов и декстранов. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения полиолы выбирают из группы, состоящей из маннита, сорбита и ксилита. В других интересных вариантах осуществления настоящего изобретения антиоксидант выбирают из группы, состоящей из гомоцистеина, цистеина, цистатионина, метионина, глютатиона и пептидов, содержащих любой из указанных компонентов: гомоцистеин, цистеин, цистатионин, метионин и глютатион.
Следует понимать, что наполнители сахаридной и полиоловой природы, соответственно, могут также представлять собой смесь двух таких перечисленных средств. В одной серии вариантов осуществления настоящего изобретения сахаридный наполнитель используют в сочетании по меньшей мере с двумя ди-, три- и/или полисахаридами, таком как, например, сахароза в сочетании с циклодекстрином, трегалоза в сочетании с циклодекстрином, сахароза в сочетании с декстраном или сахароза в сочетании с лактозой. В одной серии вариантов осуществления настоящего изобретения используемый полиоловый наполнитель представляет собой сочетание по меньшей мере двух полиолов, такое как, например, маннит в сочетании с сорбитом, маннит в сочетании с ксилитом или сорбит в сочетании с ксилитом. В одной серии вариантов осуществления настоящего изобретения используемый антиоксидантный наполнитель представляет сочетание по меньшей мере двух антиоксидантов, такое как, например, метионин в сочетании с одним или более из указанных ниже компонентов: гомоцистеин, цистеин, цистатионин, глютатион и пептиды, содержащие один из указанных компонентов: гомоцистеин, цистеин, цистатионин, метионин и глютатион.
Авторы настоящего изобретения определили, что соответствующее сочетание полиолов и сахаридов, а также их содержание способствует, по меньшей мере частично, достижению благоприятной стабильности.
В этой связи, в некоторых наиболее интересных вариантах осуществления настоящего изобретения полиолы присутствуют в количестве, варьирующем от примерно 5 мас.% до примерно 90 мас.%. Предпочтительно, полиолы присутствуют в количестве от примерно 18 мас.% до примерно 88 мас.%, в частности, в количестве от примерно 18 мас.% до примерно 83 мас.%, таком как от примерно 18 мас.% до примерно 83 мас.%, от 25 мас.% до 80 мас.%, от 30 мас.% до 65 мас.%, от 30 мас.% до 80 мас.%, от 40 мас.% до 80 мас.%, от 50 мас.% до 80 мас.%, от 30 мас.% до 75 мас.%, от 40 мас.% до 75 мас.%, от 50 мас.% до 75 мас.% или от примерно от 50 мас.% до примерно 70 мас.%. Полиол должен содержаться в количестве от примерно 0,5 до примерно 75 мг/мл, в частности, в количестве от примерно 2 мг/мл до 60 мг/мл, от 5 мг/мл до 55 мг/мл, от 8 мг/мл до 45 мг/мл, от 10 мг/мл до 40 мг/мл, от 10 мг/мл до 30 мг/мл или от примерно 2 мг/мл до 45 мг/мл, от 5 мг/мл до 45 мг/мл, от 5 мг/мл до 35 мг/мл, от 5 мг/мл до 25 мг/мл, от 5 мг/мл до 20 мг/мл, от 20 мг/мл до 40 мг/мл, таком как от примерно 20 мг/мл до 30 мг/мл.
Кроме того, в интересных вариантах указанного аспекта, а также в некоторых других интересных вариантах осуществления настоящего изобретения рассматриваемый сахарид присутствует в композиции в количестве от примерно 0 до примерно 85 мас.%. В других интересных вариантах осуществления настоящего изобретения его количество составляет от примерно 3 мас.% до примерно 8 мас.%, в частности, от примерно 7 мас.% до примерно 75 мас.%, от 10 мас.% до 70 мас.%, от 10 мас.% до 50 мас.%, от 20 мас.% до 50 мас.%, от 10 мас.% до 40 мас.%, или от примерно 10 мас.% до примерно 35 мас.%. Сахарид должен содержаться в количестве от примерно 0,5 до примерно 75 мг/мл, в частности, в таком количестве, как от примерно 2 мг/мл до 60 мг/мл, от примерно 5 мг/мл до 55 мг/мл, от примерно 8 мг/мл до 45 мг/мл, от примерно 10 мг/мл до 40 мг/мл, от примерно 10 мг/мл до 30 мг/мл или от примерно 2 мг/мл до примерно 45 мг/мл, от примерно 5 мг/мл до 45 мг/мл, от примерно 5 мг/мл до 35 мг/мл, от примерно 5 мг/мл до 25 мг/мл, таком как от примерно 5 мг/мл до примерно 20 мг/мл.
Кроме того, авторы настоящего изобретения показали, что соответствующие количества антиоксидантов должны находиться в диапазоне от примерно 0,05 до 5 мг/мл, в частности, от примерно 0,1 мг/мл до 5 мг/мл, от 0,1 мг/мл до 2,5 мг/мл, от 0,1 мг/мл до 2 мг/мл или от примерно 0,1 мг/мл до 1 мг/мл.
Существенно, что коэффициент соотношения между полиолом и сахаридом должен быть соответствующим образом откорректирован. В подходящих вариантах осуществления настоящего изобретения указанный полиол присутствует в весовом соотношении относительно указанного сахарида в диапазоне от примерно 100:1 до 1:50. В еще более подходящих вариантах осуществления настоящего изобретения указанное весовое соотношение составляет от примерно 50:1 до 1:10, более предпочтительно, от примерно 20:1 до 1:5. В других подходящих вариантах осуществления настоящего изобретения указанное весовое соотношение относится к диапазонам от примерно 10:1 до 1:2 и от примерно 6:1 до 1:2. Однако, как показали авторы настоящего изобретения (см. пример 5), лиофилизированная лепешка слеживается при включении увеличенных количеств сахарида. В этой связи, весьма подходящие варианты относятся к таким вариантам осуществления настоящего изобретения, где указанный сахарный спирт присутствует в весовом соотношении относительно данного сахарида в диапазоне от примерно 4:1 до 1:1, таком как от 4:1 до 3:2 или от примерно 1:1 до 3:2.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения указанный полиол представляет собой маннит, а в других вариантах сахарид представляет сахарозу. Кроме того, в некоторых вариантах антиоксидант представляет собой метионин.
Композиции могут быть соответствующим образом изготовлены путем включения других фармацевтически приемлемых наполнителей с целью создания композиций, приемлемых для парентерального введения, в частности, внутривенного введения. Фактически используемые методы создания композиций, подходящих для парентерального введения, известны или очевидны для специалистов в данной области и описаны были детально, например, в руководстве Ремингтона (Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th ed., Maсk Publishing Company, Easton, PA (1995)). Термин "наполнители" включает фармацевтически приемлемые реагенты, обеспечивающие подходящие свойства лиофилизированной лепешке (объемные наполнители), действующие в направлении лиопротекции и криопротекции белка, выполняющие функцию поддержания pH, подержания приемлемого уровня тоничности, а также соответствующей конформации белка при хранении, так что обеспечивается существенное поддержание биологической активности и стабильности белка.
Таким образом, согласно настоящему изобретению, рассматриваемая в нем композиция дополнительно включает модификатор тоничности. Модификатор тоничности может быть выбран из группы, состоящей из ацетата натрия, лактата натрия, хлорида натрия, хлорида калия и хлорида кальция. Однако, не исключаются другие приемлемые модификаторы тоничности. Следует отметить также, что композиции могут включать более высокие концентрации средства модификации тоничности, при условии, что композиция становится изотонической или близкой к изотоничности перед ее использованием (например, слегка гипертонической или гипотонической), при этом, например, объемные композиции продукта не обязательно должны быть точно изотоничными, но соответствующими физиологическому диапазону.
Дальнейшая стабилизация композиции, включающей полипептид фактора VII, может быть достигнута путем добавления поверхностно-активных веществ. Таким образом, в еще других интересных вариантах осуществления настоящего изобретения рассматриваемая в нем композиция дополнительно включает поверхностно-активное вещество, при этом указанное поверхностно-активное вещество выбирают из группы, состоящей из полисорбата, например, Твина®, такого как полисорбат 20 или 80, полиоксиэтиленалкильных эфиров, например, лаурилового эфира полиоксила 23 (например, Бриджа 35®), или полоксамеров, таких как полоксамер 188 (например, Плуроник®) или полоксамер 407 (например, Литрол®), и другие блок-сополимеров этилена/полипропилена, полиэтиленгликолей (ПЭГ), таких как ПЭГ8000, или в типичном случае поверхностно-активные вещества добавляют в количестве от 0,005 до 5 мг/мл. Предпочтительные количества составляют примерно от 0,01 до 3 мг/мл, более предпочтительно от 0,01 до 0,3 мг/мл, в случае Твина 20 и/или Твина 80, и от 0,05 до 3,0 мг/мл, в случае Полоксамера 188.
В других предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения рассматриваемая в нем композиция дополнительно включает другие фармацевтические наполнители, действующие в качестве добавок, увеличивающих объем. Иными словами, в настоящие композиции включаются также наполнители, отличные от маннита. В частности, в композиции, получаемые при лиофилизации, включают объемные наполнители.
Исходное содержание полипептидов фактора VII в композиции составляет предпочтительно от примерно 0,6 мг/мл до примерно 10,0 мг/мл, составляя, в частности, от примерно 0,6 мг/мл до примерно 6,0 мг/мл, от примерно 0,6 мг/мл до примерно 5 мг/мл или от примерно 0,6 мг/мл до примерно 4 мг/мл.
В одном варианте настоящего изобретения данная композиция включает: полипептид фактора VII, маннит, сахарозу и Твин 80, имеющая содержание влаги не более чем примерно 3%, и имеет pH в диапазоне значений от 5,0 до 7,0, в случае растворения композиции в воде. В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиция также включает один или более компонентов, выбранных из следующего перечня: CaCl2, NaCl и глицилглицин. В одном варианте осуществления настоящего изобретения полипептид фактора VII представляет собой человеческий фактор VIIа.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиция включает: полипептид фактора VII, маннит, сахарозу, метионин и Твин 80, характеризуется содержанием влаги не более чем примерно 3%, и имеет pH в диапазоне значений от 5,0 до 7,0, в случае растворения композиции в воде. В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиция также включает один или более компонентов, выбранных из следующего перечня: CaCl2, NaCl и глицилглицин. В одном варианте осуществления настоящего изобретения полипептид фактора VII представляет собой человеческий фактор VIIа.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения композиция включает: полипептид фактора VII, маннит, сахарозу, гистидин и Твин 80, характеризуется содержанием влаги не более чем примерно 3%, и имеет pH в диапазоне значений от 5,0 до 7,0, в случае растворения композиции в воде. В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиция также включает один или более компонентов, выбранных из следующего перечня: CaCl2, NaCl и глицилглицин. В одном варианте осуществления настоящего изобретения полипептид фактора VII представляет собой человеческий фактор VIIа.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиция включает: полипептид фактора VII, маннит, сахарозу, метионин, гистидин и Твин 80, характеризуется содержанием влаги не более чем примерно 3%, и имеет pH в диапазоне значений от 5,0 до 7,0, в случае растворения композиции в воде. В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиция также включает один или более компонентов, выбранных из следующего перечня: CaCl2, NaCl и глицилглицин. В одном варианте осуществления настоящего изобретения полипептид фактора VII представляет собой человеческий фактор VIIа.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения композиция включает: полипептид фактора VII, маннит, сахарозу и Полоксамер 188, характеризуется содержанием влаги не более чем примерно 3%, и имеет pH в диапазоне значений от 5,0 до 7,0, в случае растворения композиции в воде. В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиция также включает один или более компонентов, выбранных из следующего перечня: CaCl2, NaCl и глицилглицин. В одном варианте осуществления настоящего изобретения полипептид фактора VII представляет собой человеческий фактор VIIа.
В другом варианте композиция также включает: полипептид фактора VII, маннит, сахарозу, метионин и Полоксамер188, характеризуется содержанием влаги не более чем примерно 3%, и имеет pH в диапазоне значений от 5,0 до 7,0, в случае растворения композиции в воде. В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиция также включает один или более компонентов, выбранных из следующего перечня: CaCl2, NaCl и глицилглицин. В одном варианте осуществления настоящего изобретения полипептид фактора VII представляет собой человеческий фактор VIIа.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения композиция включает: полипептид фактора VII, маннит, сахарозу, гистидин и Полоксамер 188, характеризуется содержанием влаги не более чем 3%, и имеет pH в диапазоне значений от 5,0 до 7,0, в случае растворения композиции в воде. В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиция также включает один или более компонентов, выбранных из следующего перечня: CaCl2, NaCl и глицилглицин. В одном варианте осуществления настоящего изобретения полипептид фактора VII представляет собой человеческий фактор VIIа.
В другом варианте композиция включает: полипептид фактора VII, маннит, сахарозу, гистидин, метионин и Полоксамер 188, характеризуется содержанием влаги не более чем 3%, и имеет pH в диапазоне значений от 5,0 до 7,0, в случае растворения композиции в воде. В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиция также включает один или более компонентов, выбранных из следующего перечня: CaCl2, NaCl и глицилглицин. В одном варианте осуществления настоящего изобретения полипептид фактора VII представляет собой человеческий фактор VIIа.
В других вариантах композиции имеют вид, показанный в таблице А.
Таблица А
Соединение Композиция А Композиция B Композиция C Композиция D
Полипептид FVII 0,6-10 мг/мл 0,6-10 мг/мл 0,6-10 мг/мл 0,6-10 мг/мл
CaCl2×2H2O 5-20 мМ 5-20 мМ 5-20 мМ 5-20 мМ
NaCl 0-50 мМ 0-50 мМ 0-50 мМ 0-50 мМ
Глицилглицин 0-15 мМ 0-15 мМ 0-15 мМ 0-15 мМ
L-гистидин 0-20 мМ 0-20 мМ 0-20 мМ 0-20 мМ
Маннит 20-40 мг/мл 20-40 мг/мл 20-40 мг/мл 20-40 мг/мл
Сахароза 5-20 мг/мл - - 5-20 мг/мл
Метионин 0-1 мг/мл 0-1 мг/мл 0-1 мг/мл 0-1 мг/мл
Твин 80 0,05-0,15 мг/мл 0,05-0,15 мг/мл    
Полоксамер 188 - - 0,5-3 мг/мл 0,5-3 мг/мл
pH 5,0-7,0 5,0-7,0 5,0-7,0 5,0-7,0
В других вариантах осуществления настоящего изобретения композиции имеют вид, показанный в таблице В.
Таблица В
Соединение Композиция E Композиция F Композиция G Композиция H
Полипептид FVII 1,0 мг/мл 1,0 мг/мл 1,0 мг/мл 1,0 мг/мл
CaCl2×2H2O 10 мМ 10 мМ 10 мМ 10 мМ
NaCl 39 мМ 39 мМ 39 мМ 39 мМ
Глицилглицин 10 мМ 10 мМ 10 мМ 10 мМ
Маннит 25 мг/мл 25 мг/мл 25 мг/мл 25 мг/мл
Сахароза 10 мг/мл 10 мг/мл 10 мг/мл 10 мг/мл
Метионин 0,5 мг/мл 0,5 мг/мл 0,5 мг/мл 0,5 мг/мл
Твин 80 0,1 мг/мл - 0,1 мг/мл -
Полоксамер 188 - 1,0 мг/мл - 1,0 мг/мл
L-гистидин - - 10 мМ 10 мМ
pH 6,0 6,0 6,0 6,0
Полипептид FVII 1,0 мг/мл 1,0 мг/мл 1,0 мг/мл 1,0 мг/мл
CaCl2×2H2O 10 мМ 10 мМ 10 мМ 10 Мм
NaCl 39 мМ 39 мМ 39 мМ 39 мМ
Глицилглицин 10 мМ 10 мМ 10 мМ 10 мМ
Маннит 25 мг/мл 25 мг/мл 25 мг/мл 25 мг/мл
Сахароза 10 мг/мл 10 мг/мл 10 мг/мл 10 мг/мл
Метионин - - - -
Твин 80 0,1 мг/мл - 0,1 мг/мл -
Полоксамер 188 - 1,0 мг/мл - 1,0 мг/мл
L-гистидин - - 10 мМ 10 мМ
pH 6,0 6,0 6,0 6,0
В других вариантах композиции E1-L1 содержат наполнители и их количества, указанные в таблице В, но они вводятся в состав со значением pH 5,9.
В других вариантах композиции E2-L2 содержат наполнители и их количества, указанные в таблице В, но они вводятся в состав со значением pH 5,8.
В других вариантах композиции E3-L3 содержат наполнители и их количества, указанные в таблице В, но они вводятся в состав со значением pH 5,7.
В других вариантах композиции E4-L4 содержат наполнители и их количества, указанные в таблице В, но они вводятся в состав со значением pH 5,6.
В других вариантах композиции E5-L5 содержат наполнители и их количества, указанные в таблице В, но они вводятся в состав со значением pH 5,5.
Как обсуждалось выше, авторы настоящего изобретения разработали способ стабилизации полипептидов фактора VII за счет получения белков в виде твердых композиций, включающих выбранные фармацевтически приемлемые наполнители, в состав которых важно включать стабилизаторы. Согласно настоящему изобретению, такое средство, способствующее стабилизации, состоит из сочетания средств из по меньшей мере двух групп наполнителей, выбранных из наполнителей, представляющих собой полисахариды, полиолы и антиоксиданты. Кроме того, авторы настоящего изобретения показали, что сахариды (сахароза) и антиоксиданты (метионин) существенны для улучшения стабильности полипептида фактора VII.
В этой связи, другой аспект настоящего изобретения относится к способу получения стабильного полипептида фактора VII. Указанный способ включает стадии:
i) Создание композиции указанного полипептида фактора VII в растворе, включающей по меньшей мере один стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из:
а) сочетания антиоксиданта и маннита;
b) сочетания метионина и полиола;
c) сочетания сахарида и маннита;
d) сочетание сахарозы и полиола и
e) метионина.
ii) Обработка указанного раствора с получением твердой композиции, характеризующейся содержанием влаги не более чем примерно 3 мас.%.
В особо интересных вариантах осуществления настоящего изобретения рассматриваемый в нем способ включает выбор указанного антиоксиданта из группы, состоящей из гомоцистеина, цистеина, цистатионина, метионина, глютатиона и пептидов, содержащих одно из указанных соединений: гомоцистеин, цистеин, цистатионин, метионин и глютатион. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антиоксидант представляет собой метионин. В других интересных вариантах осуществления настоящего изобретения указанный сахарид выбирают из группы, состоящей из сахарозы, декстрозы, лактозы, мальтозы, трегалозы, циклодекстринов, мальтодекстринов и декстранов. В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения полиолы представляют собой маннит и сахарид представляет собой сахарозу. Кроме того, в других более предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения антиоксидант представляет собой метионин.
Предпочтительно содержание сахарида и необязательно содержание антиоксиданта в указанном растворе (i) должно корректироваться с целью достижения повышенной стабилизации полипептидов фактора VII.
В соответствии с настоящим изобретением, сахарид должен содержаться в количестве от примерно 0,5 до 75 мг/мл, в частности от примерно 2 мг/мл до 60 мг/мл, от примерно 5 мг/мл до 55 мг/мл, от примерно 8 мг/мл до 45 мг/мл, от примерно 10 мг/мл до 40 мг/мл, от примерно 10 мг/мл до 30 мг/мл или от примерно 2 мг/мл до 45 мг/мл, от примерно 5 мг/мл до 45 мг/мл, от примерно 5 мг/мл до 35 мг/мл, от примерно 5 мг/мл до 25 мг/мл, в таком диапазоне как примерно от 5 мг/мл до 20 мг/мл.
В соответствии с настоящим изобретением, полиол должен содержаться в количестве от примерно 0,5 до 75 мг/мл, в частности, в таком количестве, как от примерно 2 мг/мл до 60 мг/мл, от примерно 5 мг/мл до 55 мг/мл, от примерно 8 мг/мл до 45 мг/мл, от примерно 10 мг/мл до 40 мг/мл, от примерно 10 мг/мл до 30 мг/мл или от примерно 2 мг/мл до 45 мг/мл, от примерно 5 мг/мл до 45 мг/мл, от примерно 5 мг/мл до 35 мг/мл, от примерно 5 мг/мл до 25 мг/мл, в таком диапазоне как от примерно 5 мг/мл до 20 мг/мл.
Антиоксиданты должны находиться в количестве от примерно 0,05 до 10 мг/мл, предпочтительно в количестве от примерно 0,1 мг/мл до 5 мг/мл, более предпочтительно, в количестве от примерно 0,1 мг/мл до примерно 2,5 мг/мл, еще более предпочтительно, в количестве от примерно 0,1 мг/мл до 2 мг/мл и наиболее предпочтительно, от примерно 0,1 мг/мл до 1 мг/мл.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения способ получения стабильного полипептида фактора VII включает лиофильную сушку. Лиофильная сушка относится к процессу, в ходе которого раствор, включающий указанный полипептид фактора VII, вводят во флакон для лиофилизации или аналогичный резервуар. Указанный полипептид фактора VII может быть необязательно подвергнут стерильному фильтрованию перед началом лиофильной сушки. На полке в аппарате для лиофильной сушки подают охлаждение для замораживания флаконов и раствора до уровня, ниже критических температур для данного продукта. Далее удаляют воду путем создания вакуума и конденсации водяных паров на ледяном конденсаторе в морозилке. Когда продукт будет сухим, обычно содержащим менее чем 3% остаточной влаги (измеряемой, например, по методике кулонометрического титрования Карла Фишера, описанной выше), флаконы закрывают и завинчивают крышкой. Процесс производства завершают, и композиция имеет по окончании процесса вид лиофилизированной лепешки.
Такие композиции при введении пациенту путем инъекций должны восстанавливаться перед использованием с использованием соответствующей жидкости. Они могут также восстанавливаться для других целей, например, для включения в процесс изготовления других фармацевтических композиций. Однако настоящее изобретение не исключает, что композиции могут вводиться пациенту в твердой форме.
Композиции восстанавливают с использованием приемлемого, предпочтительно стерильного разбавителя или носителя, предпочтительно водного носителя. Множество водных носителей может использоваться для этих целей, например, вода (в частности, вода для инъекций/ВДИ (WFI)), забуференная вода, солевой раствор (например, 0,4% солевой раствор), глицин (например, 0,3% глицин), гистидин и т.п. Восстанавливающий разбавитель может также содержать одну или более солей, таких как соль кальция (например, CaCl2) или сочетание соли натрия и соли кальция (например, NaCl и CaCl2).
Восстановленные композиции предназначаются для парентерального введения с целью профилактического и/или терапевтического лечения. Предпочтительно терапевтические композиции вводят парентерально, например, внутривенно, подкожно или внутримышечно, или вводят способом непрерывной или пульсирующей инфузии.
В этой связи, еще один аспект настоящего изобретения относится к применению твердой стабилизированной композиции для получения лекарственного средства, применяемого при лечении реактивного синдрома фактора VII.
Иными словами, один аспект настоящего изобретения относится к применению полипептида фактора VII в процессе изготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения реактивного синдрома фактора VII, где указанное лекарственное средство содержит композицию, включающую:
Полипептид фактора VII и по меньшей мере одно средство, способствующее стабильности, выбранное из группы, состоящей из:
а) сочетания антиоксиданта и маннита;
b) сочетания метионина и полиола;
c) сочетания сахарида и маннита;
d) сочетания сахарозы и полиола и
e) метионина,
где указанная композиция характеризуется содержанием влаги не более чем примерно 3%.
Кроме того, в других аспектах настоящее изобретение относится к введению указанного стабилизированного полипептида фактора VII пациенту для лечения реактивного синдрома фактора VII. Таким образом, настоящее изобретение относится к способу лечения реактивного синдрома фактора VII, включающему введение субъекту, при необходимости такого лечения, эффективного количества композиции, включающей полипептид фактора VII и по меньшей мере одно средство, способствующее стабильности, выбранное из группы, состоящей из:
а) сочетания антиоксиданта и маннита;
b) сочетания метионина и полиола;
c) сочетания сахарида и маннита;
d) сочетания сахарозы и полиола и
e) метионина,
где указанная композиция характеризуется содержанием влаги не более чем примерно 3%.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения реактивный синдром фактора VII представляет собой гемофилию А, гемофилию В, недостаточность фактора XI, недостаточность фактора VII, тромбоцитопению, болезнь фон Виллебранда, состояние, связанное с наличием ингибитора фактора свертывания крови, состояние после хирургического вмешательства или травмы. Дополнительно, фактор VII-реактивный синдром может быть связан с проведением антикоагуляционной терапии.
Как указывалось выше, композиция имеет твердую форму. Соответственно, в подходящем варианте осуществления настоящего изобретения данное лекарственное средство должно быть пригодным для растворения, что позволяет осуществлять парентеральное введение такого лекарственного средства. Таким образом, при введении композиции пациенту в данный процесс включается стадия растворения композиции в подходящей жидкости перед стадией введения.
Используемые в описании сокращения имеют следующие значения:
FVII - Фактор свертывания крови VII в виде единичной цепи
FVIIа - Фактор свертывания крови VII в расщепленной активированной двухцепочечной форме
rFVII (rFIIA) - Рекомбинантный фактор VII (рекомбинантный фактор VIIа)
Приведенные ниже примеры даны для целей иллюстрации изобретения, но не с целью его ограничения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
Ниже показаны композиции, включающие полипептиды фактора VII и полученные по процедуре примера 2. Типичные наполнители и их типичные количества также показаны ниже.
В таблице 1 приведены значения концентрации активных ингредиентов и наполнителей, в том случае, когда композиции имеют жидкую форму, и относятся к композиции перед завершением процесса производства (то есть перед завершением процесса лиофильной сушки) или в случае уже восстановленного раствора.
В таблице 2 приведены значения концентрации активных ингредиентов и наполнителей в том случае, когда композиции имеют твердую форму, то есть форму, полученную после лиофильной сушки.
Таблица 1
Композиции и содержание наполнителей в растворе
Основная функция Наполнители Содержание (мг/мл) в жидкой композиции
Активный ингредиент RFVIIа 0,6-5
Модификатор тоничности Хлорид натрия 0-4
Модификатор тоничности/стабилизатор Хлорид кальция, 2H2O 1-7
Наполнитель для создания объема Глицилглицин 1,32 (0-1,5)
Поверхностно-активное вещество Полисорбат 80 0,05-2
Наполнитель для создания объема/криопротектор/лиопротектор Маннит 10-40
Наполнитель для создания объема/криопротектор/ лиопротектор Сахароза 10-40
Антиоксидант Метионин 0-1,0
  рH 5-6
Таблица 2
Композиции и содержание наполнителей в форме, полученной после лиофильной сушки
Основная функция Наполнители Содержание (объемн.%) в жидкой композиции
Активный ингредиент RFVIIа 0,6-19
Модификатор тоничности Хлорид натрия 0-15
Модификатор тоничности/стабилизатор Хлорид кальция, 2H2O 1,0-24,0
Наполнитель для создания объема Глицилглицин 0-6,0
Поверхностно-активное вещество Полисорбат 80 0,05-8,0
Наполнитель для создания объема/криопротектор/ лиопротектор Маннит 13-76
Наполнитель для создания объема/криопротектор/ лиопротектор Сахароза 13-76
Антиоксидант Метионин 0-4,2
  рH 5-6
Пример 2
Получение композиций
В основном композицию получают из очищенной массы раствора. Добавляют наполнители и раствор разбавляют до желательной концентрации rFVIIa. Полученный раствор подвергают стерильному фильтрованию с использованием стерилизованного мембранного фильтра (размер пор 0,2 микрона или эквивалентный размер) и затем вводят в стерильные стеклянные флаконы. Флаконы подвергают лиофильной сушке, закрывают пробками и запечатывают алюминиевыми крышками (типа хлопающих крышек).
Пример 3
Композиции 1-19, включающие различные количества хлорида натрия, маннита, сахарозы и метионина и имеющие разные значения pH, готовят с использованием способа, описанного в примере 2. Композиции включают фиксированные концентрации фактора VII (1,0 мг/мл), хлорида кальция, 2Н2О (1,47 мг/мл), глицилглицина (1,32 мг/мл) и Полисорбата 80 (1,0 мг/мл).
Таблица 3
Композиции 1-19
Содержание наполнителей, мг/мл
Соединение № NaCl Маннит Сахароза Метионин pH
1 0 10 10 0 6,0
2 3,5 10 10 0 5,0
3 0 40 10 0 5,0
4 3,5 40 10 0 6,0
5 0 10 40 0 5,0
6 3,5 10 40 0 6,0
7 0 40 40 0 6,0
8 3,5 40 40 0 5,0
9 0 10 10 0,5 5,0
10 3,5 10 10 0,5 6,0
11 0 40 10 0,5 6,0
12 3,5 40 10 0,5 5,0
13 0 10 40 0,5 6,0
14 3,5 10 40 0,5 5,0
15 0 40 40 0,5 5,0
16 3,5 40 40 0,5 6,0
17 1,75 25 25 0,25 5,5
18 1,75 25 25 0,25 5,0
19 1,75 25 25 0,25 5,0
Пример 4
Аналитические методы, используемые для определения стабильности на основе соответствующих параметров
А. Определение окисленных форм путем ВЭЖХ с обращением фазы (ОФ-ВЭЖЗ)
Колонка ВЭЖХ: колонка с размером 4,5×250 мм, заполненная бутил-содержащим силикагелем с размером части 5 мкм, с размером пор 300Å. Температура колонки: 70°С. Элюент А: Вода - 99,9 объемн.% и трифторуксусная кислота - 0,1 объемн.%. Элюент В: ацетонитрил - 80 объемн.%, трифторуксусная кислота - 0,09 объемн.% и вода - 19,91 объемн.%. Через колонку пропускают линейный градиент элюента от Х% В до (Х+13)% В в течение 30 минут. Скорость течения: 1,0 мл/мин. Выявление проводят при длине волны 214 нм.
Окисленные формы представлены полипептидами фактора VII, в которых имеются сульфоксиды метионина. Например, два основных производных FVII представляют собой Met(O)298 FVII и Met(O)306 FVII.
Содержание окисленных форм выражают в виде процента от исходного количества фактора VII в композиции при изготовлении, которое восстанавливается в виде окисленных форм фактора VII.
В. Определение агрегатных форм полипептида фактора VII путем высокоэффективной гель-проникающей хроматографии (ГП-ВЭЖХ).
ГП-ВЭЖХ проводят на колонке Уотерс Протеин Пак 300 SW (Waters Protein Pak 300 SW) с размером 7,5×300 мм, с использованием 0,2 М сульфата аммония, при pH 7,0, содержащего 5% изопропанола, в качестве мобильной фазы. Скорость течения: 0,5 мл/мин и выявление проводят при длине волны 215 нм.
Содержание окисленных форм выражают в виде процентов от исходного количества фактора VII в композиции при изготовлении, которое восстанавливается в виде димерных, олигомерных и полимерных форм фактора VII.
Пример 5
Содержание окисленных форм фактора VIIа после завершения процесса лиофильной сушки и в процессе хранения:
Композиции 1-19 из примера 3 анализируют по методу А (пример 4) для определения содержания окисленных форм после завершения процесса лиофильной сушки и после окончания срока хранения при 30°С в течение 2 и 8 месяцев.
Таблица 4
Содержание окисленных форм и его повышение при хранении в течение 8 месяцев
% фактора VIIа, превращенного в окисленные формы, от исходного содержания
Композиция № 0 2 8 Повышение за период 0-8 месяцев
1 2,5 3,5 4,8 2,3
2 2,7 3 6,1 3,4
3 2,3 3,7 7 4,7
4 2,7 5,5 12 9,3
5 2,6 3,6 5,3 2,7
6 2,7 3,3 5,8 3,1
7 3 3,5 5,2 2,2
8 2,3 2,9 3,4 1,1
9 1,6 1,5 1,7 0,1
10 1,7 1,7 2,1 0,4
11 1,7 1,8 2,5 0,8
12 1,6 1,6 1,9 0,3
13 1,7 1,6 1,7 0
14 1,6 1,5 1,6 0
15 1,6 1,5 1,8 0,2
16 1,7 1,6 1,8 0,1
17 1,7 1,6 н.a н.a
18 1,7 1,6 1,9 0,2
19 1,7 1,6 1,8 0,1
н.a. - не анализировали
Статистический анализ показывает, что композиции, содержащие метионин, наиболее стабильны в отношении окислительной деградации.
Пример 6
Содержание агрегатных форм фактора VII после завершения процесса лиофильной сушки и при хранении:
Композиции 1-19 из примера 3 анализируют по методу В (пример 4) для определения содержания агрегатных форм после завершения процесса сушки при замораживании и после окончания срока хранения при 30°С в течение 2-8 месяцев.
Таблица 5
Содержание агрегатных форм и их повышение при хранении в течение 8 месяцев
% фактора VIIа, превращенного в агрегатные формы, от исходного содержания
Композиция № 0 2 8 Повышение за период 0-8 месяцев
1 0,7 0,8 0,9 0,2
2 1 2 2,9 1,9
3 1,5 2,5 3,5 2
4 1,1 2,1 3,1 2
5 0,8 1 1,1 0,3
6 0,8 1,2 1,1 0,3
7 0,9 1 0,9 0
8 0,9 1 1,2 0,3
9 0,9 1 1,1 0,2
10 0.8 1,7 2,5 1,7
11 1 1,2 1,5 0,5
12 1,3 2 2,8 1,5
13 0,7 0,8 0,9 0,2
14 1 1,7 1,4 0.4
15 1,1 1,4 1,5 0,4
16 0,8 0,9 1. 0,2.
17 0,9 1,1 н.a н.a
18 0,9 1 1,5 0,7
19 1 1 1,1 0,1
н.а. - не анализировали
Статистический анализ показывает, что присутствие сахарозы в композициях является важным фактором, способствующим снижению уровня образования агрегатных форм.
Пример 7
Содержание димерных и олигомерных форм фактора VII после завершения процесса лиофильной сушки и окончания срока хранения:
Композицию А, включающую полиол и сахарид в соответствии с таблицей 6, получают по способу, описанному в примере 2. Композиция дополнительно включает фактор VIIa (1,0 мг/мл), хлорид кальция × 2H2O (1,47 мг/мл), глицилглицин (1,32 мг/мл) и полисорбат 80 (0,7 мг/мл), pH составляет 5,0.
Композицию А анализируют по методу В (пример 4) для определения содержания агрегатных форм по завершении процесса лиофильной сушки и после окончания срока хранения при 30°С в течение 1 и 2 месяцев. В таблице 6 приведены данные по процентному содержанию фактора VII, превращенного в агрегатные формы, относительно его исходного содержания.
Таблица 6
% фактора VIIа, превращенного в агрегатные формы, от исходного содержания
Композиция Добавки Месяцы
0 1 2
А Маннит, 25 мг/мл
Трегалоза, 15 мг/мл		 1,1 2,0 1,7
Пример 8
Структурная стабильность лиофильно высушенной лепешки показана для различных композиций 1-19 (см. пример 3). В таблице 7 приводится коэффициент соотношения маннита и сахарозы для каждой композиции.
Таблица 7
Стабильность лиофильно высушенной лепешки в соответствии с достигаемым соотношением между маннитом и сахарозой
  Композиции
5, 6, 13, 14 1, 2, 7, 8, 9, 10, 15, 16 17, 18 и 19 3, 4, 11, 12
Весовое соотношение Ман: Сах 1:4 1:1 1:1 4:1
Лофильно высушенная лепешка С ОК ОК ОК
С - слежавшаяся лепешка, Ман: маннит, Сах: сахароза, ОК: небольшое слеживание или отсутствие слеживания
Пример 9
Приведенные ниже композиции получают при методике примера 2 с использованием при заполнении объемов 1 и 5 мл.
Композиция A B C
rFVIIа (мг/мл) 0,6 1,0 1,0
CaCl2 (мМ) 10 10 10
Глицилглицин 10 10 10
L-гистидин (мМ) - 10 10
NaCl (мМ) 50 39 39
Твин 80 (мг/мл) 0,038 0,07 0,07
Метионин (мг/мл) - 0,5 2,0
Маннит (мг/мл) 30 25 25
Сахароза (мг/мл) - 10 10
pH 5,5 5,5 5,5
Стабильность композиций исследуют при температурах 25°С, 30°С и 40°С и получают следующие результаты. Содержимое флаконов восстанавливают водой перед проведением анализа.
Димерные и олигомерные формы
Содержание димерных и олигомерных форм определяют методом ГП-ВЭЖХ, как описано в примере 4. Все результаты приведены в виде %.
Заполняемый объем 5 мл:
Композиция 0 месяцев 1/2 месяца 1 месяц 3 месяца 6 месяцев
40°С 40°С 40°С 30°С 25°С 25°С
A 3,3 5,5 6,4 8,0 6,0 6,3 6,3
B 2,3 2,7 2,8 3,0 2,7 3,2 3,0
C 4,0 4,2 4,6 4,7 4,3 4,4 4,4
Заполняемый объем 1 мл:
Композиция 0 месяцев 3 месяца
40°С 30°С 25°С
A 2,7 11,0 7,0 6,5
B 2,2 7,4 3,4 2,9
C 3,3 6,9 3,8 3,7
Кроме того, содержание агрегатных форм в композиции А (= стандарт) и композиции В (= новый вариант) при объеме заполнения 5 мл можно определить по фиг. 2а.
Окисленные формы
Содержание окисленных форм определяют методом ГП-ВЭЖХ, как описано в примере 4.
Заполняемый объем 5 мл:
Композиция 0 месяцев 1/2 месяца 1 месяц 3 месяца 6 месяцев
40°С 40°С 40°С 30°С 25°С 25°С
A 2,1 2,8 3,4 4,0 3,4 3,1 3,5
B 1,3 1,3 1,6 1,3 1,6 1,6 1,4
C 1,2 1,4 1,6 1,8 1,6 1,6 1,3
Заполняемый объем 1 мл:
Композиция 0 месяцев 3 месяца
40°С 30°С 25°С
A 2,5 4,6 4,0 5,3
B 1,3 2,0 1,1 1,8
C 1,3 1,8 1,7 1,5
Кроме того, содержание окисленных форм в композиции А (= стандарт) и композиции В (= новый вариант) при объеме заполнения 5 мл можно определить по фиг. 2b.
Активность
Активность определяют в тесте на одностадийное свертывание крови, как описано в примере 12, с использованием композиций, которые хранились при температуре 30°С в течение 3 месяцев. Удельную активность вычисляют на основе содержания rFVIIa в композициях и получают при этом следующие результаты:
Композиция Удельная активность (МЕ/мг)
A 50523
B 58373
C 60318
Интерпретация результатов
Полученные результаты показывают, что композиции В и С, которые содержат маннит, сахарозу и метионин, более стабильны, то есть демонстрируют меньшее увеличение содержание димерных и олигомерных форм, а также окисленных форм. Соответственно, активность таких композиций выше при измерении после 3 месяцев хранения при температуре 30°С.
Пример 10
Приведенные ниже композиции получают по методике, описанной в примере 2, при заполнении проб до объема 5 мл.
Композиция A B C D E
rFVIIа (мг/мл) 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
CaCl2 (мМ) 10 10 10 10 10
Глицилглицин 10 10 10 10 10
L-гистидин (мМ) 10 10 10 10 10
NaCl (мМ) 39 39 39 39 39
Метионин (мг/мл) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Твин 20 (мг/мл) 0,1        
Твин 80 (мг/мл)   0,1      
Полоксамер 188 (мг/мл)     0,1    
Бридж 35 (мг/мл)       0,1  
Маннит 25 25 25 25 25
Сахароза (мг/мл) 10 10 10 10 10
pH 5,5 5,5 5,5 5,5 5,5
Содержимое флакона восстанавливают в воде и встряхивают в течение 19 часов для анализа физической стабильности композиций. Эффект встряхивания исследуют путем визуального осмотра и измерения УФ-поглощения при длине волны 400 нм (Abs = поглощ. в таблице ниже). Приведенные ниже результаты четко показывают повышение физической стабильности, наблюдаемое при добавлении детергента.
  Перед встряхиванием После встряхивания
Композиция Визуальный осмотр Поглощение Визуальный осмотр Поглощение
A Прозрачная жидкость 0,01 Прозрачная жидкость с некоторыми частицами 0,01
B Прозрачная жидкость 0,00 Слегка мутная 0,36
C Прозрачная жидкость 0,00 Прозрачная жидкость с некоторыми частицами 0,00
D Прозрачная жидкость 0,00 Прозрачная жидкость с некоторыми частицами 0,00
E Прозрачная жидкость 0,01 Мутная 2,18
Пример 11
Шесть композиций получают по методике, описанной в примере 2. Композиции имеют следующий состав:
rFVIIa 1,0 мг/мл
CaCl2 10 мМ
Глицилглицин 10 мМ
L-гистидин 10 мМ
NaCl 39 мМ
Твин 80 0,07 мг/мл
Маннит 25 мг/мл
Сахароза 10 мг/мл
Каждую из шести композиций корректируют до достижения различных pH:
Композиция А: pH 5,0
Композиция B: pH 5,5
Композиция C: pH 6,0
Композиция D: pH 6,5
Композиция E: pH 7,0
Композиция F: pH 7,5
Стабильность шести композиций определяют во флаконах, хранящихся при температурах 25°С и 40°С. Результаты показаны в приведенной ниже таблице (и на фиг. 1а и на фиг. 1b).
Композиция Димерные и олигомерные формы (агрегаты) (%)
  0 месяцев 40°С/3 месяца 25°С/3 месяца
A 2,2 3,8 2,5
B 1,7 3,2 1,9
C 1,5 2,7 1,7
D 1,1 1,9 1,3
E 0,8 1,6 1,0
F 0,8 1,6 1,0
Композиция Окисленные формы (%)
  0 месяцев 40°С/3 месяца 25°С/3 месяца
A 2,7 3,3 3,4
B Н/А 4,0 3,6
C 2,6 5,0 3,7
D 2,5 4,9 3,6
E 2,6 10,0 4,6
F 2,6 8,7 4,7
Содержание димерных и олигомерных форм, а также окисленых форм определяют по методике примера 4.
Пример 12
Тесты для определения биологической активности полипептидов фактора VII
Тест на активность фактора VIIа
Соответствующий тест для определения активности фактора VIIа и в этой связи, для выбора подходящих вариантов фактора VIIа, может быть проведен в качестве предварительного теста in vitro (см. "Тест на гидролиз in vitro").
Тест на гидролиз in vitro
Нативный фактор VIIа (дикого типа) и вариант фактора VIIа (называемый далее как "фактор VIIа") могут быть проанализированы для определения уровня удельной активности. Анализ может быть проведен параллельно для непосредственного сравнения их удельных активностей. Тест проводят в микротитрационном планшете (MaxiSorp, Nunc, Дания). Хромогенный субстрат D-Ile-Pro-Arg-п-нитроанилид (S-2288, Chromogenix, Швеция) до конечной концентраций 1 мМ добавляют к фактору VIIа (конечная концентрация 100 мМ) в 50 мМ буфера Hepes, рH 7,4, содержащем 0,1 мМ NaCl, 5 мМ CaCl2 и 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина. Поглощение при длине волны 405 нм измеряют непрерывно в счетчике для микротитрационных планшетов SpectraMaxTM 340 (Molecular Devices, СШA). Поглощение развивается после 20-минутной инкубации, из полученной величины вычитают поглощение в ячейке со слепой пробой, не содержащей фермента, и разность используют для вычисления соотношения между активностями варианта фактора VIIа и фактора VIIа дикого типа:
Коэффициент соотношения = (А405 нм варианта фактора VIIа)/ (А405 нм фактор VIIа дикого типа)
На основании проведенных вычислений могут быть идентифицированы варианты фактора VIIа с активностью, которая сравнима с активностью нативного фактора VIIа или превосходит его, такие как, например, варианты, в которых коэффициент соотношения между активностью варианта и активностью нативного фактора VII (FVII дикого типа) составляет примерно или выше 1,0.
Активность фактора VIIа или вариантов фактора VIIа может быть определена с использованием физиологического субстрата, такого как фактор Х, в приемлемой концентрации 100-1000 нМ, где содержание образуемого фактора Ха количественно измеряют после добавления соответствующего хромогенного субстрата (например, S-2765) (см. "Тест на протеолиз in vitro"). Кроме того, тест на активность может быть проведен при физиологической температуре.
Тест на протеолиз in vitro
Нативный фактор VIIа (фактор дикого типа) и вариант фактора VIIа (оба называемые далее как фактор VIIа) анализируют параллельно с проведением непосредственного сравнения их активностей. Тест выполняют в микротитрационном планшете (MaxiSorp, Nunc, Дания). Фактор VIIа (10 мМ) и фактор Х (0,8 микроМ) в 100 микролитрах 50 мМ буфера Hepes, рH 7,4, содержащего 0,1 М NaCl, 5 мМ CaCl2 и 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина, инкубируют в течение 15 минут. Расщепление Фактор Х останавливают добавлением 50 микролитров 50 мМ Hepes, рH 7,4, содержащего 0,1 М NaCl, 20 мМ ЭДТА и 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина. Количество образуемого фактора VIIа измеряют после добавления хромогенного субстрата Z-D-Arg-Gly-Arg-п-нитроанилида (S-2288, Chromogenix, Швеция) до конечной концентрации 0,5 мМ. Поглощение при длине волны 405 нм измеряют непрерывно в счетчике для микротитрационных планшетов SpectraMaxTM 340 (Molecular Devices, СШA). Измеряют величину поглощения, развившегося через 10 минут, затем из полученной величины вычитают поглощение в ячейке со слепой пробой, не содержащей FVIIа, и разность используют для вычисления соотношения между протеолитическими активностями варианта фактора VIIа и фактора VIIа дикого типа:
Коэффициент соотношения = (А405нм варианта фактора VIIа)/ (А405нм фактора VIIа дикого типа)
На основании полученных результатов, могут быть идентифицированы варианты фактора VIIа с активностью, которая сравнима с активностью нативного фактора VIIа или превосходит ее, такие как, например, варианты, в которых соотношение между активностями варианта фактора VII и нативного фактора VII (FVII дикого типа) составляет примерно или превосходит 1,0.
Тест на образование тромбина
Способность фактора VII или полипептидов, родственных фактору VII, или фактора VIII или полипептидов, родственных фактору VIII (например, вариантов), образовывать тромбин может быть определена в тесте, включающем все относящиеся к коагуляции факторы и ингибиторы в физиологических концентрациях и активированные тромбоциты, как описано в руководстве (страница 543, Monroe et al., (1997) Brit. J. Haematol, 99, 542-547), которое включено в настоящее описание в качестве ссылки.
Тест на свертывание
Активность полипептидов фактора VIIа может быть определена с использованием одностадийного теста на свертывание (тест 4), по существу описанного в WO 92/15686 или в патенте США 5 997 864. В общих чертах, указанная процедура состоит в том, что исследуемый образец разбавляют 50 мМ Трис (pH 7,5), содержащим 0,1% БСА, и 100 мкл инкубируют с 100 мкл плазмы, дефицитной по фактору VII, и 200 мкл тромбопластина С, содержащего 10 мМ Ca2+. Измеряют время свертывания и сравнивают с использованием стандарта или пула цитрат-содержащей нормальной человеческой плазмы в серийном разбавлении.

Claims (48)

1. Композиция, содержащая эффективное количество полипептида фактора VII и сочетание сахарозы и полиола, где влажность композиции составляет не более чем около 3%.
2. Композиция по п.1, где сочетание сахарозы и полиола дополнительно включает антиоксидант.
3. Композиция по п.1, где антиоксидант выбран из группы, состоящей из гомоцистеина, цистеина, цистатионина, метионина, глютатиона и пептидов, содержащих любой компонент, выбранный из гомоцистеина, цистеина, цистатионина, метионина и глютатиона.
4. Композиция по любому из пп.1, 2 и 3, где указанный полиол выбран из группы, состоящей из маннита, сорбита и ксилита.
5. Композиция по п.1, где композиция является стабильной, то есть не более, чем около 5% масс./масс. от исходного содержания полипептида фактора VII преобразуется в агрегатные формы при хранении указанной композиции при 30°С в течение 8 месяцев, предпочтительно не более чем около 4,0% масс./масс., 3,0% масс./масс., 2,5% масс./масс., 2,0% масс./масс., 1,5% масс./масс. или не более чем около 1,0% масс./масс.
6. Композиция по п.1, где композиция является стабильной, то есть не более чем около 6% масс./масс. от исходного содержания полипептида фактора VII преобразуется в окисленные формы при хранении указанной композиции при 30°С в течение 8 месяцев, предпочтительно не более чем около 5% масс./масс., 4,0% масс./масс., 3,0% масс./масс., 2,5% масс./масс., 2,0% масс./масс. или не более чем около 1,5% масс./масс.
7. Композиция по п.1, где количество указанного полиола находится в диапазоне от около 0,5 до 75 мг/мл, например, от 2 до 60 мг/мл, от 5 до 55 мг/мл, от 8 до 45 мг/мл, от 10 до 40 мг/мл, от 10 до 30 мг/мл, от около 2 до 45 мг/мл, от 5 до 45 мг/мл, от 5 до 35 мг/мл, от 5 до 25 мг/мл, от 5 до 20 мг/мл, от 20 до 40 мг/мл или, например, от около 20 до 30 мг/мл.
8. Композиция по п.1, где количество указанной сахарозы находится в диапазоне от около 0,5 до 75 мг/мл, например, от 2 до 60 мг/мл, от около 5 до 55 мг/мл, от около 8 до 45 мг/мл, от около 10 до 40 мг/мл, от около 10 до 30 мг/мл, от около 2 до 45 мг/мл, от около 5 до 45 мг/мл, от около 5 до 35 мг/мл, от около 5 до 25 мг/мл, например, от около 5 до 20 мг/мл.
9. Композиция по п.1, где массовое соотношение указанного полиола и указанной сахарозы находится в диапазоне от около 100:1 до 1:50, предпочтительно от около 50:1 до 1:10, от 20:1 до 1:5, от 10:1 до 1:2, от 6:1 до 1:2, от 4:1 до 1:1 или от примерно 4:1 до 3:2.
10. Композиция по п.1, дополнительно содержащая средство, подходящее для поддержания значения pH указанной композиции в диапазоне от 3 до 9, при растворении в водном растворителе, предпочтительно значение pH находится в диапазоне от 4 до 7, более предпочтительно в диапазоне от 4,5 до 6,5, и еще более предпочтительно, в диапазоне от 5 до 6.
11. Композиция по п.10, где указанное средство выбрано из группы, состоящей из цитрата, ацетата, гистидина, малата, фосфата, винной кислоты, янтарной кислоты, MES, HEPES, PIPES, имидазола, TRIS, лактата, глютамата и глицилглицина.
12. Композиция по п.1, дополнительно содержащая модификатор изотоничности.
13. Композиция по п.12, где модификатор изотоничности выбран из группы, состоящей из ацетата натрия, лактата натрия, хлорида натрия, хлорида калия и хлорида кальция.
14. Композиция по п.1, дополнительно содержащая поверхностно-активное вещество.
15. Композиция по п.14, где указанное поверхностно-активное вещество выбрано из группы, состоящей из полисорбатов, таких как полисорбат 20 или 80; полиоксиэтиленалкиловый эфир, таких как Бридж 35®, или полоксамеров, таких как Полоксамер 188 или 407; и других блок-сополимеров этилена/полипропилена или полиэтиленгликоля (ПЭГ), такого как ПЭГ8000.
16. Композиция по п.1, дополнительно содержащая фармацевтические наполнители, действующие в качестве объемного наполнителя.
17. Композиция по п.1, где указанный полиол представляет собой маннит.
18. Композиция по п.1, где полипептид фактора VII выбран из группы, состоящей из фактора VIIa человека, рекомбинантного фактора VIIa человека и варианта последовательности фактора VII.
19. Композиция по п.18, где указанный полипептид фактора VII представляет собой фактор VIIa человека или рекомбинантный фактор VIIa человека.
20. Композиция по п.1, где указанный полипептид фактора VII представляет собой полипептид, родственный фактору VII, где соотношение между активностью указанного полипептида, родственного фактору VII, и фактора VII дикого типа составляет по меньшей мере 1,25, при тестировании с использованием одного или нескольких анализов "на протеолиз in vitro" или "на гидролиз in vitro", описанных в настоящем описании.
21. Композиция по любому из пп.18-20, где указанный полипептид фактора VII находится в концентрации от около 0,6 мг/мл до около 10,0 мг/мл, такой как от около 0,6 мг/мл до около 6 мг/мл, от около 0,6 мг/мл до около 5 мг/мл, от около 0,6 мг/мл до около 4 мг/мл.
22. Композиция по любому из пп.1-2 и 18-20, где указанное содержание влаги не превышает около 2,5% масс./масс., предпочтительно не превышает около 2% масс./масс., и наиболее предпочтительно не превышает около 1,5% масс./масс.
23. Композиция по любому из пп.1-2 и 18-20, где указанная композиция представляет собой лиофилизированную лепешку.
24. Композиция по п.1, где указанная композиция содержит полипептид фактора VII, манит, сахарозу и поверхностно-активное вещество, выбранное из полисорбата или полоксамера, такого как Твин 80® и Полоксамер 188®.
25. Композиция по п.24, которая дополнительно содержит метионин.
26. Композиция по любому из пп.24 или 25, которая дополнительно содержит L-гистидин.
27. Композиция по любому из пп.24 или 25, которая дополнительно содержит один или несколько компонентов, выбранных из CaCl2, NaCl и глицилглицин.
28. Композиция по п.1, где указанная композиция выбрана из композиций A-D:
Соединение Композиция А Композиция D Полипептид FVII 0,6-10 мг/мл 0,6-10 мг/мл   CaCl2·2H2O 5-20 мМ 5-20 мМ NaCl 0-50 мМ 0-50 мМ Глицилглицин 0-15 мМ 0-15 мМ L-гистидин 0-20 мМ 0-20 мМ Маннит 20-40 мг/мл 20-40 мг/мл Сахароза 5-20 мг/мл 5-20 мг/мл Метионин 0-1 мг/мл 0-1 мг/мл Твин 80 0,05-0,15 мг/мл   Полоксамер 188 - 0,5-3 мг/мл pH 5,0-7,0 5,0-7,0
29. Композиция по п.1, где указанная композиция выбрана из композиций Ex-Lx:
Соединение Композиция Ех Композиция Fx Композиция Gx Композиция Нх Полипептид FVIIa 1,0 мг/мл 1,0 мг/мл 1,0 мг/мл 1,0 мг/мл CaCl2·2H2O 10 мМ 10 мМ 10 мМ 10 мМ NaCl 39 мМ 39 мМ 39 мМ 39 мМ Глицилглицин 10 мМ 10 мМ 10 мМ 10 мМ Маннит 25 мг/мл 25 мг/мл 25 мг/мл 25 мг/мл Сахароза 10 мг/мл 10 мг/мл 10 мг/мл 10 мг/мл Метионин 0,5 мг/мл 0,5 мг/мл 0,5 мг/мл 0,5 мг/мл Твин 80 0,1 мг/мл - 0,1 мг/мл - Полоксамер 188 - 1,0 мг/мл - 1,0 мг/мл L-гистидин - - 10 мМ 10 мМ pH 5,5-6,0 5,5-6,0 5,5-6,0 5,5-6,0   Соединение Композиция Ix Композиция Jx Композиция Кх Композиция Lx Полипептид FVIIa 1,0 мг/мл 1,0 мг/мл 1,0 мг/мл 1,0 мг/мл СаСb2·2Н20 10 мМ 10 мМ 10 мМ 10 мМ NaCl 39 мМ 39 мМ 39 мМ 39 мМ Глицилглицин 10 мМ 10 мМ 10 мМ 10 мМ Маннит 25 мг/мл 25 мг/мл 25 мг/мл 25 мг/мл Сахароза 10 мг/мл 10 мг/мл 10 мг/мл 10 мг/мл Метионин - - - - Твин 80 0,1 мг/мл - 0,1 мг/мл - Полоксамер 188 - 1,0 мг/мл - 1,0 мг/мл L-гистидин - - 10 мМ 10 мМ pH 5,5-6,0 5,5-6,0 5,5-6,0 5,5-6,0
30. Композиция по п.24, где полипептид фактора VII представляет собой фактор VIIa человека.
31. Способ получения стабильного полипептида фактора VII, включающий стадии:
i) введения указанного полипептида фактора VII в раствор, содержащий сочетание сахарозы и полиола; и
ii) обработки указанного раствора с получением твердой композиции с содержанием влаги не более чем около 3% масс./масс.
32. Способ по п.31, в котором сочетание сахарозы и полиола дополнительно включает антиоксидант.
33. Способ по п.31, где антиоксидант выбран из группы, состоящей из гомоцистеина, цистеина, цистатионина, метионина, глютатиона и пептидов, содержащих любой компонент, выбранный из гомоцистеина, цистеина, цистатионина, метионина и глютатиона.
34. Способ по п.31, где полиол выбран из группы, состоящей из маннита, сорбита и ксилита.
35. Способ по п.31, где количество указанного полиола находится в диапазоне от около 0,5 до около 75 мг/мл, предпочтительно от около 2 мг/мл до 45 мг/мл, например, от около 5 мг/мл до 45 мг/мл, от около 5 мг/мл до 35 мг/мл, от около 5 мг/мл до 25 мг/мл, от 5 мг/мл до 20 мг/мл, от 20 мг/мл до 40 мг/мл или от около 20 мг/мл до около 30 мг/мл.
36. Способ по п.31, где количество указанной сахарозы находится в диапазоне от около 0,5 до 75 мг/мл, предпочтительно от около 2 мг/мл до 45 мг/мл, например, от около 5 мг/мл до 45 мг/мл, от около 5 мг/мл до 35 мг/мл, от около 5 мг/мл до 25 мг/мл или от около 5 мг/мл до 20 мг/мл.
37. Способ по п.31, где количество указанного антиоксиданта находится в диапазоне от примерно 0,05 до 10 мг/мл, предпочтительно от примерно 0,1 мг/мл до 5 мг/мл, более предпочтительно от примерно 0,1 мг/мл до 2,5 мг/мл, еще более предпочтительно от примерно 0,1 мг/мл до 2 мг/мл, наиболее предпочтительно от примерно 0,1 мг/мл до 1 мг/мл.
38. Способ по п.31, где антиоксидант представляет собой метионин.
39. Способ по п.31, где полиол представляет собой маннит.
40. Способ по п.31, где указанная обработка включает лиофильную сушку.
41. Способ лечения реактивного синдрома фактора VII, включающий введение индивиду эффективного количества композиции, содержащей полипептид фактора VII и сочетание сахарозы и полиола, где содержание влаги в указанной композиции составляет не более чем около 3%.
42. Способ по п.41, где указанный синдром выбран из группы, включающей гемофилию А, гемофилию В, недостаточность фактора XI, недостаточность фактора VII, тромбоцитопению, болезнь фон Виллебранда, состояние, связанное с наличием ингибитора фактора свертывания крови, состояние при хирургическом вмешательстве или при травме и при антикоагуляционной терапии.
43. Способ по п.41, включающий стадию растворения композиции в подходящей жидкости перед стадиями введения.
44. Способ по п.41, где композицией является композиция по любому из пп.1-30.
45. Применение полипептида фактора VII для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения реактивного синдрома фактора VII, причем указанное лекарственное средство содержит композицию, содержащую полипептид фактора VII и сочетание сахарозы и полиола, где содержание влажности в указанной композиции не превышает около 3%.
46. Применение по п.45, где указанный синдром выбран из группы, включающей гемофилию А, гемофилию В, недостаточность фактора XI, недостаточность фактора VII, тромбоцитопению, болезнь фон Виллебранда, состояние, связанное с наличием ингибитора фактора свертывания крови, состояние при хирургическом вмешательстве, при травме и при антикоагуляционной терапии.
47. Применение по п.45, где указанное лекарственное средство может быть растворимым.
48. Применение по п.45, где указанная композиция представляет собой композицию по любому из пп.1-30.
RU2005101340/15A 2002-06-21 2003-06-20 Стабилизированные твердые композиции полипептидов фактора vii RU2366451C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA200200963 2002-06-21
DKPA200200963 2002-06-21

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2005101340A RU2005101340A (ru) 2005-12-10
RU2366451C2 true RU2366451C2 (ru) 2009-09-10

Family

ID=34178323

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2005101340/15A RU2366451C2 (ru) 2002-06-21 2003-06-20 Стабилизированные твердые композиции полипептидов фактора vii

Country Status (16)

Country Link
US (11) US20040248793A1 (ru)
EP (2) EP2283856B1 (ru)
JP (1) JP4648002B2 (ru)
KR (2) KR101212025B1 (ru)
CN (2) CN101912601B (ru)
AU (1) AU2003240438A1 (ru)
BR (1) BRPI0311959B8 (ru)
CA (1) CA2490342C (ru)
DK (2) DK1517698T4 (ru)
ES (2) ES2653555T3 (ru)
HU (1) HUE037603T2 (ru)
IL (1) IL165608A (ru)
PL (1) PL207018B1 (ru)
PT (2) PT2283856T (ru)
RU (1) RU2366451C2 (ru)
WO (1) WO2004000347A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2787855C2 (ru) * 2011-06-10 2023-01-13 Бакстер Интернэшнл Инк. Лечение нарушений свертываемости крови путем введения рекомбинантного фактора виллебранда

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040247607A1 (en) * 1999-11-08 2004-12-09 Novus International, Inc. Use of surfactants to stabilize oocysts
ES2325653T3 (es) 2001-12-21 2009-09-11 Novo Nordisk Health Care Ag Composicion liquida de polipeptidos del factor vii.
BRPI0311959B8 (pt) 2002-06-21 2021-05-25 Novo Nordisk Healthcare Ag composição, métodos para preparar um polipeptídeo estável do fator vii, e para tratar uma síndrome responsiva do fator vii, e, uso do polipeptídeo do fator vii
ES2382157T3 (es) 2003-06-25 2012-06-05 Novo Nordisk Health Care Ag Composición líquida de polipépttidos del factor VII
WO2005002615A1 (en) * 2003-07-01 2005-01-13 Novo Nordisk Health Care Ag Liquid, aqueous pharmaceutical composition of factor vii polypeptides
AU2011203354B2 (en) * 2003-12-19 2014-07-17 Novo Nordisk Health Care Ag Stabilised compositions of factor VII polypeptides
KR20130026498A (ko) 2003-12-19 2013-03-13 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 인자 ｖｉｉ 폴리펩티드의 안정화된 조성물
EP1716119B1 (en) 2003-12-23 2013-03-06 Infinity Discovery, Inc. Analogs of benzoquinone-containing ansamycins for the treatment of cancer
KR20070008645A (ko) † 2004-05-04 2007-01-17 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 폴리펩티드의 ｏ-연결된 단백당형 및 그들의 제조 방법
WO2006089952A1 (en) * 2005-02-24 2006-08-31 Novo Nordisk Health Care Ag Amidino-compounds por stabilizing factor vii polypeptide formulations
AU2012213951B2 (en) * 2005-04-28 2014-10-16 Novo Nordisk Health Care Ag A closed container comprising an activated factor VII polypeptide, processes for the preparation of the same, and a kit and a method for use of the kit
JP2008539208A (ja) * 2005-04-28 2008-11-13 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト 活性化型のｖｉｉ因子ポリペプチドを含んでいる閉鎖容器、調製する方法、並びにキットおよび前記キットを使用する方法
US8137677B2 (en) * 2005-10-06 2012-03-20 Allergan, Inc. Non-protein stabilized clostridial toxin pharmaceutical compositions
ES2257225B1 (es) * 2006-02-17 2007-03-16 Grifols, S.A Preparacion terapeutica de fviia de muy alta pureza y metodo para su obtencion.
TW200806317A (en) * 2006-03-20 2008-02-01 Wyeth Corp Methods for reducing protein aggregation
WO2008078189A2 (en) * 2006-12-20 2008-07-03 Bayer Healthcare Llc Factor vii and viia compositions
EP2134338A1 (en) * 2007-04-12 2009-12-23 Infinity Discovery, Inc. Hydroquinone ansamycin formulations
AU2008245821B2 (en) * 2007-04-26 2013-07-04 Bayer Healthcare Llc Stabilization of liquid solutions of recombinant protein for frozen storage
EP2152233A1 (en) * 2007-05-02 2010-02-17 Novo Nordisk Health Care AG High concentration factor vii polypeptide formulations comprising an aromatic preservative and an antioxidant
JP5513380B2 (ja) 2007-06-25 2014-06-04 アムジエン・インコーポレーテツド 肝細胞増殖因子に対する特異的結合剤の組成物
CN101648012A (zh) * 2008-04-24 2010-02-17 伊玛提克斯生物技术有限公司 结合到人类白细胞抗原(hla)ⅰ类或ⅱ类分子上用作疫苗的肿瘤相关肽新制剂
ATE462442T1 (de) * 2008-04-30 2010-04-15 Immatics Biotechnologies Gmbh Neuartige formulierungen von tumor-assoziierten peptiden, welche an menschliche leukozytenantigene der klasse i oder ii für impfungen binden
CA2739928A1 (en) 2008-10-15 2010-04-22 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Ansamycin hydroquinone compositions
FR2947181B1 (fr) 2009-06-26 2012-05-04 Lfb Biotechnologies Composition de facteur vii
EP2364690A1 (en) 2010-02-12 2011-09-14 Centro De Ingenieria Genetica Y Biotecnologia Orally administrable pharmaceutical pellet of epidermal growth factor
CN102441172B (zh) * 2011-12-06 2014-05-07 中国医学科学院输血研究所 高纯度凝血酶原复合物制品冷冻干燥稳定剂
US8883979B2 (en) 2012-08-31 2014-11-11 Bayer Healthcare Llc Anti-prolactin receptor antibody formulations
SG11201604972TA (en) * 2013-12-24 2016-07-28 Ares Trading Sa Fgf-18 formulation in alginate/collagen hydrogels
CN104826117B (zh) * 2015-05-05 2017-11-14 广东卫伦生物制药有限公司 用于人体血清免疫球蛋白溶液制剂的储存稳定剂
CN104991079B (zh) * 2015-07-16 2016-04-06 青岛古高生物科技有限公司 一种凝血试剂用抗氧化剂
AU2016298425B2 (en) 2015-07-30 2022-11-10 Biomarin Pharmaceutical Inc. Use of C-type natriuretic peptide variants to treat skeletal dysplasia
CN106139127B (zh) * 2016-08-05 2020-04-07 无锡药明生物技术股份有限公司 重组凝血因子ⅷ冻干制剂
AR109621A1 (es) * 2016-10-24 2018-12-26 Janssen Pharmaceuticals Inc Formulaciones de vacunas contra glucoconjugados de expec
CN112138149A (zh) * 2019-06-28 2020-12-29 北京基科晟斯医药科技有限公司 重组凝血因子viii制剂
US20210069306A1 (en) 2019-08-15 2021-03-11 Catalyst Biosciences, Inc. Modified factor vii polypeptides for subcutaneous administration and on-demand treatment
CN119698300A (zh) * 2022-06-20 2025-03-25 江苏贝捷泰生物科技有限公司 凝血因子x激活剂及其用于治疗出血性疾病的制剂
CN117860874B (zh) * 2024-03-12 2024-07-02 正大天晴药业集团南京顺欣制药有限公司 重组人凝血因子VIIa的药物组合物

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4495278A (en) * 1981-04-27 1985-01-22 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Process for making novel blood clotting enzyme compositions
US5763401A (en) * 1996-07-12 1998-06-09 Bayer Corporation Stabilized albumin-free recombinant factor VIII preparation having a low sugar content
US5962650A (en) * 1993-05-07 1999-10-05 Pharmacia & Upjohn Aktiebolag Oxygen-reduced aqueous solution of factor VIII
RU2142278C1 (ru) * 1997-10-31 1999-12-10 Чухаджян Ара Гарникович Гемостатическое средство местного действия
WO2000048635A1 (en) * 1999-02-22 2000-08-24 Baxter International Inc. Novel albumin-free factor viii formulations
RU2003112676A (ru) * 2000-10-02 2005-01-20 Ново Нордиск Хелт Кэр Аг (Ch) Гликоформы фактора vii

Family Cites Families (106)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US115590A (en) 1871-06-06 Lfxlproxeixie
DE2916711A1 (de) 1979-04-25 1980-11-06 Behringwerke Ag Blutgerinnungsfaktoren und verfahren zu ihrer herstellung
US4956386A (en) * 1980-04-25 1990-09-11 Gist-Brocades N.V. Pharmaceutical compositions and process for their preparation
US4404132A (en) 1980-05-27 1983-09-13 Cutter Laboratories, Inc. Blood coagulation promoting product
CA1182748A (en) 1980-11-21 1985-02-19 Gerard Marx Method for synthesizing procoagulant factor viii activity
US4382083A (en) 1981-06-25 1983-05-03 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Therapeutic method for treating blood-clotting defects with factor VIIa
GR860984B (en) 1985-04-17 1986-08-18 Zymogenetics Inc Expression of factor vii and ix activities in mammalian cells
US5180583A (en) 1985-11-26 1993-01-19 Hedner Ulla K E Method for the treatment of bleeding disorders
JPH0780783B2 (ja) 1985-11-26 1995-08-30 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ 出血障害の治療のための第▲ＶＩＩ▼ａ因子を含有する治療組成物
US5595886A (en) 1986-01-27 1997-01-21 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
AU607927B2 (en) 1986-06-24 1991-03-21 Nordisk Gentofte A/S A process for producing a coagulation active complex of factor viii fragments
EP0317376B2 (fr) 1987-10-23 1996-04-03 Centre Regional De Transfusion Sanguine De Lille Préparation de concentré de facteur IX humain de haute pureté et d'autres protéines plasmatiques
CA1329760C (en) 1987-10-29 1994-05-24 Ted C. K. Lee Plasma and recombinant protein formulations in high ionic strength media
US5472850A (en) 1991-04-10 1995-12-05 Oklahoma Medical Research Foundation Quantitative clotting assay for activated factor VII
JP2824430B2 (ja) 1989-08-02 1998-11-11 財団法人化学及血清療法研究所 血液凝固第▲ｖｉｉ▼因子または活性型血液凝固第▲ｖｉｉ▼因子の調製方法
US5580560A (en) 1989-11-13 1996-12-03 Novo Nordisk A/S Modified factor VII/VIIa
DE3939346A1 (de) 1989-11-29 1991-06-06 Behringwerke Ag Arzneimitel zur subkutanen oder intramuskulaeren applikation enthaltend polypeptide
DE4001451A1 (de) 1990-01-19 1991-08-01 Octapharma Ag Stabile injizierbare loesungen von faktor viii und faktor ix
ATE180834T1 (de) 1990-01-29 1999-06-15 Zymogenetics Inc Antikoagulierende proteine
US5833982A (en) 1991-02-28 1998-11-10 Zymogenetics, Inc. Modified factor VII
US5788965A (en) 1991-02-28 1998-08-04 Novo Nordisk A/S Modified factor VII
US5817788A (en) 1991-02-28 1998-10-06 Zymogenetics, Inc. Modified factor VII
US5997864A (en) 1995-06-07 1999-12-07 Novo Nordisk A/S Modified factor VII
JP3459416B2 (ja) 1991-02-28 2003-10-20 ザイモジェネティクス，インコーポレイティド 修飾されたファクター▲ｖｉｉ▼
AU2309692A (en) 1991-07-03 1993-02-11 Cryolife, Inc. Method for stabilization of biomaterials
FR2684999A1 (fr) 1991-12-16 1993-06-18 Aquitaine Dev Transf Sanguine Procede de fabrication d'un concentre de facteur vii active de haute purete essentiellement depourvu des facteurs vitamine k dependants et des facteurs viiic et viiicag.
JP3155797B2 (ja) 1991-12-26 2001-04-16 株式会社日立製作所 過電圧自己保護型半導体装置、及び、それを使用した半導体回路
WO1993022336A1 (en) 1992-04-30 1993-11-11 Alpha Therapeutic Corporation Improved solubilization and stabilization of factor viii complex
CA2143125C (en) 1992-08-27 2008-09-23 Koenraad Mertens Antibodies specific for a haemostatic protein, their use for isolating intact protein, haemostatic compositions devoid of proteolytic cleavage products of the protein
DK38293D0 (da) 1993-03-31 1993-03-31 Novo Nordisk As Fremstilling af proteiner
ATE210458T1 (de) 1993-05-21 2001-12-15 Zymogenetics Inc Modifizierter faktor vii zur hemmung der vaskulären restenosis und thrombozytenablagerung
WO1995003332A1 (en) 1993-07-23 1995-02-02 Baxter International Inc. Activated human factor viii and method of preparation
US6277828B1 (en) 1993-08-20 2001-08-21 Syntex (U.S.A.) Inc. Pharmaceutical formulations of nerve growth factor
US5576291A (en) 1993-09-13 1996-11-19 Baxter International Inc. Activated factor VIII as a therapeutic agent and method of treating factor VIII deficiency
IL113010A (en) 1994-03-31 1999-10-28 Pharmacia & Upjohn Ab Pharmaceutical formulation comprising factor viii with an activity of at least 500iu/ml and an enhancer for improved subcutaneous intramuscular or intradermal administration
US6372716B1 (en) 1994-04-26 2002-04-16 Genetics Institute, Inc. Formulations for factor IX
US5580856A (en) 1994-07-15 1996-12-03 Prestrelski; Steven J. Formulation of a reconstituted protein, and method and kit for the production thereof
DE4435520A1 (de) 1994-10-04 1996-04-11 Immuno Ag Verfahren zur Trennung von rekombinantem pro-Faktor IX von rekombinantem Faktor IX
SE9403915D0 (sv) 1994-11-14 1994-11-14 Annelie Almstedt Process A
US5649959A (en) 1995-02-10 1997-07-22 Sherwood Medical Company Assembly for sealing a puncture in a vessel
US6255091B1 (en) 1995-04-28 2001-07-03 Axys Pharmaceuticals, Inc. Potentiating metal mediated serine protease inhibitors with cobalt or zinc ions
DE19531637A1 (de) 1995-08-28 1997-03-06 Immuno Ag Pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung von Blutgerinnungsstörugnen, Verfahren zur Herstellung derselben und deren Verwendung
DE19538715A1 (de) 1995-10-18 1997-04-30 Behringwerke Ag Verfahren zur Reinigung von Faktor VII und aktiviertem Faktor VII
SE9503679D0 (sv) 1995-10-20 1995-10-20 Pharmacia Ab Antioxidants
AU7068896A (en) 1995-11-09 1997-05-15 Corunum Corporation Protein composition derived from sesame seed and use thereof
US5925738A (en) 1995-12-01 1999-07-20 The American National Red Cross Methods of production and use of liquid formulations of plasma proteins
US6320029B1 (en) 1996-11-29 2001-11-20 The American National Red Cross Methods of production and use of liquid formulations of plasma proteins
US5830852A (en) 1995-12-19 1998-11-03 Cobra Therapeutics, Ltd. Compositions for insulin-receptor mediated nucleic acid delivery
US5770700A (en) 1996-01-25 1998-06-23 Genetics Institute, Inc. Liquid factor IX formulations
DE19903693A1 (de) 1998-04-24 1999-10-28 Centeon Pharma Gmbh Protease zur Aktivierung des Gerinnungsfaktors VII
TWI240627B (en) 1996-04-26 2005-10-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Erythropoietin solution preparation
PL193447B1 (pl) 1996-12-24 2007-02-28 Biogen Idec Inc Kompozycja interferonu, kompozycja farmaceutycznainterferonu oraz sposób stabilizowania kompozycjiinterferonu
US5804420A (en) 1997-04-18 1998-09-08 Bayer Corporation Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium
ID23172A (id) 1997-04-28 2000-03-23 Lilly Co Eli Metode yang diperbaiki untuk pengolahan protein c teraktivasi
US6461610B1 (en) 1997-07-18 2002-10-08 Novo Nordisk A/S Methods for modifying cell motility using factor VIIa or inactivated factor VIIa
US6310183B1 (en) 1997-09-10 2001-10-30 Novo Nordisk A/S Coagulation factor VIIa composition
AT409334B (de) 1997-09-19 2002-07-25 Immuno Ag Pharmazeutisches präparat enthaltend vitamin k-abhängige einzelfaktoren
US6017882A (en) 1997-10-23 2000-01-25 Regents Of The University Of Minnesota Modified vitamin K-dependent polypeptides
AT408613B (de) 1998-06-17 2002-01-25 Immuno Ag Pharmazeutisches faktor vii-präparat
AU1311800A (en) 1998-10-07 2000-04-26 Sigma-Aldrich Co. Thromboplastin reagents and methods for preparing and using such reagents
DE19853033A1 (de) 1998-11-18 2000-05-25 Centeon Pharma Gmbh Stabilisierte Proteinzubereitung für einen Gewebekleber
JP2000247903A (ja) 1999-03-01 2000-09-12 Chugai Pharmaceut Co Ltd 長期安定化製剤
US20010031721A1 (en) 1999-05-05 2001-10-18 Chandra Webb Highly concentrated, lyophilized, and liquid factor IX formulations
CA2378751C (en) 1999-07-13 2012-11-06 Biovitrum Ab Stable factor viii compositions
DE19937218A1 (de) 1999-08-06 2001-02-08 Aventis Behring Gmbh Verfahren zur Reindarstellung der den Blutgerinnungsfaktor VII aktivierenden Protease, ihres Proenzyms oder eines Gemisches beider Proteine mittels Affinitätschromatographie
US6586574B1 (en) 1999-08-17 2003-07-01 Nn A/S Stabilization of freeze-dried cake
JP2003507388A (ja) 1999-08-17 2003-02-25 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ 凍結乾燥したケーキの安定化
JP4451514B2 (ja) 1999-08-24 2010-04-14 財団法人化学及血清療法研究所 血液凝固第ｖｉｉ因子改変体
US7253142B1 (en) 1999-09-08 2007-08-07 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Protein solution preparation and method of stabilizing the same
US6750053B1 (en) 1999-11-15 2004-06-15 I-Stat Corporation Apparatus and method for assaying coagulation in fluid samples
CA2739933A1 (en) 2000-02-11 2001-08-16 Bayer Healthcare Llc Factor vii or viia-like molecules
ATE485371T1 (de) 2000-05-03 2010-11-15 Novo Nordisk Healthcare Ag Varianten des menschlichen koagulationsfaktors vii
JP5090605B2 (ja) 2000-05-03 2012-12-05 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト 凝固因子ｖｉｉの皮下投与
US7015194B2 (en) 2000-05-10 2006-03-21 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical composition comprising factor VIIa and anti-TFPI
AU5822801A (en) 2000-05-10 2001-11-20 Novo Nordisk As Tharmaceutical composition comprising a factor viia and a factor xiii
PL204888B1 (pl) 2000-09-13 2010-02-26 Novo Nordisk Healthcare Ag Wariant polipeptydu czynnika VII, konstrukcja kwasu nukleinowego, rekombinowana komórka gospodarza, zwierzę transgeniczne, sposób wytwarzania wariantu polipeptydu czynnika VII, kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie wariantu polipeptydu czynnika VII
EP1325113B1 (en) 2000-10-02 2010-04-21 Novo Nordisk Health Care AG Factor vii glycoforms
WO2002038162A1 (en) 2000-11-09 2002-05-16 The Scripps Research Institute MODIFIED FACTOR VIIa
EP1226829B1 (de) 2001-01-08 2008-06-11 CSL Behring GmbH Stabilisierte Flüssigzubereitung der den Blutgerinnungsfaktor VII aktivierenden Protease oder ihres Proenzyms
US6825323B2 (en) 2001-01-10 2004-11-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Compositions for treatment of hemorrhaging with activated factor VIIa in combination with fibrinogen and methods of using same
IL157842A0 (en) 2001-03-22 2004-03-28 Novo Nordisk Healthcare Ag Coagulation factor vii derivatives
ES2407134T3 (es) 2001-07-10 2013-06-11 The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute Composiciones hemostáticas farmacéuticamente estables
GB0117879D0 (en) 2001-07-21 2001-09-12 Common Services Agency Storage of liquid compositions
US6858587B2 (en) 2001-11-02 2005-02-22 Novo Nordisk Pharmaceuticals, Inc. Use of tissue factor agonist or tissue factor antagonist for treatment of conditions related to apoptosis
US7078479B2 (en) 2001-11-09 2006-07-18 Novo Nordisk Healthcare A/G Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and alpha2-antiplasmin polypeptides
JP2005510515A (ja) 2001-11-09 2005-04-21 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト Ｖｉｉ因子ポリペプチドおよびプロテインｃ阻害剤を含む薬学的組成物
US7125846B2 (en) 2001-11-09 2006-10-24 Novo Nordisk Healthcare A/G Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and factor V polypeptides
US20030119743A1 (en) 2001-11-09 2003-06-26 Rasmus Rojkjaer Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and tissue plasminogen inhibitors
AU2002351755A1 (en) * 2001-12-21 2003-07-15 Novo Nordisk A/S Liquid composition of modified factor vii polypeptides
KR20040065278A (ko) 2001-12-21 2004-07-21 노보 노르디스크 에이/에스 변경된 인자 ⅶ 폴리펩티드의 액체 조성물
ES2325653T3 (es) 2001-12-21 2009-09-11 Novo Nordisk Health Care Ag Composicion liquida de polipeptidos del factor vii.
ATE468336T1 (de) 2002-03-15 2010-06-15 Vertex Pharma Azolylaminoazine als proteinkinasehemmer
WO2003092731A1 (en) † 2002-05-03 2003-11-13 Novo Nordisk A/S Stabilised solid compositions of modified factor vii
US20040009918A1 (en) 2002-05-03 2004-01-15 Hanne Nedergaard Stabilised solid compositions of modified factor VII
BRPI0311959B8 (pt) 2002-06-21 2021-05-25 Novo Nordisk Healthcare Ag composição, métodos para preparar um polipeptídeo estável do fator vii, e para tratar uma síndrome responsiva do fator vii, e, uso do polipeptídeo do fator vii
US6933808B2 (en) 2002-07-17 2005-08-23 Qing Ma Microelectromechanical apparatus and methods for surface acoustic wave switching
EP1422309A1 (de) 2002-11-22 2004-05-26 Siemens Aktiengesellschaft Verwendung einer Sprühkompaktierungsanlage zur Erzeugung einer Schicht und Schichtsystem hergestellt mittels einer Sprühkompaktierungsanlage und Schichtsystem
AT501088A2 (de) 2002-12-18 2006-06-15 Bio Prod & Bio Eng Ag Stabile therapeutische proteine
EP1605968A2 (en) 2003-03-18 2005-12-21 Novo Nordisk Health Care AG Liquid, aqueous, pharmaceutical compositions of factor vii polypeptides
US7897734B2 (en) 2003-03-26 2011-03-01 Novo Nordisk Healthcare Ag Method for the production of proteins
WO2004103398A1 (en) 2003-05-23 2004-12-02 Novo Nordisk Health Care Ag Protein stabilization in solution
EP1646398A2 (en) 2003-06-13 2006-04-19 Novo Nordisk Health Care AG Formulations comprising factor viia and a factor vii related polypeptide
WO2005002615A1 (en) 2003-07-01 2005-01-13 Novo Nordisk Health Care Ag Liquid, aqueous pharmaceutical composition of factor vii polypeptides
KR101293503B1 (ko) 2003-08-14 2013-08-07 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 인자 ｖｉｉ 폴리펩티드의 액상 수성 약학적 조성물
KR20130026498A (ko) 2003-12-19 2013-03-13 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 인자 ｖｉｉ 폴리펩티드의 안정화된 조성물
JP2008539208A (ja) 2005-04-28 2008-11-13 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト 活性化型のｖｉｉ因子ポリペプチドを含んでいる閉鎖容器、調製する方法、並びにキットおよび前記キットを使用する方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4495278A (en) * 1981-04-27 1985-01-22 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Process for making novel blood clotting enzyme compositions
US5962650A (en) * 1993-05-07 1999-10-05 Pharmacia & Upjohn Aktiebolag Oxygen-reduced aqueous solution of factor VIII
US5763401A (en) * 1996-07-12 1998-06-09 Bayer Corporation Stabilized albumin-free recombinant factor VIII preparation having a low sugar content
RU2142278C1 (ru) * 1997-10-31 1999-12-10 Чухаджян Ара Гарникович Гемостатическое средство местного действия
WO2000048635A1 (en) * 1999-02-22 2000-08-24 Baxter International Inc. Novel albumin-free factor viii formulations
RU2003112676A (ru) * 2000-10-02 2005-01-20 Ново Нордиск Хелт Кэр Аг (Ch) Гликоформы фактора vii

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2787855C2 (ru) * 2011-06-10 2023-01-13 Бакстер Интернэшнл Инк. Лечение нарушений свертываемости крови путем введения рекомбинантного фактора виллебранда

Also Published As

Publication number Publication date
BR0311959A (pt) 2005-04-26
EP2283856B1 (en) 2017-09-20
CN1671410A (zh) 2005-09-21
US8729022B2 (en) 2014-05-20
KR20110049897A (ko) 2011-05-12
CN101912601A (zh) 2010-12-15
DK1517698T4 (da) 2018-01-29
ES2653555T3 (es) 2018-02-07
PT2283856T (pt) 2017-12-26
US20070207956A1 (en) 2007-09-06
EP2283856A1 (en) 2011-02-16
US20170128550A1 (en) 2017-05-11
BRPI0311959B1 (pt) 2021-01-05
KR101212025B1 (ko) 2013-01-09
US20130017184A1 (en) 2013-01-17
HUE037603T2 (hu) 2018-09-28
CN1671410B (zh) 2010-05-12
KR20050013148A (ko) 2005-02-02
US20160228553A1 (en) 2016-08-11
DK2283856T3 (da) 2017-11-20
RU2005101340A (ru) 2005-12-10
JP2006513983A (ja) 2006-04-27
IL165608A0 (en) 2006-01-15
EP1517698A1 (en) 2005-03-30
CA2490342A1 (en) 2003-12-31
US8299029B2 (en) 2012-10-30
US20040248793A1 (en) 2004-12-09
US20150343064A1 (en) 2015-12-03
US20180085439A1 (en) 2018-03-29
BRPI0311959B8 (pt) 2021-05-25
CA2490342C (en) 2015-06-16
EP1517698B1 (en) 2014-08-13
PL373904A1 (en) 2005-09-19
PT1517698E (pt) 2014-11-19
WO2004000347A1 (en) 2003-12-31
CN101912601B (zh) 2012-08-29
AU2003240438A1 (en) 2004-01-06
US20190111118A1 (en) 2019-04-18
PL207018B1 (pl) 2010-10-29
EP1517698B2 (en) 2017-12-06
JP4648002B2 (ja) 2011-03-09
US20200254072A1 (en) 2020-08-13
US20140178356A1 (en) 2014-06-26
IL165608A (en) 2011-04-28
ES2523655T5 (es) 2018-04-23
DK1517698T3 (en) 2014-11-24
ES2523655T3 (es) 2014-11-28
US20190328851A1 (en) 2019-10-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2366451C2 (ru) Стабилизированные твердые композиции полипептидов фактора vii
JP5852024B2 (ja) Ｖｉｉ因子ポリペプチドの安定化された組成物

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Correction of name of patent owner