[go: up one dir, main page]

RU2346463C2 - Method for production of dietary supplement - Google Patents

Method for production of dietary supplement Download PDF

Info

Publication number
RU2346463C2
RU2346463C2 RU2007109893/13A RU2007109893A RU2346463C2 RU 2346463 C2 RU2346463 C2 RU 2346463C2 RU 2007109893/13 A RU2007109893/13 A RU 2007109893/13A RU 2007109893 A RU2007109893 A RU 2007109893A RU 2346463 C2 RU2346463 C2 RU 2346463C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cells
bacillus
feed
subtilis
raw material
Prior art date
Application number
RU2007109893/13A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2007109893A (en
Inventor
Нина Александровна Ушакова (RU)
Нина Александровна Ушакова
Дмитрий Сергеевич Павлов (RU)
Дмитрий Сергеевич Павлов
Борис Александрович Чернуха (RU)
Борис Александрович Чернуха
Юрий Антонович Кошелев (RU)
Юрий Антонович Кошелев
Анна Анатольевна Козлова (RU)
Анна Анатольевна Козлова
Алексей Васильевич Нифатов (RU)
Алексей Васильевич Нифатов
Original Assignee
Нина Александровна Ушакова
Дмитрий Сергеевич Павлов
Борис Александрович Чернуха
Юрий Антонович Кошелев
Анна Анатольевна Козлова
Алексей Васильевич Нифатов
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Нина Александровна Ушакова, Дмитрий Сергеевич Павлов, Борис Александрович Чернуха, Юрий Антонович Кошелев, Анна Анатольевна Козлова, Алексей Васильевич Нифатов filed Critical Нина Александровна Ушакова
Priority to RU2007109893/13A priority Critical patent/RU2346463C2/en
Publication of RU2007109893A publication Critical patent/RU2007109893A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2346463C2 publication Critical patent/RU2346463C2/en

Links

Landscapes

  • Fodder In General (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: agriculture.
SUBSTANCE: method of production of dietary supplement from plant raw material implies aerobic submerged cultivation of Bacillus subtilis 8130 cellulolytic bacillus to obtain vegetative cell titer of at least 109 CFU/ml, absence of spores in bacilli cells being controlled. Resulting liquid culture is mixed with plant raw material in wt %, which provides for 40-70 wt % humidity. Then, sodium bicarbonate is added to obtain pH 7.0-7.5 and solid-state fermentation is carried out for 2-4 days until final product containing total amount of bacilli cells of at least 109 cells/g is obtained. Sea-buckthorn, dog rose, sunflower cake, mill offal, including rice hulls and buckwheat hulls are used as plant raw material.
EFFECT: stable digestion improvement, enhanced food digestibility and improved gain and productivity of livestock.
2 cl, 1 tbl, 3 ex

Description

Изобретение относится к кормопроизводству, в частности к способам приготовления биологически активных кормовых добавок для млекопитающих, птиц, рыб, повышающих эффективность пищеварения, основанных на переработке целлюлозосодержащего субстрата из растительного сырья и отходов.The invention relates to feed production, in particular to methods for the preparation of biologically active feed additives for mammals, birds, fish, which increase digestion efficiency, based on the processing of cellulose-containing substrate from plant materials and waste.

К числу перспективных направлений микробной биотехнологии относится создание биологически активных пробиотических препаратов, оказывающих разностороннее действие на животный организм и позволяющих применять их как для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний, так и для стимуляции роста и повышения продуктивности животных. В настоящее время разработаны способы получения пробиотических препаратов, имеющих в своем составе бактерии вида Bacillus subtilis.Among the promising areas of microbial biotechnology is the creation of biologically active probiotic preparations that have a versatile effect on the animal organism and allow their use both for the treatment and prevention of gastrointestinal diseases, and for stimulating the growth and increasing the productivity of animals. Currently developed methods for producing probiotic preparations containing bacteria of the species Bacillus subtilis.

Известно, что бациллы продуцируют различные биологически активные вещества: ферменты, аминокислоты, витамины, антибиотики и обладают выраженным иммуномодулирующим действием в полости желудочно-кишечного тракта. Физиолого-биохимические свойства бацилл позволяют использовать их в составе лечебно-профилактических пробиотических препаратов и в составе кормовых биологически активных добавок.It is known that bacilli produce various biologically active substances: enzymes, amino acids, vitamins, antibiotics and have a pronounced immunomodulating effect in the cavity of the gastrointestinal tract. The physiological and biochemical properties of the bacilli make it possible to use them as part of therapeutic and prophylactic probiotic preparations and as part of biologically active feed additives.

Из уровня техники известны пробиотические препараты и способы их получения на основе культуры В.subtilis, предназначенные для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний животных, птицы и рыбы. Например, штамм бактерий В.subtilis ВКМ В-2250Д используют для получения пробиотического препарата «Субтилис», который нормализует деятельность желудочно-кишечного тракта животных и перспективен в лечении и профилактике бактериальных инфекций (1). Препарат представляет собой жидкую споровую культуру бактерий В.subtilis (80-90% спор) или лиофильно высушенные клетки со спорами. Недостатком препарата в сухой форме является применение спор бактерий, что может вызвать загрязнение спорами окружающей среды при смешении с кормом и кормлении животных. Жидкая форма препарата не удобна для транспортировки, длительного хранения.Probiotic preparations and methods for their preparation on the basis of B. subtilis culture, intended for the prevention and treatment of gastrointestinal diseases of animals, birds and fish, are known in the art. For example, the bacterial strain B.subtilis VKM B-2250D is used to obtain the probiotic drug Subtilis, which normalizes the activity of the gastrointestinal tract of animals and is promising in the treatment and prevention of bacterial infections (1). The drug is a liquid spore culture of bacteria B. subtilis (80-90% spores) or freeze-dried cells with spores. The disadvantage of the drug in dry form is the use of bacterial spores, which can cause pollution by environmental spores when mixed with food and animal feed. The liquid form of the drug is not convenient for transportation, long-term storage.

Известен способ получения лечебно-профилактического корма для животных, включающий введение в измельченный корм пробиотика на основе культуры бактерий В.subtilis ВКПМ-В-4759 в сухом (лиофилизованном) виде, смешивание компонентов корма с пробиотиком, нагрев острым паром до температуры 65-95° и гранулирование (2). Однако стадия смешения споровой бактерии в сухом виде с кормом создает опасность повышенного обсеменения спорами воздуха и производственных помещений.A known method of obtaining a therapeutic and preventive animal feed, including the introduction of a probiotic into a crushed feed based on the culture of B. subtilis VKPM-B-4759 bacteria in a dry (lyophilized) form, mixing the feed components with a probiotic, heating with hot steam to a temperature of 65-95 ° and granulation (2). However, the stage of mixing spore bacteria in dry form with food creates the danger of increased seeding with spores of air and industrial premises.

Известен способ кормления сельскохозяйственных животных, при котором к основному рациону добавляют отход производства препарата «Биоспорин» - пробиотика из ассоциации бацилл В. subtilis ВКПМВ-2335(3) и В.licheniformis ВКПМВ-2336 (31). Отходом является фугат, полученный после отделения клеток, который используют в жидком виде в рационах животных ежедневно в период откорма или курсами по 14-21 день. Обоснованием к применению фугатов в качестве кормовой добавки в животноводстве является то, что содержащиеся в препарате клетки В.subtilis ВКПМВ-2335 (3) и В.licheniformis ВКПМВ-2336 (31) способствуют стабилизации нормальной микрофлоры кишечника, вытеснению патогенных и условно патогенных микроорганизмов, обеспечивают защиту от кишечных вирусов за счет стимуляции местного иммунитета, продукции интерферона и повышения общей резистентности организма (3). В фугате присутствует остаточное количество клеток бацилл, обеспечивающее его некоторую биологическую эффективность. Следует отметить, что получение пробиотиков, состоящих из ассоциации нескольких видов бактерий, требует контроля за сохранением необходимого соотношения форм бактерий в ассоциации для обеспечения стабильных показателей качества препарата и его отхода - фугата. Однако фугат не удобен для длительного хранения и транспортировки.There is a known method of feeding farm animals, in which the waste of production of the Biosporin preparation, a probiotic from the B. subtilis VKPMV-2335 (3) and B.licheniformis VKPMV-2336 bacilli association, is added to the main diet. Waste is a centrate obtained after separation of cells, which is used in liquid form in animal diets daily during the feeding period or in courses of 14-21 days. The rationale for the use of centrifuges as a feed additive in animal husbandry is that the cells of B. subtilis VKPMV-2335 (3) and B.licheniformis VKPMV-2336 (31) contained in the preparation contribute to the stabilization of the normal intestinal microflora, displacement of pathogenic and conditionally pathogenic microorganisms, provide protection against intestinal viruses by stimulating local immunity, production of interferon and increasing the overall resistance of the body (3). In the centrate there is a residual number of bacillus cells, providing it with some biological effectiveness. It should be noted that obtaining probiotics consisting of an association of several types of bacteria requires control over the preservation of the necessary ratio of bacterial forms in the association to ensure stable indicators of the quality of the drug and its waste - the centrate. However, the centrate is not suitable for long-term storage and transportation.

Приведенные выше примеры основаны на глубинном аэробном культивировании бацилл для накопления биомассы бактерий в жидкой питательной среде (2-3% сухих веществ в культуральной жидкости) и получении спор, в то время как естественные условия пищеварительного тракта - анаэробные, влажность химуса не превышает 75%, а микроорганизмы, обитающие в кишечном тракте, представлены вегетативными клетками. Кроме того, при получении препаратов не учитываются целлюлолитические свойства В.subtilis и не используются клетчатковые субстраты для выращивания клеток.The above examples are based on deep aerobic cultivation of bacilli to accumulate the biomass of bacteria in a liquid nutrient medium (2-3% of dry substances in the culture fluid) and receive spores, while the natural conditions of the digestive tract are anaerobic, the humidity of the chyme does not exceed 75%, and microorganisms living in the intestinal tract are represented by vegetative cells. In addition, upon receipt of the preparations, the cellulolytic properties of B. subtilis are not taken into account and cellular substrates for cell growth are not used.

Известен способ получения корма для животных из растительного сырья, включающий измельчение растительного сырья и его ферментативный гидролиз, который осуществляют путем внесения в растительный субстрат предварительно приготовленного препарата на основе содержимого слепой кишки обыкновенной полевки Microtus arvalis (4). Однако предложенная ассоциация бактерий не может длительное время сохранять стабильное соотношение входящих в нее компонентов, что создает трудности для получения препарата с заданными свойствами.A known method of producing animal feed from plant materials, including grinding plant materials and its enzymatic hydrolysis, which is carried out by introducing into the plant substrate a pre-prepared preparation based on the contents of the cecum of the common vole Microtus arvalis (4). However, the proposed association of bacteria cannot maintain a stable ratio of its constituents for a long time, which creates difficulties for obtaining a drug with desired properties.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ получения биологически активной кормовой добавки с помощью твердофазного процесса обработки целлюлозосодержащего сырья в факультативно-анаэробных условиях (5) прототип. Способ включает получение посевного материала, внесение его в количестве 2-10% в растительный субстрат (различные типы шротов, сухую пивную дробину, отруби и т.д.). Затем влажную массу помещают в условия затрудненного доступа кислорода (например, запаянные полиэтиленовые пакеты) и проводят твердофазную ферментацию субстрата в течение 5-48 часов. В качестве монокультуры бактерий, использующейся для получения биологически активной кормовой добавки, применена бацилла В.subtilis B-8130. Введение в комбикорм сухой пивной дробины, обогащенной препаратом, содержащим клетки В.subtilis 8130 (препарат Пробиоцел), и скармливание корма поросятам позволяет увеличить привесы животных за счет повышения усвояемости корма, снизить затраты комбикорма на 1 кг прироста живой массы поросят (6). Однако использование указанной дозы посевного материала В.subtilis 8130 для твердофазной ферментации растительного субстрата в факультативно-анаэробных условиях не вызывает накопления большого числа клеток бациллы Поэтому для обеспечения поступления в организм животного эффективного количества клеток пробиотика необходимо вводить в рацион животных относительно большое количество препарата (5% на тонну комбикорма). Это делает производство препарата крупнотоннажным и вызывает ряд трудностей: увеличение производственных площадей, обеспечение механизмами для подъема и транспортировки грузов, увеличение площади складских помещений, что удорожает стоимость препарата.The closest in technical essence and the achieved result is a method for producing a biologically active feed additive using a solid-phase process for processing cellulose-containing raw materials under optional anaerobic conditions (5) prototype. The method includes obtaining seed, adding it in an amount of 2-10% to the plant substrate (various types of meal, dry beer pellet, bran, etc.). Then the wet mass is placed in conditions of difficult access of oxygen (for example, sealed plastic bags) and conduct solid-phase fermentation of the substrate for 5-48 hours. Bacillus B. subtilis B-8130 was used as a monoculture of bacteria used to obtain a biologically active feed additive. The introduction of dry beer grains enriched in a feed containing a preparation containing B. subtilis 8130 cells (Probiocel preparation) and feeding the feed to the piglets allows them to increase the weight gain of the animals by increasing the feed digestibility and reduce the feed cost by 1 kg of growth in the live weight of the piglets (6). However, the use of the indicated dose of B. subtilis 8130 seed material for solid-phase fermentation of the plant substrate under facultative anaerobic conditions does not cause the accumulation of a large number of bacillus cells. Therefore, in order to ensure that the animal receives an effective amount of probiotic cells, a relatively large amount of the drug must be introduced into the animal diet (5% per ton of feed). This makes the production of the drug large-capacity and causes a number of difficulties: increasing production areas, providing mechanisms for lifting and transporting goods, increasing the area of storage facilities, which increases the cost of the drug.

Для усиления биологической эффективности продуктов твердофазной ферментации при затрудненном доступе кислорода и увеличения численности клеток пробиотика в препарате, разработан способ получения биологически активной кормовой добавки, включающий две стадии ее получения глубинное аэробное культивирование пробиотических бактерий вида Bacillus subtilis с целлюлолитическими свойствами (к числу которых относится штамм В subtilis B-8130) для накопления биомассы клеток (первая стадия), и последующая твердофазная ферментация растительного сырья при затрудненном доступе кислорода (вторая стадия). Процесс осуществляют в присутствии бикарбоната натрия (NaHCO3) для связывания ацетил-КоА и нейтрализации кислых продуктов ферментации, тем самым применяют метод метаболитной ловушки по Нейбергу для дрожжевого брожения.To enhance the biological effectiveness of solid-phase fermentation products with difficult access of oxygen and increase the number of probiotic cells in the preparation, a method for producing a biologically active feed additive has been developed, which includes two stages of its preparation by deep aerobic cultivation of probiotic bacteria of the species Bacillus subtilis with cellulolytic properties (which include strain B subtilis B-8130) for the accumulation of cell biomass (first stage), and the subsequent solid-phase fermentation of plant materials during rudnennom oxygen access (second step). The process is carried out in the presence of sodium bicarbonate (NaHCO 3 ) to bind acetyl-CoA and neutralize acidic fermentation products, thereby using the Neuberg metabolic trap method for yeast fermentation.

Техническим результатом изобретения является стабильное улучшение пищеварения, повышение привесов и продуктивности животных, уменьшение падежа молодняка и увеличение сохранности поголовья.The technical result of the invention is a stable improvement in digestion, an increase in weight gain and animal productivity, a decrease in mortality of young animals and an increase in the safety of the livestock.

При создании изобретения решается задача разработки биологически активной добавки, обладающей свойствами пробиотических препаратов, способствующей нормализации и активизации микробиоценоза кишечника, стимулирующей пищеварение, что способствует повышению усвояемости кормов и увеличивает привесы и продуктивность животных.When creating the invention, the problem of developing a biologically active supplement having the properties of probiotic preparations, contributing to the normalization and activation of intestinal microbiocenosis, stimulating digestion, which improves feed digestibility and increases the weight gain and productivity of animals, is solved.

Для достижения технического результата при приготовлении биологически активной кормовой добавки на основе растительного сырья и целлюлолитической культуры В.subtilis В-8130 проводят аэробное глубинное культивирование бактерии до получения титра вегетативных клеток не менее 109 КОЕ/мл, при этом осуществляют контроль на отсутствие спор в клетках бациллы, затем смешивают полученную жидкую культуру с растительным сырьем в весовом соотношении, обеспечивающем получение 45-70% влажности массы, к смеси добавляют бикарбонат натрия до достижения рН среды 7,0-7,5, и осуществляют процесс твердофазной ферментации при затрудненном доступе кислорода в течение 2-4 суток до получения конечного продукта с общей численностью клеток бациллы - не менее 109 КОЕ/г. Аэробное глубинное культивирование бациллы В.subtilis B-8130 осуществляют, например, на глюкозо-пептонной питательной среде, состава, г/л глюкоза - 20.0, пептон - 4.0, дрожжевой экстракт - 1.5, (NH4)2HPO4 - 1.5, MgSO4 - 0.5, рН 7.2-7.4, что не ограничивает применения других целлюлолитических штаммов бактерий вида В.subtilis, и питательных сред иного состава. В качестве растительного сырья для твердофазной ферментации используют сухие клетчатковые субстраты (облепиховый, шиповниковый, подсолнечниковый шрот или жмых, отходы мукомольного производства, производства круп, в том числе, рисовую шелуху, шелуху гречихи, и т.п.).To achieve a technical result in the preparation of a biologically active feed additive based on plant materials and cellulolytic culture of B. subtilis B-8130, aerobic deep cultivation of bacteria is carried out to obtain a vegetative cell titer of at least 10 9 CFU / ml, while monitoring for the absence of spores in the cells bacilli, then the resulting liquid culture is mixed with vegetable raw materials in a weight ratio, providing 45-70% moisture content of the mass, sodium bicarbonate is added to the mixture until pH cf food 7.0-7.5, and carry out the process of solid phase fermentation with difficult access of oxygen for 2-4 days to obtain the final product with a total number of bacillus cells - at least 10 9 CFU / g. Aerobic deep cultivation of B. subtilis B-8130 bacillus is carried out, for example, on glucose-peptone culture medium, composition, g / l glucose - 20.0, peptone - 4.0, yeast extract - 1.5, (NH 4 ) 2 HPO 4 - 1.5, MgSO 4 - 0.5, pH 7.2-7.4, which does not limit the use of other cellulolytic strains of bacteria of the species B. subtilis, and nutrient media of a different composition. Dry fiber substrates (sea buckthorn, dogrose, sunflower meal or cake, waste from flour milling, cereals, including rice husks, buckwheat husks, etc.) are used as plant raw materials for solid-phase fermentation.

Ниже приведены примеры получения биологически активной кормовой добавки.The following are examples of biologically active feed additives.

Пример 1Example 1

Для получения препарата в количестве, необходимом для введения в 1 тонну комбикорма, проводят аэробное глубинное культивирование бациллы В.subtilis 8130 в 0.5 л глюкозопептонной питательной среды до достижения титра клеток 1.2×109 КОЕ/мл. Осуществляют контроль на отсутствие спор в клетках и определяют эндоглюканазную активность (вискозиметрическим способом), которая составляет 7.0-14.0 ед./мл, протеазу, активность которой составляет до 120 ед./мл по методу Ансона. Полученные 0.5 л жидкой культуры смешивают с 0.6 кг подсолнечникового шрота для достижения влажности массы 45% и добавляют бикарбонат натрия (сода питьевая) до рН 7,0-7.2. Растительное сырье предварительно стерилизуют сухим жаром при 120°С, с помощью УФ-излучения или автоклавированием.To obtain the drug in the amount necessary for the introduction of 1 ton of feed, aerobic deep cultivation of B. subtilis 8130 bacillus is carried out in 0.5 L of glucose peptone medium until a cell titer of 1.2 × 10 9 CFU / ml is reached. They monitor for the absence of spores in the cells and determine the endoglucanase activity (by the viscometric method), which is 7.0-14.0 units / ml, a protease whose activity is up to 120 units / ml according to the Anson method. The resulting 0.5 l of liquid culture is mixed with 0.6 kg of sunflower meal to achieve a moisture content of 45% and sodium bicarbonate (drinking soda) is added to a pH of 7.0-7.2. Plant materials are pre-sterilized with dry heat at 120 ° C, using UV radiation or autoclaving.

Сырую массу помещают в емкость в условия затрудненного доступа кислорода и проводят твердофазную ферментацию в течение 2 суток. Для ограничения доступа кислорода массу помещают высоким слоем в специальное оборудование типа закрытого смесителя с регулируемым нагревом, или ею заполняют до верха бочки или полиэтиленовые пакеты мешки, которые закрывают крышками, или плотно завязывают и помещают в термокамеру. Продукт ферментации представляет собой биотрансформированное растительное сырье, содержит общее количество клеток 109 КОЕ/г, низкомолекулярные метаболиты (производные пропионовой и масляной кислот, низкомолекулярные амины, ароматические спирты, кислоты эфиры).The wet mass is placed in a container under conditions of difficult access of oxygen and solid-phase fermentation is carried out for 2 days. To limit the access of oxygen, the mass is placed in a high layer in special equipment such as a closed mixer with adjustable heating, or it is filled to the top of the barrel or plastic bags, which are closed with lids, or tightly tied and placed in a heat chamber. The fermentation product is a biotransformed plant material, contains a total number of cells of 10 9 CFU / g, low molecular weight metabolites (derivatives of propionic and butyric acids, low molecular weight amines, aromatic alcohols, acid esters).

Пример 2Example 2

Проводят глубинное культивирование В.subtilis 8130, как в примере 1, до получения жидкой культуры с титром вегетативных клеток бациллы 1.5×109 КОЕ/мл. Осуществляют микробиологический контроль в пробе на отсутствие в клетках спор. Затем проводят смешивание полученной жидкой культуры (0,5 л) с воздушно-сухим облепиховым шротом (п.2 формулы) в количестве 0.4 кг шрота, влажность полученной массы 70%. К смеси добавляют бикарбонат натрия в количестве, обеспечивающем достижение в смеси рН 7,5. Затем осуществляют процесс твердофазной ферментации при затрудненном доступе кислорода в течение 4 суток до получения конечного продукта с общим количеством клеток бациллы 5×109 КОЕ/г. В конечном продукте присутствуют уксусная, пропионовая, масляная, гексановая кислоты.An in-depth cultivation of B. subtilis 8130 was carried out, as in Example 1, until a liquid culture with a titer of vegetative cells of the bacillus 1.5 × 10 9 CFU / ml was obtained. Microbiological control is carried out in the sample for the absence of spores in the cells. Then, the resulting liquid culture (0.5 L) is mixed with air-dried sea buckthorn meal (claim 2 of the formula) in the amount of 0.4 kg of meal, the humidity of the resulting mass is 70%. Sodium bicarbonate is added to the mixture in an amount ensuring a pH of 7.5 is reached in the mixture. Then, a solid-phase fermentation process is carried out with difficult oxygen access for 4 days to obtain the final product with a total number of 5 × 10 9 CFU / g bacillus cells. Acetic, propionic, butyric, and hexanoic acids are present in the final product.

Пример 3Example 3

Осуществляют, как в примере 1, глубинное культивирование бациллы В.subtilis 8130 до получения вегетативных клеток - 1.4×109 КОЕ/мл. Смешивание жидкой культуры В.subtilis 8130 в количестве 0.5 л проводят с измельченной кожурой семян гречихи (п.2 формулы) в количестве 0.45 кг (влажность полученной сырой массы 60%), добавляют бикарбонат натрия в количестве, необходимом до достижения рН 7,3 и ведут твердофазную ферментацию в полностью заполненных и запаянных полиэтиленовых пакетах в течение 3 суток до получения конечного продукта с общим количеством клеток бациллы 2×109 КОЕ/г.Carry out, as in example 1, the deep cultivation of bacillus B. subtilis 8130 to obtain vegetative cells - 1.4 × 10 9 CFU / ml Mixing a liquid culture of B. subtilis 8130 in an amount of 0.5 l is carried out with crushed peel of buckwheat seeds (claim 2 of the formula) in an amount of 0.45 kg (humidity of the obtained fresh mass of 60%), sodium bicarbonate is added in an amount necessary to reach a pH of 7.3 conduct solid-phase fermentation in fully filled and sealed plastic bags for 3 days until the final product with a total number of bacillus cells 2 × 10 9 CFU / g is obtained.

В качестве растительного субстрата возможно использовать облепиховый, подсолнечниковый, шиповниковый шрот, измельченную кожуру семян гречихи и др. (см. п.2 ф-лы).As a plant substrate, it is possible to use sea buckthorn, sunflower, rosehip meal, crushed peel of buckwheat seeds, etc. (see paragraph 2 f-ly).

Подбор вышеуказанных параметров обусловлен оптимальными режимами для накопления клеток и активации выделения клетками биологически активных метаболитов.The selection of the above parameters is due to optimal conditions for the accumulation of cells and activation of the release of biologically active metabolites by cells.

Предложенные параметры при осуществлении заявленного способа получения биологически активной кормовой добавки для сельскохозяйственных животных являются оптимальными для получения высокоэффективной добавки - стимулятора пищеварения у животных и способствуют увеличению усвояемости корма, что увеличивает продуктивность, прирост живой массы животных при введении 0.25-0.5 кг добавки на тонну комбикорма (0.025-0.05%), т.е. при производстве кормовой добавки заявленным способом достигается технический результат изобретения.The proposed parameters in the implementation of the claimed method for producing a biologically active feed additive for farm animals are optimal for obtaining a highly effective additive - a digestive stimulant in animals and increase feed digestibility, which increases productivity, increase live weight of animals when 0.25-0.5 kg of feed additive per ton of feed is introduced ( 0.025-0.05%), i.e. in the manufacture of a feed additive by the claimed method, the technical result of the invention is achieved.

При введении соды в процессе твердофазной ферментации рН реакционной массы не снижается ниже 5.8-5.9, и при этом эндоглюканаза и протеаза расщепляют целлюлозу и растительные пептиды, образуются низкомолекулярные органические кислоты, в том числе уксусная, пропионовая, масляная и гексановая кислоты, которые являются стимуляторами пищеварения. В продуктах ферментации определяются также низкомолекулярные амины, ароматические соединения. Бактериальная ферментация растительного субстрата ведет также к увеличению в продукте ферментации содержания аминокислот, в наибольшей степени - глутаминовой кислоты и гистидина. В препарате на основе облепихового шрота доля глутаминовой кислоты в сумме аминокислот составила 5,2%, гистидина - 0,84%, которые стимулируют обмен веществ, что в комплексе с другими отмеченными низкомолекулярными метаболитами обеспечивает заявленный технический результат.When soda is introduced during solid-phase fermentation, the pH of the reaction mass does not drop below 5.8-5.9, and endoglucanase and protease break down cellulose and plant peptides, and low molecular weight organic acids, including acetic, propionic, butyric, and hexanoic acids, which stimulate digestion, are formed . Low molecular weight amines and aromatic compounds are also determined in fermentation products. Bacterial fermentation of the plant substrate also leads to an increase in the content of amino acids in the fermentation product, to the greatest extent - glutamic acid and histidine. In the preparation based on sea buckthorn meal, the proportion of glutamic acid in the total amount of amino acids was 5.2%, histidine - 0.84%, which stimulate the metabolism, which, in combination with other noted low molecular weight metabolites, provides the claimed technical result.

Пробиотические функции В.subtilis B-8130 в препарате, полученном заявленным способом, могут проявляться в стимуляции развития отдельных видов представителей кишечного микробиоценоза (лактобактерий, руминококков), увеличении эффективности пищеварения, в стимуляции азотистого обмена веществ у животного, что ведет к увеличению мышечной массы.The probiotic functions of B. subtilis B-8130 in a preparation obtained by the claimed method can be manifested in stimulating the development of certain types of representatives of intestinal microbiocenosis (lactobacilli, ruminococci), increasing digestion efficiency, and stimulating nitrogen metabolism in an animal, which leads to an increase in muscle mass.

Для доказательства этого предложения были изучены зоотехнические показатели бройлеров кросса Сибиряк, получавших комбикорм с 0.025% препарата на основе твердофазной ферментации облепихового шрота при затрудненном доступе кислорода в течение 2-х суток заявленным способом по данному изобретению и содержащего общее количество клеток бациллы 1.5×109 клеток/г (группа Опытная 1) и бройлеров кросса ИЗА-15, получавших комбикорм с 0.05% препарата на основе твердофазной ферментации облепихового шрота при затрудненном доступе кислорода в течение 3-х суток заявленным способом по данному изобретению и содержащего общее количество клеток бациллы 1.6×109 КОЕ/г (группа Опытная 2). Контрольная группа 1 не получала никаких препаратов, контрольная группа 0 получала комбикорм с 5% препарата-аналога с В.subtilis B-8130 (препарат Пробиоцел), контрольная группа 2 получала кормовой антибиотик «Флавомицин». Все группы цыплят получали одинаковый полнорационный корм. Показатели продуктивности откорма приведены в таблице.To prove this proposal, we studied the zootechnical parameters of Sibiryak cross broilers who received mixed feed with 0.025% of the preparation based on solid-phase fermentation of sea buckthorn meal with difficult oxygen supply for 2 days by the claimed method according to this invention and containing a total number of 1.5 × 10 9 bacillus cells / g (Experimental group 1) and ISA-15 cross broilers who received mixed feed with 0.05% of the preparation based on solid-phase fermentation of sea buckthorn meal with difficult oxygen supply for 3 days to the claimed process of the present invention and comprising a total number of bacillus cells 1.6 × September 10 CFU / g (Experimental group 2). Control group 1 did not receive any drugs, control group 0 received mixed feed with 5% of an analogue drug with B. subtilis B-8130 (Probiocel drug), control group 2 received the feed antibiotic Flavomycin. All groups of chickens received the same complete feed. Feeding productivity indicators are given in the table.

Показатели продуктивности откорма бройлеровBroiler Feeding Performance ПоказательIndicator Бройлеры кросса СибирякBroilers cross Siberian Бройлеры кросса ИЗА-15Broilers cross ISA-15 Контроль 0Control 0 Контроль 1Control 1 Опыт 1Experience 1 Контроль 2Control 2 Опыт 2Experience 2 Число цыплят в группеThe number of chickens in the group 4040 50fifty 50fifty 2482024820 2894328943 Возраст при убое, дниAge at slaughter, days 4343 4343 4343 4242 4242 Сохранность, %Preservation,% 92.092.0 91.091.0 92.592.5 93.493.4 93.093.0 Среднесуточный привес, гThe average daily gain, g 43.143.1 41.541.5 44.844.8 45.445.4 47.447.4 Среднесдаточный вес 1 головы, гThe average weight of 1 head, g 19101910 18251825 19701970 19411941 20542054 Расход корма, кг на кг привесаFeed consumption, kg per kg gain -- -- -- 1.891.89 1.891.89 Конверсия корма, ц.к. ед.Feed conversion, c.c. units 1.981.98 2.052.05 1.931.93 -- --

Как показывают данные таблицы, при экспериментальном кормлении препаратами в течение 42-43-х дней в конце эксперимента увеличилась сохранность поголовья, приближаясь к показателям при введении кормового антибиотика, среднесуточный привес в опытных группах увеличился на 4.5-8%. Среднесдаточный вес 1 головы увеличился на 6-8% по сравнению с контрольными группами 1 и 2. Уменьшение конверсии корма в среднем на 3% на 1 голову свидетельствуют о повышении эффективности пищеварения у опытных бройлеров. Вместе с тем, опытные птицы показали лучшие технические результаты по сравнению с контрольной группой 0 по показателям среднесдаточного веса 1 головы, среднесуточным привесам и конверсии корма, что указывает на преимущества нового способа получения препарата заявленным способом по данному изобретению перед ближайшим аналогом.As the data in the table show, during experimental feeding of the drugs for 42-43 days at the end of the experiment, the safety of the livestock increased, approaching the indicators with the introduction of a feed antibiotic, the average daily gain in the experimental groups increased by 4.5-8%. The average weight of 1 head increased by 6-8% compared to control groups 1 and 2. A decrease in feed conversion by an average of 3% per 1 head indicates an increase in the digestion efficiency of experienced broilers. At the same time, the experimental birds showed better technical results compared to the control group 0 in terms of average daily weight of 1 head, average daily gain and feed conversion, which indicates the advantages of the new method of obtaining the preparation of the claimed method according to this invention over the closest analogue.

ЛитератураLiterature

1. RU 2184774 С1, C12N 1/20, 10.07.2002.1. RU 2184774 C1, C12N 1/20, 07/10/2002.

2. RU 2140165 С1, A23K 1/00, 27.10.1999.2. RU 2140165 C1, A23K 1/00, 10.27.1999.

3. RU 2236147 C2, A23K 1/00, 20.09.2004.3. RU 2236147 C2, A23K 1/00, 09/20/2004.

4. RU 2153813 С1, A23K 1/165, 10.08.2000.4. RU 2153813 C1, A23K 1/165, 08/10/2000.

5. RU 2202224 C2, A23K 1/165, 20.04.2003 (прототип).5. RU 2202224 C2, A23K 1/165, 04/20/2003 (prototype).

6. RU 2284703 С1, А23К 1/06, 10.10.2006.6. RU 2284703 C1, A23K 1/06, 10/10/2006.

Claims (2)

1. Способ получения биологически активной кормовой добавки из растительного сырья, предусматривающий аэробное глубинное культивирование пробиотической целлюлолитической бациллы Bacillus subtilis 8130 до получения титра вегетативных клеток не менее 109 КОЕ/мл, контроль на отсутствие спор в клетках бациллы, смешивание полученной жидкой культуры с растительным сырьем в массовом соотношении, обеспечивающем получение 45-70% влажности массы, к полученной смеси добавляют бикарбонат натрия до достижения рН среды 7,0-7,5 и проводят твердофазную ферментацию при затрудненном доступе кислорода в течение 2-4 сут до получения конечного продукта с общим количеством клеток бациллы не менее 109 клеток/г.1. A method of obtaining a biologically active feed additive from plant materials, which provides for aerobic deep cultivation of the probiotic cellulolytic bacillus Bacillus subtilis 8130 to obtain a vegetative cell titer of at least 10 9 CFU / ml, control for the absence of spores in the bacillus cells, mixing the obtained liquid culture with vegetable raw materials in a mass ratio, providing 45-70% moisture content of the mass, sodium bicarbonate is added to the resulting mixture until a pH of 7.0-7.5 is reached and solid phase fermentation is carried out When access is difficult, the oxygen for 2-4 days to obtain the final product with total number of bacillus cells at least 10 9 cells / g. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют облепиховый, шиповниковый, подсолнечниковый шрот или жмых, отходы мукомольного производства, производства круп, в том числе, рисовую шелуху, шелуху гречихи. 2. The method according to claim 1, characterized in that sea buckthorn, dogrose, sunflower meal or cake, waste from flour milling, cereals, including rice husks, buckwheat husks are used as plant materials.
RU2007109893/13A 2007-03-20 2007-03-20 Method for production of dietary supplement RU2346463C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2007109893/13A RU2346463C2 (en) 2007-03-20 2007-03-20 Method for production of dietary supplement

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2007109893/13A RU2346463C2 (en) 2007-03-20 2007-03-20 Method for production of dietary supplement

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2007109893A RU2007109893A (en) 2008-09-27
RU2346463C2 true RU2346463C2 (en) 2009-02-20

Family

ID=39928498

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2007109893/13A RU2346463C2 (en) 2007-03-20 2007-03-20 Method for production of dietary supplement

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2346463C2 (en)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2433738C1 (en) * 2010-05-28 2011-11-20 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-технический центр биологических технологий в сельском хозяйстве" Method for production of fodder additive for prevention of animals and birds mycotoxicosis
RU2438346C1 (en) * 2010-04-23 2012-01-10 ООО "Бинар" Method for production of premix for poultry feeding
RU2477614C1 (en) * 2011-07-11 2013-03-20 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-технический центр биологических технологий в сельском хозяйстве" Method for production of complex biologically active fodder additive for farm animals, birds and fish with probiotics and medicinal herbs
RU2499829C1 (en) * 2012-05-31 2013-11-27 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-технический центр биологических технологий в сельском хозяйстве" Production method of complex feed preparation with lysin producer based on corynebacterium glutamicum
RU2546880C2 (en) * 2013-06-03 2015-04-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова Академии Наук Method of probiotic feed preparation for farm animals
RU2583084C2 (en) * 2014-09-04 2016-05-10 Общество с ограниченной ответственностью "Биотехнологии производства кормов" Biologically active feed supplement
RU2772214C2 (en) * 2017-05-05 2022-05-18 Хювефарма Functionalized saccharides as anti-inflammatory agents

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0033584A2 (en) * 1980-01-11 1981-08-12 Farmos-Yhtyma Oy Process for the production of a bacterial preparation for the prophylaxis of intestinal disturbances in poultry
RU2105562C1 (en) * 1995-06-14 1998-02-27 Леляк Александр Иванович Method of preparing base-bacillus subtilis bacterial preparation
RU2202224C2 (en) * 2001-02-22 2003-04-20 Институт проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН Method of preparing biologically active fodder additive from vegetable raw material
RU2280464C2 (en) * 2004-03-22 2006-07-27 Александр Иванович Петенко Method for preparing dry probiotic preparation "batsell"

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0033584A2 (en) * 1980-01-11 1981-08-12 Farmos-Yhtyma Oy Process for the production of a bacterial preparation for the prophylaxis of intestinal disturbances in poultry
RU2105562C1 (en) * 1995-06-14 1998-02-27 Леляк Александр Иванович Method of preparing base-bacillus subtilis bacterial preparation
RU2202224C2 (en) * 2001-02-22 2003-04-20 Институт проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН Method of preparing biologically active fodder additive from vegetable raw material
RU2280464C2 (en) * 2004-03-22 2006-07-27 Александр Иванович Петенко Method for preparing dry probiotic preparation "batsell"

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
УШАКОВА Н.А. и др. Изучение механизмов активности штамма Bacillus subtilis 8130, входящего в препарат Пробиоцел, в лабораторных экспериментах, научно-хозяйственных опытах и при производственной проверке в рационе свиней. Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания и перспективы. Современное состояние и перспективы. Сборник материалов международной конференции. - М., 2-4 июня 2004, с.162-163. *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2438346C1 (en) * 2010-04-23 2012-01-10 ООО "Бинар" Method for production of premix for poultry feeding
RU2433738C1 (en) * 2010-05-28 2011-11-20 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-технический центр биологических технологий в сельском хозяйстве" Method for production of fodder additive for prevention of animals and birds mycotoxicosis
RU2477614C1 (en) * 2011-07-11 2013-03-20 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-технический центр биологических технологий в сельском хозяйстве" Method for production of complex biologically active fodder additive for farm animals, birds and fish with probiotics and medicinal herbs
RU2499829C1 (en) * 2012-05-31 2013-11-27 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-технический центр биологических технологий в сельском хозяйстве" Production method of complex feed preparation with lysin producer based on corynebacterium glutamicum
RU2546880C2 (en) * 2013-06-03 2015-04-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова Академии Наук Method of probiotic feed preparation for farm animals
RU2583084C2 (en) * 2014-09-04 2016-05-10 Общество с ограниченной ответственностью "Биотехнологии производства кормов" Biologically active feed supplement
RU2772214C2 (en) * 2017-05-05 2022-05-18 Хювефарма Functionalized saccharides as anti-inflammatory agents

Also Published As

Publication number Publication date
RU2007109893A (en) 2008-09-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2412612C1 (en) Method for production of "ferm km" probiotic fodder additive for domestic animals and birds
KR100840145B1 (en) Fermented feed for animal husbandry using lactic acid bacterium and yeast and method for producing the same
CN101449744B (en) Multifunctional biology aquatic feedstuff additive
KR100944757B1 (en) Livestock Probiotics and Manufacturing Method Thereof
CN102228129B (en) Fermented feed
CN102696860B (en) Highly efficient and low-cost microbiological feed proteins based on vinegar residue and miscellaneous meal
CN106260504B (en) Method for producing microbial fermentation wet feed by using beer yeast paste
CN101019609A (en) Solid fermentation process for producing natto bacillus feed additive with bean dregs
CN111838408A (en) Functional amino acid enzyme and preparation method thereof
CN103110033A (en) Pig feed additive and preparation method thereof
CN117004520A (en) Bacillus compositions and methods for ruminants
CN108541805A (en) The reuse method and fermentate of a kind of clostridium butyricum fermentation waste water and its application
RU2346463C2 (en) Method for production of dietary supplement
RU2458526C1 (en) Probiotic fodder additive for farm birds and fur animals
CN113414226A (en) Kitchen waste leavening agent and preparation method and application thereof
CN105851479A (en) A kind of earthworm fermented liquid and its preparation method and application method
CN102389037A (en) Bio-fermented and extruded pellet feed for chickling preparation method thereof
KR100287825B1 (en) Probiotics For Feed Additives
CN101194671A (en) Enzymolysis protein feedstuff containing probiotic bacteria and producing method thereof
CN116831229A (en) Biological fermentation feed for ruminants with increased protein content and preparation method thereof
CN106720956A (en) A kind of carp feed
CN110419622B (en) Composite probiotic oligosaccharide fruit feed additive and preparation and use methods thereof
KR101709248B1 (en) Probiotics for feed additives using a palm oil mesocarp, method for preparing, and utilizing the same
RU2378000C2 (en) Method for production of therapeutic additive
CN105248883A (en) Method for degrading harmful residue in aquatic and poultry animal bodies by using short chain fatty acid

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20140321

NF4A Reinstatement of patent

Effective date: 20150310

MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20180321