RU2343481C2 - Way of laser diagnostics of biotechnology cellularisation/decellularisation stages of tissue structures - Google Patents
Way of laser diagnostics of biotechnology cellularisation/decellularisation stages of tissue structures Download PDFInfo
- Publication number
- RU2343481C2 RU2343481C2 RU2006128966/15A RU2006128966A RU2343481C2 RU 2343481 C2 RU2343481 C2 RU 2343481C2 RU 2006128966/15 A RU2006128966/15 A RU 2006128966/15A RU 2006128966 A RU2006128966 A RU 2006128966A RU 2343481 C2 RU2343481 C2 RU 2343481C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- stages
- decellularization
- decellularisation
- cellularisation
- biotechnology
- Prior art date
Links
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- 238000001499 laser induced fluorescence spectroscopy Methods 0.000 claims description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 2
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 claims 1
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 abstract description 11
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 abstract description 7
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 239000004744 fabric Substances 0.000 abstract 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 208000004434 Calcinosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004099 Chlortetracycline Substances 0.000 description 1
- 208000002251 Dissecting Aneurysm Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007875 V-40 Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 206010002895 aortic dissection Diseases 0.000 description 1
- 210000001765 aortic valve Anatomy 0.000 description 1
- 229910052586 apatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000033558 biomineral tissue development Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000007675 cardiac surgery Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- CYDMQBQPVICBEU-UHFFFAOYSA-N chlorotetracycline Natural products C1=CC(Cl)=C2C(O)(C)C3CC4C(N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)C4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O CYDMQBQPVICBEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYDMQBQPVICBEU-XRNKAMNCSA-N chlortetracycline Chemical compound C1=CC(Cl)=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@@]4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O CYDMQBQPVICBEU-XRNKAMNCSA-N 0.000 description 1
- 229960004475 chlortetracycline Drugs 0.000 description 1
- 235000019365 chlortetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000011824 nuclear material Substances 0.000 description 1
- VSIIXMUUUJUKCM-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;fluoride;triphosphate Chemical compound [F-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O VSIIXMUUUJUKCM-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 230000001020 rhythmical effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000004621 scanning probe microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000006032 tissue transformation Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Laser Surgery Devices (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики состояния тканей на этапах децеллюляризации и целлюляризации тканевых конструкций в биотехнологии.The invention relates to medicine and is intended for diagnosing the state of tissues at the stages of decellularization and cellulization of tissue structures in biotechnology.
В настоящее время основное внимание тканевых инженеров в области кардиохирургии фокусируется на создании функционально идентичной копии здорового клапансодержащего графта. Это относительно новая техника в области тканевого инжиниринга и, может быть скоро, она сможет преодолеть недостатки, связанные с клиническим использованием механических и биологических ксеноклапанов [1, 2, 3, 4]. В настоящее время биотехнологический подход для создания трансплантируемых клапанов заключается в применении ацеллюлярного, натурального биоматрикса. Например, фрагмент клапансодержащего графта может быть обработан для удаления их клеточных составляющих, что уменьшает его иммуногенность и делает возможным повторное заселение клетками реципиента. Этот подход требует техники децеллюляризации, которая заключается в эллиминации клеточных элементов из структуры аорты. Однако децеллюляризация может неблагоприятно влиять на механические свойства биоматрикса и восстановление ткани in vivo [5]. В отличие от полимерных кондуитов. ацеллюлярный биоматрикс сохраняет лиганды и компоненты экстрацеллюлярного матрикса, что более физиологично для процессов восстановления функции клапана. В связи с этим возникает необходимость контроля за состоянием аллографта на этапах децеллюляризации и последующего засевания аутологичными клетками клапансодержащего графта аорты. Системы оценки качества биотехнологических этапов приготовления аутографтов на сегодняшний день нет. Для оценки графта при отработке протокола используется биопсия с последующими исследованиями образцов различными гистологическими, гистохимическими методами, флуоресцентными зондами, включая измерение механического напряжения. Перечисленные методы инвазивны для графта, их проведение требует множества дополнительных и часто длительных процедур, что делает эти методы малопривлекательными для реальной практики. Более того использование всех вышеперечисленных технологий возможно только на этапе подготовки протокола биотехнологии.Currently, the focus of tissue engineers in the field of cardiac surgery is focused on creating a functionally identical copy of a healthy valve-containing graft. This is a relatively new technique in the field of tissue engineering and, perhaps soon, it will be able to overcome the disadvantages associated with the clinical use of mechanical and biological xeno valves [1, 2, 3, 4]. Currently, the biotechnological approach for creating transplantable valves is to use an acellular, natural biomatrix. For example, a fragment of a valve-containing graft can be processed to remove their cellular components, which reduces its immunogenicity and makes it possible to repopulate recipient cells. This approach requires a technique of decellularization, which consists in the elimination of cellular elements from the structure of the aorta. However, decellularization can adversely affect the mechanical properties of biomatrix and tissue repair in vivo [5]. Unlike polymer conduits. the acellular biomatrix retains the ligands and components of the extracellular matrix, which is more physiological for the restoration of valve function. In this regard, it becomes necessary to monitor the state of the allograft at the stages of decellularization and subsequent inoculation with autologous cells of the valve-containing aortic graft. There are currently no systems for assessing the quality of biotechnological stages in the preparation of autographs. To assess the graft during the development of the protocol, a biopsy is used with subsequent examination of the samples by various histological, histochemical methods, fluorescence probes, including measurement of mechanical stress. The listed methods are invasive for the graft; their implementation requires many additional and often lengthy procedures, which makes these methods unattractive for real practice. Moreover, the use of all of the above technologies is possible only at the stage of preparation of the biotechnology protocol.
Известно, что для определения жизнеспособности тканей может быть использована лазерно-индуцированная флюоресценция (ЛИФ) [6].It is known that laser-induced fluorescence (LIF) can be used to determine tissue viability [6].
Целью изобретения является разработка способа объективной оценки состояния графта на этапах децеллюляризации-целлюляризации, методом лазерноиндуцированной флюоресценции.The aim of the invention is to develop a method for an objective assessment of the condition of the graft at the stages of decellularization-cellulization, using laser-induced fluorescence.
Указанная цель достигается путем определения спектров вторичной флюоресценции тканей под воздействием ультрафиолетового импульсного лазерного облучения.This goal is achieved by determining the spectra of secondary fluorescence of tissues under the influence of ultraviolet pulsed laser irradiation.
Способ осуществляется следующим образом.The method is as follows.
Забор фрагментов клапансодержащих графтов аорты человека производился в областном бюро судебно-медицинской экспертизы города Новосибирска. Проводилась стандартная диссекция аорты вместе с аортальным клапаном согласно протоколам европейского банка тканей. Давность наступления смерти составляла 12-24 часа. Полученные клапансодержащие графты аорты транспортировались в холодном физиологическом растворе и далее велись следующим образом.Fragments of valve-containing human aortic grafts were collected at the regional forensic examination bureau of the city of Novosibirsk. Standard aortic dissection was performed along with the aortic valve according to the protocols of the European tissue bank. The prescription of death was 12-24 hours. The obtained valve-containing aortic grafts were transported in cold saline and then carried out as follows.
Пять фрагментов клапансодержащих графтов аорт размерами 5×1 см после диссекции были сразу же погружены в холодный физиологический раствор и отправлены на анализ ЛИФ, где с каждого кусочка размерами 1×1 см со стороны эндотелия проводили исследование ЛИФ. После этого была произведена фиксация материала в формалине для дальнейшего морфологического исследования. Оставшийся материал клапансодержащих графтов аорт человека в стерильных условиях бокса биологической безопасности подвергался процессу децеллюляризации, затем проводился анализ спектров ЛИФ для оценки степени децеллюляризации во времени. Процесс децеллюляризации заключается в элиминации аутологичных клеток с сохранением структурных особенностей и организации экстрацеллюлярного матрикса, что достигается погружением клапансодержащего фрагмента аорты человека в раствор, содержащий 0,5% трипсин/0,2% ЭДТА на 0,02 М фосфатном буфере, рН=7,4. Образцы оставлены в термостате при 37°С на 40 часов в стерильном сосуде с магнитной мешалкой. Фрагменты аорт забирались на следующих этапах: этап 1-2,5; этап 11-5; этап III-8; этап IV-26; этап V-40 часов после начала процесса децеллюляризации с последующим измерением ЛИФ. После каждого измерения спектров ЛИФ, материал также фиксировался в формалине, для дальнейшего морфологического исследования.Five fragments of valve-containing aortic grafts 5 × 1 cm in size after dissection were immediately immersed in cold physiological saline and sent for LIF analysis, where LIF was examined from each piece 1 × 1 cm in size from the endothelium. After this, material was fixed in formalin for further morphological studies. The remaining material of valve-containing human aortic grafts under sterile conditions of the biological safety box was subjected to the process of decellularization, then the LIF spectra were analyzed to assess the degree of decellularization in time. The process of decellularization consists in the elimination of autologous cells while maintaining the structural features and organization of the extracellular matrix, which is achieved by immersion of the valve-containing fragment of the human aorta in a solution containing 0.5% trypsin / 0.2% EDTA in 0.02 M phosphate buffer, pH = 7, four. Samples were left in a thermostat at 37 ° C for 40 hours in a sterile vessel with a magnetic stirrer. Fragments of the aorta were taken at the following stages: stage 1-2.5; stage 11-5; stage III-8; stage IV-26; stage V-40 hours after the start of the process of decellularization with subsequent measurement of LIF. After each measurement of the LIF spectra, the material was also fixed in formalin for further morphological studies.
На фиг.1 представлены спектры с аорты (по оси OX - длина волны, по оси OY - интенсивность флюоресценции). Показано, что полный цикл децеллюляции графтов аорт (40 часов) приводит к исчезновению пика в полосе от 420 до 570 нм. Что отражает с одной стороны собственно децеллюляцию, а с другой декальцификацию аорт.Figure 1 shows the spectra from the aorta (along the OX axis - wavelength, along the OY axis - fluorescence intensity). It was shown that the complete cycle of aortic graft decellulation (40 hours) leads to the disappearance of the peak in the band from 420 to 570 nm. Which reflects, on the one hand, the actual decellulation, and on the other, the decalcification of the aorta.
Уточняя феномен исчезновения спектрального пика в полосе 420-570 нм, проведен дополнительный эксперимент с целью изучения морфологических изменений цитоархитектоники ткани аорт и степени деградации ядерного материала. Для этого фрагменты клапансодержащих графтов аорт забирались на различных этапах процесса децеллюляризации Забор образцов производился через 2,5; 5; 8; 24; 40 часов после начала процесса децеллюляризации. Далее материал фиксировался в формалине, и готовились криостатные срезы для последующего окрашивания гематоксилином-эозином, этидиумом бромидом, хлортетрациклином. Выполнялась флюориметрия образцов при температуре 24°C по стандартной схеме.Refining the phenomenon of the disappearance of the spectral peak in the band 420-570 nm, an additional experiment was conducted to study the morphological changes in the cytoarchitectonics of aortic tissue and the degree of degradation of nuclear material. For this, fragments of valve-containing aortic grafts were taken at various stages of the decellularization process. Samples were taken after 2.5; 5; 8; 24; 40 hours after the start of the process of decellularization. Further, the material was fixed in formalin, and cryostatic sections were prepared for subsequent staining with hematoxylin-eosin, ethidium bromide, and chlortetracycline. Fluorimetry of the samples was carried out at a temperature of 24 ° C according to the standard scheme.
Выявлено, что стенка аорты в процессе децеллюляризации претерпевает значительные морфологические изменения. Так гистологический анализ показал последовательное уменьшение и полное исчезновения ядросодержащих клеток в стенке аорт на этапах децеллюляции. На фиг.2 отражено начало децеллюляции графта аорты - 2,5 часа в децеллюляризирующем растворе - присутствуют ядросодержащие клетки и полное отсутствие ядросодержащих клеток в стенке аорты через 40 часов после содержания в децеллюлялизирующем растворе, фиг.3.It was revealed that the aortic wall undergoes significant morphological changes in the process of decellularization. So histological analysis showed a consistent decrease and complete disappearance of nucleated cells in the aortic wall at the stages of decellulation. Figure 2 shows the onset of aortic graft decellulation — 2.5 hours in a decellularizing solution — there are nucleated cells and the complete absence of nucleated cells in the aortic wall 40 hours after being contained in the decellularizing solution, FIG. 3.
Эти изменения, так же наблюдались при анализе изображений при окрашивании этидиумом бромидом фиг.4 начало децеллюляции - присутствие ядросодержащих клеток, умеренный межволоконный отек, и фиг.5 - конец децеллюляции. Полное отсутствие ядросодержащих клеток, набухание волокон.These changes were also observed when analyzing images when staining with ethidium bromide in Fig. 4 the beginning of decellulation - the presence of nucleated cells, moderate interfiber edema, and Fig. 5 - the end of decellulation. The complete absence of nucleated cells, fiber swelling.
На фиг.6 представлена диаграмма, демонстрирующая изменение интенсивности флюоресценции в процессе децеллюляризации по включению этидиума бромида. Нами получено статистически достоверное различие (р<0,05) по уровню интенсивности суммарной флюоресценции Ethidium bromide аорт на последних двух этапах децеллюляризации - через 24 часа и 40 часов децеллюляризации, где было определено значительное снижение уровня флюоресценции в сравнении с исходным уровнем флюоресценции нативного препарата, а также с предшествовавшими биотехнологическими этапами 2,5 часа, 5, и 8 часов децеллюляризации.FIG. 6 is a diagram showing a change in fluorescence intensity during decellularization by incorporating ethidium bromide. We obtained a statistically significant difference (p <0.05) in the level of intensity of total fluorescence of Ethidium bromide aorta at the last two stages of decellularization - after 24 hours and 40 hours of decellularization, where a significant decrease in the level of fluorescence was determined in comparison with the initial level of fluorescence of the native drug, as well as with the preceding biotechnological stages of 2.5 hours, 5, and 8 hours of decellularization.
Обзорная сканирующая микроскопия показала, что на последних этапах децеллюляризации происходит тканевая трансформация, которая проявляется выскальзыванием отдельных волокон, нарушением ритмического характера волокнистой организации стенки аорты (фиг.7), а также появлением ячеистых структур при окончании процесса децеллюляризации (фиг.8) в сравнении с контролем, нативной стенкой аорты (фиг.9), отражающим линейно-прерывистый характер ориентации депозитов.Survey scanning microscopy showed that tissue transformation occurs at the last stages of decellularization, which is manifested by the slipping of individual fibers, the violation of the rhythmic nature of the fibrous organization of the aortic wall (Fig. 7), and the appearance of cellular structures at the end of the decellularization process (Fig. 8) in comparison with control, the native wall of the aorta (Fig.9), reflecting the linearly discontinuous nature of the orientation of the deposits.
Обзорная сканирующая электронная микроскопия в режиме обратного рассеяния электронов показала ряд характерных черт на этапах получения ацеллюлярного гомографта относительно нативной аорты. Так субэндотелиальные линейно-прерывистые депозиты, ориентированные продольно аорте (по ходу крови), и апатитная минерализация, наблюдаемые во всех нативных аортах и более чем в половине препаратов, определяемые очаговые, глыбчатые депозиты размерами от 1 до 10 микрон не обнаруживались на этапе децеллюляризации 24 и 48 часов. Кроме того, обнаружена характерная трансформация тканей гомографта к поздним этапам децеллюляризации, которую мы охарактеризовали как формирование сетчато-ячеистой структуры. Более того, статистический анализ цифровых данных полученных при рентгеноспектральном изучении образцов тканей аорт, отчетливо продемонстрировал значительное снижение уровня кальция в сочетании с подъемом уровня фосфора. Потеря кальция тканями гомографтов аорт носит комбинированный характер как экстрацеллюлярный, так и внутриклеточный.Survey scanning electron microscopy in the electron backscattering mode showed a number of characteristic features at the stages of obtaining an acellular homograft relative to the native aorta. So, subendothelial linearly discontinuous deposits oriented longitudinally to the aorta (along the blood flow), and apatite mineralization observed in all native aorta and in more than half of the preparations, defined focal, cobble deposits with sizes from 1 to 10 microns were not detected at the decellularization stage 24 and 48 hours. In addition, a characteristic transformation of homograft tissues to late stages of decellularization was found, which we characterized as the formation of a mesh-cellular structure. Moreover, a statistical analysis of digital data obtained by X-ray spectral studies of aortic tissue samples clearly demonstrated a significant decrease in calcium levels in combination with an increase in phosphorus levels. The loss of calcium by aortic homograft tissues is of a combined nature, both extracellular and intracellular.
Исследование показало, что спектры ЛИФ на этапах децеллюляризации достоверно различаются от спектров тканей до начала этапа децеллюляризации. Более того, исследование показало перспективность использования УФ-лазера с λ=248 нм для диагностики состояния биологических тканей, в частности для определения степени децеллюляризации клапанно-содержащих графтов аорт. Приведенные данные доказывают перспективность применения диагностической лазериндуцированной флюоресценции, возбуждаемой эксимерными лазерами, для идентификации состава биологических тканей, регистрации их состояния и наличия изменений.The study showed that the LIF spectra at the stages of decellularization significantly differ from the spectra of tissues to the beginning of the stage of decellularization. Moreover, the study showed the promise of using a UV laser with λ = 248 nm to diagnose the state of biological tissues, in particular to determine the degree of decellularization of valve-containing aortic grafts. The data presented prove the promise of using diagnostic laser-induced fluorescence excited by excimer lasers to identify the composition of biological tissues, register their status and the presence of changes.
ЛитератураLiterature
1. Bader A, Schilling Т, Haverich A, et al. Tissue engineering of heart valves-human endothelial cell seeding of detergent acellularized porcine valves. Eur J Cardiothorac Surg. 1998; 14: 279-284.1. Bader A, Schilling T, Haverich A, et al. Tissue engineering of heart valves-human endothelial cell seeding of detergent acellularized porcine valves. Eur J Cardiothorac Surg. 1998; 14: 279-284.
2. Cebotari S., Mertsching H., et al. Construction of Autologous Human Heart Valves Based on an Acellular Allograft Matrix // Circulation. 2002, 106: 1-63.2. Cebotari S., Mertsching H., et al. Construction of Autologous Human Heart Valves Based on an Acellular Allograft Matrix // Circulation. 2002, 106: 1-63.
3. Elkins RC, Dawson PE, Goldstein S, et al. Decellularized human valve allografts. Ann ThoracSurg. 2001; 71: S428-S432.3. Elkins RC, Dawson PE, Goldstein S, et al. Decellularized human valve allografts. Ann ThoracSurg. 2001; 71: S428-S432.
4. Hoerstrup S.P., Sodian R., Daebritz S., et al. Functional living trileaflet heart valves grown in vitro. Circulation 2000; 102 (Suppl 3): III44-III49.4. Hoerstrup S.P., Sodian R., Daebritz S., et al. Functional living trileaflet heart valves grown in vitro. Circulation 2000; 102 (Suppl 3): III44-III49.
5. Steinhoff G, Mertsching H, Haverich A, et al. Tissue engineering of pulmonary heart valves on allogenic acellular matrix conduits: in vivo restoration of valve tissue. Circulation. 2000; 102: III50-5.5. Steinhoff G, Mertsching H, Haverich A, et al. Tissue engineering of pulmonary heart valves on allogenic acellular matrix conduits: in vivo restoration of valve tissue. Circulation. 2000; 102: III50-5.
6. Ларионов П.М. Лазерно-индуцированная флюоресценция сердечных тканей при поражении кальцинозом. // Журнал Прикладной спектроскопии, 1997, т.64, №4, июль-август, стр.539-541.6. Larionov P.M. Laser-induced fluorescence of cardiac tissue with calcinosis. // Journal of Applied Spectroscopy, 1997, vol. 64, No. 4, July-August, pp. 539-541.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006128966/15A RU2343481C2 (en) | 2006-08-09 | 2006-08-09 | Way of laser diagnostics of biotechnology cellularisation/decellularisation stages of tissue structures |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006128966/15A RU2343481C2 (en) | 2006-08-09 | 2006-08-09 | Way of laser diagnostics of biotechnology cellularisation/decellularisation stages of tissue structures |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2006128966A RU2006128966A (en) | 2008-02-20 |
| RU2343481C2 true RU2343481C2 (en) | 2009-01-10 |
Family
ID=39266791
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006128966/15A RU2343481C2 (en) | 2006-08-09 | 2006-08-09 | Way of laser diagnostics of biotechnology cellularisation/decellularisation stages of tissue structures |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2343481C2 (en) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2013765C1 (en) * | 1990-08-14 | 1994-05-30 | Сидорин Василий Сергеевич | Method of microscopic structure elements examining in tissue for piecemeal density and piece volume determining |
| US5993844A (en) * | 1997-05-08 | 1999-11-30 | Organogenesis, Inc. | Chemical treatment, without detergents or enzymes, of tissue to form an acellular, collagenous matrix |
| RU2231997C2 (en) * | 2002-07-30 | 2004-07-10 | Научный центр сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева РАМН | Method for treating transplants' tissues for cardiovascular surgery |
-
2006
- 2006-08-09 RU RU2006128966/15A patent/RU2343481C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2013765C1 (en) * | 1990-08-14 | 1994-05-30 | Сидорин Василий Сергеевич | Method of microscopic structure elements examining in tissue for piecemeal density and piece volume determining |
| US5993844A (en) * | 1997-05-08 | 1999-11-30 | Organogenesis, Inc. | Chemical treatment, without detergents or enzymes, of tissue to form an acellular, collagenous matrix |
| RU2231997C2 (en) * | 2002-07-30 | 2004-07-10 | Научный центр сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева РАМН | Method for treating transplants' tissues for cardiovascular surgery |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| LARIONOV PM et al. Influence of mineral components on laser-induced fluorescence spectra of calcified human heart-valve tissues. Appl Ort. 2000. Aug 1; 39(22): 4031-6. PMID 18349985 найдено [он лайн] 15.04.2008 в PubMed. * |
| ЛАРИОНОВ П.М. и др. Лазерно-индуцированная флуоресценция сердечных тканей при поражении кальцинозом. Ж. прикладной спектроскопии. Июль-август 1997, т.64, №4, с.539-541. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2006128966A (en) | 2008-02-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| König et al. | Multiphoton autofluorescence imaging of intratissue elastic fibers | |
| Schenke-Layland et al. | Impact of decellularization of xenogeneic tissue on extracellular matrix integrity for tissue engineering of heart valves | |
| Schenke-Layland et al. | Two-photon microscopes and in vivo multiphoton tomographs—powerful diagnostic tools for tissue engineering and drug delivery | |
| Schenke-Layland et al. | Impact of cryopreservation on extracellular matrix structures of heart valve leaflets | |
| Choe et al. | Biomaterial characterization of off‐the‐shelf decellularized porcine pericardial tissue for use in prosthetic valvular applications | |
| Schenke‐Layland | Non‐invasive multiphoton imaging of extracellular matrix structures | |
| Hogg et al. | Development of a decellularised dermis | |
| WO2010096821A2 (en) | Method for ice-free cryopreservation of tissue | |
| Wang et al. | Second-harmonic generation microscopy for assessment of mesenchymal stem cell-seeded acellular dermal matrix in wound-healing | |
| JPWO2005063316A1 (en) | Implantable biomaterial and method for producing the same | |
| Rieder et al. | Granulocyte-based immune response against decellularized or glutaraldehyde cross-linked vascular tissue | |
| Shaik et al. | FLIm-guided Raman imaging to study cross-linking and calcification of bovine pericardium | |
| Elagin et al. | Multiparametric optical bioimaging reveals the fate of epoxy crosslinked biomeshes in the mouse subcutaneous implantation model | |
| Gao et al. | Characterization of decellularized scaffold derived from porcine meniscus for tissue engineering applications | |
| Hogg et al. | Development of a terminally sterilised decellularised dermis | |
| Jiang et al. | Decellularized-disc based allograft and xenograft prosthesis for the long-term precise reconstruction of temporomandibular joint disc | |
| Gerson et al. | Retained structural integrity of collagen and elastin within cryopreserved human heart valve tissue as detected by two-photon laser scanning confocal microscopy | |
| Musilkova et al. | Human decellularized and crosslinked pericardium coated with bioactive molecular assemblies | |
| Wu et al. | Reinforcing the function of bone graft via the Ca-P ceramics dynamic behavior-enhanced osteogenic microenvironment for optimal bone regeneration and reconstruction | |
| Seebacher et al. | Biomechanical properties of decellularized porcine pulmonary valve conduits | |
| RU2343481C2 (en) | Way of laser diagnostics of biotechnology cellularisation/decellularisation stages of tissue structures | |
| Fonseca et al. | The effects of aging on the intimal region of the human saphenous vein: insights from multimodal microscopy and quantitative image analysis | |
| RU2564895C1 (en) | Method for making biological tissue samples with implanted elements for light microscopy study | |
| JP2008228744A (en) | Treatment method for suppressing calcification of tissue for transplantation from living body and treated tissue | |
| Jiwangga et al. | Synergistic effects of SDS and H2O2 combinations on tracheal scaffold development: an in vitro study using goat trachea |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110810 |