RU2238318C1 - Method for stabilization and activation of hydrolytic enzymes - Google Patents
Method for stabilization and activation of hydrolytic enzymes Download PDFInfo
- Publication number
- RU2238318C1 RU2238318C1 RU2003118270/13A RU2003118270A RU2238318C1 RU 2238318 C1 RU2238318 C1 RU 2238318C1 RU 2003118270/13 A RU2003118270/13 A RU 2003118270/13A RU 2003118270 A RU2003118270 A RU 2003118270A RU 2238318 C1 RU2238318 C1 RU 2238318C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- enzyme
- stabilization
- methylresorcinol
- activation
- concentration
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 230000004913 activation Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title abstract description 29
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title abstract description 29
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 title description 7
- OIPPWFOQEKKFEE-UHFFFAOYSA-N orcinol Chemical compound CC1=CC(O)=CC(O)=C1 OIPPWFOQEKKFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 34
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000003028 elevating effect Effects 0.000 abstract 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 N-protected amino Chemical group 0.000 description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003625 amylolytic effect Effects 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- ULWHHBHJGPPBCO-UHFFFAOYSA-N propane-1,1-diol Chemical compound CCC(O)O ULWHHBHJGPPBCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению стабильных ферментов, а именно гидролитических.The invention relates to biotechnology, in particular to the production of stable enzymes, namely hydrolytic.
Известен способ стабилизации и активации гидролитических ферментов ионами кальция, а также органическим агентом, в качестве которого используют N-защищенную аминокислоту, в частности N-бензилоксикарбониламинокислоту молярной концентрации, превышающей более чем в 30 раз молярную концентрацию фермента (RU 2167937, C 12 N 9/96).A known method of stabilization and activation of hydrolytic enzymes with calcium ions, as well as an organic agent, which is used as an N-protected amino acid, in particular N-benzyloxycarbonylamino acid molar concentration exceeding more than 30 times the molar concentration of the enzyme (RU 2167937, C 12 N 9 / 96).
Недостатком известного способа является то, что для стабилизации фермента используют одновременно два стабилизатора - ионы кальция и вышеуказанную аминокислоту.The disadvantage of this method is that to stabilize the enzyme, two stabilizers are used simultaneously - calcium ions and the above amino acid.
Известен способ стабилизации и активации гидролитических ферментов, в частности амилолитических, предусматривающий введение в раствор, содержащий фермент, стабилизатора, в качестве которого используют водорастворимую кальциевую соль и органический агент - алифатический гликоль, имеющий формулу HO-CHCHO или пропандиол, а в некоторых случаях неионогенное моющее вещество (US 3819528, С 11 D, 1974).A known method of stabilization and activation of hydrolytic enzymes, in particular amylolytic, involving the introduction of a stabilizer into a solution containing an enzyme, using a water-soluble calcium salt and an organic agent, an aliphatic glycol having the formula HO-CHCHO or propanediol, and in some cases a nonionic detergent substance (US 3819528, C 11 D, 1974).
Недостатком известного способа является недостаточная эффективность стабилизации и активации фермента.The disadvantage of this method is the lack of stabilization and activation of the enzyme.
Наиболее близким техническим решением является способ стабилизации и активации ферментов, в частности РНКазы и химотрипсина с помощью С7-алкилоксибензола.The closest technical solution is a method of stabilization and activation of enzymes, in particular RNase and chymotrypsin using C 7 -alkyloxybenzene.
Способ осуществляют путем внесения в раствор фермента, предварительно растворенного в этаноле С7-алкилоксибензола в концентрации 0,03-0,1, и последующего инкубирования полученной смеси в течение 10-60 мин (“Микробиология”, 2000, том 69, №2, 224-230).The method is carried out by introducing into the solution an enzyme previously dissolved in ethanol With 7- alkyloxybenzene at a concentration of 0.03-0.1, and then incubating the resulting mixture for 10-60 minutes (Microbiology, 2000, Volume 69, No. 2, 224-230).
Задачей предложенного технического решения является повышение стабилизации и активации ферментов, а также расширение ассортимента стабилизаторов и активаторов ферментов.The objective of the proposed technical solution is to increase the stabilization and activation of enzymes, as well as expanding the range of stabilizers and activators of enzymes.
Поставленная задача решается за счет того, что разработан способ стабилизации и активации гидролитических ферментов 5-метилрезорцином, при этом 5-метилрезорцин используют в виде водного раствора с концентрацией 0,05-1,0 мг/мл, при использовании в качестве гидролитического фермента Амилосубтилина раствор 5-метилрезорцина используют в концентрации 0,5-1,0 мг/мл, а при использовании в качестве гидролитического фермента Ксиланазы раствор 5-метилрезорцина используют в концентрации 0,05-0,2 мг/мл.The problem is solved due to the fact that a method has been developed for stabilization and activation of hydrolytic enzymes with 5-methylresorcinol, while 5-methylresorcinol is used in the form of an aqueous solution with a concentration of 0.05-1.0 mg / ml, using the solution of amylosubtiline as a hydrolytic enzyme 5-methylresorcinol is used at a concentration of 0.5-1.0 mg / ml, and when used as a Xylanase hydrolytic enzyme, a solution of 5-methylresorcinol is used at a concentration of 0.05-0.2 mg / ml.
Пример 1Example 1
Исследование влияния 5-метилрезорцина на активность Ксиланазы ГЗх с активностью 8000 ед./г. Для этого готовят серию растворов 5-метилрезорцина с концентрацией 0,05-1,0 мг/мл. Готовят раствор фермента Ксиланазы ГЗх с концентрацией 0,2 мг/мл. В раствор фермента вносят раствор 5-метилрезорцина в соотношении, указанном в таблице 1. Смесь выдерживают при температуре 50°С в течение 10 минут, после чего определяют активность Ксиланазы ГЗх по ТУ 9291-035-34588571-2001.A study of the effect of 5-methylresorcinol on the activity of Xylanase Gxx with an activity of 8000 units / g. To do this, prepare a series of solutions of 5-methylresorcinol with a concentration of 0.05-1.0 mg / ml. Prepare a solution of the enzyme Xylanase GZx with a concentration of 0.2 mg / ml. A solution of 5-methylresorcinol is added to the enzyme solution in the ratio shown in Table 1. The mixture is kept at a temperature of 50 ° C for 10 minutes, after which the activity of Xylanase Gxx is determined according to TU 9291-035-34588571-2001.
Полученные данные представлены в таблице 1.The data obtained are presented in table 1.
Проведены исследования по влиянию 5-метилрезорцина на термо- и рН стабильность Ксиланазы ГЗх.Studies have been conducted on the effect of 5-methylresorcinol on the thermal and pH stability of Xylanase GXx.
Полученные результаты представлены в таблицах 2 и 3.The results are presented in tables 2 and 3.
Из полученных данных видно, что внесение в раствор фермента 5-метилрезорцина способствует повышению активности фермента на 38-51% при оптимальном значении температуры действия фермента, а при рН 6,0 активность фермента увеличилась на 72% по сравнению с контролем.From the obtained data it is seen that the addition of 5-methylresorcinol to the enzyme solution contributes to an increase in the enzyme activity by 38-51% at the optimum value of the enzyme action temperature, and at pH 6.0 the enzyme activity increased by 72% compared to the control.
Пример 2Example 2
Готовят раствор фермента Амилосубтилина ГЗх (производства ОАО “Восток”) и серию растворов 5-метилрезорцина в концентрации, указанной в таблице 4.Prepare a solution of the enzyme Amilosubtilin GZh (manufactured by Vostok OJSC) and a series of solutions of 5-methylresorcinol in the concentration indicated in table 4.
Проведены исследования по влиянию 5-метилрезорцина на термо- и рН стабильность фермента амилосубтилина ГЗх, а также на сохранение его активности в процессе хранения.Studies were conducted on the effect of 5-methylresorcinol on the thermal and pH stability of the amylosubtilin GZx enzyme, as well as on the maintenance of its activity during storage.
Полученные результаты представлены в таблицах 5, 6, 7.The results are presented in tables 5, 6, 7.
Из результатов, приведенных в таблицах 5 и 6, видно, что при обработке Амилосубтилина ГЗх 5-метилрезорцином происходит стабилизация фермента и увеличение его ферментативной активности. Так, активность фермента при 40°С возрастает на 70%, а при рН 6,0 на 82,5%.From the results shown in tables 5 and 6, it is seen that during the treatment of Amylosubtilin GZx with 5-methylresorcinol, the enzyme stabilizes and increases its enzymatic activity. So, the activity of the enzyme at 40 ° C increases by 70%, and at pH 6.0 by 82.5%.
Активность Амилосубтилина ГЗх без обработки стабилизатором составила через сутки 77%, на вторые и третьи сутки снизилась до 45%, в то время, как активность фермента, обработанного стабилизатором, увеличилась на 40%.The activity of Amylosubtilin GXx without treatment with a stabilizer was 77% after 24 hours, on the second and third days it decreased to 45%, while the activity of the enzyme treated with a stabilizer increased by 40%.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003118270/13A RU2238318C1 (en) | 2003-06-20 | 2003-06-20 | Method for stabilization and activation of hydrolytic enzymes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003118270/13A RU2238318C1 (en) | 2003-06-20 | 2003-06-20 | Method for stabilization and activation of hydrolytic enzymes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2238318C1 true RU2238318C1 (en) | 2004-10-20 |
| RU2003118270A RU2003118270A (en) | 2004-12-10 |
Family
ID=33538105
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003118270/13A RU2238318C1 (en) | 2003-06-20 | 2003-06-20 | Method for stabilization and activation of hydrolytic enzymes |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2238318C1 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2441068C2 (en) * | 2010-03-11 | 2012-01-27 | Галина Ивановна Эль-Регистан | Method for targeted enzymatic protein alteration |
| RU2441069C2 (en) * | 2010-03-11 | 2012-01-27 | Галина Ивановна Эль-Регистан | Enzymatic protein stabiliser |
| RU2447448C1 (en) * | 2010-08-30 | 2012-04-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Оренбургский государственный университет" | Method for stabilising antibodies in aqueous solutions |
| RU2447887C2 (en) * | 2007-08-03 | 2012-04-20 | Куньмин Инститьют Оф Ботани, Чайниз Экэдеми Оф Сайнсиз | Use of 5-methyl-1,3-benzdiol or its derivatives in preparing drug and functional food stuff for treating and preventing depression |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4169817A (en) * | 1971-12-23 | 1979-10-02 | Midwest Biochemical Corporation | Liquid cleaning composition containing stabilized enzymes |
| RU2167937C2 (en) * | 1993-08-27 | 2001-05-27 | ХОЛЛАНД СВИТЕНЕР КОМПАНИ В.о.Ф. | Method of stabilizing aqueous solution or suspension of metalloprotease, and stabilized aqueous solution or suspension of metalloprotease |
| EP1136550A1 (en) * | 1998-04-24 | 2001-09-26 | International Reagents Corporation | Method for stabilizing enzymes and enzyme compositions |
-
2003
- 2003-06-20 RU RU2003118270/13A patent/RU2238318C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4169817A (en) * | 1971-12-23 | 1979-10-02 | Midwest Biochemical Corporation | Liquid cleaning composition containing stabilized enzymes |
| RU2167937C2 (en) * | 1993-08-27 | 2001-05-27 | ХОЛЛАНД СВИТЕНЕР КОМПАНИ В.о.Ф. | Method of stabilizing aqueous solution or suspension of metalloprotease, and stabilized aqueous solution or suspension of metalloprotease |
| EP1136550A1 (en) * | 1998-04-24 | 2001-09-26 | International Reagents Corporation | Method for stabilizing enzymes and enzyme compositions |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| КОЛПАКОВ А.И. и др. Стабилизация ферментов аутоиндукторами анабиоза как один из механизмов устойчивости покоящихся форм микроорганизмов. Микробиология, 2000, №2, с.224-230. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2447887C2 (en) * | 2007-08-03 | 2012-04-20 | Куньмин Инститьют Оф Ботани, Чайниз Экэдеми Оф Сайнсиз | Use of 5-methyl-1,3-benzdiol or its derivatives in preparing drug and functional food stuff for treating and preventing depression |
| RU2441068C2 (en) * | 2010-03-11 | 2012-01-27 | Галина Ивановна Эль-Регистан | Method for targeted enzymatic protein alteration |
| RU2441069C2 (en) * | 2010-03-11 | 2012-01-27 | Галина Ивановна Эль-Регистан | Enzymatic protein stabiliser |
| RU2447448C1 (en) * | 2010-08-30 | 2012-04-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Оренбургский государственный университет" | Method for stabilising antibodies in aqueous solutions |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101577079B1 (en) | Yeast autolysates | |
| CN109122667A (en) | Preservative solution and preparation method and application thereof | |
| DE69028529D1 (en) | METHOD FOR KILLING CELLS WITHOUT CELLYSIS | |
| RU2008139609A (en) | BREWING METHOD | |
| RU2238318C1 (en) | Method for stabilization and activation of hydrolytic enzymes | |
| ATE242818T1 (en) | METHOD FOR FIGHTING MICROORGANISMS IN A SUGAR-CONTAINING, AQUEOUS PROCESS MEDIUM | |
| KR20230107289A (en) | Deuterium-stabilized ribonucleic acid (RNA) molecules exhibiting increased resistance to thermal and enzymatic hydrolysis, aqueous compositions comprising stabilized RNA molecules and methods for their preparation | |
| ES2217006T3 (en) | PROCEDURE TO PREPARE STABILIZED WINES. | |
| JP2018068292A (en) | Method for transforming filamentous fungi | |
| DE102014200497A1 (en) | Enzymatic method | |
| JP4414837B2 (en) | Method for producing self-digesting yeast extract | |
| Dahiya et al. | Strawberry fruit oxalate oxidase—Detection, purification, characterization and physiological role | |
| JP7274913B2 (en) | Liquid medium for culturing microorganisms and method for culturing microorganisms using liquid medium | |
| JPH04505851A (en) | Enzyme concentrate | |
| Habaguchi | A possible function of cyclic AMP in the induction of polyphenol oxidase preceding root formation in cultured carrot-root callus | |
| RU2003118270A (en) | METHOD FOR STABILIZING AND ACTIVATING HYDROLYTIC ENZYMES | |
| ES2432377T3 (en) | Method for removing bisulfite-type by-products from enzymatic compositions | |
| JP4954771B2 (en) | Method for producing low protein rice using white rice as treated rice | |
| JPH10179084A (en) | Production method of yeast extract | |
| RU2003137569A (en) | METHOD FOR PRODUCING L-AMINO ACIDS | |
| JP7171575B2 (en) | thermolysin solution | |
| DE60224197D1 (en) | PROCESS FOR THE FERMENTATIVE MANUFACTURE OF L-AMINO ACIDS BY CYLINDERS BACTERIA | |
| SU1606528A1 (en) | Method of producing autolysate of saccharomyces yeast | |
| WO2025099168A1 (en) | Storable multi-component compositions comprising a stable biocide component | |
| RU2173707C1 (en) | Method of production of baking yeast enriched with iodine |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20050621 |