RU2235324C1 - Способ определения казеинолитической активности микроорганизмов при экспресс-диагностике дисбактериоза кишечника - Google Patents
Способ определения казеинолитической активности микроорганизмов при экспресс-диагностике дисбактериоза кишечника Download PDFInfo
- Publication number
- RU2235324C1 RU2235324C1 RU2003105528/15A RU2003105528A RU2235324C1 RU 2235324 C1 RU2235324 C1 RU 2235324C1 RU 2003105528/15 A RU2003105528/15 A RU 2003105528/15A RU 2003105528 A RU2003105528 A RU 2003105528A RU 2235324 C1 RU2235324 C1 RU 2235324C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- agar
- zones
- proteolysis
- casein
- added
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 18
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 title claims description 13
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 title claims description 12
- 230000000963 caseinolytic effect Effects 0.000 title claims description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims description 5
- 208000036649 Dysbacteriosis Diseases 0.000 title claims description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 title abstract 4
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 title description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims abstract description 23
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 18
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 13
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 9
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 7
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 claims 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 abstract description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 abstract 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 20
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 20
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000005337 ground glass Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, биохимии. Способ определения проводят в супернатантах фекалий, свободных от бактерий, при помощи хлороформа, при котором 20 мкл супернатанта вносится в лунку со специальной питательной средой, в которую вносится казеин. 1,5%-ный раствор казеина на 0,2 Н NaOH вносят к расплавленному питательному агару в соотношении 1:10, автоклавируют при 121°С 15 мин, доводят рН до 7,2-7,4 и разливают в стерильные чашки Петри. После охлаждения чашек в агаре делают лунки диаметром 6 мм. После культивирования в термостате при 37°С 6-8 ч зоны протеолиза проявляют внесением на агар 5 мл 5%-ного водного раствора соляной кислоты. Диаметры зон протеолиза измеряют в миллиметрах (мм). В результате измерения зон протеолиза активность считали низкой при диаметре зон до 10 мм, средней - при 11-16 мм, высокой - при диаметре зон протеолиза выше 16 мм. Изобретение обеспечивает быстроту и легкость осуществления.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, микробиологии и биохимии. В последнее время при самых разнообразных внешних воздействиях (загрязнение окружающей среды, повышенный радиационный фон, магнитные возмущения и др.), экстремальных условиях, стрессовых ситуациях, гиподинамии, нарушениях биоритмов, в случаях снижения иммунологического статуса, развития в желудочно-кишечном тракте патологических состояний и воспалительных процессов как инфекционной, так и неинфекционной этиологии происходят экологические сдвиги в микробном пейзаже кишечника (Соколова К.Я., Соловьева И.В. Дисбактериозы. Теория и практика. Н.Новгород, 1999; Ефимов Б.А., Володин Н.Н., Кафарская Л.И. и др. Характеристика микроорганизмов, колонизирующих кишечник человека. Журн. микробиол. 2002, 5:98-104).
Развитие дисбактериозов кишечника различной этиологии отягощает течение основного заболевания, ухудшает его прогноз. В ряде случаев дисбактериозы становятся в последующем определяющим фактором в формировании патологического состояния организма, приводят к выраженным функциональным нарушениям в пищеварительном тракте и могут быть причиной развития инфекционного заболевания. По данным многих авторов, дисбактериоз кишечника наблюдается среди 70-90% больных желудочно-кишечными, сердечно-сосудистыми, неврологическими, аллергическими и др. заболеваниями (Воробьев А.А., Абрамов Н.А., Бондаренко В.М., Шендеров Б.А. Дисбактериозы - актуальная проблема медицины. Вестн. РАМН, 1997, 3:4-7. Salminen S., Isolauri E., Onnela Т. Gut flora in normal and disordered states. Chemotherapy. 1995, 41 (suppl.l):5-15).
В медицинской практике для диагностики дисбактериозов кишечника используется, как правило, классический бактериологический анализ, требующий наличия большого количества дорогостоящих питательных сред и длительный во времени (не менее 5 дней). Следует отметить, что только в кишечнике человека обитают около 500 видов микроорганизмов нормальной микрофлоры. При этом соотношение анаэробов к аэробам 1000:1, и учесть все столь отдаленные в таксономическом отношении микроорганизмы при классическом бактериологическом анализе практически невозможно.
Для скрининговых исследований на дисбактериоз требуется разработка достаточно быстрых биохимических методов, легко осуществляемых на практике.
Аналогом, по мнению авторов, является метод определения казеинолитической (протеолитической) активности микробов на казеиново-агаровых пластинках, предложенный В.М. Никитиным (Справочник методов биохимической экспресс-индикации микробов. Кишинев, 1986, с.117-119).
Принцип. При взаимодействии протеиназ бактериальных культур с казеином, содержащимся в агаровой среде, происходит его расщепление. При добавлении коагулянта белка на мутном фоне агара выявляются зоны просветления вокруг роста казеинолитически активных микроорганизмов.
Реагенты и материалы. Исследуемые суточные культуры микробов на МПБ или МПА; раствор 1% казеина на 1/15 М фосфатном буфере рН 7,2; 2% агар на физрастворе, рН 7,2, в пробирке или колбочку; проявители для белка (казеина): а) 10% раствор трихлоруксусной кислоты во флаконе с притертой пробкой или б) ледяная уксусная кислота 1 г, метиловый спирт 4,5 мл, дист. вода 4,5 мл; красители для белка (казеина) - амидочерный 10 В или кумаси ярко-синий R-250 во флаконах из темного стекла с притертой стеклянной пробкой; пробирки, пипетки, чашки Петри, предметные стекла, пробойники для создания лунок (колодцев) в агаре и др. лабораторное оборудование.
Приготовление раствора-красителя, используемого для окраски белковых преципитатов казеина: амидочерный 10 В (или кумаси ярко-синий R-250) 50,0 г + этиловый спирт 96° 4,5 л + ледяная уксусная кислота 1,0 л + дист. вода 4,5 л. Краску растворяют, и раствор оставляют на ночь при комнатной температуре, затем фильтруют и используют. Применение красителя повышает чувствительность метода.
Методика внесения казеина в агар. В 10 мл расплавленного и охлажденного до 60-65°С 2% агара в пробирке приливают 1 мл 1% раствора казеина, перемешивают и содержимое быстро выливают в стерильную чашку Петри или на поверхность двух предметных стекол. После застывания агара в нем проделывают лунки диаметром 5-7 мм. В каждую лунку вносят густую взвесь испытуемых микробов, заполняя ее до краев. Чашки (предметные стекла) с посевами помещают в термостат при 37°С. Через 6-12 ч на поверхность агара с пробами наносят проявитель “а” или “б” в объеме 4-5 мл (пробы на предметном стекле опускают в чашку с проявителем), выдерживают 7-10 мин и удаляют.
Регистрация результатов осуществляется визуально. На мутном фоне казеинового агара при положительном результате отмечаются зоны просветления с казеинолитическими микробными культурами. При отрицательной реакции агаровая среда вокруг лунки остается равномерно мутной. Применение красителей способствует повышению чувствительности методики, поскольку мутные преципитаты казеина становятся более контрастными, приобретая черно-синий цвет, а зоны лизиса, наоборот, бывают неокрашенными и светлыми и лучше выявляются, особенно слабые степени бактериального казеинолизиса.
Некоторыми недостатками предлагаемого способа являются:
- плохая растворимость казеина в фосфатном буфере,
- неравномерное его введение в питательную среду.
В качестве прототипа авторы предлагают биохимический экспресс-метод, разработанный в лаборатории генетики вирулентности бактерий НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи (Лучшев Л.И., Бондаренко В.М., Исаева Н.П., Земскова Л.И., Шахмарданов М.З., Грицевская Н.Ю. Косвенный метод экспресс-диагностики дисбактериозов кишечника у больных сальмонеллезом и дизентерией. Эпидемиология и инфекционные болезни. 1996, 1:52-54), основанный на определении протеолитической (казеинолитической) активности содержимого толстой кишки, что позволяет в общей сложности оценить состояние микробного биоценоза и дать ориентировочный ответ через 18 ч от начала исследования.
Тестирование казеинолитической активности проводили на чашках Петри с казеиновым агаром после 18-часовой инкубации в термостате. Зоны протеолиза проявляли добавлением 5% трихлоруксусной кислоты.
Активность считали низкой при диаметре зон до 10 мм, средней - при 11-15 мм и высокой - при диаметре зон протеолиза выше 16 мм.
Недостатками прототипа является отсутствие данных о заборе материала для исследований, о способе внесения в питательную среду казеина, о приготовлении питательной среды для определения казеинолитической активности.
Авторами предлагается способ определения казеинолитической (протеолитической) активности микроорганизмов при экспресс-диагностике дисбактериозов в супернатантах фекалий.
Для анализа порции фекалий собирали в стерильную посуду либо сбор материала осуществляли стерильным зондом с декроновым или ватным тампоном, который вводили в прямую кишку как можно выше, и вращательными движениями, избегая соприкосновения со стенками кишечника, собирали материал, который переносили в пробирку с физиологическим раствором. До отправки в лабораторию образцы можно хранить в течение нескольких дней при +5-8°С.
Исследование протеолитической (казеинолитической) активности супернатантов фекалий осуществляли в порции фекалий 1-2 г, которую разводили физиологическим раствором 1:10. После 20 мин отстаивания жидкость над осадком отсасывали и переносили в пробирки, приливали к пробе не более 0,05 мл (1 каплю) хлороформа (для лизиса бактерий и обеззараживания), отстаивали в течение 30-40 мин и вносили в лунки (не более 9 на чашке) со специально приготовленной питательной средой по 20 мкл. В одну из лунок для контроля вносили казеинолитически активную пробу с известной степенью протеолиза.
Способ приготовления питательной среды с казеином состоит из следующих этапов. Вначале готовили 100 мл 3,5% стандартного питательного агара, содержащего дрожжевой или рыбный экстракт и другие ингредиенты (производство г.Махачкала и др.), предназначенного для 5 чашек Петри, и доводили до кипения. Затем готовили 1,5% раствор казеина на 0,2 Н NaOH (0,15 г казеина на 10 мл щелочи). При этом добивались полного растворения казеина в щелочном растворе. После этого питательный агар и раствор казеина смешивали 10:1, автоклавировали при 121°С 15 мин, доводили рН до 7,2-7,4 и разливали в стерильные чашки Петри. После охлаждения чашек на ровной поверхности в агаре делали лунки диаметром 6 мм специальным пробойником или штампом. Таким образом, питательная среда с казеином была готова для внесения в лунки супернатантов фекалий для определения в них казеинолитической (протеинолитической) активности.
После культивирования в термостате при 37°С 6-8 ч зоны протеолиза проявляли внесением на агар 5 мл 5% водного раствора соляной кислоты. При этом не требуется дополнительно подкрашивать агар для проявления зон протеолиза, что сокращает количество этапов и делает способ более экономичным.
Способ позволяет оценить состояние микробного биоценоза, обладает быстротой и легкостью осуществления, что позволяет использовать его в скрининговых исследованиях.
Предложенный способ позволяет полностью растворять казеин и вносить его без остатка в питательную среду. При этом можно увеличить концентрацию казеина в растворе, что повышает чувствительность определения. Время культивирования в термостате сокращается до 6-8 ч. При проявлении реакции не требуется дополнительного подкрашивания среды, т.е. исключается дополнительный этап реакции, что делает способ более экономичным во времени и в плане материальных затрат.
Диаметры зон протеолиза измеряли в миллиметрах (мм). В результате измерения зон протеолиза на нашей среде активность считали низкой при диаметре зон до 10 мм, средней - при 11-16 мм, высокой - при диаметре зон протеолиза выше 16 мм.
При параллельном исследовании фекалий на дисбактериоз с помощью классического бактериологического анализа и с использованием экспресс-метода, проведенным на большом количестве пациентов (543 чел.), была установлена корреляция между снижением популяционного уровня анаэробной облигатной и факультативной нормальной микрофлоры, повышением численности аэробной условно патогенной грамнегативной микрофлоры и размерами зон протеолиза супернатантов фекалий. Это связано с возрастанием количества бактерий, продуцирующих различные протеазы.
Совпадение результатов при использовании классического и экспресс-методов составило 89,8%. Прослеживалась прямая корреляция между диаметрами зон протеолиза и степенью выраженности дисбактериоза, что может применяться с диагностической целью и служить критерием эффективности проводимой терапии.
Claims (1)
- Способ определения казеинолитической активности микроорганизмов при экспресс-диагностике дисбактериозов кишечника, включающий определение протеолитической активности супернатантов фекалий по зонам лизиса на питательной среде, отличающийся тем, что помещенную в пробирку порцию фекалий массой 1-2 г разводят физиологическим раствором 1:10, после 20 мин отстаивания отсасывают жидкость и переносят ее в пробирки, приливают к пробе не более 0,05-0,1 мл хлороформа, после отстаивания в течение 30-40 мин вносят в лунки с питательной средой по 20 мкл супернатанта, а в одну из лунок - контрольную казеинолитически активную пробу, после чего культивируют в термостате 6-8 ч и зоны лизиса проявляют внесением на агар 5 мл 5%-ного водного раствора соляной кислоты и измеряют диаметры зон просветления, причем среду готовят из 100 мл стандартного питательного агара, доведенного до кипения, приготавливают 1,5%-ный раствор казеина на 0,2 Н NaOH и доводят до полного растворения его в щелочном растворе, после чего питательный агар и раствор казеина смешивают 10:1, автоклавируют при 121°С 15 мин, доводят рН до 7,2-7,4 и разливают в стерильные чашки Петри, а после охлаждения делают лунки диаметром 6 мм в количестве не более 9.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003105528/15A RU2235324C1 (ru) | 2003-02-25 | 2003-02-25 | Способ определения казеинолитической активности микроорганизмов при экспресс-диагностике дисбактериоза кишечника |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003105528/15A RU2235324C1 (ru) | 2003-02-25 | 2003-02-25 | Способ определения казеинолитической активности микроорганизмов при экспресс-диагностике дисбактериоза кишечника |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2003105528A RU2003105528A (ru) | 2004-08-27 |
| RU2235324C1 true RU2235324C1 (ru) | 2004-08-27 |
Family
ID=33414038
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003105528/15A RU2235324C1 (ru) | 2003-02-25 | 2003-02-25 | Способ определения казеинолитической активности микроорганизмов при экспресс-диагностике дисбактериоза кишечника |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2235324C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2487943C1 (ru) * | 2012-05-25 | 2013-07-20 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ оценки биологической активности лактобацилл и бифидобактерий относительно холерных вибрионов in vitro |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2139044C1 (ru) * | 1997-12-16 | 1999-10-10 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Средство для лечения гнойно-некротических ран и ожогов "коллагель" |
| RU2160312C2 (ru) * | 1993-06-18 | 2000-12-10 | Астра Актиеболаг | Выделенная нуклеиновая кислота, плазмида, реплицируемый вектор экспрессии, трансформированная линия клеток мыши 127, полипептид, способ получения предшественника полипептида, обладающего активностью scce, фармацевтическая композиция для лечения нарушений, связанных с кератинизацией |
| RU2166950C1 (ru) * | 2000-06-30 | 2001-05-20 | Демина Нина Сергеевна | Фармацевтическая композиция на основе коллагеназы микробного происхождения |
-
2003
- 2003-02-25 RU RU2003105528/15A patent/RU2235324C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2160312C2 (ru) * | 1993-06-18 | 2000-12-10 | Астра Актиеболаг | Выделенная нуклеиновая кислота, плазмида, реплицируемый вектор экспрессии, трансформированная линия клеток мыши 127, полипептид, способ получения предшественника полипептида, обладающего активностью scce, фармацевтическая композиция для лечения нарушений, связанных с кератинизацией |
| RU2139044C1 (ru) * | 1997-12-16 | 1999-10-10 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Средство для лечения гнойно-некротических ран и ожогов "коллагель" |
| RU2166950C1 (ru) * | 2000-06-30 | 2001-05-20 | Демина Нина Сергеевна | Фармацевтическая композиция на основе коллагеназы микробного происхождения |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| НИКИТИН В.М. Справочник методов биохимической экспресс-индикации микробов. - Кишинев, 1986, с.117-119. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2487943C1 (ru) * | 2012-05-25 | 2013-07-20 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ оценки биологической активности лактобацилл и бифидобактерий относительно холерных вибрионов in vitro |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Markey et al. | Clinical veterinary microbiology e-book: clinical veterinary microbiology e-book | |
| CN110343780A (zh) | 加德纳杆菌、白色念珠菌和阴道毛滴虫多重检测的引物、探针组、试剂盒及检测方法 | |
| CN111286474B (zh) | 副干酪乳杆菌及其应用 | |
| CN101402989A (zh) | 注射器型微生物培养装置 | |
| Al-Mushrif et al. | A study of the prevalence of hydrogen peroxide generating Lactobacilli in bacterial vaginosis:... | |
| CN103266163B (zh) | 一种检测鉴别念珠菌和滴虫的联检试剂盒 | |
| CN101177668B (zh) | 淋球菌培养基及其制备方法 | |
| CN105713859A (zh) | 短双歧杆菌及牛奶中多种抗生素残留的检测方法及应用 | |
| RU2619834C2 (ru) | Способ исследования кала на дисбактериоз кишечника | |
| RU2235324C1 (ru) | Способ определения казеинолитической активности микроорганизмов при экспресс-диагностике дисбактериоза кишечника | |
| CN108285917A (zh) | 同时检测大肠菌群和沙门氏菌的显色培养基及检测片 | |
| US5091307A (en) | Procedure for the counting, detection and identification of mycoplasms in general and urinogenital mycoplasms in particular and a biological medium specially adapted to this effect | |
| RU2088938C1 (ru) | Способ выявления кишечного дисбиоза и кишечной инфекции | |
| CN109370986A (zh) | 一种犬脂肪干细胞的提取方法及其制剂和应用 | |
| CN105803044A (zh) | 淀粉降解微生物检测试剂盒及检测淀粉降解微生物的方法 | |
| CN109385381A (zh) | 一种泌尿生殖道支原体双相培养基 | |
| RU2137837C1 (ru) | Способ определения количества жизнеспособных клеток молочнокислых микробов в испражнениях людей | |
| RU2768493C1 (ru) | Способ диагностики степени пародонтита по определению протеинолитической активности микроорганизмов ротовой жидкости | |
| WO2018176066A2 (en) | Cord blood therapy to treat chronic disease caused by l-form bacteria | |
| RU2027996C1 (ru) | Способ определения степени тяжести дисбактериоза кишечника у детей | |
| CN119685443B (zh) | 一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌的定量检测方法及其应用 | |
| WO2016079733A1 (en) | Method for early diagnosis of cancer | |
| RU2553548C1 (ru) | Набор для лабораторной диагностики инфекций, вызываемых mycoplasma hominis и ureaplasma urealyticum | |
| CN109576337A (zh) | 用于检测生殖支原体的试剂盒 | |
| Rashed et al. | Diagnostic study of fungal and bacterial pathogens that cause vaginal infection in women |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070226 |