[go: up one dir, main page]

RU2228952C2 - Strain of bacterium pseudomonas stutzeri mev-s1 used for treatment of soil, ground and surface water from petroleum and products of its processing - Google Patents

Strain of bacterium pseudomonas stutzeri mev-s1 used for treatment of soil, ground and surface water from petroleum and products of its processing Download PDF

Info

Publication number
RU2228952C2
RU2228952C2 RU2002122612/13A RU2002122612A RU2228952C2 RU 2228952 C2 RU2228952 C2 RU 2228952C2 RU 2002122612/13 A RU2002122612/13 A RU 2002122612/13A RU 2002122612 A RU2002122612 A RU 2002122612A RU 2228952 C2 RU2228952 C2 RU 2228952C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
strain
soil
mev
oil
petroleum
Prior art date
Application number
RU2002122612/13A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2002122612A (en
Inventor
А.И. Марченко (RU)
А.И. Марченко
А.В. Воробьев (RU)
А.В. Воробьев
Р.В. Боровик (RU)
Р.В. Боровик
В.Н. Алдобаев (RU)
В.Н. Алдобаев
Г.А. Жариков (RU)
Г.А. Жариков
В.В. Капранов (RU)
В.В. Капранов
Original Assignee
Научно-исследовательский центр токсикологии и гигиенической регламентации биопрепаратов
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Научно-исследовательский центр токсикологии и гигиенической регламентации биопрепаратов filed Critical Научно-исследовательский центр токсикологии и гигиенической регламентации биопрепаратов
Priority to RU2002122612/13A priority Critical patent/RU2228952C2/en
Publication of RU2002122612A publication Critical patent/RU2002122612A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2228952C2 publication Critical patent/RU2228952C2/en

Links

Landscapes

  • Processing Of Solid Wastes (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)

Abstract

FIELD: industrial microbiology, ecology. SUBSTANCE: strain of bacterium Pseudomonas stutzeri MEV-S1 is isolated from usual chernozem and deposited in All-Russian collection of industrial microorganisms, Moscow, at number B-8277. The strain utilizes petroleum, mazut, diesel fuel, polycyclic aromatic hydrocarbons comprising from 2 to 4 benzene rings: naphthalene, phenanthrene, pyrene, fluorene; phenol. The strain is resistant to heavy metal ions: Pb, Zn, Mo, Fe, Hg. The culture Pseudomonas stutzeri MEV-S1 produces biological surface-active substances (biosurfactants). The strain can be used for preparing preparation for treatment of soil, ground and surface waters in penetration of petroleum and products of its processing to environment and in combined pollution with petroleum hydrocarbons and metals. EFFECT: valuable properties of microorganism. 10 tbl, 11 ex

Description

Изобретение относится к области микробиологии и представляет собой новый бактериальный штамм, который может быть использован для очистки почвы, грунтовых и поверхностных вод при попадании в окружающую среду нефти и продуктов ее переработки.The invention relates to the field of microbiology and is a new bacterial strain that can be used to clean soil, groundwater and surface water when oil and products of its processing enter the environment.

Загрязнение окружающей среды нефтью, продуктами ее переработки представляет серьезную угрозу здоровью населения и природе. Тяжелые фракции нефти, токсичные и наиболее трудно разлагаемые, содержат полициклические ароматические углеводороды (ПАУ). ПАУ относятся к категории приоритетных загрязнителей окружающей среды.Environmental pollution with oil and its products poses a serious threat to public health and nature. The heavy fractions of oil, toxic and most difficult to decompose, contain polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs). PAHs are classified as priority environmental pollutants.

Известны штаммы микроорганизмов: Pseudomonas alcaligenes E7 [1], Trichoderma lignorum Л-1 ГКМ ВИЗР N 103 [2], Pseudomonas alcaligenes B-1 [3], Mycobacterium flavescens EX-91 [4], Rhodococcus species 56Д [5], Pseudomonas putida 9 [6], Rhodococcus species MFN [7], которые могут разлагать углеводороды нефти, в том числе и ПАУ в почве и воде. Недостатком вышеперечисленных штаммов является то, что они осуществляют деструкцию полициклических ароматических углеводородов, содержащих только 2 и 3 бензольных кольца.Microorganism strains are known: Pseudomonas alcaligenes E7 [1], Trichoderma lignorum L-1 GKM VIZR N 103 [2], Pseudomonas alcaligenes B-1 [3], Mycobacterium flavescens EX-91 [4], Rhodococcus species 56D [5], Pseudomonas putida 9 [6], Rhodococcus species MFN [7], which can decompose oil hydrocarbons, including PAHs in soil and water. The disadvantage of the above strains is that they carry out the destruction of polycyclic aromatic hydrocarbons containing only 2 and 3 benzene rings.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является штамм бактерий Pseudomonas alcaligenes E7 [1], обладающий высокими характеристиками по биодеградации нефти и нефтепродуктов. Однако недостатком этого штамма является то, что из полициклических ароматических углеводородов он утилизирует только нафталин при температуре 20-30°С.Closest to the proposed invention is a bacterial strain Pseudomonas alcaligenes E7 [1], which has high characteristics for biodegradation of oil and oil products. However, the disadvantage of this strain is that it utilizes only naphthalene from polycyclic aromatic hydrocarbons at a temperature of 20-30 ° C.

Цель изобретения состоит в получении нового штамма микроорганизмов, быстро и эффективно утилизирующего in situ в почвах, грунтовых и поверхностных водах нефть и продукты ее переработки при комбинированном загрязнении солями тяжелых металлов, а также продуцирующего внеклеточные биологические поверхностно-активные вещества (биосурфактанты), которые ускоряют биодеградацию малорастворимых гидрофобных ПАУ.The purpose of the invention is to obtain a new strain of microorganisms that quickly and effectively utilizes in situ in soils, ground and surface waters oil and products of its processing during combined pollution with salts of heavy metals, as well as producing extracellular biological surfactants (biosurfactants) that accelerate biodegradation sparingly soluble hydrophobic PAHs.

Предлагаемый штамм Pseudomonas stutzeri MEV-S1 выделен из ризосферы пшеницы и селекционирован путем пересевов отдельных колоний бактерий на чашках с минимальным агаром А [8], который содержит (г/дм3): Nа3НРO4 × Н2O - 6,0; КН2РO4 - 3,0; NaCl - 0,5; NH4Cl - 1,0; Mg2SO4 × 7H2O - 0,3; СаCl2 × 2H2O - 0,01; Агар-агар - 15,0. Вода дистиллированная - до 1 дм3; рН - 7,2 в присутствии фенантрена в количестве 300 мг на 1 дм3 питательной среды.The proposed strain of Pseudomonas stutzeri MEV-S1 was isolated from the rhizosphere of wheat and selected by reseeding individual bacterial colonies on plates with minimal agar A [8], which contains (g / dm 3 ): Na 3 НРО 4 × Н 2 O - 6.0; KH 2 PO 4 - 3.0; NaCl - 0.5; NH 4 Cl - 1.0; Mg 2 SO 4 × 7H 2 O - 0.3; CaCl 2 × 2H 2 O - 0.01; Agar-agar - 15.0. Distilled water - up to 1 dm 3 ; pH - 7.2 in the presence of phenanthrene in an amount of 300 mg per 1 DM 3 nutrient medium.

Штамм Pseudomonas stutzeri MEV-S1 идентифицирован в соответствии с определителем Берга [9] и депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под номером ВКПМ В-8277.The strain Pseudomonas stutzeri MEV-S1 was identified in accordance with the identifier Berg [9] and deposited in the All-Russian collection of industrial microorganisms (VKPM) under the number VKPM B-8277.

Предлагаемый штамм характеризуется следующими морфологическими и физиолого-биохимическими признаками. Грамотрицательные подвижные палочки размером 2-3 × 0,8 мкм спор не образует. На агаризованной питательной среде из кислотного гидролизата рыбной муки на вторые сутки образуются плоские, матовые колонии диаметром 2-3 мм. В бульоне из кислотного гидролизата рыбной муки растет в виде пленки и равномерного помутнения. Штамм является аэробом, обладает оксидазной и каталазной активностью, растет в температурном диапазоне от 8 до 38°С, оптимум 28°С. В качестве источника углерода потребляет глюкозу и L-валин. Трегалозу, 2-кетоглюконат, мезо-инозит, гераниол, β-аланин, DL-арнинин не потребляет. Использует нитраты в качестве источника азота. Аргининдигидролазной активностью не обладает. Осуществляет денитрификацию. Гидролизует крахмал, желатин и поли-β-оксибутират не гидролизует. Обладает лецитиназной активностью. Прототроф в дополнительных факторах роста не нуждается.The proposed strain is characterized by the following morphological and physiological-biochemical characteristics. Gram-negative movable sticks with a size of 2-3 × 0.8 μm do not form spores. On the agar medium, from the acid hydrolyzate of fish meal, flat, dull colonies with a diameter of 2-3 mm are formed on the second day. In a broth made from acid hydrolyzate, fishmeal grows in the form of a film and uniform turbidity. The strain is an aerobic, has oxidase and catalase activity, grows in the temperature range from 8 to 38 ° C, the optimum is 28 ° C. It uses glucose and L-valine as a carbon source. Trehalose, 2-ketogluconate, meso-inositol, geraniol, β-alanine, DL-arninine does not consume. Uses nitrates as a source of nitrogen. Arginine dihydrolase activity does not possess. Carries out denitrification. Hydrolyzes starch, gelatin and poly-β-hydroxybutyrate does not hydrolyze. It has lecithinase activity. Prototroph does not need additional growth factors.

Штамм не патогенен (не вирулентен, не токсичен, токсигенностью не обладает). На штамм оформлено заключение о безопасности.The strain is not pathogenic (non-virulent, non-toxic, non-toxic). The strain issued a safety opinion.

Генетические особенности. Культура устойчива к стрептомицину – 100 мкг/см3, канамицину – 20 мкг/см3. Штамм устойчив к ионам тяжелых металлов: Pb, Zn, Mo, Fe - 100 мг/дм3, Hg - 8 мг/ дм3.Genetic features. The culture is resistant to streptomycin - 100 μg / cm 3 , kanamycin - 20 μg / cm 3 . The strain is resistant to heavy metal ions: Pb, Zn, Mo, Fe - 100 mg / dm 3 , Hg - 8 mg / dm 3 .

Культура использует в качестве единственного источника углерода нефть, нефтепродукты, полициклические ароматические углеводороды, содержащие 2, 3 и 4 бензольных кольца (нафталин, фенантрен, пирен, флуорен), а также фенол (таблица 3).The culture uses oil, petroleum products, polycyclic aromatic hydrocarbons containing 2, 3 and 4 benzene rings (naphthalene, phenanthrene, pyrene, fluorene) as well as phenol as the sole source of carbon (table 3).

Штамм продуцирует биологические поверхностно-активные вещества (биосурфактанты). Штамм хорошо растет на богатых питательных средах на основе мясопептонного бульона и ферментативного гидролизата рыбной муки.The strain produces biological surfactants (biosurfactants). The strain grows well in rich nutrient media based on meat and peptone broth and enzymatic hydrolyzate of fish meal.

Условия хранения: в лиофилизированном состоянии при 4°С - 3 года; на агаризованном ферментативном гидролизате рыбной муки при 4°С две недели, в пробирках на скошенном агаре под стерильным вазелиновым маслом при 4°С до года. Штамм может поддерживаться регулярными пересевами (1 раз в 2 недели) на агаризованном ферментативном гидролизате рыбной муки с 300 мг/дм3 фенантрена.Storage conditions: in a lyophilized state at 4 ° С - 3 years; on agarized enzymatic hydrolyzate of fish meal at 4 ° C for two weeks, in test tubes on mown agar under sterile paraffin oil at 4 ° C for up to a year. The strain can be maintained by regular reseeding (once every 2 weeks) on an agarized enzymatic hydrolyzate of fish meal with 300 mg / dm 3 phenanthrene.

Изобретение поясняется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.

Пример 1. Штамм бактерий Pseudomonas stutzeri MEV-S1 выращивают аэробно в жидкой среде на ферментативном гидролизате рыбной муки с 300 мг/дм3 фенантрена на качалке при 200 об/мин и температуре 28±2°С в течение 18 часов. Титр выросшей культуры составляет 1,2×109 колониеобразующих единиц (КОЕ) на 1 см3 питательной среды.Example 1. The bacterial strain Pseudomonas stutzeri MEV-S1 is grown aerobically in a liquid medium on an enzymatic hydrolyzate of fish meal with 300 mg / dm 3 phenanthrene on a shaker at 200 rpm and a temperature of 28 ± 2 ° C for 18 hours. The titer of the grown culture is 1.2 × 10 9 colony forming units (CFU) per 1 cm 3 of nutrient medium.

Пример 2. Штамм Pseudomonas stutzeri MEV-S1 выращивают на синтетической среде следующего состава, г/дм3: (NН4)2НРО4 - 0,5; КН2РO4 - 0,7; NaCl - 0,5; MgSO4·7H2O - 0,8; дистиллированная вода - до 1 дм3; рН 7,2. Нефть, мазут, дизельное топливо добавляют в синтетическую среду в количестве 1% от массы питательной среды в качестве единственного источника углерода. Опыт проводят в четырех повторностях. В колбы объемом 100 см3 вносят по 30 см3 минеральной среды и по 300 мг нефти, мазута и дизельного топлива. Колбы засевают клетками штамма Pseudomonas stutzeri MEV-S1 до концентрации 1·107 КОЕ/см3. В качестве контролей используют незасеянные колбы со средой, а также с нефтью и нефтепродуктами. Колбы культивируют на качалке при 200 об/мин и 30°С течение 14 суток. Эффективность биодеградации определяют на газожидкостном хроматографе. Результаты эксперимента представлены в таблице 1. Полученные результаты показывают, что в течение 5 суток при 30°С штамм MEV утилизирует нефть, мазут и дизельное на %: 77,2; 56,5; 89,1 соответственно.Example 2. The strain Pseudomonas stutzeri MEV-S1 is grown on a synthetic medium of the following composition, g / DM 3 : (NH 4 ) 2 NRA 4 - 0.5; KH 2 PO 4 - 0.7; NaCl - 0.5; MgSO 4 · 7H 2 O — 0.8; distilled water - up to 1 dm 3 ; pH 7.2. Oil, fuel oil, diesel fuel is added to the synthetic medium in an amount of 1% by weight of the nutrient medium as the sole carbon source. The experiment is carried out in four replicates. 30 cm 3 of mineral medium and 300 mg of oil, fuel oil and diesel fuel are introduced into 100 cm 3 flasks. Flasks are inoculated with cells of the strain Pseudomonas stutzeri MEV-S1 to a concentration of 1 · 10 7 CFU / cm 3 . Unsown flasks with medium, as well as with oil and oil products, are used as controls. The flasks were cultivated on a shaker at 200 rpm and 30 ° C for 14 days. The effectiveness of biodegradation is determined on a gas-liquid chromatograph. The experimental results are presented in table 1. The obtained results show that within 5 days at 30 ° C, the strain MEV utilizes oil, fuel oil and diesel by%: 77.2; 56.5; 89.1 respectively.

Figure 00000001
Figure 00000001

Пример 3. Предлагаемый штамм культивируют так же, как в примере 2. Однако культивирование проводят при 20°С. Результаты представлены в таблице 2.Example 3. The proposed strain is cultivated in the same way as in example 2. However, the cultivation is carried out at 20 ° C. The results are presented in table 2.

Figure 00000002
Figure 00000002

Пример 4. В колбы на 100 см3 вносят по 30 см3 минеральной среды (состав среды указан в примере 2) и по 200 мг нафталина, фенантрена, пирена, флуорена, фенола. Колбы засевают культурой Pseudomonas stutzeri MEV-S1 до концентрации 1·107 КОЕ/см3. В качестве контролей используют незасеянные колбы со средой, а также с изучаемыми веществами. Культивирование проводят на качалке при 200 об/мин, температуре 20°С в течение 5 суток. Эффективность биодеградации определяют на газожидкостном хроматографе. Результаты экспериментов показывают, что за 5 дней биодеградация нафталина и фенантрена прошла на 100%, а пирена, флуорена и фенола на %: 48,4; 58,9 и 53,3 соответственно (таблица 3).Example 4. In a flask per 100 cm 3 contribute 30 cm 3 of the mineral medium (the composition of the medium is shown in example 2) and 200 mg of naphthalene, phenanthrene, pyrene, fluorene, phenol. Flasks are seeded with a Pseudomonas stutzeri MEV-S1 culture to a concentration of 1 · 10 7 CFU / cm 3 . Unsown flasks with the medium, as well as with the studied substances, are used as controls. Cultivation is carried out on a rocking chair at 200 rpm, a temperature of 20 ° C for 5 days. The effectiveness of biodegradation is determined on a gas-liquid chromatograph. The experimental results show that for 5 days the biodegradation of naphthalene and phenanthrene was 100%, and pyrene, fluorene and phenol by%: 48.4; 58.9 and 53.3, respectively (table 3).

Figure 00000003
Figure 00000003

Пример 5. В колбы на 100 см3 вносят по 30 см3 синтетической среды (состав среды указан в примере 2), 300 мг нефти, 15 мг/дм3 солей Pb, Zn, Mo, Fe и Cr - 50 мкг/дм3 и клетки штамма Pseudomonas stutzeri MEV-S1 до концентрации 1·107 КОЕ/см3. Контролем служит засеянная колба с нефтью. Исследуемые колбы культивируют в четырех повторностях на качалке при 28°С и 200 об/мин в течение 5 дней. Результаты эксперимента показывают, что эффективность деградации нефти предлагаемым штаммом в вариантах с солями металлов и без них не отличается (таблица 4).Example 5. In flasks per 100 cm 3 contribute 30 cm 3 of synthetic medium (the composition of the medium is shown in example 2), 300 mg of oil, 15 mg / dm 3 salts of Pb, Zn, Mo, Fe and Cr - 50 μg / dm 3 and cells of the strain Pseudomonas stutzeri MEV-S1 to a concentration of 1 · 10 7 CFU / cm 3 . The control is a seeded flask with oil. The flasks under investigation were cultured in four replicates on a shaker at 28 ° C and 200 rpm for 5 days. The results of the experiment show that the efficiency of oil degradation by the proposed strain in variants with and without metal salts does not differ (table 4).

Figure 00000004
Figure 00000004

Пример 6. Культуральную жидкость штамма Pseudomonas stutzeri MEV-S1, выращенного как в примере 1, отделяют от микробных клеток центрифугированием при 5000 об/мин в течение 10 минут. В качестве биосурфактантсодержащей жидкости в опыте используется культуральная жидкость, разведенная дистиллированной водой в 10 раз. Поверхностное натяжение этой жидкости определяют с использованием кольцевого тензиометра. Контролем служит дистиллированная вода. Результаты определения поверхностного натяжения показывают (таблица 5), что добавление культуральной среды в дистиллированную воду приводит к снижению поверхностного натяжения дистиллированной воды с 61,2 дин/см до 35,8 дин/см. Добавление питательной среды в таком же соотношении 1:10 не оказывает влияния на поверхностное натяжение дистиллированной воды. Таким образом, культуральная жидкость предлагаемого штамма содержит биологические поверхностно-активные вещества.Example 6. The culture fluid of the strain Pseudomonas stutzeri MEV-S1, grown as in example 1, is separated from the microbial cells by centrifugation at 5000 rpm for 10 minutes. As a biosurfactant-containing fluid in the experiment, a culture fluid diluted with distilled water by a factor of 10 is used. The surface tension of this fluid is determined using a ring tensiometer. The control is distilled water. The results of determining the surface tension show (table 5) that the addition of the culture medium to distilled water leads to a decrease in the surface tension of distilled water from 61.2 dyne / cm to 35.8 dyne / cm. The addition of a nutrient medium in the same ratio of 1:10 does not affect the surface tension of distilled water. Thus, the culture fluid of the proposed strain contains biological surfactants.

Figure 00000005
Figure 00000005

Пример 7. В колбы на 100 см3 вносят по 27 см3 минеральной среды (состав среды указан в примере 2) и смесь, содержащую по 200 мг нафталина, фенантрена, пирена, флуорена. В колбы добавляют по 3 см3 биосурфактантсодержащей культуральной среды как в примере 6. Колбы засевают культурой Pseudomonas stutzeri MEV-S1 до концентрации 1·107 КОЕ/см3. В качестве контролей используют колбы со смесью нафталина, фенантрена, пирена и флуорена. Культивирование проводят на качалке при 200 об/мин, температуре 20°С в течение 5 суток. Эффективность биодеградации полициклических ароматических углеводородов определяют на газожидкостном хроматографе. Результаты экспериментов показывают (таблица 6), что добавление биосурфактанта повышает эффективность биодеградации ПАУ. Так, за 5 суток в вариантах опыта с добавлением биосурфактанта биодеградация нафталина и фенантрена прошла на 100%, а пирена и флуорена на %: 56,0; 72,4% соответственно.Example 7. In flasks per 100 cm 3 contribute 27 cm 3 of the mineral medium (the composition of the medium is indicated in example 2) and a mixture containing 200 mg of naphthalene, phenanthrene, pyrene, fluorene. To the flasks add 3 cm 3 biosurfactant-containing culture medium as in example 6. The flask is seeded with a culture of Pseudomonas stutzeri MEV-S1 to a concentration of 1 · 10 7 CFU / cm 3 . As controls use flasks with a mixture of naphthalene, phenanthrene, pyrene and fluorene. Cultivation is carried out on a rocking chair at 200 rpm, a temperature of 20 ° C for 5 days. The biodegradation efficiency of polycyclic aromatic hydrocarbons is determined on a gas-liquid chromatograph. The experimental results show (table 6) that the addition of a biosurfactant increases the efficiency of PAH biodegradation. So, for 5 days, in the test variants with the addition of a biosurfactant, the biodegradation of naphthalene and phenanthrene was 100%, and pyrene and fluorene by%: 56.0; 72.4%, respectively.

Figure 00000006
Figure 00000006

Пример 8. В эксикаторы объемом 3 дм3 с 2 кг дерново-подзолистой почвы вносят 1% по массе нефти, мазута, дизельного топлива и тщательно перемешивают.Example 8. In desiccators with a volume of 3 dm 3 with 2 kg of sod-podzolic soil contribute 1% by weight of oil, fuel oil, diesel fuel and mix thoroughly.

Суспензию бактерий штамма Pseudomonas stutzeri MEV-S1 разводят фосфатным буферным раствором рН 7,2 и вносят в почву, загрязненную ксенобиотиками из расчета 1·107 КОЕ на 1 г почвы. Почву тщательно перемешивают, увлажняют до 60% от общей влагоемкости и экспонируют при 20°С в течение 2 месяцев. Для анализа образцы почвы отбирают в момент начала эксперимента и через 2 месяца. Эффективность биодеградации нефти и продуктов ее переработки предлагаемым штаммом в почве оценивают методом газожидкостной хроматографии. Результаты исследований показывают, что предлагаемый штамм в течение 2 месяцев при температуре 20°С осуществляет деградацию 60,6% нефти, 51,4% мазута и 68,3% дизельного топлива (см. табл. 7).A suspension of bacteria of the strain Pseudomonas stutzeri MEV-S1 is diluted with a phosphate buffer solution of pH 7.2 and introduced into the soil contaminated with xenobiotics at a rate of 1 · 10 7 CFU per 1 g of soil. The soil is thoroughly mixed, moistened to 60% of the total moisture capacity and exposed at 20 ° C for 2 months. For analysis, soil samples are taken at the beginning of the experiment and after 2 months. The effectiveness of biodegradation of oil and its refined products by the proposed strain in the soil is evaluated by gas-liquid chromatography. The research results show that the proposed strain for 2 months at a temperature of 20 ° C degrades 60.6% of oil, 51.4% of fuel oil and 68.3% of diesel fuel (see table. 7).

Figure 00000007
Figure 00000007

Пример 9. Предлагаемый штамм вносят в почву так же, как в примере 8. Однако эксперимент проводят при 30°С. Результаты представлены в таблице 8.Example 9. The proposed strain is applied to the soil in the same way as in example 8. However, the experiment is carried out at 30 ° C. The results are presented in table 8.

Figure 00000008
Figure 00000008

Пример 10. В эксикаторы объемом 3 дм3 с 2 кг дерново-подзолистой почвы вносят 1% по массе смеси нафталина (4 г), фенантрена (4 г), пирена (4 г), флуорена (4 г), фенола (4 г) и тщательно перемешивают. Суспензию бактерий штамма Pseudomonas stutzeri MEV-S1, полученную как в примере 1, разводят фосфатным буферным раствором с рН 7,2 до титра 1·108 КОЕ/см3 и вносят в почву, загрязненную ксенобиотиками из расчета 1·107 КОЕ на 1 г почвы. Почву тщательно перемешивают, увлажняют до 60% от общей влагоемкости и экспонируют при 30°С в течение 2 месяцев. Для анализа образцы почвы отбирают в начале эксперимента и через 2 месяца. Эффективность биодеградации ПАУ и фенола предлагаемым штаммом в почве оценивают методом газожидкостной хроматографии. Результаты исследований показывают, что предлагаемый штамм в течение 2 месяцев при температуре 20°С осуществляет деградацию 100% нафталина и фенантрена, 59% флуорена, 52% пирена и 56 % фенола (см. табл. 9).Example 10. In desiccators with a volume of 3 dm 3 with 2 kg of sod-podzolic soil make 1% by weight of a mixture of naphthalene (4 g), phenanthrene (4 g), pyrene (4 g), fluorene (4 g), phenol (4 g ) and mix thoroughly. The bacterial suspension of the strain Pseudomonas stutzeri MEV-S1, obtained as in example 1, is diluted with phosphate buffer solution with a pH of 7.2 to a titer of 1 · 10 8 CFU / cm 3 and introduced into the soil contaminated with xenobiotics at the rate of 1 · 10 7 CFU per 1 g of soil. The soil is thoroughly mixed, moistened to 60% of the total moisture capacity and exposed at 30 ° C for 2 months. For analysis, soil samples are taken at the beginning of the experiment and after 2 months. The effectiveness of biodegradation of PAHs and phenol of the proposed strain in the soil is evaluated by gas-liquid chromatography. The research results show that the proposed strain for 2 months at a temperature of 20 ° C degrades 100% naphthalene and phenanthrene, 59% fluorene, 52% pyrene and 56% phenol (see table. 9).

Figure 00000009
Figure 00000009

Пример 11. В эксикаторы объемом 3 дм3 с 2 кг дерново-подзолистой почвы вносят 20 г нефти и 15 мг/кг почвы солей Pb, Zn, Mo, Fe, и Cr - 50 мкг/кг и клетки штамма Pseudomonas stutzeri MEV-S1 до концентрации 1·107 КОЕ/г почвы. Почву тщательно перемешивают, увлажняют до 60% от общей влагоемкости и экспонируют при 30°С в течение 2 месяцев. Для анализа образцы почвы отбирают в начале эксперимента и через 2 месяца. Эффективность биодеградации нефти предлагаемым штаммом в почве оценивают методом газожидкостной хроматографии. Контролем служит почва с нефтью и внесенными микроорганизмами. Повторность опыта четырехкратная. Результаты эксперимента показывают, что эффективность деградации нефти предлагаемым штаммом в вариантах с солями металлов и без них не отличается (таблица 10).Example 11. In desiccators with a volume of 3 dm 3 with 2 kg of sod-podzolic soil make 20 g of oil and 15 mg / kg of soil salts of Pb, Zn, Mo, Fe, and Cr - 50 μg / kg and cells of the strain Pseudomonas stutzeri MEV-S1 to a concentration of 1 · 10 7 CFU / g of soil. The soil is thoroughly mixed, moistened to 60% of the total moisture capacity and exposed at 30 ° C for 2 months. For analysis, soil samples are taken at the beginning of the experiment and after 2 months. The effectiveness of oil biodegradation of the proposed strain in the soil is evaluated by gas-liquid chromatography. The control is soil with oil and introduced microorganisms. The experiment was repeated four times. The results of the experiment show that the efficiency of oil degradation by the proposed strain in variants with and without metal salts does not differ (table 10).

Figure 00000010
Figure 00000010

Таким образом, преимуществом предлагаемого штамма является то, что он при температуре 20-30°С утилизирует нефть, мазут и дизельное топливо в почве и воде, а также полициклические ароматические углеводороды, содержащие от 2 до 4 бензольных колец (нафталин, фенантрен, пирен, флуорен). Предлагаемый штамм продуцирует биологические поверхностно-активные вещества, что ускоряет деградацию полициклических ароматических углеводородов в водной среде. Устойчивость штамма к ионам тяжелых металлов расширяет диапазон его применения при очистке территорий от комбинированного загрязнения углеводородами нефти и металлами.Thus, the advantage of the proposed strain is that at a temperature of 20-30 ° C it utilizes oil, fuel oil and diesel fuel in soil and water, as well as polycyclic aromatic hydrocarbons containing from 2 to 4 benzene rings (naphthalene, phenanthrene, pyrene, fluoren). The proposed strain produces biological surfactants, which accelerates the degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons in the aquatic environment. The resistance of the strain to heavy metal ions extends the range of its use in cleaning territories from combined pollution with oil hydrocarbons and metals.

Источники информацииSources of information

1. Патент России №2134723, кл. C 12 N 1/20. Штамм Pseudomonas alcaligenes E7, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. - 1999.1. Patent of Russia No. 2134723, cl. C 12 N 1/20. The strain Pseudomonas alcaligenes E7, used to clean water and soil from oil and oil products. - 1999.

2. Патент России №2157842, кл. C 12 N 1/26. Штамм Trichoderma lignorum Л-1 ГКМ ВИЗР №103 для окисления углеводородов нефти и нефтепродуктов. - 2000.2. Patent of Russia No. 2157842, cl. C 12 N 1/26. The strain Trichoderma lignorum L-1 GKM VIZR No. 103 for the oxidation of hydrocarbons of oil and oil products. - 2000.

3. Патент России №2133770, кл. C 12 N 1/20. Штамм Pseudomonas alcaligenes B-1, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. - 1999.3. Patent of Russia No. 2133770, cl. C 12 N 1/20. The strain Pseudomonas alcaligenes B-1, used to purify water and soil from oil and oil products. - 1999.

4. Патент России №92005971, кл. C 12 N 1/20. Штамм Mycobacterium flavescens EX-91, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. - 1996.4. Patent of Russia No. 92005971, cl. C 12 N 1/20. The strain Mycobacterium flavescens EX-91, used to purify water and soil from oil and oil products. - 1996.

5. Патент России №95119734, кл. C 12 N 1/20. Штамм Rhodococcus species 56D, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. - 1998.5. Patent of Russia No. 95119734, cl. C 12 N 1/20. The strain Rhodococcus species 56D, used to purify water and soil from oil and oil products. - 1998.

6. Патент России №2134722, кл. C 12 N 1/20. Штамм Pseudomonas putida 9, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. - 1999.6. Patent of Russia No. 2134722, cl. C 12 N 1/20. The strain Pseudomonas putida 9, used to purify water and soil from oil and oil products. - 1999.

7. Патент России №2133769, кл. C 12 N 1/20. Штамм Rhodococcus species MFN, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. - 1998.7. Patent of Russia No. 2133769, class. C 12 N 1/20. The strain Rhodococcus species MFN used to purify water and soil from oil and oil products. - 1998.

8. Дэвис Р., Бодстайн Д., Рот Дж. Методы генетической инженерии. Генетика бактерий. Пер. с англ. под редакцией чл. - корр. АН СССР Р.Б.Хесина. - М.: Мир, 1984-176 с.8. Davis R., Bodstein D., Roth J. Methods of genetic engineering. Genetics of bacteria. Per. from English edited by - correspondent USSR Academy of Sciences R. B. Khesin. - M.: Mir, 1984-176 p.

9. Bergey's Manual of Determinative Bacteriology. Ninth Edition. Baltimore, Maryland: Williams&Wilkins, 1994. – 787 р.9. Bergey's Manual of Determinative Bacteriology. Ninth Edition. Baltimore, Maryland: Williams & Wilkins, 1994 .-- 787 p.

Claims (1)

Сурфактантобразующий штамм бактерий Pseudomonas stutzeri MEV-Sl депонирован в ВКПМ В-8277, используемый для очистки почвы, грунтовых и поверхностных вод от нефти и продуктов ее переработки in situ.The surfactant-forming bacterial strain Pseudomonas stutzeri MEV-Sl was deposited in VKPM B-8277, which is used to clean oil, soil and surface water from oil and its processed products in situ.
RU2002122612/13A 2002-08-23 2002-08-23 Strain of bacterium pseudomonas stutzeri mev-s1 used for treatment of soil, ground and surface water from petroleum and products of its processing RU2228952C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2002122612/13A RU2228952C2 (en) 2002-08-23 2002-08-23 Strain of bacterium pseudomonas stutzeri mev-s1 used for treatment of soil, ground and surface water from petroleum and products of its processing

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2002122612/13A RU2228952C2 (en) 2002-08-23 2002-08-23 Strain of bacterium pseudomonas stutzeri mev-s1 used for treatment of soil, ground and surface water from petroleum and products of its processing

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2002122612A RU2002122612A (en) 2004-03-10
RU2228952C2 true RU2228952C2 (en) 2004-05-20

Family

ID=32678829

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2002122612/13A RU2228952C2 (en) 2002-08-23 2002-08-23 Strain of bacterium pseudomonas stutzeri mev-s1 used for treatment of soil, ground and surface water from petroleum and products of its processing

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2228952C2 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2529948C2 (en) * 2012-09-13 2014-10-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский (Приволжский) Федеральный Университет" (ФГАОУ ВПО КФУ) Pseudomonas stutzeri BACTERIA STRAIN - DECOMPOSER OF ALIPHATIC AND AROMATIC PETROLEUM HYDROCARBONS AND PLANT GROWTH STIMULANT AND USE THEREOF
RU2575064C1 (en) * 2015-01-26 2016-02-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Новосибирский национальный исследовательский государственный университет" (Новосибирский государственный университет, НГУ) STRAIN OF BACTERIA Pseudomonas denitrificans, HAVING PROPERTY TO DISPOSE PHENANTHRENE

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113980856B (en) * 2021-11-17 2023-08-29 中国农业科学院研究生院 New Strain of Pseudomonas and Its Application
CN114717152B (en) * 2022-04-24 2024-01-09 北京沃太斯环保科技发展有限公司 Composite functional microbial agent taking pseudomonas stutzeri as carrier for in-situ remediation of polluted soil and application thereof
CN116162567B (en) * 2022-11-15 2024-10-29 安徽国祯环境修复股份有限公司 Microorganism combination and method for repairing polycyclic aromatic hydrocarbon and hexavalent chromium combined polluted soil
CN116376786B (en) * 2023-05-30 2023-09-01 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 A kind of anthracene-degrading bacterial strain and its isolation and screening method
CN117264838B (en) * 2023-10-09 2024-04-19 东北农业大学 Pseudomonas with growth-promoting function for plant lead stress and application thereof
CN117798183B (en) * 2024-01-09 2025-10-24 华南理工大学 A method and application for simultaneously removing polycyclic aromatic hydrocarbons and heavy metals

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4855051A (en) * 1987-05-11 1989-08-08 Polysar Limited Microbial treatment of wastewater to remove tertiary butyl alcohol
SU1724686A1 (en) * 1990-03-13 1992-04-07 МГУ им.М.В.Ломоносова Strain of bacteria pseudomonas stutzeri, used for purification of industrial sewage from maleic acid
WO1995031408A1 (en) * 1994-05-11 1995-11-23 Aktsionernoe Obschestvo Zakrytogo Tipa 'biotekhinvest' Biological preparation and method of removing crude oil and petroleum-product contaminants from water and soil
US5656169A (en) * 1996-08-06 1997-08-12 Uniroyal Chemical Ltd./Ltee Biodegradation process for de-toxifying liquid streams
RU2134723C1 (en) * 1998-03-25 1999-08-20 Государственный научный центр прикладной микробилогии Strain of bacterium pseudomonas alcaligenes e7 used for treatment of water and soil from oil and petroleum products

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4855051A (en) * 1987-05-11 1989-08-08 Polysar Limited Microbial treatment of wastewater to remove tertiary butyl alcohol
SU1724686A1 (en) * 1990-03-13 1992-04-07 МГУ им.М.В.Ломоносова Strain of bacteria pseudomonas stutzeri, used for purification of industrial sewage from maleic acid
WO1995031408A1 (en) * 1994-05-11 1995-11-23 Aktsionernoe Obschestvo Zakrytogo Tipa 'biotekhinvest' Biological preparation and method of removing crude oil and petroleum-product contaminants from water and soil
US5656169A (en) * 1996-08-06 1997-08-12 Uniroyal Chemical Ltd./Ltee Biodegradation process for de-toxifying liquid streams
RU2134723C1 (en) * 1998-03-25 1999-08-20 Государственный научный центр прикладной микробилогии Strain of bacterium pseudomonas alcaligenes e7 used for treatment of water and soil from oil and petroleum products

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2529948C2 (en) * 2012-09-13 2014-10-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский (Приволжский) Федеральный Университет" (ФГАОУ ВПО КФУ) Pseudomonas stutzeri BACTERIA STRAIN - DECOMPOSER OF ALIPHATIC AND AROMATIC PETROLEUM HYDROCARBONS AND PLANT GROWTH STIMULANT AND USE THEREOF
RU2575064C1 (en) * 2015-01-26 2016-02-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Новосибирский национальный исследовательский государственный университет" (Новосибирский государственный университет, НГУ) STRAIN OF BACTERIA Pseudomonas denitrificans, HAVING PROPERTY TO DISPOSE PHENANTHRENE

Also Published As

Publication number Publication date
RU2002122612A (en) 2004-03-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kiyohara et al. Rapid screen for bacteria degrading water-insoluble, solid hydrocarbons on agar plates
RU2133770C1 (en) Strain of bacterium pseudomonas alcaligenes b-1 used for water and soil treatment from oil and petroleum products
Thimmarayan et al. Biodegradation of naphthalene–Ecofriendly approach for soil pollution mitigation
CN110283741B (en) A rose chromogen with efficient polycyclic aromatic hydrocarbon degradation and its application
RU2228952C2 (en) Strain of bacterium pseudomonas stutzeri mev-s1 used for treatment of soil, ground and surface water from petroleum and products of its processing
RU2228953C2 (en) Strain of bacterium pseudomonas alcaligenes mev used for treatment of soil, ground and surface water from petroleum and products of its processing
RU2509150C2 (en) Association of strains of bacteria-oil decomposers, and remediation method of oil-contaminated objects
Stancu Response mechanisms in Serratia marcescens IBBPo15 during organic solvents exposure
RU2134723C1 (en) Strain of bacterium pseudomonas alcaligenes e7 used for treatment of water and soil from oil and petroleum products
RU2142996C1 (en) Strain arthrobacter sp for degradation of crude oil and petroleum products
RU2257409C1 (en) Strain rhodococcus erythropolis for decomposition of petroleum and petroleum products
RU2292392C2 (en) BACTERIUM Pseudomonas alcaligence STRAIN USEFUL IN PURIFICATION OF SOILS, GROUND WATER AND SURFACE WATER FROM TRINITROTOLUENE
RU2266958C2 (en) Destructor microorganism strains zoogloea sp.14h, arthrobacter sp.13h, arthrobacter sp.15h, bacillus sp.3h, bacillus sp.12h, useful in remediation of ponds and soils contaminated with petroleum and petroleum product, and strain association based on the same
El-Tarrs et al. In vitro screening for oil degrading bacteria and evaluation of their biodegradation potential for hydrocarbon
RU2617950C1 (en) STRAIN OF BACTERIA Stenotrophomonas maltophilia - OIL AND OILPRODUCT DESTRUCTOR
RU2292391C2 (en) BACTERIUM Pseudomonas putida STRAIN USEFUL IN PURIFICATION OF SOILS, GROUND WATER AND SURFACE WATER FROM TRINITROTOLUENE
RU2300561C1 (en) Strain rhodococcus globerulus h-42 for decomposition of petroleum and petroleum products
Sivakumar et al. Relative Bioremediation of Used engine oil Contaminated soil from an Industrialised area by Various microbes
RU2560272C1 (en) Strain of bacteria serratia plymuthica - decomposer of crude oil and petroleum products
RU2687155C1 (en) STRAIN OF THE MICROBACTERIUM PARAOXYDANS BKM Ac-2619D BACTERIA - OIL AND OIL PRODUCTS DECOMPOSER
RU2675940C1 (en) Bacillus species vkm b-2815d bacteria strain - oil and petroleum product decomposer
RU2257410C1 (en) Strain rhodococcus erythropolis for decomposition of petroleum and petroleum products
Akpoka et al. Archives of Ecotoxicology
Wiencke et al. The Potter Cove coastal ecosystem, Antarctica
RU2134722C1 (en) Strain of bacterium pseudomonas putida-9 used for treatment of water and soil from oil and petroleum products

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20080824