RU2214420C2 - Гибридный белок для ингибирования дегрануляции мастоцитов и его применение - Google Patents
Гибридный белок для ингибирования дегрануляции мастоцитов и его применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2214420C2 RU2214420C2 RU2000131217/04A RU2000131217A RU2214420C2 RU 2214420 C2 RU2214420 C2 RU 2214420C2 RU 2000131217/04 A RU2000131217/04 A RU 2000131217/04A RU 2000131217 A RU2000131217 A RU 2000131217A RU 2214420 C2 RU2214420 C2 RU 2214420C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- protein
- cells
- protease
- basophils
- fragment
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 86
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 65
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 64
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 title description 6
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 26
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims abstract description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 49
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 34
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 34
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 claims description 20
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 19
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 19
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 15
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 claims description 12
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 claims description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 10
- 241000193155 Clostridium botulinum Species 0.000 claims description 9
- 102000009438 IgE Receptors Human genes 0.000 claims description 9
- 108010073816 IgE Receptors Proteins 0.000 claims description 9
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 claims description 8
- 108010002231 IgA-specific serine endopeptidase Proteins 0.000 claims description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 7
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 claims description 4
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004257 Potassium Channel Human genes 0.000 claims description 4
- 101800002885 Tetanus toxin light chain Proteins 0.000 claims description 4
- 108020001213 potassium channel Proteins 0.000 claims description 4
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 claims description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims 2
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 claims 1
- 230000003112 degranulating effect Effects 0.000 claims 1
- 229940099472 immunoglobulin a Drugs 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003179 granulation Effects 0.000 abstract 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 abstract 1
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 62
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 46
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 31
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 108010077372 mast cell degranulating peptide Proteins 0.000 description 10
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 9
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 9
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 9
- QMBRLNFAEHGOLY-UHFFFAOYSA-N mcd peptide Chemical compound N1C(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)C(C)CC)CSSCC(C(=O)NCC(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CC(N)=O)C(N)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(CCCNC(N)=N)NC(=O)C(NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CC2N=CN=C2)NC(=O)C2CCCN2C(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(C(C)C)NC2=O)CSSCC1C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NC2CC1C=NC=N1 QMBRLNFAEHGOLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108030001720 Bontoxilysin Proteins 0.000 description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 7
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 6
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 6
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 6
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 6
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 6
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 5
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 4
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 229940053031 botulinum toxin Drugs 0.000 description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 239000002581 neurotoxin Substances 0.000 description 4
- 231100000618 neurotoxin Toxicity 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 3
- 229940071106 ethylenediaminetetraacetate Drugs 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 description 2
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193449 Clostridium tetani Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 101710138657 Neurotoxin Proteins 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- 108010010469 Qa-SNARE Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010005730 R-SNARE Proteins Proteins 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000002215 Synaptobrevin Human genes 0.000 description 2
- 102000004183 Synaptosomal-Associated Protein 25 Human genes 0.000 description 2
- 108010057722 Synaptosomal-Associated Protein 25 Proteins 0.000 description 2
- 102000050389 Syntaxin Human genes 0.000 description 2
- 108010057266 Type A Botulinum Toxins Proteins 0.000 description 2
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 2
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229940094657 botulinum toxin type a Drugs 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N morphine Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 210000004739 secretory vesicle Anatomy 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QRYXYRQPMWQIDM-UHFFFAOYSA-N 3-benzoyl-3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)-1-hydroxypyrrolidine-2,5-dione Chemical compound O=C1N(O)C(=O)CC1(C(=O)C=1C=CC=CC=1)N1C(=O)C=CC1=O QRYXYRQPMWQIDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- 208000035285 Allergic Seasonal Rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 108090001069 Chymopapain Proteins 0.000 description 1
- 241001112695 Clostridiales Species 0.000 description 1
- 101100272852 Clostridium botulinum (strain Langeland / NCTC 10281 / Type F) F gene Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N L-N-acetyl-Cysteine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 208000009481 Laryngeal Edema Diseases 0.000 description 1
- 206010023845 Laryngeal oedema Diseases 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 208000019430 Motor disease Diseases 0.000 description 1
- 201000009053 Neurodermatitis Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- ISWQCIVKKSOKNN-UHFFFAOYSA-L Tiron Chemical compound [Na+].[Na+].OC1=CC(S([O-])(=O)=O)=CC(S([O-])(=O)=O)=C1O ISWQCIVKKSOKNN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 1
- 229960004308 acetylcysteine Drugs 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical class CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000003659 bee venom Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229960002976 chymopapain Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003145 cytotoxic factor Substances 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 1
- 125000003374 diacylglycerol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N disodium;3,7-dioxido-2,4,6,8,9-pentaoxa-1,3,5,7-tetraborabicyclo[3.3.1]nonane Chemical compound [Na+].[Na+].O1B([O-])OB2OB([O-])OB1O2 UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 230000000632 dystonic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028023 exocytosis Effects 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 1
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- -1 leukotrienes (derivatives of arachidonic acid Chemical class 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229960005181 morphine Drugs 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 229940035363 muscle relaxants Drugs 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000003158 myorelaxant agent Substances 0.000 description 1
- 230000005455 negative regulation of mast cell degranulation Effects 0.000 description 1
- 230000003957 neurotransmitter release Effects 0.000 description 1
- 230000002276 neurotropic effect Effects 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000001734 parasympathetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 108010074523 rimabotulinumtoxinB Proteins 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000006748 scratching Methods 0.000 description 1
- 230000002393 scratching effect Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004876 tela submucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- ATCJTYORYKLVIA-SRXJVYAUSA-N vamp regimen Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1.C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1.O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1.C([C@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C(C45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C=O)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 ATCJTYORYKLVIA-SRXJVYAUSA-N 0.000 description 1
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003639 vasoconstrictive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Fire-Extinguishing Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к гибридному белку, содержащему (I) известный белок, который связывается с мастоцитами и/или базофилами известным образом или абсорбируется таким образом, и (II) протеазу, которая расщепляет один или более чем один белок аппарата секреции мастоцитов и/или базофилов, или состоящему из них. Гибридный белок по изобретению обладает высокой ингибирующей активностью по отношению к грануляции мастоцитов. 3 с. и 2 з.п. ф-лы.
Description
Аллергические реакции немедленного типа характеризуются тем, что пациенты, к которым это относится, вырабатывают антитела IgE-типа против аллергенов (например, цветочной пыльцы, домашней пыли, клещей, шерсти животных). Эти антитела циркулируют не только в крови, но также связаны с присутствующими в ткани клетками, экспонирующими в плазматической мембране специфичный рецептор к участку молекулы IgE, Fc-фрагменту (Fishman & Lorberboum-Galski 1997; Hamawy 1997). Клетками с рецепторами IgE являются исключительно мастоциты и базофилы. Эти клетки представляют собой клетки, осуществляющие аллергическую реакцию немедленного типа. Они содержат пузырьки, содержащие вазоактивные амины, а также простагландины и лейкотриены (производные арахидоновой кислоты). Высвобождение этих веществ, приводящее к дегрануляции мастоцитов, происходит посредством специфического и неспецифического механизма. Как только клетки механически разрушаются, например путем царапины на коже, неспецифически высвобождается гистамин. Кожа около раны становится красной. Образуется крапивница (отеки) и чешется кожа (тройной ответ). Вещества, специфически высвобождающие гистамин, эффективны в относительно низких концентрациях и запускают следующий каскад реакций (сигнальный каскад): активация фосфолипазы С - образование вторичных мессенджеров "диацилглицерина" и "IP3" - мобилизация кальция из клеточных депо - слияние гранул с клеточной мембраной - экзоцитоз гранул без цитолиза - обмен натрия на положительно заряженный гистамин комплекса с гепарином и основным белком - высвобождение гистамина из матрикса гранул. Если имеет место контакт между мастоцитами субъекта, имеющего аллергию, и аллергеном, молекулы IgE на клеточной поверхности связывают этот аллерген. Как только молекулы аллергена связаны в достаточных количествах, происходит агрегация рецепторов в плазматической мембране. Агрегация является специфическим стимулом для индукции вышеописанного сигнального каскада внутри клетки. Высвободившиеся вещества вызывают аллергические симптомы (конъюнктивит, ринит, астму, отек гортани, крапивницу, кровяное давление снижается до резко выраженного анафилактического шока). Пептиды, содержащиеся в токсине пчелы, такие как мастоцит-дегранулирующий пептид (MCD), также влияют на дегрануляцию мастоцитов. Кроме того, некоторые фармацевтические препараты вызывают специфическое высвобождение гистамина как нежелательный эффект. Высвобождение гистамина у людей описано для миорелаксантов, декстранов, ацетилсалициловой кислоты (аспирина), морфина, антибиотиков, контрастных веществ в рентгенографии, чужеродных сывороток и тому подобного.
Если слияние пузырьков с плазматической мембраной успешно ингибируется, тогда не происходит высвобождения аминов и производных арахидоновой кислоты. В результате не индуцируются аллергические реакции. Несколько белков (белков слияния) вовлечены в процесс секреции и высвобождение, эти белки, соответственно, могут быть связаны с мембранами секреторных пузырьков и/или с плазматической мембраной. Подобным образом они могут находиться в цитозоле. Представителями этих белков являются SNAP 25, синаптобревин (VAMP), синтаксин и его изоформы, соответственно. Эти белки образуют комплекс (комплекс слияния), фиксирующий секреторные пузырьки на внутренней стороне плазматической мембраны. Такая фиксация предшествует слиянию пузырьков с плазматической мембраной, причем указанное слияние индуцируется притоком Са++, вызванным IgЕ. Образование комплекса ингибируется путем инактивации одного из этих белков, например путем протеолитического расщепления.
Известно, что упомянутые белки слияния являются молекулами-мишенями (субстратами) легких цепей нейротоксинов, продуцируемых бациллой Clostridium botulinum в нервных клетках (Ahnert-Hilger & Bigalke, 1995; Bigalke 1999 в печати). В настоящее время известны семь различных типов ботулинических токсинов (А, В, С1, D, Е, F и G). Упомянутый синаптобревин, кроме того, является молекулой-мишенью для TeNT (Link et al., 1993), продуцируемого Clostridium tetani, а также для протеазы из Neisseria gonorrhoeae (Binscheck et al. , 1995). Токсины, за исключением последнего, состоят из по меньшей мере двух функциональных доменов. С-концевой участок белка (тяжелая цепь) ответственен за связывание его с нервной клеткой, в то время как N-конец (легкая цепь) характеризуется описанной выше высокоспецифической протеолитической активностью. Токсины связываются с нервными клетками посредством своей тяжелой цепи и достигают цитозоля посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза и последующего перемещения, где они расщепляют один или более чем один из упомянутых белков слияния, которые, в свою очередь, являются конститутивными для комплекса слияния. После расщепления соответствующего белка ингибируется секреция ацетилхолина и других медиаторов, соответственно, из нервных клеток (Binscheck and Wellhoner, 1997).
Ингибирование высвобождения медиаторов терапевтически использовалось в прошлом для лечения дистонических двигательных расстройств и для подавления избыточной парасимпатической активности (Benecke and Kessler, 1995). Для клостридиальных нейротоксинов иные биологические субстраты, нежели белки слияния, неизвестны. Тяжелые цепи обладают высокой аффинностью к периферическим нервным клеткам, так что легкие цепи, соединенные с ними, достигают только этих клеток и становятся эффективными только в этих клетках - хотя другие типы клеток, такие как мастоциты и базофилы, в которых происходят процессы секреции, обладают вышеупомянутыми субстратами, однако они не обладают механизмом для поглощения протеазы (Marxen et al., 1989).
Описание изобретения
Одно воплощение настоящего изобретения относится к гибридному белку, содержащему:
(I) белок, по существу известный, связывающийся с мастоцитами и/или базофилами и/или поглощаемый этими клетками по существу известным образом,
(II) протеазу, по существу известную, расщепляющую один или несколько белков аппарата секреции мастоцитов и/или базофилов,
или состоящему из них.
Одно воплощение настоящего изобретения относится к гибридному белку, содержащему:
(I) белок, по существу известный, связывающийся с мастоцитами и/или базофилами и/или поглощаемый этими клетками по существу известным образом,
(II) протеазу, по существу известную, расщепляющую один или несколько белков аппарата секреции мастоцитов и/или базофилов,
или состоящему из них.
Дополнительное воплощение настоящего изобретения относится к гибридному белку, содержащему:
(I) белок, связывающийся с мастоцитами и/или базофилами и/или поглощаемый этими клетками, причем этот белок (I) выбран из группы, состоящей из:
IgЕ,
фрагмента IgЕ, в частности Fc-фрагмента IgЕ,
антитела против IgE-рецептора мастоцитов и/или базофилов, фрагмента антитела против IgE-рецептора мастоцитов и/или базофилов, в частности Fab фрагмента, антитела против мастоцит-специфического калиевого канала и неактивного, но связывающего MCD пептида, и
(II) протеазу, в частности протеазу, по существу известную, расщепляющую один или несколько белков аппарата секреции мастоцитов и/или базофилов,
или состоящего из них.
(I) белок, связывающийся с мастоцитами и/или базофилами и/или поглощаемый этими клетками, причем этот белок (I) выбран из группы, состоящей из:
IgЕ,
фрагмента IgЕ, в частности Fc-фрагмента IgЕ,
антитела против IgE-рецептора мастоцитов и/или базофилов, фрагмента антитела против IgE-рецептора мастоцитов и/или базофилов, в частности Fab фрагмента, антитела против мастоцит-специфического калиевого канала и неактивного, но связывающего MCD пептида, и
(II) протеазу, в частности протеазу, по существу известную, расщепляющую один или несколько белков аппарата секреции мастоцитов и/или базофилов,
или состоящего из них.
Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к гибридному белку, содержащему:
(I) белок, в частности белок, по существу известный, связывающийся с мастоцитами и/или базофилами и/или поглощаемый этими клетками, в частности по существу известным образом, и
(II) протеазу, расщепляющую один или несколько белков аппарата секреции мастоцитов и/или базофилов, причем эта протеаза (II) выбрана из группы, состоящей из:
легкой цепи токсина Clostridium botulinum, в частности токсинов типа А, В, С1, D, Е, F и G,
каталитически активного фрагмента легкой цепи токсина Clostridium botulinum, в частности токсина типа А, В, С1, D, Е, F и G,
легкой цепи столбнячного токсина (TeNT),
каталитически активного фрагмента легкой цепи столбнячного токсина,
протеазы IgA Neisseria gonorrhoeae и
каталитического домена протеазы IgA Neisseria gonorrhoeae;
или состоящему из них.
(I) белок, в частности белок, по существу известный, связывающийся с мастоцитами и/или базофилами и/или поглощаемый этими клетками, в частности по существу известным образом, и
(II) протеазу, расщепляющую один или несколько белков аппарата секреции мастоцитов и/или базофилов, причем эта протеаза (II) выбрана из группы, состоящей из:
легкой цепи токсина Clostridium botulinum, в частности токсинов типа А, В, С1, D, Е, F и G,
каталитически активного фрагмента легкой цепи токсина Clostridium botulinum, в частности токсина типа А, В, С1, D, Е, F и G,
легкой цепи столбнячного токсина (TeNT),
каталитически активного фрагмента легкой цепи столбнячного токсина,
протеазы IgA Neisseria gonorrhoeae и
каталитического домена протеазы IgA Neisseria gonorrhoeae;
или состоящему из них.
Гибридный белок по настоящему изобретению может отличаться тем, что белок (I) и протеаза (II) выбраны соответственно из предыдущих групп белков и протеаз.
Гибридный белок по настоящему изобретению может дополнительно отличаться тем, что N-концевой участок тяжелой цепи соответствующего токсина (НN-фрагмент) или его фрагмент, может представлять собой часть гибридного белка, в дополнение к легкой цепи токсина Clostridium botulinum или столбнячного токсина.
Если бы мастоциты были убиты, то существовала бы опасность, что будет индуцирован аллергический шок, как только погибающие мастоциты высвободят содержащиеся в них эндогенные амины. Кроме того, снижение числа мастоцитов стимулировало бы синтез de novo этих клеток, которые, в свою очередь, были бы снова пригодны для аллергических реакций. Гибридный белок по настоящему изобретению, таким образом, фундаментально отличается от конъюгата IgE-Fc/экзотоксин псевдомонад, ингибирующего синтез белков путем его АДФ(аденозиндифосфат)-рибозилирующей активности, и, таким образом, осуществляющего гибель клетки (Fishman & Lorberboum-Galski, 1997). Как раз наоборот, гибридный белок по настоящему изобретению не служит для того, чтобы убивать мастоциты. Клетка, вернее, остается живой после того, как она была подвергнута воздействию гибридного белка по настоящему изобретению, и теряет не более чем свою способность высвобождать сосудосуживающие амины.
Стимуляции синтеза de novo не происходит. При терапевтическом применении устраняются возможные токсичные побочные действия, которые ожидаются при использовании конъюгата, основанного на целом цитотоксичном псевдомонадном токсине или сопоставимом цитотоксине.
Таким образом, объектом изобретения может быть конъюгат (гибридный белок), состоящий из (I) белка или пептида (транспортного белка/пептида), проявляющего высокую аффинность к мастоцитам/базофилам и (II) специфической протеазы, причем этот конъюгат блокирует дегрануляцию и механизм секреции, соответственно, этих клеток. Этот конъюгат полезен для терапии/профилактики аллергических реакций немедленного типа.
(I) Предпочтительные высокоаффинные мастоцит-связывающие компоненты конъюгатов представляют собой иммуноглобулины типа Е (IgЕ) и их фрагменты (например, Fc-фрагмент), соответственно. Дополнительно, используют антитела против специфических поверхностных молекул мастоцитов/базофилов, причем эти антитела селективно связываются с плазматической мембраной этих клеток. Главным образом, этой цели отвечают антитела против IgE-рецептора. Более того, неактивные, но связывающие мутанты мастоцит-дегранулирующего пептида должны быть использованы в качестве транспортных пептидов/белков в гибридном белке. Эти транспортные пептиды/белки полезны для пропускания протеазы в клетки. Эта протеаза расщепляет белки в комплексе слияния мастоцитов высокоспецифичным образом, каковые белки инициируют механизм дегрануляции этих клеток.
(II) В качестве высокоспецифичной протеазы полезна металлопротеаза, например легкая цепь ботулинического токсина типа А, В, С1, D, Е, F или G (BoNT/X) и столбнячного токсина (TeNT) или протеаза IgA Neisseria gonorrhoeae. Эти протеазы расщепляют синаптосомальный связанный белок (относительная молекулярная масса 25000) (SNAP 25), синаптобревин или синтаксин. Если только один из этих белков/пептидов расщеплен, дегрануляция мастоцитов ингибирована. Как результат, секреции гистамина, простагландинов и лейкотриенов не будет происходить, и аллергические симптомы больше не смогут появиться.
В настоящем изобретении нетоксичные легкие цепи токсинов могут быть присоединены к транспортным белкам, связывающимся исключительно с мастоцитами и базофилами, соответственно, и могут быть, таким образом, поглощены только этими клетками, причем легкие цепи достигают клеток, как если бы они переносились в качестве пассажира. Они не могут вторгаться в нервные клетки и клетки организма другого типа, так что действие ограничено мастоцитами и базофилами. Если один из субстратов протеолитически разрушен, то отсутствуют любые аллергические симптомы, следующие за контактом этих IgE-нагруженных клеток с аллергеном или с одним из вышеупомянутых фармацевтических препаратов.
В качестве белков, специфически связывающихся с мастоцитами, полезны:
1) иммуноглобулины типа Е и их фрагменты типа Fc,
2) антитела против IgE-рецептора,
3) мастоцит-дегранулирующий пептид, и
4) антитело против мастоцит-специфического калиевого канала.
1) иммуноглобулины типа Е и их фрагменты типа Fc,
2) антитела против IgE-рецептора,
3) мастоцит-дегранулирующий пептид, и
4) антитело против мастоцит-специфического калиевого канала.
В отношении перечисленных белков делается ссылка на следующие публикации:
- IgE: Helman (1995);
- IgE-Fc-фрагмент: Helman (1995);
- антитело против IgE-рецептора мастоцитов/базофилов, антитела против мастоцит-специфического калиевого канала, Fab-фрагмент антитела: это стандартные процедуры, описанные в: Liddel & Weeks (1995);
- MCD-пептиды: Gmachel & Krell (1995);
- неактивный, но связывающий мутант
Мутантный пептид получают в соответствии со стандартными способами: Nichol D.S.T. (1995);
- легкие цепи различных ботулинических токсинов типа A-G: Binz et al. (1990);
- легкая цепь столбнячного токсина: Eisel et al. (1989);
- протеаза IgA: Bruscheck et al. (1995).
- IgE: Helman (1995);
- IgE-Fc-фрагмент: Helman (1995);
- антитело против IgE-рецептора мастоцитов/базофилов, антитела против мастоцит-специфического калиевого канала, Fab-фрагмент антитела: это стандартные процедуры, описанные в: Liddel & Weeks (1995);
- MCD-пептиды: Gmachel & Krell (1995);
- неактивный, но связывающий мутант
Мутантный пептид получают в соответствии со стандартными способами: Nichol D.S.T. (1995);
- легкие цепи различных ботулинических токсинов типа A-G: Binz et al. (1990);
- легкая цепь столбнячного токсина: Eisel et al. (1989);
- протеаза IgA: Bruscheck et al. (1995).
Соединение обоих компонентов (транспортного белка и протеазы) происходит различными путями. Сначала легкую цепь токсина хроматографически очищают. Легкая цепь совершенно не токсична, поскольку после ее отделения от тяжелой цепи, нейротропного транспортного белка, она не может достичь нервных клеток, а внеклеточного субстрата не существует. Легкую цепь затем химически связывают с одним из четырех мастоцит-связывающих белков с образованием конъюгата, который, в свою очередь, поглощается цитозолем мастоцитов. Легкая цепь расщепляет здесь свой субстрат, причем это расщепление ингибирует секрецию гистамина и других веществ. Второй способ получения конъюгата заключается в слиянии гена легкой цепи и гена одного из четырех мастоцит-связывающих белков, так чтобы гибридный белок экспрессировался в подходящих клетках-хозяевах. Этот гибридный белок, получаемый биотехнологическим путем, должен блокировать процесс секреции из мастоцитов по аналогии с конъюгатом, получаемым из двух белковых компонентов. Получение гибридных белков представляет собой процедуру, по существу известную, в частности, в области терапии опухолей (Vogel, 1987; Magerstadt, 1991). В этой терапевтической концепции антитело против поверхностных белков опухолевых клеток прикреплено к цитотоксическому белку, например рицину, дифтерийному токсину, чтобы убивать раковые клетки. Новый аспект в способе по настоящему изобретению заключается в применении специфических протеаз и протеолитических доменов, соответственно, в гибридных белках для ингибирования дегрануляции мастоцитов и, таким образом, для противоаллергической терапии. Эти гибридные белки были полезны не только для того, чтобы избежать сильно ухудшающихся аллергических симптомов (сенной лихорадки, астмы и нейродермита). Их также можно вводить профилактически для того, чтобы избежать аллергических реакций во время терапии с помощью спасающих жизнь фармацевтических препаратов. Более того, с их помощью можно было бы избежать аллергических симптомов, имеющих место в курсе десенсибилизации.
Пример 1. Синтез гибридного белка из IgE и легкой цепи ВоNТ/А
Очищенный ботулинический токсин (5,0 мг) типа А был нанесен, после уравновешивания в 15 мМ тетраборате натрия и 30 мМ фосфате, рН 8.4, на колонку QAE Sephadex (1,0•3,0 см), уравновешенную тем же самым буфером. Колонку последовательно промывали 10 мл 120 мМ дитиоэритрола, 2 М мочевины и 1 мМ ЭДТА (этилендиаминтетраацетат) и инкубировали в течение ночи. После этого легкую цепь элюировали из колонки с помощью 10 мМ боратного буфера и диализировали против 20 мМ фосфата, рН 7,0.
Очищенный ботулинический токсин (5,0 мг) типа А был нанесен, после уравновешивания в 15 мМ тетраборате натрия и 30 мМ фосфате, рН 8.4, на колонку QAE Sephadex (1,0•3,0 см), уравновешенную тем же самым буфером. Колонку последовательно промывали 10 мл 120 мМ дитиоэритрола, 2 М мочевины и 1 мМ ЭДТА (этилендиаминтетраацетат) и инкубировали в течение ночи. После этого легкую цепь элюировали из колонки с помощью 10 мМ боратного буфера и диализировали против 20 мМ фосфата, рН 7,0.
Иммуноглобулин Е (крыса) был куплен. 10 мг иммуноглобулина расщепляли 50 мкг папаина в 1 мл фосфатного буфера (4oС в течение ночи). Fc-фрагмент очистили через гель-фильтрационную колонку (Sephacryl S200). 3,0 мг очищенного Fc-фрагмента инкубировали с 3,0 мг очищенной легкой цепи ботулинического токсина с 10 мМ дитиобиссукцинимидилпропионатом (бифункциональный агент) в 2 мл Na-фосфата, рН 7,0, в течение периода, составляющего 16 часов. Синтезированный таким образом гибридный белок был очищен с помощью гель-фильтрации (Sephacryl S200) и проанализирован на чистоту посредством гель-электрофореза сДСН (додецилсульфат натрия).
Ингибирование дегрануляции мастоцитов оценивали с использованием двух экспериментальных методов. В первом методе выделенные мастоциты крысы инкубировали с гибридной молекулой. После этого стимулировали высвобождение гистамина. Стимуляция происходила с помощью специфических гистамин-освобождающих агентов, таких как пептид MCD и конканавалин А (последний был экспериментально используемым веществом), и путем непосредственного увеличения внутриклеточной концентрации кальция, соответственно. Последнее достигается путем введения кальция в отдельные мастоциты. Таким образом, непосредственно достигается вышеописанный сигнальный каскад, поскольку увеличение концентрации кальция представляет собой стадию во время процесса секреции, за которой следует слияние пузырьков. За дегрануляцией мастоцита, отражающей высвобождение гистамина, следят в фазово-контрастный микроскоп. Затем можно количественно подсчитать высвободившийся гистамин с помощью измерения флуоресценции. Наконец, увеличение мастоцита, вызванное включением мембран пузырьков в плазматическую мембрану в процессе дегрануляции, можно определить электрофизиологически. В клетках, обработанных гибридным белком, в отличие от контрольных клеток не будет происходить (1) никакого морфологического изменения, (2) никакого увеличения флуоресценции в супернатанте клетки, и (3) никакого увеличения клетки. Таким образом можно доказать, что высвобождение гистамина блокируется гибридным белком.
Во втором экспериментальном методе гибридный белок вводят живым крысам. Крыс убивают через несколько дней и их мастоциты выделяют традиционным способом. Дегрануляцию и высвобождение гистамина, соответственно, определяют как описано выше. В этом методе оценивают, способен ли конъюгат достичь компартмента, в котором локализованы мастоциты, также в живом животном, и инактивирует ли конъюгат мастоцит в живом животном.
Пример 2. Продуцирование рекомбинантного гибридного белка путем связывания работоспособным образом гена, кодирующего легкую цепь типа А Clostridium botulinum, с геном, кодирующим иммуноглобулин Е и один из его фрагментов (Fc-фрагмент), соответственно.
Ген, кодирующий легкую цепь ботулинического токсина типа А, выделяют с помощью подходящих праймеров посредством ПЦР (полимеразная цепная реакция). Получают культуру Clostridium botulinum типа А, из которой получают ДНК. Из опубликованной последовательности гена токсина (Binz et al.) получают пару праймеров и ген легкой субъединицы, амплифицированный посредством ПЦР. После этого этот ген клонируют в имеющемся в продаже векторе экспрессии pQE в соответствии с инструкцией производителя.
Ген, кодирующий Fc-фрагмент человеческого иммуноглобулина Е (Helman L), был выделен посредством ПЦР из имеющейся в продаже библиотеки кДНК и слит в векторную конструкцию с геном легкой цепи ботулинического токсина типа А.
Этой конструкцией трансформировали компетентные клетки М15 (Е. соli). Поскольку в этой системе экспрессии встроенные гены снабжены "his-меткой", рекомбинантный белок очищают через колонку с иммобилизованным Ni. За процессом тщательной очистки белка следует гель-фильтрация через Sephacryl S300.
Измерение биологической активности осуществляли снова на выделенных мастоцитах in vitro.
Пример 3. Получение рекомбинантного гибридного белка путем связывания работоспособным образом гена, кодирующего легкую субъединицу столбнячного токсина, с мутантным геном, кодирующим мастоцит-дегранулирующий пептид (MCD).
"Последовательность для "мастоцит-дегранулирующего пептида", 22 мер, известна (Gmachl and Kreil). На ее основе синтезируют олигонуклеотид.
Для того чтобы выделить последовательность легкой субъединицы столбнячного токсина получали культуру С. tetani и из нее доставали ДНК. От известной последовательности нуклеиновой кислоты столбнячного токсина получали праймер для ПЦР и, в результате, ген легкой субъединицы токсина.
Как описано в Примере 1, обе последовательности нуклеиновых кислот были слиты в векторе экспрессии pQU и затем экспрессированы в Е. соli. Гибридный белок, который, в свою очередь, был снабжен his-меткой, очищали с помощью аффинной хроматографии и последующей гель-фильтрации. Очищенный ген, кодирующий мастоцит-дегранулирующий пептид, химически синтезируют, включая точковую мутацию в активном домене пептида. Ген работоспособным образом связывают с геном, кодирующим легкую цепь столбнячного токсина. Гибридный белок экспрессируют в Е.соli и очищают. Полученный таким образом гибридный белок тестируют in vitro в анализе дегрануляции мастоцитов.
Пример 4: Получение рекомбинантного гибридного белка путем связывания гена, кодирующего Fc-фрагмент IgЕ, с геном, кодирующим протеазу IgА.
Ген, кодирующий Fc-фрагмент IgЕ, выделяли как описано в Примере 1.
Ген, кодирующий протеазу IgA из N. gonorrhoeae, известен. Из него были получены праймеры, и ген, кодирующий специфическую протеазу, был выделен посредством ПЦР из препарата нуклеиновой кислоты, полученного из N. gonorrhoeae.
Обе нуклеиновые кислоты были встроены в имеющийся в продаже вектор, следуя инструкции, данной производителем, и гибридный белок очищали с помощью аффинной хроматографии (см. Пример 2).
Ингибиторная активность снова доказана in vitro на выделенных мастоцитах (см. выше).
Пример 5. Получение гибридного белка, состоящего из Fab-фрагмента антитела против IgE-рецептора и легкой цепи ботулинического токсина типа В.
Моноклональное антитело против IgE-рецептора на мастоцитах было куплено и повторно очищено с помощью хроматографии. 0,5 мг антитела конъюгировали с 0,4 г очищенной легкой цепи ботулинического токсина F. Легкую субъединицу выделили путем расщепления нейротоксина и последующей очистки посредством ионобменной хроматографии, как только осуществили получение нейротоксина в соответствии с процедурой Примера 1.
Оба белка (легкая субъединица токсина типа F и моноклональное антитело) связали друг с другом с помощью бифункционального агента. Для этой цели выделенные белки инкубировали с 10 мМ малеимидобензоил-N-гидрокси-сукцинимидэфиром. Гибридный белок затем очищали от неконъюгированных белков с помощью гель-фильтрации через Sephacryl S300.
Выделенные мастоциты снова использовали для демонстрации того, что синтезированный гибридный белок ингибирует секрецию гистамина. Ссылка на следующие патенты:
Патент 4902495
Системы направленной доставки IgE- Fc
Новый агент, контролирующий клеточную активность
Заявка РСТ WO 94/21300
Ссылки (см. в конце описания).
Патент 4902495
Системы направленной доставки IgE- Fc
Новый агент, контролирующий клеточную активность
Заявка РСТ WO 94/21300
Ссылки (см. в конце описания).
Дополнительные примеры
Исследование биологической активности
Пример 6. Ингибирование секреции гистамина из мастоцитов человека гибридным белком из Примера 1.
Исследование биологической активности
Пример 6. Ингибирование секреции гистамина из мастоцитов человека гибридным белком из Примера 1.
Мастоциты человека выделили из биоптатов кишечника согласно Bischoff et аl. (Bischoff S.C. Schwengberg S., Raab R. & Manns M. P. (1997). Functional Properties of Human Intestinal Mast Cells Cultured in a New Culture System Enhancement of IgE. - Receptor-Dependent Mediator Release and Response to Stem Cell Factor Journal of Immun 159, p. 560-5567). Слизистую оболочку механически отделяли от подслизистой основы и слизь отбирали в 1 мг/мл ацетилцистеина. После отделения эпителиальных клеток (5 мМ EDTA) изолят инкубировали в течение 30 минут последовательно инкубировали со следующими ферментами: 3 мг/мл проназы, химопапаина, коллагеназы D и эластазы. Освобожденные клетки отфильтровывали (полиамидный фильтр Nicolt) и затем очищали центрифугированием в градиенте Перкола (500 г • 15 мин).
106 клеток культивировали при 5% СO2 в пластиковых планшетах в течение 14 суток. 105 клеток затем инкубировали с 10 нМ гибридного белка, полученного в Примере 1, или без этого белка в течение ночи при 37oС и 5% СO2. После промывки клеток секрецию гистамина стимулировали иономицином и РМА. Общее содержание гистамина определяли после лизиса клеток, применяя радиоиммунный анализ (Dianova). Содержание гистамина (секретированный гистамин) в супернатанте обработанных и необработанных клеток анализировали радиоиммунным анализом после центрифугирования (400 г • 10 мл). В необработанных клетках секретировалось 45% клеточного гистамина. В клетках, обработанных указанным гибридным белком, секретировалось только 5% клеточного гистамина.
Пример 7. Ингибирование секреции гистамина из мастоцитов человека гибридным белком из примера 3
Эксперимент осуществляли как описано выше для гибридного белка из Примера 1 (см. Пример 6), за исключением того, что использовали гибридный белок из Примера 3.
Эксперимент осуществляли как описано выше для гибридного белка из Примера 1 (см. Пример 6), за исключением того, что использовали гибридный белок из Примера 3.
Получили следующие результаты: в необработанных клетках секретировалось 40% клеточного гистамина, тогда как в клетках, которые были обработаны гибридным белком, секретировалось только 4% гистамина.
Пример 8. Ингибирование секреции гистамина из мастоцитов человека гибридным белком из Примера 4
Эксперимент осуществляли как описано выше для гибридного белка из Примера 1 (см. Пример 6), за исключением того, что использовали гибридный белок из Примера 4.
Эксперимент осуществляли как описано выше для гибридного белка из Примера 1 (см. Пример 6), за исключением того, что использовали гибридный белок из Примера 4.
Получили следующие результаты: в необработанных клетках секретировалось 42% клеточного гистамина, тогда как в клетках, которые были обработаны гибридным белком, секретировалось только 7% гистамина.
Пример 9. Ингибирование секреции гистамина из мастоцитов человека гибридным белком из Примера 5
Эксперимент осуществляли как описано выше для гибридного белка из Примера 1 (см. Пример 6), за исключением того, что использовали гибридный белок из Примера 5.
Эксперимент осуществляли как описано выше для гибридного белка из Примера 1 (см. Пример 6), за исключением того, что использовали гибридный белок из Примера 5.
Получили следующие результаты: в необработанных клетках секретировалось 46% клеточного гистамина, тогда как в клетках, которые были обработаны гибридным белком, секретировалось только 8% гистамина.
Claims (5)
1. Гибридный белок, содержащий (I) белок, по существу, известный, связывающийся с мастоцитами и/или базофилами и/или поглощаемый этими клетками, по существу, известным образом, (II) протеазу, по существу, известную, расщепляющую один или несколько белков аппарата секреции мастоцитов и/или базофилов, или состоящий из них.
2. Гибридный белок, содержащий (I) белок, связывающийся с мастоцитами и/или базофилами и/или поглощаемый этими клетками, причем этот белок (I) выбран из группы, состоящей из иммуноглобулина Е (IgE), фрагмента IgE, в частности Fc-фрагмента IgE, антитела против IgE-рецептора мастоцитов и/или базофилов, фрагмента антитела против IgE-рецептора мастоцитов и/или базофилов, в частности Fab-фрагмента, антитела против мастоцит-специфического калиевого канала и неактивного, но связывающего мастоцит-дегранулирующего (MCD) пептида, и (II) протеазу, в частности протеазу, по существу, известную, расщепляющую один или несколько белков аппарата секреции мастоцитов и/или базофилов, или состоящий из них.
3. Гибридный белок, содержащий (I) белок, в частности белок, по существу, известный, связывающийся с мастоцитами и/или базофилами и/или поглощаемый этими клетками, в частности, по существу, известным образом, и (II) протеазу, расщепляющую один или несколько белков аппарата секреции мастоцитов и/или базофилов, причем эта протеаза (II) выбрана из группы, состоящей из легкой цепи токсина Clostridium botulinum, в частности токсинов типа А, В, С1, D, Е, F и G, каталитически активного фрагмента легкой цепи токсина Clostridium botulinum, в частности токсина типа А, В, Сl, D, Е, F и G, легкой цепи столбнячного токсина (ТеNТ), каталитически активного фрагмента легкой цепи столбнячного токсина, протеазы иммуноглобулина A (IgA) Neisseria gonorrhoeae и каталитического домена протеазы IgA Neisseria gonorrhoeae, или состоящий из них.
4. Гибридный белок по п.2 или 3, отличающийся тем, что белок (I) выбран из группы в соответствии с п.2, а протеаза (II) выбрана из группы в соответствии с п.3.
5. Гибридный белок по п. 4, отличающийся тем, что N-концевой участок тяжелой цепи соответствующего токсина (Hn-фрагмент) или его фрагмент может представлять собой часть гибридного белка в дополнение к легкой цепи токсина Clostridium botulinum или столбнячного токсина.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19821285 | 1998-05-13 | ||
| DE19821285.2 | 1998-05-13 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2000131217A RU2000131217A (ru) | 2003-01-27 |
| RU2214420C2 true RU2214420C2 (ru) | 2003-10-20 |
Family
ID=7867540
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000131217/04A RU2214420C2 (ru) | 1998-05-13 | 1999-05-12 | Гибридный белок для ингибирования дегрануляции мастоцитов и его применение |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1084146B1 (ru) |
| JP (1) | JP4549533B2 (ru) |
| KR (1) | KR100580541B1 (ru) |
| CN (1) | CN1241945C (ru) |
| AT (1) | ATE227739T1 (ru) |
| AU (1) | AU755513B2 (ru) |
| BR (1) | BR9910359A (ru) |
| CA (1) | CA2331274C (ru) |
| CU (1) | CU22997A3 (ru) |
| CZ (1) | CZ294376B6 (ru) |
| DE (1) | DE59903410D1 (ru) |
| DK (1) | DK1084146T3 (ru) |
| ES (1) | ES2187200T3 (ru) |
| HU (1) | HUP0103601A3 (ru) |
| IL (2) | IL139478A0 (ru) |
| MX (1) | MXPA00011148A (ru) |
| NO (1) | NO328361B1 (ru) |
| PL (1) | PL201879B1 (ru) |
| PT (1) | PT1084146E (ru) |
| RU (1) | RU2214420C2 (ru) |
| WO (1) | WO1999058571A2 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2255761C1 (ru) * | 2004-07-01 | 2005-07-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Токсины и сопутствующие продукты" | Препарат для лечения мышечных дистоний из токсина культуры clostridium botulinum и способ его получения |
| RU2525194C2 (ru) * | 2008-07-31 | 2014-08-10 | Тотал Маркетинг Сёрвисез | Конструкции и способы для продуцирования и секреции ферментов, расщепляющих клеточную стенку |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9721189D0 (en) | 1997-10-08 | 1997-12-03 | Speywood Lab The Limited | Analgesic conjugates |
| GB9818548D0 (en) | 1998-08-25 | 1998-10-21 | Microbiological Res Authority | Treatment of mucas hypersecretion |
| US20040071736A1 (en) | 1998-08-25 | 2004-04-15 | Health Protection Agency | Methods and compounds for the treatment of mucus hypersecretion |
| US20080038274A1 (en) | 1999-09-23 | 2008-02-14 | Foster Keith A | Inhibition of secretion from non-neuronal cells |
| GB9922554D0 (en) * | 1999-09-23 | 1999-11-24 | Microbiological Res Authority | Inhibition of secretion from non-neuronal cells |
| EP1365800B1 (en) * | 2000-06-28 | 2013-03-06 | Ira Sanders | Methods for using tetanus toxin for benificial purposes in animals (mammals) |
| GB0321344D0 (en) * | 2003-09-11 | 2003-10-15 | Health Prot Agency | Re-targeted toxin conjugates |
| GB0426394D0 (en) | 2004-12-01 | 2005-01-05 | Health Prot Agency | Fusion proteins |
| KR100845278B1 (ko) * | 2006-08-04 | 2008-07-09 | 포항공과대학교 산학협력단 | 비만 세포의 활성을 유도하는 펩타이드 및 이를 포함하는면역조절제 |
| CN107446053A (zh) | 2008-06-12 | 2017-12-08 | 益普生生物创新有限公司 | 癌症的抑制 |
| EP2719392B1 (en) | 2008-06-12 | 2019-07-24 | Ipsen Bioinnovation Limited | Fusion proteins for use in the treatment of acromegaly |
| GB0820970D0 (en) | 2008-11-17 | 2008-12-24 | Syntaxin Ltd | Suppression of cancer |
| CN102241774B (zh) * | 2010-05-27 | 2014-05-14 | 四川大学 | 重组IgE-Fc-抗EGFR单链抗体融合蛋白及其制备方法和用途 |
| GB201108108D0 (en) | 2011-05-16 | 2011-06-29 | Syntaxin Ltd | Therapeutic fusion proteins |
| US20140056870A1 (en) | 2012-08-27 | 2014-02-27 | Allergan, Inc. | Fusion proteins |
| GB201312317D0 (en) | 2013-07-09 | 2013-08-21 | Syntaxin Ltd | Cationic neurotoxins |
| DK3242884T3 (da) | 2015-01-09 | 2021-04-19 | Ipsen Bioinnovation Ltd | Kationiske neurotoksiner |
| GB201517450D0 (en) | 2015-10-02 | 2015-11-18 | Ipsen Biopharm Ltd | Method |
| EP3263710A1 (en) | 2016-07-01 | 2018-01-03 | Ipsen Biopharm Limited | Production of activated clostridial neurotoxins |
| GB201815817D0 (en) | 2018-09-28 | 2018-11-14 | Ispen Biopharm Ltd | Clostridial neurotoxins comprising and exogenous activation loop |
| GB201900621D0 (en) | 2019-01-16 | 2019-03-06 | Ipsen Biopharm Ltd | Labelled polypeptides |
| GB201914034D0 (en) | 2019-09-30 | 2019-11-13 | Ipsen Biopharm Ltd | Treatment of neurological disorders |
| GB202100566D0 (en) | 2021-01-15 | 2021-03-03 | Ipsen Biopharm Ltd | Treatment of brain damage |
| GB202104294D0 (en) | 2021-03-26 | 2021-05-12 | Ipsen Biopharm Ltd | Clostridial neurotoxins comprising an exogenous activation loop |
| KR20230155007A (ko) | 2021-03-30 | 2023-11-09 | 입센 바이오팜 리미티드 | 통증 ＆ 염증성 장애의 치료를 위한 촉매 불활성 클로스트리디움 신경독소 |
| WO2022208091A1 (en) | 2021-03-30 | 2022-10-06 | Ipsen Biopharm Limited | Treatment of pain & inflammatory disorders |
| GB202116795D0 (en) | 2021-11-22 | 2022-01-05 | Ipsen Biopharm Ltd | Treatment of visceral pain |
| PL244930B1 (pl) | 2021-12-08 | 2024-04-02 | Gdanski Univ Medyczny | Zastosowanie 2-metoksyestradiolu w leczeniu mastocytozy |
| GB202214229D0 (en) | 2022-09-28 | 2022-11-09 | Ipsen Biopharm Ltd | Clostridial neurotoxins comprising an activating endosomal protease cleavage site |
| GB202214232D0 (en) | 2022-09-28 | 2022-11-09 | Ispen Biopharm Ltd | Clostridial neurotoxins comprising an activating exogenous protease cleavage site |
| GB202318884D0 (en) | 2023-12-11 | 2024-01-24 | Ipsen Biopharm Ltd | Formulation |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1237972A1 (ru) * | 1983-01-07 | 1986-06-15 | Киевский научно-исследовательский институт отоларингологии им.проф.А.И.Коломийченко | Способ определени активности ингибитора дегранул ции мастоцитов |
| US4902495A (en) * | 1986-07-22 | 1990-02-20 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | IgE Fc directed delivery system |
| WO1994021300A2 (en) * | 1993-03-19 | 1994-09-29 | Speywood Lab Ltd | Novel agent for controlling cell activity |
| RU2030914C1 (ru) * | 1992-09-15 | 1995-03-20 | Людмила Михайловна Огородова | Средство, предупреждающее дегрануляцию тучных клеток |
| WO1997022364A1 (en) * | 1995-12-18 | 1997-06-26 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | FCε-PE CHIMERIC PROTEIN FOR TARGETED TREATMENT OF ALLERGY RESPONSES, A METHOD FOR ITS PRODUCTION AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING THE SAME |
-
1999
- 1999-05-12 IL IL13947899A patent/IL139478A0/xx active IP Right Grant
- 1999-05-12 AT AT99950347T patent/ATE227739T1/de active
- 1999-05-12 AU AU42605/99A patent/AU755513B2/en not_active Ceased
- 1999-05-12 HU HU0103601A patent/HUP0103601A3/hu unknown
- 1999-05-12 EP EP99950347A patent/EP1084146B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-05-12 RU RU2000131217/04A patent/RU2214420C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-05-12 CZ CZ20004161A patent/CZ294376B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-05-12 DE DE59903410T patent/DE59903410D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-05-12 ES ES99950347T patent/ES2187200T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-05-12 MX MXPA00011148A patent/MXPA00011148A/es not_active IP Right Cessation
- 1999-05-12 PL PL344752A patent/PL201879B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1999-05-12 BR BR9910359-1A patent/BR9910359A/pt not_active Application Discontinuation
- 1999-05-12 CN CNB998060615A patent/CN1241945C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-05-12 PT PT99950347T patent/PT1084146E/pt unknown
- 1999-05-12 CA CA2331274A patent/CA2331274C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-05-12 KR KR1020007011584A patent/KR100580541B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1999-05-12 DK DK99950347T patent/DK1084146T3/da active
- 1999-05-12 WO PCT/EP1999/003272 patent/WO1999058571A2/de not_active Ceased
- 1999-05-12 JP JP2000548373A patent/JP4549533B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-10-30 CU CU20000234A patent/CU22997A3/es not_active IP Right Cessation
- 2000-11-05 IL IL139478A patent/IL139478A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-11-08 NO NO20005637A patent/NO328361B1/no not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1237972A1 (ru) * | 1983-01-07 | 1986-06-15 | Киевский научно-исследовательский институт отоларингологии им.проф.А.И.Коломийченко | Способ определени активности ингибитора дегранул ции мастоцитов |
| US4902495A (en) * | 1986-07-22 | 1990-02-20 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | IgE Fc directed delivery system |
| RU2030914C1 (ru) * | 1992-09-15 | 1995-03-20 | Людмила Михайловна Огородова | Средство, предупреждающее дегрануляцию тучных клеток |
| WO1994021300A2 (en) * | 1993-03-19 | 1994-09-29 | Speywood Lab Ltd | Novel agent for controlling cell activity |
| WO1997022364A1 (en) * | 1995-12-18 | 1997-06-26 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | FCε-PE CHIMERIC PROTEIN FOR TARGETED TREATMENT OF ALLERGY RESPONSES, A METHOD FOR ITS PRODUCTION AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING THE SAME |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2255761C1 (ru) * | 2004-07-01 | 2005-07-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Токсины и сопутствующие продукты" | Препарат для лечения мышечных дистоний из токсина культуры clostridium botulinum и способ его получения |
| RU2525194C2 (ru) * | 2008-07-31 | 2014-08-10 | Тотал Маркетинг Сёрвисез | Конструкции и способы для продуцирования и секреции ферментов, расщепляющих клеточную стенку |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL201879B1 (pl) | 2009-05-29 |
| EP1084146A2 (de) | 2001-03-21 |
| NO328361B1 (no) | 2010-02-01 |
| WO1999058571A2 (de) | 1999-11-18 |
| CA2331274C (en) | 2010-04-06 |
| PL344752A1 (en) | 2001-11-19 |
| HK1036994A1 (en) | 2002-01-25 |
| JP4549533B2 (ja) | 2010-09-22 |
| NO20005637L (no) | 2000-11-08 |
| CA2331274A1 (en) | 1999-11-18 |
| CZ294376B6 (cs) | 2004-12-15 |
| IL139478A (en) | 2008-06-05 |
| DK1084146T3 (da) | 2003-02-03 |
| NO20005637D0 (no) | 2000-11-08 |
| AU755513B2 (en) | 2002-12-12 |
| HUP0103601A3 (en) | 2004-06-28 |
| CU22997A3 (es) | 2004-10-12 |
| CZ20004161A3 (cs) | 2001-04-11 |
| PT1084146E (pt) | 2003-02-28 |
| ES2187200T3 (es) | 2003-05-16 |
| IL139478A0 (en) | 2001-11-25 |
| CN1300295A (zh) | 2001-06-20 |
| WO1999058571A3 (de) | 2000-02-03 |
| EP1084146B1 (de) | 2002-11-13 |
| DE59903410D1 (de) | 2002-12-19 |
| AU4260599A (en) | 1999-11-29 |
| MXPA00011148A (es) | 2003-04-22 |
| HUP0103601A2 (hu) | 2002-01-28 |
| CN1241945C (zh) | 2006-02-15 |
| BR9910359A (pt) | 2001-01-09 |
| KR100580541B1 (ko) | 2006-05-16 |
| JP2002514659A (ja) | 2002-05-21 |
| KR20010042825A (ko) | 2001-05-25 |
| ATE227739T1 (de) | 2002-11-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2214420C2 (ru) | Гибридный белок для ингибирования дегрануляции мастоцитов и его применение | |
| US7456272B2 (en) | Neurotoxins with enhanced target specificity | |
| JP5357425B2 (ja) | 神経細胞に化合物を導入するために用いられる輸送タンパク質 | |
| CA2593520C (en) | Recombinant expression of proteins in a disulfide-bridged, two-chain form | |
| KR101806567B1 (ko) | 매우 순수한 신경독을 제조하기 위한 수단 및 방법 | |
| CN108350039A (zh) | 用于治疗疼痛的组合物和方法 | |
| US6822076B2 (en) | Hybrid protein for inhibiting the degranulation of mastocytes and the use thereof | |
| US6545126B1 (en) | Chimeric toxins | |
| Stábeli et al. | Antibodies to a fragment of the Bothrops moojeni L-amino acid oxidase cross-react with snake venom components unrelated to the parent protein | |
| JPH04504664A (ja) | 化学反応速度を増進する自己抗体 | |
| HK1036994B (en) | Hybrid protein for inhibiting the degranulation of mastocytes and the use thereof | |
| ES2705485T3 (es) | Medios y métodos para fabricar una neurotoxina altamente pura | |
| AU2002228684A1 (en) | Neurotoxins with enhanced target specificity |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC4A | Invention patent assignment |
Effective date: 20100920 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20120513 |