RU2202368C2

RU2202368C2 - Allergen for diagnosis of sensitivity to mosquito sting

Info

Publication number: RU2202368C2
Application number: RU2001102525A
Authority: RU
Inventors: В.Н. Федосеева; Г.А. Мухтеремова
Original assignee: ООО "Медалл"
Priority date: 2001-01-29
Filing date: 2001-01-29
Publication date: 2003-04-20

Abstract

FIELD: medicine, immunology. SUBSTANCE: invention relates to preparation used for diagnosis of sensitivity to mosquito stings. Allergen represents buffered an aqueous-saline solution of protein- -polysaccharide complexes with activity 5000-2000 PNU/1 ml, pH is 6.6-7.5, prepared from mosquito of species Aedes aegypti by extraction with buffer solution at pH 8.2. Invention provides the development of highly purified allergen for specific diagnosis of allergy to mosquito stings. EFFECT: valuable method of allergy diagnosis. 2 tbl

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и касается препарата для диагностики чувствительности к укусам комаров. The invention relates to medicine, namely to immunology, and relates to a drug for the diagnosis of sensitivity to mosquito bites.

Известен аллерген, предназначенный для диагностики чувствительности к укусам комаров, выделенный из комаров вида Aedes aegypti, полученный путем экстракции насекомых щелочным буфером (карбонатным) при рН 8,2. Аллерген представляет собой прозрачную светло-коричневую жидкость, рН 7,2, содержащую 10000 PNU в 1 мл раствора (Адо А.Д. и др "Аллергия к комарам", Ж. Иммунология 1988, 6, стр. 48). Однако данный аллерген не является очищенным и содержит балластные вещества, так как при его получении не использованы центрифугирование и хроматографическое разделение экстракта, что приводит к побочными эффектам при его применении в клинике. Для экстракции известного аллергена использовали карбонатный буфер, который не позволяет получить максимальный выход аллергенного белка. Known allergen intended for the diagnosis of sensitivity to mosquito bites, isolated from mosquitoes of the species Aedes aegypti, obtained by extraction of insects with alkaline buffer (carbonate) at pH 8.2. The allergen is a clear, light brown liquid, pH 7.2, containing 10,000 PNU in 1 ml of solution (Ado A.D. et al. "Mosquito Allergy", J. Immunology 1988, 6, p. 48). However, this allergen is not purified and contains ballast substances, since centrifugation and chromatographic separation of the extract are not used in its preparation, which leads to side effects when used in a clinic. To extract the known allergen, a carbonate buffer was used, which does not allow to obtain the maximum yield of allergenic protein.

Задачей настоящего изобретения является создание высокоочищенного аллергена без риска наведения реакций анафилактического типа при его применении в условиях специфической диагностики аллергии к укусам комаров. The present invention is the creation of a highly purified allergen without the risk of inducing anaphylactic type reactions when it is used in the conditions of specific diagnosis of allergies to mosquito bites.

Для решения поставленной задачи предложен аллерген для диагностики чувствительности к укусам комаров, выделенный из комаров вида Aedes aegypti экстракцией буферным раствором при рН 8,2, представляющий собой забуференный водно-солевой раствор белково-полисахаридных комплексов с активностью 5000-20000 PNU и имеющий рН 6,6-7,5. To solve this problem, an allergen is proposed for diagnosing sensitivity to mosquito bites, isolated from mosquitoes of the species Aedes aegypti by extraction with a buffer solution at pH 8.2, which is a buffered water-salt solution of protein-polysaccharide complexes with an activity of 5000-20000 PNU and having a pH of 6, 6-7.5.

Аллерген выделен из сухих обезжиренных эфиром комаров вида Aedes aegypti путем экстракции щелочным буферным раствором при рН 8,0-8,2. Полученный экстракт центрифугируют при 6000 об/мин в течение 30 минут на рефрижераторной центрифуге при температуре 2-8^oС. После центрифугирования надосадочную жидкость аллергенного экстракта отбирают. В качестве консерванта используют фенол. Аллерген представляет собой прозрачную жидкость от светло-желтого до коричневого цвета, без посторонних включений осадка. 1 мл аллергена содержит белкового азота 10000±2000 PNU/ мл, содержание фенола (0,3±0,1)%.The allergen was isolated from dry ether-free mosquitoes of the species Aedes aegypti by extraction with an alkaline buffer solution at pH 8.0-8.2. The extract obtained is centrifuged at 6000 rpm for 30 minutes in a refrigerator centrifuge at a temperature of 2-8 ^o C. After centrifugation, the supernatant of the allergenic extract is taken. Phenol is used as a preservative. The allergen is a clear liquid from light yellow to brown in color, without foreign matter sediment. 1 ml of allergen contains protein nitrogen 10000 ± 2000 PNU / ml, phenol content (0.3 ± 0.1)%.

Иммунобиологические свойства. Аллерген вызывает положительную местную реакцию в виде волдыря и гиперемии при постановке кожных проб у лиц, имеющих повышенную чувствительность на укусы комаров. Immunobiological properties. The allergen causes a positive local reaction in the form of a blister and hyperemia during the staging of skin samples in individuals with increased sensitivity to mosquito bites.

Аллерген предназначен для специфической диагностики повышенной чувствительности на укусы комаров. Для специфической диагностики используют кожный тест методом скарификации. Аллерген наносят на кожу в объеме 0,1 мл (одна капля) на среднюю треть ладонной поверхности предплечья, дезинфицированную 70%-ным этиловым спиртом. Одновременно с аллергеном в качестве контроля наносят на кожу по одной капле тест-контрольную жидкость (негативный контроль) и 0,01%-ный раствор гистамина (позитивный контроль). Расстояние между пробами 30-40 мм. Затем стерильными скарификаторами отдельными для каждого препарата и для каждого больного делают царапины через капли длиной 5 мм. The allergen is intended for specific diagnosis of hypersensitivity to mosquito bites. For specific diagnosis, a skin test is used by the method of scarification. An allergen is applied to the skin in a volume of 0.1 ml (one drop) on the middle third of the palmar surface of the forearm, disinfected with 70% ethyl alcohol. Simultaneously with the allergen, one drop of test control liquid (negative control) and a 0.01% histamine solution (positive control) are applied to the skin as a control. The distance between the samples is 30-40 mm. Then, sterile scarifiers are separate for each drug and for each patient, scratches are made through drops 5 mm long.

0,01%-ный раствор гистамина готовят путем разведения гистамина-дигидрохлорида (1 часть) 0,9%-ным раствором натрия хлорида изотонического для инъекций (9 частей). A histamine 0.01% solution is prepared by diluting histamine dihydrochloride (1 part) with 0.9% isotonic sodium chloride solution for injection (9 parts).

Реакция кожи на тест-контрольную жидкость должна быть отрицательной. При положительной реакции на тест-контрольную жидкость реакцию на аллерген не учитывают. Реакция кожи на гистамин должна быть положительной. При отрицательной реакции на гистамин реакцию на аллерген не учитывают. Антигистаминные препараты отменяются за 2-3 дня до кожного тестирования. При сомнительных результатах кожную пробу можно повторить через 2-3 дня. The skin reaction to the test control fluid should be negative. With a positive reaction to the test control fluid, the reaction to the allergen is not taken into account. The skin's response to histamine should be positive. With a negative reaction to histamine, the reaction to the allergen is not taken into account. Antihistamines are canceled 2-3 days before skin testing. In case of doubtful results, a skin test can be repeated after 2-3 days.

На введение аллергена на коже возникает гиперемия и волдырь (папула) через 20 минут (реакция немедленного типа), и гиперемия и инфильтрат через 24 часа (реакция замедленного типа), которые регистрируются согласно схеме (см. табл. 1 и 2). On the introduction of an allergen on the skin, hyperemia and blister (papule) occur after 20 minutes (immediate type reaction), and hyperemia and infiltrate after 24 hours (delayed type reaction), which are recorded according to the scheme (see Tables 1 and 2).

Аллерген выпускают в комплекте, включающем 1 флакон с аллергеном (4,5 мл) и 1 флакон с тест-контрольной жидкостью (4,5 мл). Срок годности аллергена 2 года. Хранят аллерген в темном помещении с относительной влажностью не более 60%, при температуре 6±2^oС.The allergen is produced in a kit that includes 1 bottle with an allergen (4.5 ml) and 1 bottle with a test control liquid (4.5 ml). The allergen has a shelf life of 2 years. The allergen is stored in a dark room with a relative humidity of not more than 60%, at a temperature of 6 ± 2 ^o C.

Аллерген для диагностики чувствительности к укусам комаров разрешен к применению Министерством здравоохранения РФ. An allergen for the diagnosis of sensitivity to mosquito bites is approved for use by the Ministry of Health of the Russian Federation.

Claims

An allergen for diagnosing sensitivity to mosquito bites, isolated from Aedes aegypti mosquitoes by extraction with a buffer solution at pH 8.2, characterized in that the allergen is a buffered water-salt solution of protein-polysaccharide complexes with an activity of 5000-2000 PNU in 1 ml, having pH 6.6-7.5.