RU2298560C2 - Конъюгаты белка и производного полиэтиленгликоля, фармацевтическая композиция, способ борьбы с вирусной инфекцией - Google Patents
Конъюгаты белка и производного полиэтиленгликоля, фармацевтическая композиция, способ борьбы с вирусной инфекцией Download PDFInfo
- Publication number
- RU2298560C2 RU2298560C2 RU2004113379/04A RU2004113379A RU2298560C2 RU 2298560 C2 RU2298560 C2 RU 2298560C2 RU 2004113379/04 A RU2004113379/04 A RU 2004113379/04A RU 2004113379 A RU2004113379 A RU 2004113379A RU 2298560 C2 RU2298560 C2 RU 2298560C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- conjugates
- protein
- polyethylene glycol
- interferon
- conjugate
- Prior art date
Links
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 title claims abstract description 28
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 title claims abstract description 5
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 title claims abstract description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 4
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 title description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 102100040018 Interferon alpha-2 Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 108010079944 Interferon-alpha2b Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 abstract 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 21
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 21
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 18
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-triazine Chemical compound C1=CN=NN=C1 JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100040019 Interferon alpha-1/13 Human genes 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N cyanuric chloride Chemical compound ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 101000959820 Homo sapiens Interferon alpha-1/13 Proteins 0.000 description 2
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 1
- 208000006154 Chronic hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- NHWZQIYTQZEOSJ-UHFFFAOYSA-N carbonic acid;phosphoric acid Chemical compound OC(O)=O.OP(O)(O)=O NHWZQIYTQZEOSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 1
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000002498 deadly effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- KQSSATDQUYCRGS-UHFFFAOYSA-N methyl glycinate Chemical compound COC(=O)CN KQSSATDQUYCRGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 1
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 150000003918 triazines Chemical class 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 208000005925 vesicular stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Изобретение относится к новым физиологически активным конъюгатам белка, которые могут быть использованы в медицине. Предложенный конъюгат образован молекулой белка и полиэтиленгликоля и имеет следующую формулу:
Description
Изобретение относится к новым ПЭГ-производным белков, в частности к ПЭГ-производным интерферона, которые могут быть использованы в медицине, например при лечении вирусных заболеваний.
Лечение нативными препаратами пептидной структуры имеет ряд существенных недостатков: белки быстро гидролизуются в гастроинтестинальном отделе пищеварительного тракта и поэтому используются, как правило, парентерально. Относительно короткий период полураспада таких препаратов в организме пациента препятствует достижению их максимального терапевтического воздействия и предусматривает их многократное использование. Еще одним важным негативным фактором, ограничивающим применение нативных или рекомбинантных белковых препаратов, является их высокая иммуногенность и связанные с ней сенситивные реакции. Принципиальное изменение структуры их молекулы либо нивелирует их биологические свойства, либо влечет за собой увеличение побочных эффектов, связанных с их применением. Одним из путей повышения эффективности лекарственных препаратов белковой структуры является химическая модификация их молекулы, состоящая не в собственно изменении их структуры, а в физико-химической трансформации, достигаемой соединением нативной молекулы с полиэтиленгликолем (ПЭГ). Данный процесс получил название «пегилирование». Подобная химическая модификация фармакологических препаратов пептидной структуры направлена на улучшение их переносимости, снижение иммуногенности, повышение периода их полужизни, и как следствие всего перечисленного, на значительное увеличение эффективности лечения и повышение качества жизни в процессе его проведения.
ПЭГ в качестве потенциального объекта - модификатора веществ пептидной структуры привлек внимание исследователей еще в начале 1970х годов. Молекулы ПЭГ - это водорастворимые полимеры окиси этилена с двумя терминальными гидроксильными группами. Молекулярный вес молекул ПЭГ может колебаться в пределах 300-4000 Дальтон, а выстроенные в цепи макромолекулы ПЭГ могут формировать как разветвленную, так и линейную стереохимию. Именно масса ПЭГ и его стереохимическая структура, как правило, определяют свойства модифицированного пептидного субстрата.
Гидрофильность модифицированных ПЭГ-молекул формирует принципиально новые физико-химические свойства измененного пептида. Высокое содержание атомов водорода даже в одной молекуле ПЭГ позволяет ей связываться с 2-3 молекулами воды. Подобный эффект влечет за собой формирование «водного облака» вокруг модифицированной молекулы «ПЭГ-белок». Этот своеобразный «щит» воды вокруг модифицированной молекулы с одной стороны значительно повышает растворимость и биодоступность препарата, с другой - защищает молекулу от других белков (нейтрализующие антитела, комплемент). Таким образом ПЭГ-модифицированные пептиды значительно более защищены от опсонизации и активного фаго- и эндоцитоза клеточных структур макроорганизма.
Изменения фармакокинетических и фармакодинамических свойств ПЭГ-модифицированных пептидов зависят от массы молекулы ПЭГ, специфических мест связи с белком, строения молекулы модифицирующего агента.
Интерфероны - это группа биологически активных белков или гликопротеидов, синтезируемых клеткой в процессе защитной реакции на чужеродные агенты - вирусную инфекцию, антигенное или митогенное воздействие. ИФН не обладают специфичностью в отношении вирусов и действуют угнетающе на репродукцию различных вирусов. Важны также другие эффекты ИФН, интерес к ним обусловлен высокой эффективностью применения препаратов интерферона при таких патологических состояниях, как и онкологические заболевания, болезни крови, а также неуклонным ростом числа больных, страдающих вышеперечисленными заболеваниями.
Пегилированный интерферон представляет собой конъюгат молекулы интерферона и ковалентно прикрепленного к ней участка молекулы полиэтиленгликоля, который защищает молекулу интерферона от ферментного разрушения и обеспечивает препарату ряд других преимуществ.
Известны, в частности, пэгилированные производные интерферона, полученные присоединением молекулы разветвленного полиэтиленгликоля к интерферону α-2а (Патент РФ №2180595, 20.03.2002). Эти пэгилированные производные характеризуются более продолжительным временем полужизни в сыворотке крови по сравнению с немодифицированным интерфероном. Из источника Kozlowski A., et al. "Development of Pegylated interferons for the treatment of Chronic Hepatitis C", BioDrugs, 2001, 15(7), известны конъюгаты интерферонов альфа и производного полиэтиленгликоля, в которых молекулярная масса звеньев полиэтиленгликоля составляет 30 кДа и меньше.
Задачей, на решение которой направлено изобретение, является создание новых конъюгированных производных интерферона, обладающих повышенной стабильностью по сравнению с известными аналогами.
Для решения поставленной задачи в рамках настоящего изобретения были синтезированы новые ПЭГ-производные интерферона. В ходе проведенных экспериментов было неожиданно обнаружено, что эти пэгилированные производные обладают значительно более длительным сроком персистирования в организме, чем известные. Данное свойство этих соединений позволит поддерживать постоянную эффективную концентрацию препаратов на их основе в крови при меньшей кратности введения, что позволит повысить эффективность проводимой терапии и снизит затраты на лечение.
ПЭГ-производные белков согласно настоящему изобретению представляют собой конъюгат белка и производного полиэтиленгликоля формулы
где белок представляет собой интерферон α-2b, a n и n1 имеют такие значения, что средняя молекулярная масса звеньев полиэтиленгликоля составляет от приблизитеольно 7500 Да до приблизительно 35000 Да. Предпочтительным вариантом является конъюгат, в котором n=n1=120, a молекулярная масса звеньев полиэтиленгликоля составляет приблизительно 10000 Да. Изобретение также относится к фармацевтической композиции, обладающей противовирусной активностью, содержащей указанный коньюгат, и терапевтически инертный носитель; и к способу борьбы с вирусной инфекцией, включающий введение в организм указанного ПЭГ-конъюгата.
График (см. чертеж) отражает уровень биологически активного интерферона в сыворотке крови в условных единицах активности. Из графика видно, что заявленные соединения обладают значительно более высокой стабильностью по сравнению с другими производными - в течение 14 дней наблюдения его выведение из организма не отмечалось. На графике использованы следующие обозначения:
Соединение 1 - конъюгат по изобретению,
Соединение 2 - конъюгат 2,4-бис-(метоксиполиэтилен)триазина и интерферона α-2а,
Соединение 3 - конъюгат 2,4-бис-(метоксиполиэтилен)триазина и интерферона α-1,
Соединение 4 - конъюгат 2,4-бис-(метоксиполиэтилен)триазина и интерферона β-1,
Соединение 5 - конъюгат 2,4-бис-(метоксиполиэтилен)триазина и интерферона α-4.
Известный аналог - конъюгат полиэтиленгликоля и интерферона α-2а.
Пример 1. Получение ПЭГ-производных
Вначале получают полиэтиленоксид многостадийным или одностадийным синтезом. В качестве стартового вещества использовали олигоэтиленоксид с молекулярной массой 250 (средняя степень полимеризации 4,5), полученный при взаимодействии окиси этилена с метилатом натрия. При одностадийном синтезе к 100 г стартового вещества постепенно в течение 12 дней при повышении температуры от 120 до 170°С под давлением 4-5 атм добавляли 2500 г окиси этилена. Многостадийный синтез проводят следующим образом:
1 стадия. К 100 г стартового вещества добавляют 700 г окиси этилена. Реакцию проводят в стальном реакторе с мешалкой в атмосфере азота под давлением 4 атм при температуре 120°С в течение 8 часов.
2 стадия. К 100 г продукта, полученного на стадии 1, добавляют 700 г окиси этилена. Реакцию проводят в тех же условиях в течение 9 часов.
3 стадия. К 170 г продукта, полученного на стадии 2, добавляют 330 г окиси этилена. Реакцию проводят при температуре 140°С в течение 9 часов.
4 стадия. К 200 г продукта, полученного на стадии 3, добавляют 330 г окиси этилена. Реакцию проводят при температуре 140°С в течение 9 часов.
5 стадия. К 400 г продукта, полученного на стадии 4, добавляют 120 г окиси этилена. Реакцию проводят при температуре 160°С в течение 9 часов.
6 стадия. К 210 г продукта, полученного на стадии 5, добавляют 340 г окиси этилена. Реакцию проводят при температуре 170°С в течение 9 часов.
Синтез полиэтиленоксидов, разветвленных с помощью цианурхлорида осуществляют в одну стадию в растворе 1,2-дихлорэтана путем взаимодействия очищенного методом возгонки цианурхлорида с NaO-полиэтиленоксидом с различной длиной цепи. При этом проводят взаимодействие между 15% раствором полиэтиленоксида с цианурхлоридом в присутствии триэтиламина (25% моль от общего количества концевых групп)
Реакцию проводят при 80°С в течение часа. Полученный полимер высаживают в 4-х кратный избыток серного эфира, а затем трехкратно промывают им же.
Таким образом получают триазиновые производные полиэтиленоксида формулы:
Пример 2. ПЭГилирование интерферона-α-2b
Возможность использования этих соединений для модификации белков продемонстрирована на примере интерферона. Интерферон-α-2в фирмы Hydrola Ltd. 20 мг препарата растворяют в 4 мл воды. Аликвоты по 1 мл (5 мг) переносят в реакционные флаконы. Для модификации рН раствора доводят до 9.5 50 мМ фосфатно-карбонатным буфером. Реагенты добавляют 5 раз в 10-кратном молярном избытке с интервалами в 6-12 часов. За ходом реакции следят с помощью проведения гель-фильтрационной ВЭЖХ. Спустя 60 часов реакцию останавливают добавлением 50 мМ метилового эфира глицина. Физико-химические характеристики полученного конъюгата: молекулярная масса 10000 Да, рН - 6,0, прозрачность 2,3 FTU, осмоляльность 375 мОсм/кг (осмометр Vogel ОМ 802), бактериальные эндотоксины - 0,15 EU/мкг, чистота (обращено-фазовая ВЭЖХ) - 98% площади.
Пример 3. Антивирусная активность конъюгатов интерферона-α-2b
Отбирают пробы по 2 мл следующей расчетной активности:
1) стандарт (исходный интерферон) - 25 мкг/мл (3.5×106)
2) конъюгат по изобретению - 24 мкг/мл (3.36×106)
Противовирусную активность проверяют стандартным методом в культуре клеток легких человека Л-68 против вирусного везикулярного стоматита.
Биологическое тестирование дало следующие результаты:
| Препарат | Биоактивность расчетная | Биоактивность определенная | Биоактивность приведенная | Биоактивность удельная | % сохранения активности |
| Стандарт | 3.5×106 | 2.7×106 | 3.5×106 | 1.4×108 | 100% |
| Конъюгат по изобретению | 3.36×106 | 2.2×105 | 2.9×105 | 0.09×108 | 6,4% |
Биоактивность приведенная - биоактивность определенная, умноженная на коэффициент, получаемый от деления расчетной активности стандарта на определенную активности стандарта. Приведенную биоактивность рассчитывают для определения уменьшения удельной активности интерферона в процессе модификации.
Таким образом, модифицированный интерферон-α-2b согласно данному изобретению сохраняет значительную антивирусную активность, подобную известному препарату, для которого таковая составляет 7% при удельной биоактивности 1.4×107.
Пример 4. Исследование фармакокинетики препаратов
Беспородным крысам внутривенно вводили следующие препараты:
Конъюгат по изобретению по 0,56 мл=13,5 мкг/крыса.
Известный аналог - пэгилированное производное интерферона (согласно RU 2180595) - по 0,1 мл=13,5 мкг/крыса
У каждой крысы через 1 час после введения из хвостовой вены брали по 0,5 мл крови. Для этого скальпелем отсекали 1,5-2 мм плоти хвоста. Кровь собирали в пробирки типа Eppendorf. Пробирки помещали в термостат и инкубировали 30 минут при 37°С. Стеклянным капилляром отделяли образовавшийся тромб от стенок пробирки. Пробирки помещали в холодильную камеру и инкубировали 4-6 часов при +4°С. Автоматической пипеткой отсасывали сыворотку и для удаления клеток крови центрифугировали при 5000 об/мин в течение 5 минут. Для стерилизации образцов сыворотки крови супернатанты переносили в системы фильтрации Ultrafree-MC (Amicon) и центифугировали при 2000 об/мин в течение 10 минут. Образцы для тестирования хранили при +4°С.
Результаты измерения уровня биологически активного интерферона за период 14 дней показаны на графике.
Пример 5. Токсичность полученных ПЭГ-производных
Эксперименты по изучению острой токсичности выполнялись на белых нелинейных мышах и крысах. Для исследования каждой дозы препарата использовались группы по 6 животных. При использовании интервала доз от 1 до 15 МЕ/кг летальных эффектов не наблюдалось. Учитывая то, что максимальная терапевтическая доза для человека составит около 0,03 МЕ/кг, препараты являются малотоксичными.
Пример 6. Противовирусная активность in vivo
Для определения противовирусной активности 20 мышам весом 10-12 г вводят 0,2 мл препарата 24 мкг/мл внутрибрюшинно за 24 и 2 ч до заражения смертельным вирусом. Животных наблюдают в течение 14 дней. Если процент выживаемости составляет более 60%, то тестируемый препарат считается активным. Для конъюгата по изобретению этот показатель составил 90%, что позволяет отнести его к высокоактивным.
Claims (4)
1. Конъюгаты белка и производного полиэтиленгликоля формулы
где белок представляет собой интерферон α-2b, a n и n1 имеют такие значения, что средняя молекулярная масса звеньев полиэтиленгликоля составляет от приблизительно 7500 Да до приблизительно 35000 Да.
2. Конъюгаты по п.1, где n=n1=120, а молекулярная масса звеньев полиэтиленгликоля составляет приблизительно 10000 Да.
3. Фармацевтическая композиция, обладающая противовирусной активностью, содержащая коньюгат по любому из пп.1 и 2 и терапевтически инертный носитель.
4. Способ борьбы с вирусной инфекцией, включающий введение в организм конъюгата по любому из пп.1 и 2 в эффективном количестве.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004113379/04A RU2298560C2 (ru) | 2004-04-30 | 2004-04-30 | Конъюгаты белка и производного полиэтиленгликоля, фармацевтическая композиция, способ борьбы с вирусной инфекцией |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004113379/04A RU2298560C2 (ru) | 2004-04-30 | 2004-04-30 | Конъюгаты белка и производного полиэтиленгликоля, фармацевтическая композиция, способ борьбы с вирусной инфекцией |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2004113379A RU2004113379A (ru) | 2005-10-20 |
| RU2298560C2 true RU2298560C2 (ru) | 2007-05-10 |
Family
ID=35863011
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004113379/04A RU2298560C2 (ru) | 2004-04-30 | 2004-04-30 | Конъюгаты белка и производного полиэтиленгликоля, фармацевтическая композиция, способ борьбы с вирусной инфекцией |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2298560C2 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2382048C1 (ru) * | 2008-12-25 | 2010-02-20 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Фармапарк" | Лекарственное средство на основе модифицированного интерферона альфа с пролонгированным терапевтическим действием |
| EA019319B1 (ru) * | 2011-06-06 | 2014-02-28 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Форт" (Ооо "Форт") | Способ получения ковалентного конъюгата полиэтиленгликоля с интерфероном и способ получения активированного пэг-агента |
| US9125880B2 (en) | 2002-12-26 | 2015-09-08 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates of interferon-beta with enhanced biological potency |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0332323A1 (en) * | 1988-03-10 | 1989-09-13 | Chisso Corporation | Carrier for affinity chromatography immobilized with antibodies and preparation thereof |
| US5225212A (en) * | 1989-10-20 | 1993-07-06 | Liposome Technology, Inc. | Microreservoir liposome composition and method |
| US5264209A (en) * | 1990-02-13 | 1993-11-23 | Kirin-Amgen, Inc. | Modified HIL-6 |
| US6576235B1 (en) * | 1998-08-06 | 2003-06-10 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | PEG-urate oxidase conjugates and use thereof |
| RU2222345C2 (ru) * | 2002-01-21 | 2004-01-27 | Волчек Игорь Анатольевич | Фармацевтическая композиция цитокинового и иммуномодулирующего действия |
-
2004
- 2004-04-30 RU RU2004113379/04A patent/RU2298560C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0332323A1 (en) * | 1988-03-10 | 1989-09-13 | Chisso Corporation | Carrier for affinity chromatography immobilized with antibodies and preparation thereof |
| US5225212A (en) * | 1989-10-20 | 1993-07-06 | Liposome Technology, Inc. | Microreservoir liposome composition and method |
| US5264209A (en) * | 1990-02-13 | 1993-11-23 | Kirin-Amgen, Inc. | Modified HIL-6 |
| US6576235B1 (en) * | 1998-08-06 | 2003-06-10 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | PEG-urate oxidase conjugates and use thereof |
| RU2222345C2 (ru) * | 2002-01-21 | 2004-01-27 | Волчек Игорь Анатольевич | Фармацевтическая композиция цитокинового и иммуномодулирующего действия |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Kozlowski A. et al. Development of pegylated interferons for the treatment of chronic hepatitis C. BioDrugs. 2001, 15 (7), 419-429. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9125880B2 (en) | 2002-12-26 | 2015-09-08 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates of interferon-beta with enhanced biological potency |
| RU2382048C1 (ru) * | 2008-12-25 | 2010-02-20 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Фармапарк" | Лекарственное средство на основе модифицированного интерферона альфа с пролонгированным терапевтическим действием |
| EA019319B1 (ru) * | 2011-06-06 | 2014-02-28 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Форт" (Ооо "Форт") | Способ получения ковалентного конъюгата полиэтиленгликоля с интерфероном и способ получения активированного пэг-агента |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2004113379A (ru) | 2005-10-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1088721C (zh) | 干扰素结合物 | |
| KR100396983B1 (ko) | 고반응성의 가지 달린 고분자 유도체 및 고분자와 단백질또는 펩타이드의 접합체 | |
| US6436386B1 (en) | Hydroxyapatite-targeting poly (ethylene glycol) and related polymers | |
| EA003789B1 (ru) | КОНЪЮГАТЫ ПОЛИОЛ-β-ИНТЕРФЕРОН | |
| EP2459226B1 (en) | Glycopolysialylation of proteins other than blood coagulation proteins | |
| US8784849B2 (en) | Hydroxyapatite-targeting poly(ethylene glycol) and related polymers | |
| EA008866B1 (ru) | ПОЛИМЕРНЫЙ КОНЪЮГАТ МОДИФИКАЦИЙ ИНТЕРФЕРОНА-β, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ ПРОДУКТЫ НА ЕГО ОСНОВЕ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ | |
| EA013535B1 (ru) | Полимерный конъюгат биоактивного компонента (варианты), способ его получения и использования, фармацевтические продукты на его основе | |
| EP2606072A1 (en) | Synergistic biomolecule-polymer conjugates | |
| JP2004525097A5 (ru) | ||
| BG66525B1 (bg) | Полиалкиленгликол с остатък за конюгиране с биологично активно съединение | |
| RU2447083C1 (ru) | НОВЫЙ ФУНКЦИОНАЛЬНО АКТИВНЫЙ ВЫСОКООЧИЩЕННЫЙ СТАБИЛЬНЫЙ КОНЪЮГАТ ИНТЕРФЕРОНА α С ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЕМ, ПРЕДСТАВЛЕННЫЙ ОДНИМ ПОЗИЦИОННЫМ ИЗОМЕРОМ ПЭГ-NαH-ИФН, С УМЕНЬШЕННОЙ ИММУНОГЕННОСТЬЮ, С ПРОЛОНГИРОВАННЫМ БИОЛОГИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, ПРИГОДНЫЙ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ, И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ | |
| CN103228792A (zh) | PEG-干扰素λ1结合物 | |
| RU2488598C2 (ru) | Гормон роста, модифицированный двухцепочечным полиэтиленгликолем, способ его получения и применение | |
| RU2298560C2 (ru) | Конъюгаты белка и производного полиэтиленгликоля, фармацевтическая композиция, способ борьбы с вирусной инфекцией | |
| RU2311930C2 (ru) | Пэгилированный интерферон для борьбы с вирусной инфекцией | |
| US20060014666A1 (en) | Targeted hydrophilic polymer, binders with interferon and medical composite comprising above binders | |
| JP2000191700A (ja) | 持続型消化管運動ペプチド | |
| KR100353392B1 (ko) | 높은 생체 활성도를 갖는 생체 활성 단백질과 ｐｅｇ의결합체 제조방법 | |
| CN101002944A (zh) | 支链聚乙二醇－干扰素结合物及其制备方法 | |
| KR100888371B1 (ko) | 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제 | |
| RU2382048C1 (ru) | Лекарственное средство на основе модифицированного интерферона альфа с пролонгированным терапевтическим действием | |
| CN1375502A (zh) | 聚乙二醇修饰重组人干扰素 | |
| JP4866612B2 (ja) | 生理活性複合体 | |
| JP2004035515A (ja) | インターフェロンβ複合体の製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FA94 | Acknowledgement of application withdrawn (non-payment of fees) |
Effective date: 20060915 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |