RU2277422C2 - Method for production of polyclonal t-cell vaccine useful in treatment of immunological disorders - Google Patents
Method for production of polyclonal t-cell vaccine useful in treatment of immunological disorders Download PDFInfo
- Publication number
- RU2277422C2 RU2277422C2 RU2004120727/13A RU2004120727A RU2277422C2 RU 2277422 C2 RU2277422 C2 RU 2277422C2 RU 2004120727/13 A RU2004120727/13 A RU 2004120727/13A RU 2004120727 A RU2004120727 A RU 2004120727A RU 2277422 C2 RU2277422 C2 RU 2277422C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- vaccine
- treatment
- antigen
- stage
- Prior art date
Links
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 15
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 title claims abstract 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 57
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 30
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 21
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 19
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 10
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 8
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 7
- 208000035285 Allergic Seasonal Rhinitis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 4
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims 2
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 16
- 238000009171 T-cell vaccination Methods 0.000 description 11
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 9
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 8
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 8
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 3
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 3
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 2
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 2
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 230000003210 demyelinating effect Effects 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 2
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010020565 Hyperaemia Diseases 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 1
- 102000007557 Melanoma-Specific Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010071463 Melanoma-Specific Antigens Proteins 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 206010048908 Seasonal allergy Diseases 0.000 description 1
- 238000012338 Therapeutic targeting Methods 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 230000000961 alloantigen Effects 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 208000007118 chronic progressive multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 208000012997 experimental autoimmune encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000686 immunotropic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 238000005325 percolation Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000036647 reaction Effects 0.000 description 1
- 201000008628 secondary progressive multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940046536 tree pollen allergenic extract Drugs 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к иммунотропному лечению тяжелых заболеваний, в основе которых лежат антиген-индуцированные, патогенные Т-клеточные реакции, приводящие к повреждению собственных тканей организма (например, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, аллергические заболевания).The invention relates to biology and medicine, in particular to immunotropic treatment of serious diseases, which are based on antigen-induced, pathogenic T-cell reactions leading to damage to the body’s own tissues (for example, multiple sclerosis, rheumatoid arthritis, allergic diseases).
Стандартное лечение тяжелых аутоиммунных и аллергических заболеваний базируется на применении гормонов, цитостатиков и других препаратов, обладающих неспецифической иммуносупрессорной активностью. Такое лечение снижает иммунитет в целом и ассоциируется с высоким риском развития серьезных побочных эффектов. Очевидно то, что избирательная элиминация патогенных лимфоцитов из организма должна лежать в основе патогенетического лечения этих заболеваний. Один из способов достижения этой цели базируется на возможности стимуляции у больного антиидиотипического иммунного ответа, направленного на вариабельные фрагменты (идиотипы) антигенных рецепторов патогенных лимфоцитов [5]. В частности, показано, что вакцинация миелин-реактивными Т-клетками животных с экспериментальным аутоиммунным энцефаломиелитом может приводить к остановке развития демиелинизирующего процесса вследствие избирательной элиминации из организма именно тех лимфоцитов, которые ответственны за развитие аутоиммунного заболевания [3]. Представляется важным то, что этот метод лечения эксплуатирует механизм иммунной памяти и поэтому подразумевает возможность генерации длительного иммунного ответа, направленного против патогенных лимфоцитов.The standard treatment for severe autoimmune and allergic diseases is based on the use of hormones, cytostatics, and other drugs with non-specific immunosuppressive activity. Such treatment reduces immunity in general and is associated with a high risk of serious side effects. Obviously, the selective elimination of pathogenic lymphocytes from the body should underlie the pathogenetic treatment of these diseases. One of the ways to achieve this goal is based on the possibility of stimulating an anti-idiotypic immune response in a patient aimed at variable fragments (idiotypes) of antigenic receptors of pathogenic lymphocytes [5]. In particular, it was shown that vaccination with animals with experimental autoimmune encephalomyelitis by myelin-reactive T cells can lead to a halt in the development of the demyelinating process due to the selective elimination of precisely those lymphocytes from the body that are responsible for the development of autoimmune disease [3]. It seems important that this treatment method exploits the mechanism of immune memory and therefore implies the possibility of generating a prolonged immune response directed against pathogenic lymphocytes.
В пилотных клинических исследованиях показано, что в ответ на иммунизацию аутологичными миелин-реактивнымими Т-клеточными клонами у больных рассеянным склерозом (PC) генерируются антиклонотипические CD8+ Т клетки, которые способны лизировать миелин-специфичные Т-лимфоциты [1, 2, 4, 6, 7]. Т-клеточная вакцинация также вызывает генерацию анти-клонотипических CD4+ Т клеток, которые в активированном состоянии продуцируют противовоспалительные цитокины IL-4 и IL-10 [1, 2, 4, 6, 7] и, таким образом, тормозят развитие демиелинизирующего процесса. Дополнительный вклад в инактивацию аутоиммунных Т-лимфоцитов могут вносить активируемые Т-клеточной вакцинацией антиэрготипические Т-клетки. Антиэриготипическая регуляция непосредственно не связана с идиотип-антиидиотипическим Т-клеточным взаимодействием и направлена на предотвращение чрезмерной суммарной активности Т-лимфоцитов.In pilot clinical trials, it was shown that, in response to immunization with autologous myelin-reactive T-cell clones in patients with multiple sclerosis (PC), anti-clonotypic CD8 + T cells are generated that can lyse myelin-specific T-lymphocytes [1, 2, 4, 6, 7]. T-cell vaccination also causes the generation of anti-clonotypic CD4 + T cells, which, when activated, produce anti-inflammatory cytokines IL-4 and IL-10 [1, 2, 4, 6, 7] and thus inhibit the development of the demyelinating process. Anti-ergotypic T cells activated by T-cell vaccination can make an additional contribution to the inactivation of autoimmune T-lymphocytes. Anti-erigotypic regulation is not directly related to the idiotype-anti-idiotypic T-cell interaction and is aimed at preventing excessive total activity of T-lymphocytes.
Т-клеточная вакцинация имеет очевидные преимущества перед другими методами лечения заболеваний, обусловленных патогенной функциональной активностью Т-лимфоцитов. Известные методы получения Т-клеточной вакцины (WO 99/13904 С2, 25.03.1999; ЕР 0722738 А2, 24.07.1996; 1998; WO 90/11294 A1, 04.10.1990; WO 94/25063 A1, 10.11.1994; WO 95/24217 A1, 14.09.1995; WO 92/12990 А2, 06.08.1992) основаны на постоянной или периодической стимуляции лимфоцитов антигеном (например, миелином), поэтому процесс наработки вакцинальных клеток довольно длительный и дорогостоящий. Улучшение технологии получения Т-клеточных вакцин востребовано медициной и призвано обеспечить значимый прогресс в лечении целого ряда заболеваний, стандартное лечение которых, практикуемое в настоящее время, малоэффективно.T-cell vaccination has obvious advantages over other methods of treating diseases caused by the pathogenic functional activity of T-lymphocytes. Known methods for producing a T-cell vaccine (WO 99/13904 C2, 03.25.1999; EP 0722738 A2, 07.24.1996; 1998; WO 90/11294 A1, 10/04/1990; WO 94/25063 A1, 11/10/1994; WO 95 / 24217 A1, 09/14/1995; WO 92/12990 A2, 08/06/1992) are based on constant or periodic stimulation of lymphocytes by an antigen (e.g., myelin), therefore, the process of producing vaccine cells is quite lengthy and expensive. Improving the technology for producing T-cell vaccines is in demand in medicine and is designed to provide significant progress in the treatment of a number of diseases, the standard treatment of which, currently practiced, is ineffective.
Сущность предлагаемого изобретения заключается в следующем: технология получения Т-клеточной вакцины состоит из двух последовательных этапов. Первый этап включает в себя культуральную антиген-специфическую селекцию Т-клеток больного, тогда как второй - их наращивание до необходимого количества посредством неспецифической стимуляции.The essence of the invention is as follows: the technology for producing a T-cell vaccine consists of two successive stages. The first stage includes the cultural antigen-specific selection of the patient's T cells, while the second stage is their growth to the required number through non-specific stimulation.
На первом этапе выделенные из периферической крови мононуклеарные клетки (МНК) больного (например, рассеянным склерозом) культивируются в концентрации 2×106 в мл среде RPMI 1640, содержащей 10% инактивированной аутологичной плазмы, 5 мМ HEPES, 2 мМ L-глутамина, 5×10-5 М меркаптоэтанола в присутствии антигена(ов) (например, 50 мкг/мл свиного миелина) в течение 5-7 дней во влажной атмосфере с 5% СО2. Затем антиген-реактивные бластные лимфоциты отделяются от других клеток посредством их центрифугирования на перколле (плотность 1.065 г/л). На втором этапе выделенные Т-клетки культивируются в присутствии неспецифических стимуляторов (например, 5 мкг/мл фитогемагглютинина (ФГА) плюс 100 ед/мл рекомбинантного интерлейкина - 2) в течение 5 дней. По завершении культивирования клетки инактивируются (например, облучением в дозе 2000 рад), далее криоконсервируются стандартным путем в плазме с 10% диметилсульфоксида (ДМСО) и хранятся в жидком азоте до момента использования. Общее количество полученных от одного больного клеток варьирует в пределах 18-27×108.At the first stage, the patient’s mononuclear cells (MNCs) extracted from peripheral blood (for example, multiple sclerosis) are cultured at a concentration of 2 × 10 6 in ml RPMI 1640 medium containing 10% inactivated autologous plasma, 5 mM HEPES, 2 mM L-glutamine, 5 × 10 -5 M mercaptoethanol in the presence of antigen (s) (for example, 50 μg / ml porcine myelin) for 5-7 days in a humid atmosphere with 5% CO 2 . Then, antigen-reactive blast lymphocytes are separated from other cells by centrifugation on percoll (density 1.065 g / l). At the second stage, the isolated T cells are cultured in the presence of nonspecific stimulants (for example, 5 μg / ml phytohemagglutinin (PHA) plus 100 u / ml recombinant interleukin-2) for 5 days. After cultivation, the cells are inactivated (for example, by irradiation at a dose of 2000 rad), then they are cryopreserved in the standard way in plasma with 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) and stored in liquid nitrogen until use. The total number of cells received from one patient varies from 18-27 × 10 8 .
Разработанная двухэтапная технология получения Т-вакцины имеет очевидные преимущества перед методами, которые были описаны ранее. В частности, она не требует длительного культивирования клеток в присутствии антигена. Уже через 5-7 дней после культивирования с антигеном активированные, бластные, антиген-специфические Т-лимфоциты отделяются от непрореагировавших клеток с помощью градиентного центрифугирования на перколле и далее наращиваются до необходимого количества посредством их высокоэффективной неспецифической стимуляции. Важно, что такое интенсивное наращивание антиген-специфических клеток не требует добавления в культуру антигена и занимает всего 5 дней. В целом процедура получения Т-клеточной вакцины в количестве, достаточном для проведения полноценного курса иммунотерапевтического лечения, занимает 10-12 дней. Получение аналогичных количеств вакцинальных клеток методами, основанными на постоянной или периодической стимуляции Т-лимфоцитов антигеном (например, миелином), требует намного большего времени (28 дней и более). Важным представляется также то, что под удар индуцируемого поликлональной Т-клеточной вакциной антиидиотипического иммунного ответа должны попадать в первую очередь антиген-реактивные клетки, имеющие доминантное представительство в вакцине и в наибольшей степени вовлеченные в развитие патологического процесса.The developed two-stage technology for producing a T-vaccine has obvious advantages over the methods described previously. In particular, it does not require prolonged cell culture in the presence of antigen. After 5-7 days after cultivation with antigen, activated, blast, antigen-specific T-lymphocytes are separated from unreacted cells by gradient centrifugation on percoll and then grow to the required amount through their highly effective non-specific stimulation. It is important that such an intensive growth of antigen-specific cells does not require the addition of antigen to the culture and takes only 5 days. In general, the procedure for obtaining a T-cell vaccine in an amount sufficient to conduct a full course of immunotherapeutic treatment takes 10-12 days. Obtaining similar amounts of vaccine cells by methods based on continuous or periodic stimulation of T-lymphocytes with an antigen (for example, myelin) requires a much longer time (28 days or more). It also seems important that the antidiotypic immune response induced by a polyclonal T-cell vaccine should first be affected by antigen-reactive cells that have a dominant representation in the vaccine and are most involved in the development of the pathological process.
Таким образом, разработанный способ получения Т-клеточной вакцины представляется наиболее эффективным и наименее дорогим, в сравнении с имеющимися аналогами.Thus, the developed method for producing a T-cell vaccine seems to be the most effective and least expensive in comparison with existing analogues.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретенияInformation confirming the possibility of carrying out the invention
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения, представлены на примере вакцин, предназначенных для лечения рассеянного склероза, ревматоидного артрита, поллиноза, а также в экспериментах на животных, и изложены последовательно ниже.Information confirming the possibility of carrying out the invention is presented on the example of vaccines intended for the treatment of multiple sclerosis, rheumatoid arthritis, pollinosis, as well as in animal experiments, and are presented sequentially below.
Разработанная нами двухэтапная технология была использована для получения Т-клеточной вакцины, предназначенной для лечения рассеянного склероза (PC). Поверхностные маркеры миелин-реактивных вакцинальных клеток определяли с помощью моноклональных антител (МА) LT3 (CD3), LT4 (CD4), LT8 (CDS), LKN 16 (CD 16) («Сорбент», Москва), конъюгированных с флюоресцеинизотиоцианатом, и МА ICO-180 (CD20) («МедБиоСпектр», Москва), CD45RO («Becton Dickinson», США), меченных фикоэритрином. Процент позитивных клеток определяли на иммуноцитометре «FACS Calibur» («Becton Dickinson») с использованием программы «CELLQuest» («Becton Dickinson»). Цитофлюориметрический маркерный анализ полученных лимфоидных популяций показал, что процентное содержание в них CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD20+ клеток составляет 90-94%, 50-67%, 25-38%, 3-9% и 2-3% соответственно.The two-stage technology we developed was used to produce a T-cell vaccine for treating multiple sclerosis (PC). Surface markers of myelin-reactive vaccine cells were determined using monoclonal antibodies (MA) LT3 (CD3), LT4 (CD4), LT8 (CDS), LKN 16 (CD 16) (Sorbent, Moscow), conjugated to fluoresceinisothiocyanate, and MA ICO-180 (CD20) (MedBioSpektr, Moscow), CD45RO (Becton Dickinson, USA) labeled with phycoerythrin. The percentage of positive cells was determined on an FACS Calibur immunocytometer (Becton Dickinson) using the CELLQuest program (Becton Dickinson). Cytofluorimetric marker analysis of the obtained lymphoid populations showed that the percentage of CD3 +, CD4 +, CD8 +, CD16 +, CD20 + cells in them is 90-94%, 50-67%, 25-38%, 3-9% and 2-3%, respectively.
Содержание в них CD4+CD45RO+ и CD8+CD45RO+ Т-клеток-памяти превышало не менее чем в 2 раза значения, исходно выявляемые в периферической крови больного.The content of CD4 + CD45RO + and CD8 + CD45RO + T-memory cells in them exceeded at least 2 times the values initially detected in the peripheral blood of the patient.
Специфичность вакцинальных Т-лимфоцитов оценивали по их антиген-индуцированному пролиферативному ответу. Для этого 105 миелин-реактивных Т клеток культивировали в течение 72 часов совместно с облученными (2000 рад) аутологичными МНК в присутствии 50 мкг/мл миелина или контрольного антигена (белок мышиной меланомы) в лунках 96-луночного круглодонного планшета (Costar, США). Клеточная пролиферация оценивалась стандарным методом по включению [3Н] тимидина. Согласно полученным данным пролиферативный ответ Т-лимфоцитов на миелин превышал контрольные значения не менее чем в 2 раза.The specificity of vaccinal T-lymphocytes was evaluated by their antigen-induced proliferative response. For this, 10 5 myelin-reactive T cells were cultured for 72 hours together with irradiated (2,000 rad) autologous MNCs in the presence of 50 μg / ml myelin or control antigen (mouse melanoma protein) in the wells of a 96-well round-bottom plate (Costar, USA) . Cell proliferation was evaluated by the standard method for incorporation of [ 3 H] thymidine. According to the data obtained, the proliferative response of T-lymphocytes to myelin exceeded control values by at least 2 times.
Для оценки специфичности андиидитипического ответа 105 МНК, выделенных из периферической крови вакцинированных больных рассеянным склерозом, культивировали в течение 72 часов совместно с облученными вакцинальными Т-лимфоцитами (105) или с Т-клетками, специфичными к антигенам мышиной меланомы. Последние были получены по той же методике, что и миелин-реактивные Т-клетки. Было установлено, что после 4 вакцинаций пролиферативный ответ МНК больного на вакцинальные клетки в 6 раз превышал контрольные значения. Отсюда можно сделать вывод, что входящие в состав вакцины миелин-реактивные Т-лимфоциты экспрессируют на своей поверхности рецепторные идиотипические детерминанты в количестве, достаточном для индукции эффективного антиидиотипического иммунного ответа.To assess the specificity of the andiidypical response, 10 5 MNCs isolated from the peripheral blood of vaccinated patients with multiple sclerosis were cultured for 72 hours together with irradiated vaccinal T-lymphocytes (10 5 ) or with T-cells specific for murine melanoma antigens. The latter were obtained by the same methodology as myelin-reactive T cells. It was found that after 4 vaccinations the proliferative response of the patient's MNCs to vaccine cells was 6 times higher than the control values. From this it can be concluded that the myelin-reactive T-lymphocytes included in the vaccine express on their surface receptor idiotypic determinants in an amount sufficient to induce an effective anti-idiotypic immune response.
Для получения антиидиотипической Т-клеточной линии МНК (2×10-6 мл) культивировали с облученными миелин-реактивными Т-клетками (106/мл). Через 7 дней в культуру вносили облученные аутологичные МНК и идиотип-несушие Т-лимфоциты и продолжали клеточное культивирование в присутствии рекомбинантного ИЛ-2 (100 ед/мл) еще 7 суток. Далее прокультивированные клетки облучали (2000 рад) и оценивали их супрессорную активность в пролиферативном тесте. Для этого 105 этих клеток культивировали в течение 72 ч совместно с аутологичными миелин-реактивными Т-клетками (105) и с облученными МНК (105) в присутствии миелина (50 мкг/мл). В результате было установлено, что антиидиотипические Т-клеточные линии, реактивные по отношению к миелин-специфичным Т-клеткам, способны на 49-52% избирательно подавлять пролиферацию последних.To obtain an anti-idiotypic T cell line, MNCs (2 × 10 -6 ml) were cultured with irradiated myelin-reactive T cells (10 6 / ml). After 7 days, irradiated autologous MNCs and idiotype non-laying T-lymphocytes were introduced into the culture and cell cultivation was continued in the presence of recombinant IL-2 (100 units / ml) for another 7 days. Next, the cultured cells were irradiated (2000 rad) and their suppressor activity was evaluated in a proliferative test. For this, 10 5 of these cells were cultured for 72 h together with autologous myelin-reactive T cells (10 5 ) and irradiated MNCs (10 5 ) in the presence of myelin (50 μg / ml). As a result, it was found that anti-idiotypic T-cell lines reactive with myelin-specific T-cells are capable of selectively inhibiting the proliferation of the latter by 49-52%.
Таким образом, полученная вышеописанным способом Т-клеточная вакцина по своим поверхностным характеристикам, специфичности и способности индуцировать антиидиотипический иммунный ответ полностью удовлетворяет предъявляемым требованиям.Thus, the T-cell vaccine obtained by the above method in its surface characteristics, specificity and ability to induce an anti-idiotypic immune response fully meets the requirements.
Клинические исследования проводились в соответствии с протоколом, утвержденным Ученым советом и Этическим комитетом Института клинической иммунологии СО РАМН. От каждого пациента, участвующего в исследовании, было получено информированное согласие. Иммунотерапевтическое лечение было проведено 18 больным церебро-спинальной формой PC в возрасте от 26 до 50 лет с давностью заболевания не менее 2 лет. У 4 больных имело место ремиттирующее, у 3 - прогредиентно-ремиттирующее, у 2 - первично-прогредиентное и у 9 - вторично-прогредиентное течение заболевания. Диагноз был установлен клинически и подтвержден магнитно-резонансным исследованием. Пациенты не получали иммуносупрессивную терапию, по крайней мере, в течение 6 месяцев до начала лечения. Схема иммунотерапии включала в себя 4 еженедельных подкожных Т-клеточных вакцинации и поддерживающие введения вакцины с интервалом в 2 месяца. Вакцинальная доза варьировала в пределах 2.0-4.0×107 клеток.Clinical studies were carried out in accordance with the protocol approved by the Scientific Council and the Ethics Committee of the Institute of Clinical Immunology SB RAMS. Informed consent was obtained from each patient participating in the study. Immunotherapeutic treatment was performed for 18 patients with cerebrospinal form of PC aged 26 to 50 years with a disease duration of at least 2 years. In 4 patients there was a remitting, in 3 - a progressive-remitting, in 2 - a primary-progressive and in 9 - a secondary-progressive course of the disease. The diagnosis was made clinically and confirmed by magnetic resonance imaging. Patients did not receive immunosuppressive therapy for at least 6 months before starting treatment. The immunotherapy regimen included 4 weekly subcutaneous T-cell vaccinations and supportive vaccines with an interval of 2 months. The vaccine dose ranged from 2.0-4.0 × 10 7 cells.
Неврологический статус пациентов оценивался по функциональной шкале Куртцке с использованием расширенной шкалы инвалидизации (EDSS). Кроме того, проводилось электромиографическое исследование с оценкой времени центрального моторного проведения «кора - С7» и «кора - S1» в ответ на магнитную стимуляцию.The neurological status of patients was assessed using the Kurtzke functional scale using the Extended Disability Scale (EDSS). In addition, an electromyographic study was conducted evaluating the time of central motor conduction of “core-C7” and “core-S1” in response to magnetic stimulation.
За время наблюдения (12 месяцев) у 2 из 4 больных с ремитирующим и у 2 из 3 с прогредиентно-ремиттирующим течением PC обострений заболевания зарегистрировано не было, их состояние, оцениваемое по шкале Куртцке, было стабильным. По данным электромиографического исследования у одного пациента из этой подгруппы отмечено значительное улучшение показателей центрального моторного проведения «кора - S1». У 2 пациентов с первично-прогредиентным течением заболевания состояние сохранялось стабильным на протяжении всего срока наблюдения. Только у 3 из 9 пациентов с вторично-прогредиентным течением заболевания имела место стабилизация клинических параметров, у остальных отмечено ухудшение в неврологическом статусе, связанное с прогрессией болезни. Ни одного случая осложнений применения Т-клеточной вакцинации зарегистрировано не было.During the observation period (12 months), 2 out of 4 patients with remitting and 2 out of 3 with progressive remitting PC did not have any exacerbations of the disease; their condition, assessed according to the Kurtzke scale, was stable. According to the electromyographic study, one patient from this subgroup showed a significant improvement in the indices of central motor conduction “core - S1”. In 2 patients with a primary progressive course of the disease, the condition remained stable throughout the observation period. Only 3 out of 9 patients with a secondary progressive course of the disease had stabilization of clinical parameters, while the rest showed a deterioration in neurological status associated with the progression of the disease. No cases of complications of the use of T-cell vaccination have been reported.
Таким образом есть основания полагать, что Т-клеточная вакцинация может быть наиболее эффективна на ранних стадиях заболевания. Вместе с тем, не исключено, что более продолжительное и интенсивное иммунотерапевтическое лечение больных PC позволит получить ощутимые результаты в лечении вторично-прогредиентной формы заболевания.Thus, there is reason to believe that T-cell vaccination may be most effective in the early stages of the disease. At the same time, it is possible that a longer and more intensive immunotherapeutic treatment of patients with PC will provide tangible results in the treatment of the secondary-progressive form of the disease.
Двухэтапная технология была использована для получения Т-клеточной вакцины, предназначенной для лечения ревматоидного артрита (РА). Для получения такой вакцины МНК больного культивировали с коллагеновыми белками (10 нг/мл), полученными из суставных тканей человека (г.Москва), в течение 7 дней, после чего бластные лимфоциты отделяли от непрореагировавших клеток с помощью перколльного центрифугирования и далее наращивали их посредством неспецифической стимуляции. Полученные клетки имели поверхностные характеристики, сходные с характеристиками миелин-реактивных Т-клеток. А именно, процентное содержание в них CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD20+ клеток составляло 93%, 62%, 30%, 5% и 2% соответственно. Содержание CD3+CD45RO+ Т-клеток памяти в 2 раза превысило исходный уровень, а содержание CD3+CD45RA+ активированных клеток в 1,2-1,3 раза. Пролиферативный ответ полученных вакцинальных клеток в присутствии коллагена превышал исходно регистрируемые значения в 2-3 раза. Анти-идиотипический пролиферативный ответ МНК больных РА, получивших 4 вакцинации в 2,4-3,7 раз, превышал контрольные показатели. В то же время пролиферативный ответ МНК вакцинированных больных на клетки, неспецифически активированные (ФГА, интерлейкином - 2) или активированные другими антигенами (меланома мыши), не претерпевал существенных изменений. Анти-идиотипические Т-клеточные линии подавляли антиген-индуцированную пролиферацию коллаген-специфических клеток на 40-53%.A two-stage technology has been used to produce a T-cell vaccine for treating rheumatoid arthritis (RA). To obtain such a vaccine, the patient's MNCs were cultured with collagen proteins (10 ng / ml) obtained from human articular tissues (Moscow) for 7 days, after which blast lymphocytes were separated from unreacted cells by percolation centrifugation and then increased by nonspecific stimulation. The obtained cells had surface characteristics similar to those of myelin-reactive T cells. Namely, the percentage of CD3 +, CD4 +, CD8 +, CD16 +, CD20 + cells in them was 93%, 62%, 30%, 5% and 2%, respectively. The content of CD3 + CD45RO + T-cells in memory was 2 times higher than the initial level, and the content of CD3 + CD45RA + activated cells was 1.2-1.3 times. The proliferative response of the obtained vaccine cells in the presence of collagen exceeded the initially recorded values by 2–3 times. The anti-idiotypic proliferative response of MNCs in patients with RA who received 4 vaccinations was 2.4-3.7 times higher than the control values. At the same time, the proliferative response of MNCs of vaccinated patients to cells non-specifically activated (PHA, interleukin-2) or activated by other antigens (mouse melanoma) did not undergo significant changes. Anti-idiotypic T cell lines suppressed antigen-induced proliferation of collagen-specific cells by 40-53%.
Иммунотерапевтическое лечение было проведено 12 больным РА в возрасте 30-69 лет с давностью заболевания не менее 5 лет. 10 больных получали базисную терапию, включающую метатрексат (не более 10 мг/нед). Схема иммунотерапии включала 4 еженедельных вакцинации с интервалом в 1 мес. Вакцинальная доза составляла 3.0-4.0×107 клеток. В процессе лечения у 3 из 12 пациентов отмечалась местная реакция на первое введение вакцины в виде очага гиперемии размером до 5 см в диаметре на месте инъекции. У 1 больной отмечалась общая реакция в виде повышения температуры тела. Все перечисленные явления были кратковременными и купировались самостоятельно.Immunotherapeutic treatment was performed for 12 RA patients aged 30-69 years with a disease duration of at least 5 years. 10 patients received basic therapy, including metatrexate (not more than 10 mg / week). The immunotherapy regimen included 4 weekly vaccinations with an interval of 1 month. The vaccine dose was 3.0-4.0 × 10 7 cells. In the course of treatment, 3 out of 12 patients showed a local reaction to the first injection of the vaccine in the form of a focus of hyperemia up to 5 cm in diameter at the injection site. One patient showed a general reaction in the form of an increase in body temperature. All of these phenomena were short-term and stopped on their own.
За время наблюдения (6 месяцев) у 8 из 12 больных отмечено улучшение клинических параметров, характеризующих тяжесть заболевания. Достоверно снизились суставной индекс, счет боли, индекс припухлости и время утренней скованности. У остальных больных клиническое состояние существенно не изменилось. Заметной динамики лабораторных показателей за этот период времени отмечено не было.During the observation period (6 months), 8 out of 12 patients showed improvement in clinical parameters characterizing the severity of the disease. The articular index, pain score, swelling index, and morning stiffness were significantly reduced. In the remaining patients, the clinical condition did not significantly change. Noticeable dynamics of laboratory indicators for this period of time was not noted.
Двухэтапная технология была использована для получения Т-клеточной вакцины, предназначенной для лечения такого аллергического заболевания, как поллиноз. МНК больных поллинозом культивировали с аллергеном (пыльца деревьев или пыльца сорных трав производства НИИ вакцин и сывороток, г.Ставрополь; конечная концентрация 100 PNU/мл) в течение 7 дней, после чего аллерген-активированные, бластные лимфоциты отделяли от непрореагировавших клеток с помощью перколльного центрифугирования и далее наращивали их посредством неспецифической стимуляции. Группа пролеченных пациентов состояла из 12 человек в возрастном диапазоне от 18 до 56 лет. Установлено, что после 4 еженедельных вакцинаций пролиферативный ответ МНК больного на вакцинальные клетки в 1,8-3 раза превышал контрольные значения. Поддерживающий курс лечения состоял из ежемесячных вакцинаций. В результате проведенного лечения отчетливый клинический эффект был достигнут у 7 из 12 пациентов.Two-stage technology has been used to produce a T-cell vaccine for treating an allergic disease such as hay fever. MNCs of patients with hay fever were cultured with an allergen (tree pollen or weed pollen produced by the Research Institute of Vaccines and Serums, Stavropol; final concentration of 100 PNU / ml) for 7 days, after which the allergen-activated blast lymphocytes were separated from unreacted cells using percol centrifugation and then increased them through nonspecific stimulation. The group of treated patients consisted of 12 people in the age range from 18 to 56 years. It was found that after 4 weekly vaccinations the proliferative response of the patient's MNCs to vaccine cells was 1.8-3 times higher than the control values. The supporting course of treatment consisted of monthly vaccinations. As a result of the treatment, a clear clinical effect was achieved in 7 of 12 patients.
Двухэтапная технология была использована для предотвращения (торможения) иммунных процессов, направленных на отторжение донорских органов и тканей. В экспериментах показано, что вакцинация мышей C57BL6 (H-2b) активированными Т-клетками мышей (C57BL6×DBA)F1 (Н-2b/Н-2d) приводила к генерации супрессорных Т-лимфоцитов, ингибирующих более чем в 2 раза пролиферативный ответ интактных мышиных спленоцитов C57BL6 на аллоантигены DBA (H-2d).Two-stage technology was used to prevent (inhibit) immune processes aimed at rejecting donor organs and tissues. The experiments showed that vaccination of C57BL6 (H-2 b ) mice with activated T-cells of mice (C57BL6 × DBA) F1 (H-2 b / H-2 d ) led to the generation of suppressor T-lymphocytes that inhibit more than 2 times proliferative response of intact murine C57BL6 splenocytes to DBA alloantigens (H-2 d ).
В целом, описанная технология получения Т-клеточной вакцины не ограничивается упомянутыми заболеваниями. Используя разные антигены для активации соответствующих антиген-реактивных клеток, можно получать Т-клеточные вакцины для лечения разных заболеваний, в основе которых лежат патологические антиген-индуцируемые иммунные процессы.In general, the described technology for producing a T-cell vaccine is not limited to the aforementioned diseases. Using different antigens to activate the corresponding antigen-reactive cells, one can obtain T-cell vaccines for the treatment of various diseases, which are based on pathological antigen-induced immune processes.
Источники информацииInformation sources
1. Correale J., Lund В., McMillan M et al. Т cell vaccination in secondary progressive multiple sclerosis. // J.Neuroimmunol. - 2000. - V.107, №2. - P.130-139.1. Correale J., Lund B., McMillan M et al. T cell vaccination in secondary progressive multiple sclerosis. // J. Neuroimmunol. - 2000. - V.107, No. 2. - P.130-139.
2. Hermans G., Medaer R., Raus J., Stinissen P. Myelin reactive Т cells after Т cell vaccination in multiple scvlerosis: cytokine profile and depletion by additional immunizations. // J.Neuroimmunol. - 2000. - V.102, №1. - P.79-84.2. Hermans G., Medaer R., Raus J., Stinissen P. Myelin reactive T cells after T cell vaccination in multiple scvlerosis: cytokine profile and depletion by additional immunizations. // J. Neuroimmunol. - 2000. - V.102, No. 1. - P.79-84.
3. Мог F., Cohen I.R. Experimental aspects of Т cell vaccination. // Clin. Exp. Rheumatol. - 1993. - Suppl.8. - P.55-57.3. Mog F., Cohen I.R. Experimental aspects of T cell vaccination. // Clin. Exp. Rheumatol. - 1993. - Suppl. 8. - P.55-57.
4. Stinissen P., Zhang J., Medaer R., et al. Vaccination with autoreactive Т cell clones in multiple sclerosis: overeiew of immunological and clinical data. // J. of Neuroscience Research. - 1996. - V.45. - P.500-511.4. Stinissen P., Zhang J., Medaer R., et al. Vaccination with autoreactive T cell clones in multiple sclerosis: overeiew of immunological and clinical data. // J. of Neuroscience Research. - 1996. - V.45. - P.500-511.
5. Stinissen P. and Raus J. Autoreactive Т lymphocytes in multiple sclerosis: pathogenic role and therapeutic targeting. // Acta neurol. Belg. - 1999. - V.99. - P.65-69.5. Stinissen P. and Raus J. Autoreactive T lymphocytes in multiple sclerosis: pathogenic role and therapeutic targeting. // Acta neurol. Belg. - 1999. - V.99. - P.65-69.
6. Zang Y.C.Q., Hong J., Tejada-Simon M.V. et al. Th 2 immune regulation induced by Т cell vaccination in patients with multiple sclerosis. // Eur. J.Immunol. - 2000. - V.30. - P.908-913.6. Zang Y.C.Q., Hong J., Tejada-Simon M.V. et al. Th 2 immune regulation induced by T cell vaccination in patients with multiple sclerosis. // Eur. J. Immmunol. - 2000. - V.30. - P.908-913.
7. Zhang J., Stinissen P., Medaer R., et al. Т cell vaccination: clinical application in autoimmune diseases. // J. Mol. Med. - 1996. - V.74. - P.653-662.7. Zhang J., Stinissen P., Medaer R., et al. T cell vaccination: clinical application in autoimmune diseases. // J. Mol. Med. - 1996. - V.74. - P.653-662.
Claims (5)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004120727/13A RU2277422C2 (en) | 2004-07-06 | 2004-07-06 | Method for production of polyclonal t-cell vaccine useful in treatment of immunological disorders |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004120727/13A RU2277422C2 (en) | 2004-07-06 | 2004-07-06 | Method for production of polyclonal t-cell vaccine useful in treatment of immunological disorders |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2004120727A RU2004120727A (en) | 2006-01-10 |
| RU2277422C2 true RU2277422C2 (en) | 2006-06-10 |
Family
ID=35872040
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004120727/13A RU2277422C2 (en) | 2004-07-06 | 2004-07-06 | Method for production of polyclonal t-cell vaccine useful in treatment of immunological disorders |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2277422C2 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2339385C1 (en) * | 2007-04-02 | 2008-11-27 | Государственное учреждение Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН | Method for treatment of pseudorheumatism |
| DE112009002431T5 (en) | 2008-09-29 | 2011-12-15 | Ooo "Novye Vakciny" | Application of Fc fragments of immunoglobulin G as an antigen for the treatment of rheumatoid arthritis, treatment agents and methods of treatment |
| WO2013014535A1 (en) * | 2011-07-22 | 2013-01-31 | Evrogen Joint Stock Company | Methods and compositions for enhancing t cell diversity |
| RU2808817C2 (en) * | 2013-03-01 | 2023-12-05 | Дзе Юнайтед Стейтс Оф Америка, Эз Репрезентед Бай Дзе Секретари, Департмент Оф Хелс Энд Хьюман Сёрвисез | Methods for producing enriched populations of tumor-reactive t-cells from a tumor |
-
2004
- 2004-07-06 RU RU2004120727/13A patent/RU2277422C2/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| SHAPIRA et al., «Prolongation of survival of rat cardiac allografts by Т cell vaccination», J.Clin Invest., vol.91., 1993, с.388-390. MOR et al., «Clinical modeling of Teell vaccination against autoimmune disease in rats, J. Clin. Invest., vol.85, 1990, с.1594-1598. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2339385C1 (en) * | 2007-04-02 | 2008-11-27 | Государственное учреждение Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН | Method for treatment of pseudorheumatism |
| DE112009002431T5 (en) | 2008-09-29 | 2011-12-15 | Ooo "Novye Vakciny" | Application of Fc fragments of immunoglobulin G as an antigen for the treatment of rheumatoid arthritis, treatment agents and methods of treatment |
| WO2013014535A1 (en) * | 2011-07-22 | 2013-01-31 | Evrogen Joint Stock Company | Methods and compositions for enhancing t cell diversity |
| RU2808817C2 (en) * | 2013-03-01 | 2023-12-05 | Дзе Юнайтед Стейтс Оф Америка, Эз Репрезентед Бай Дзе Секретари, Департмент Оф Хелс Энд Хьюман Сёрвисез | Methods for producing enriched populations of tumor-reactive t-cells from a tumor |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2004120727A (en) | 2006-01-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Miller | Depression and immunity: a role for T cells? | |
| RU2563360C2 (en) | Composition for treating arthritis | |
| WO2014039804A1 (en) | Methods of expanding and assessing b cells and using expanded b cells to treat disease | |
| JP2015133982A (en) | CD4 +, CD25 + T cells activated by specific antigen | |
| EA021131B1 (en) | Antibodies and processes for preparing the same | |
| JP2000509604A (en) | Use of interleukin-10 to generate suppressor cell populations | |
| Steiner et al. | Tolerance induction by third-party “off-the-shelf” CD4+ CD25+ Treg cells | |
| JP6000205B2 (en) | T cell vaccine | |
| Chung et al. | Targeting the notch pathway to prevent rejection | |
| AU2008202216A1 (en) | Combination therapies for immune mediated diseases | |
| US20100111982A1 (en) | Rheumatoid arthritis t cell vaccine | |
| JPH07506563A (en) | Vaccination and methods for diseases caused by pathogenic responses by specific T cell populations | |
| CN101126076A (en) | TGF-beta induced regulatory T cells and methods of forming and using the same | |
| RU2277422C2 (en) | Method for production of polyclonal t-cell vaccine useful in treatment of immunological disorders | |
| Ju et al. | Inducer T-cell-mediated killing of antigen-presenting cells | |
| CN110337446B (en) | CCR2+ hematopoietic stem cell-mediated T cell activation in adoptive cell therapy | |
| EP0698087A1 (en) | Human t cell monoclone, process for its production and its use, diagnostic of infectious diseases, autoimmune diseases, t-cell mediated allergies and cancer | |
| JP2002539271A (en) | Induction of antigen-specific non-responsiveness by glioblastoma culture supernatant (GCS) | |
| Knueppel et al. | Upfront denileukin diftitox as in vivo regulatory T-cell depletion in order to enhance vaccination effects in a canine allogeneic hematopoietic stem cell transplantation model | |
| US20020048579A1 (en) | Ex vivo treatment of allogeneic and xenogeneic donor T-cells containing compositions (bone marrow) using gp39 antagonists and use thereof | |
| Ivanova et al. | Induction of antiidiotypic immune response with autologous T-cell vaccine in patients with multiple sclerosis | |
| Ivanova et al. | Characterization of immunogenic properties of polyclonal T cell vaccine intended for the treatment of rheumatoid arthritis | |
| Jewtoukoff et al. | Antioligodendrocyte Autoreactive T Cells | |
| WO2006081619A1 (en) | Improving survival and proliferation of cd4+ and cd25+ t cells | |
| Zhang et al. | New treatment for multiple sclerosis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160707 |