RU2272638C1 - Биотрансплантат, способ его получения и способ лечения хронического гепатита и цирроза печени (варианты) - Google Patents
Биотрансплантат, способ его получения и способ лечения хронического гепатита и цирроза печени (варианты) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2272638C1 RU2272638C1 RU2004125094/15A RU2004125094A RU2272638C1 RU 2272638 C1 RU2272638 C1 RU 2272638C1 RU 2004125094/15 A RU2004125094/15 A RU 2004125094/15A RU 2004125094 A RU2004125094 A RU 2004125094A RU 2272638 C1 RU2272638 C1 RU 2272638C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- liver
- treatment
- fetal
- cells
- chronic hepatitis
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 title claims abstract description 25
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 title claims abstract description 23
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 title claims abstract description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 65
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims abstract description 29
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims abstract description 24
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 19
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 14
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 6
- 210000004258 portal system Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 210000002563 splenic artery Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 claims description 18
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 17
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 15
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims description 13
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 13
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 claims description 13
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 claims description 10
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 8
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 8
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 claims description 8
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 8
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 claims description 8
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims description 8
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 claims description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 5
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 5
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 5
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 5
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 claims description 5
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 claims description 4
- 206010008609 Cholangitis sclerosing Diseases 0.000 claims description 4
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 208000027472 Galactosemias Diseases 0.000 claims description 4
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 claims description 4
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 claims description 4
- 206010053249 Glycogen Storage Disease Type IV Diseases 0.000 claims description 4
- 208000018565 Hemochromatosis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000010165 Tyrosinosis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000027119 bilirubin metabolic disease Diseases 0.000 claims description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 4
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 claims description 4
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 claims description 4
- 230000001553 hepatotropic effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000007000 hereditary hyperbilirubinemia Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003317 industrial substance Substances 0.000 claims description 4
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims description 4
- 201000000742 primary sclerosing cholangitis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000010157 sclerosing cholangitis Diseases 0.000 claims description 4
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 claims description 3
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 claims description 3
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 claims description 3
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 claims description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000003956 Fibroblast growth factor 8 Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000368 Fibroblast growth factor 8 Proteins 0.000 claims description 3
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 claims description 3
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 claims description 3
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 claims description 3
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 claims description 3
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 claims description 3
- 108010007093 dispase Proteins 0.000 claims description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 3
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 3
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000002747 omentum Anatomy 0.000 claims description 3
- 229940082569 selenite Drugs 0.000 claims description 3
- MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-L selenite(2-) Chemical compound [O-][Se]([O-])=O MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 claims description 2
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 claims 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 claims 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 claims 1
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 abstract description 3
- 244000309466 calf Species 0.000 abstract description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000000569 greater omentum Anatomy 0.000 abstract 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 abstract 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 18
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 4
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 4
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 4
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 3
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 3
- 102000016284 Aggrecans Human genes 0.000 description 2
- 108010067219 Aggrecans Proteins 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 2
- 206010008635 Cholestasis Diseases 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 231100000359 cholestasis Toxicity 0.000 description 2
- 230000007870 cholestasis Effects 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 210000004003 subcutaneous fat Anatomy 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 208000007788 Acute Liver Failure Diseases 0.000 description 1
- 101710081722 Antitrypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 208000011123 Glycogen storage disease due to glycogen branching enzyme deficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 230000019552 anatomical structure morphogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001475 anti-trypsic effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 description 1
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007180 physiological regulation Effects 0.000 description 1
- 208000007232 portal hypertension Diseases 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002325 super-antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и биотехнологии. Биотрансплантат для лечения хронических гепатитов и циррозов печени, содержащий мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального или донорского материала. При этом исходную ткань дезагрегируют, далее культивируют в виде прикрепленных колоний в ростовой среде, содержащей эмбриональную телячью сыворотку и глутамин, затем неоднократно пассируют в низкой плотности с изменением состава среды, а культивирование ведут, избегая накопления в культуре клеток зрелой стромы. Способ лечения хронических гепатитов и циррозов печени заключается в том, что ранее указанные биотрансплантаты вводят: с помощью венозного катетера или пункционно в вены портальной системы; с помощью артериального катетера в селезеночную артерию; пункционно в паренхиму селезенки; интраперитониально; пункционно в большой сальник. Изобретение обеспечивает повышение эффективности комплексного воздействия на пораженную печень. 5 н. и 8 з.п. ф-лы.
Description
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и биотехнологии и касается получения культур генетически немодифицированных мезенхимальных стволовых клеток, гепатоцитов и способа лечения хронических гепатитов и циррозов печени.
Рост заболеваемости при различных патологиях печени и тяжелые последствия в виде циррозов, хронических гепатитов, печеночной недостаточности и др. обуславливает актуальность поиска новых более эффективных способов лечения. Только в нашей стране количество больных с печеночно-клеточной недостаточностью достигает 200000 человек в год, при этом использование стандартных терапевтических приемов не позволяет достичь удовлетворительных результатов и смертность сохраняется на уровне 80-90%.
В структуре заболеваний печени среди хронических гепатитов и циррозов можно выделить заболевания, развившиеся вследствие воздействия гепатотропных вирусов, токсического фактора (алкоголь, лекарства, промышленные вещества и др.), метаболических нарушений (гемохроматоз, болезнь Вильсона-Коновалова, недостаточность α1-антитрипсина; гликогеноз IV типа, галактоземия, наследственный тирозиноз, наследственные гипербилирубинемии), аутоиммунных заболеваний (первичный билиарный цирроз, первичный склерозирующий холангит, аутоиммунный гепатит) и многих других факторов.
В настоящее время, в связи с развитием клеточной биологии в медицине изучаются альтернативные пересадке печени, экстракорпоральной детоксикации методы клеточной заместительной терапии, направленные на стимуляцию процессов регенерации и нормализации функции печени [Н. Mali, S. Gupta, 2001].
Как метод трансплантация клеток печени имеет ряд преимуществ. Клеточная трансплантация, в отличие от сложной хирургической операции пересадки печени, технически проще выполнима, не требует массивной иммуносупрессивной терапии, в связи с чем вероятность развития осложнений минимальна. Кроме того, выделение и культивирование клеток печени из одного донорского органа позволяет обеспечить лечение нескольких пациентов.
По мнению некоторых авторов истинными региональными стволовыми клетками печени являются так называемые овальные клетки, располагающиеся в пространствах Диссе, которые могут дифференцироваться в клетки печени различного фенотипа. Однако до настоящего момента эти клетки не были выделены и охарактеризованы в культуре. В ряде работ последних лет было показано, что для заместительной клеточной терапии могут быть использованы гепатоциты, клетки дуктулярного эпителия, мезенхимальные стволовые клетки стромы печени, мезенхимальные стволовые клетки костного мозга (гемопоэтические и мезенхимальные) [Xin Wang, Eugenio Montini, Mushen Al-Dhalimy et al. 2002]. Получены достоверные данные о возможности дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток из разных источников в гепатоциты и дуктулярный эпителий, как in vivo, так и in vitro.
При трансплантации клетки по портальной системе проникают в синусоиды, где происходит экстравазация их в паренхиму печени. Клеточные биологи последние годы дискутируют на тему - способны ли стволовые клетки (в частности, костного мозга) непосредственно дифференцироваться в другой тип клеток, или это происходит только путем клеточного слияния. Существует мнение, что гепатоциты, происходящие из костного мозга, образуются путем клеточного слияния, а не прямой дифференцировки. Последние работы свидетельствуют о возможностях прямой дифференцировки стволовых клеток костного мозга в клетки других типов [Martin Korbling, Ruth L. Katz, Abha Khana et al. 2001]. Причем в ряде исследований ученые специально акцентируют внимание на отсутствие слияния стволовых клеток при их дифференцировке in vivo или in vitro. Таким образом, стволовые клетки способны образовывать новый тип клеток путем прямой дифференцировки и клеточного слияния. Интеграция трансплантируемых клеток в паренхиме печени приводит к физиологической регуляции экспрессии генов донорских и клеток реципиента. Донорские клетки активно пролиферируют и синтезируют различные факторы роста, гормоны, цитокины, стимулирующие регенерацию клеток печени хозяина, участвуют в морфогенезе печеночных долек, биллиарных протоков, синусоидов.
В экспериментальных работах по трансплантации клеток при наследственных [Moscioni AD, Rozga J, Chen S et al. 1996] и моделированных [Vogels BA, Maas MA, Bosma A et al. 1996] заболеваниях печени у животных получены достоверные данные о выживаемости, пролиферации, дифференцировки донорских клеток in situ и стимуляции регенерации поврежденной ткани печени.
Mito et al. впервые в 1992 г. осуществил пересадку гепатоцитов группе пациентов с хроническими заболеваниями печени (10 пациентов с циррозом печени и хроническим гепатитом). В дальнейшем накоплен значительный опыт трансплантации клеток печени при метаболических заболеваниях, вирусных острых и хронических гепатитах, токсических поражениях печени (Strom SC et al. 1999., Bilir BM et al. 1997). Описаны случаи эффективной трансплантации гепатоцитов человека группе пациентов с фульминантной печеночной недостаточностью (Habibullah CM et al. 1994). Проводились клинические исследования с использованием как ауто-, так и аллогенных клеток печени. Трансплантация генетически модифицированных гепатоцитов при наследственных заболеваниях печени является эффективным способом коррекции метаболических нарушений (Grossman M et. al 1995). По результатам этих работ получена достоверная положительная динамика клинико-лабораторных показателей цитолиза, холестаза и синтетической функции печени. В 1998 году Fox IJ et al. описали случай трансплантации гепатоцитов пациентке с синдромом Клиглера - Найяра I типа, после трансплантации наблюдалось длительное снижение уровня билирубина.
Клеточная трансплантация обладает рядом важных преимуществ по сравнению с пересадкой целого органа (печени):
заместительная клеточная терапия позволяет культуральными методами избавиться от примеси сверхантигенных донорских клеток, которые в первую очередь вовлекаются в процесс иммунного отторжения;
подсадку клеток можно регулировать по дозам и многократно повторять;
стоимость клеточной трансплантации значительно ниже, чем пересадки органа.
Большинство исследователей предпочитают аутогенные клетки (костный мозг, клетки периферической крови). Преимущества аутотрансплантатов не вызывают сомнений, однако имеется ряд ограничений по их применению. В частности, длительность выращивания клеточных культур - более 2 месяцев - может являться критической для ряда пациентов;
клетки, полученные от пожилых и тяжелобольных людей обладают низкой способностью к пролиферации и самообновлению.
В сравнении с аутологичным клеточным трансплантационным материалом донорские (в том числе фетальные) клетки обладают рядом преимуществ:
фетальные клетки имеют больший потенциал роста и пролиферации, выраженную способность к дифференцировке и функционально более активны, продуцируют факторы роста и регенерации;
пересаженные фетальные клетки стимулируют ангиогенез;
фетальные клетки и ткани лучше переносят гипоксию и холодовую консервацию;
культуры донорских клеток могут быть приготовлены заранее и использоваться по первому требованию.
Наиболее выраженным терапевтическим потенциалом при патологиях печени обладают генетически немодифицированные гепатоциты и мезенхимальные стволовые клетки.
Мезенхимальные стволовые клетки, в основном, получают из донорского костного мозга, однако существуют и другие источники - скелетные мышцы, подкожная жировая ткань, фетальные органы гемопоэза (печень, тимус, селезенка). Описанные методики выращивания МСК из костного мозга и липоаспиратов позволяют получить гетерогенные популяции клеток стромы, лишь небольшой процент которых являются стволовыми. Клетки зрелой стромы не обладают свойством дифференцироваться в различные клеточные линии и, таким образом, терапевтически неэффективны. После трансплантации стромальные клетки мигрируют преимущественно в соединительную ткань и там накапливаются.
При стандартном пассировании в высоких посевных дозах доля зрелых стромальных клеток быстро увеличивается.
Использование в качестве трансплантата гомогенной (не менее 80%) популяции плюрипотентных МСК позволяет повысить эффективность лечения, увеличить воспроизводимость результатов и избежать нежелательных эффектов.
В настоящее время существуют несколько способов трансплантации клеток печени: введение в вены портальной системы, в паренхиму селезенки [Rosental RJ, Chen SC, Hewitt W et al. 1996], интраперитонеально. Преимущества методов введения определяются простотой выполнения и обеспечением выживаемости трансплантируемых клеток.
Задачей настоящего изобретения является получение биотрансплантата для наиболее эффективного (комплексного) воздействия на пораженную печень человека и разработка наиболее эффективного способа введения при хронических гепатитах и циррозах.
Для решения поставленной задачи предложена группа изобретений, объединенная общим изобретательским замыслом.
Предложен биотрансплантат для лечения хронического гепатита и цирроза печени, который содержит культуру фетальных гепатоцитов человека из печени эмбрионов человека 1-2-го триместра беременности, селективно размноженных в условиях культивирования, и представляет собой суспензию клеточной культуры в физиологическом растворе с концентрацией клеточных элементов 1-15 млн. клеток на 1 кг веса пациента. Биотрансплантат содержит свежеприготовленную культуру. Предложен способ получения биотрансплантата для лечения хронического гепатита и цирроза печени, заключающийся в том, что ткань печени эмбрионов человека 1-2-го триместра беременности измельчают, дезагрегируют, полученную суспензию первичных диссоциированных клеток культивируют в ростовой среде RPMI+F12 (1:1), содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 1% ИТС (1 мкг/мл инсулина, 10 мкг/мл трансферрина, селенит), 10 мкг/мл гентамицина, 5 мкг/мл амфотерицина В с добавлением дексаметазона 0.00125 мл/мл и глутамина 0.11 мг/мл, до достижения клеточной культуры конфлюэнтного состояния.
Для дезагрегации измельченную ткань печени инкубируют в ферментном растворе, содержащем 0.25% раствор диспазы и 0.05% раствор коллагеназы в соотношении 1:1 в течение 30-40 минут с последующим измельчением ткани путем многократного пипетирования до получения одноклеточной суспензии, далее последнюю трижды отмывают центрифугированием при 700 об/мин.
Предложен также биотрансплантат для лечения хронического гепатита и цирроза печени, заключающийся в том, что он содержит мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального, донорского или аутологичного материала путем дезагрегации ткани с последующим культивированием на ростовой среде, содержащей трансферин, инсулин, фактор роста фибробластов и гепарин до накопления гомогенной клеточной культуры с содержанием агрекан- и коллаген П экспрессирующих клеток не менее 80%, и представляет собой суспензию указанных клеток в физиологическом растворе с концентрацией клеточных элементов 1-15 млн. клеток на 1 кг веса пациента.
В качестве фетального материала используют ткани: костный мозг, тимус, печень, жировая ткань эмбрионов человека 1-го триместра беременности.
В качестве донорского материала используют ткани: костный мозг, тимус, печень, жировая ткань.
В качестве аутологичного материала используют ткани: костный мозг, жировая ткань.
Предложен способ получения биотрансплантата для лечения хронического гепатита и цирроза печени, заключающийся в том, что мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального, донорского или аутологичного материала ферментативно дезагрегируют, полученную клеточную суспензию ресуспендируют в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки и 2 мМ глутамина, далее высевают при плотности посева 1-20 млн. мононуклеарных клеток на 1 см2 и инкубируют при 37°С в атмосфере 5% СО2, по достижении культурой 50% конфлуентности монослой трипсинизируют и пересевают с плотностью 10-30 клеток на 1 см2 на ростовую среду, содержащую 10 мкг/мл трансферрина, 1 мкг/мл инсулина, 10 нг/мл фактора роста фибробластов - 2 и 8 ЕД/мл гепарина и с увеличением посевной дозы культивирование ведут до накопления в культуре зрелой стромы.
Предложен способ лечения хронического гепатита и цирроза печени, заключающийся в том, что используют ранее указанные биотрансплантаты, при этом суспензию мезенхимальных стволовых или фетальных гепатоцитов или их комбинацию вводят в виде суспензии в физиологическом растворе с концентрацией клеточных элементов 1-15 млн. клеток на 1 кг веса пациента.
Мезенхимальные стволовые клетки и фетальные гепатоциты берут в соотношениях от 1:1 до 1:15.
Указанные биотрансплантаты вводят: с помощью венозного катетера или пункционно в вены портальной системы; с помощью артериального катетера в селезеночную артерию; пункционно в паренхиму селезенки; интраперитониально; пункционно в большой сальник.
Способ может быть использован при лечении хронического гепатита и цирроза печени, развившихся вследствие воздействия гепатотропных вирусов, а именно вирус гепатита В, С, D, G, F, TTV, CMV, EBV; токсического фактора, такого как алкоголь, лекарства, промышленные вещества и др.; метаболических нарушений вследствие гемохроматоза, болезни Вильсона-Коновалова, недостаточности α1-антитрипсина, гликогеноз IV типа, галактоземии, наследственного тирозиноза, наследственных гипербилирубинемий; аутоиммунных заболеваний (первичный билиарный цирроз, первичный склерозирующий холангит, аутоиммунный гепатит).
Возможность использования биоматериала достигается на следующих сроках гестации: печень - 5-8 недель, тимус - 18-20 недель, костный мозг - 17-20 недель, подкожная жировая ткань - 17-19 недель. Если выделение клеток производится не из аспиратов (костный мозг, липоаспират), а из плотных тканей, например тимуса, орган предварительно измельчают и ферментативно дезагрегируют. Суспензию фильтруют через мелкоячеистое сито из нержавеющей стали. Клеточную суспензию (аспират) разводят 1:1 солевым раствором Хэнкса, центрифугируют в режиме 1500×g, 10 минут и ресуспендируют в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки, селектированной для выращивания клеток в низкой плотности, 2 мМ глутамина. Суспензию клеток высевают на пластиковые чашки Петри с диаметром 100 мм. Плотность посева первичной клеточной суспензии составляет 1-20 миллионов мононуклеарных клеток на 1 см2 в зависимости от источника выделения. Через 1 сутки неприкрепившиеся клетки удаляют, ростовую среду заменяют. Культуры инкубируют при 37°С в атмосфере 5% СО2. Через 6 дней наблюдают рост гетерогенных клеточных популяций. По достижении культурой 50% конфлуентности монослой трипсинизируют и пересевают на новые чашки с плотностью 10-30 клеток на 1 см2 в ростовой среде, дополнительно содержащей 10 мкг/мл трансферрина, 1 мкг/мл инсулина, 10 нг/мл фактора роста фибробластов - 2 и 8 ЕД/мл гепарина. Через 7-10 дней отбирают плотные колонии мелких клеток (диаметром 7-10 мкм) с большим количеством митозов. Отобранные колонии рассевают в новые чашки с плотностью 20 клеток/см2 и выращивают до состояния преконфлуентности. Замену среды производят через каждые 2 дня. Последующие пассажи производят в том же режиме. Увеличение посевной дозы или изменение состава ростовой среды приводят к быстрому накоплению в культуре клеток зрелой стромы.
Экспериментально подобранные условия, объединяющие критерии отбора исходного биоматериала и режим культивирования, являются оптимальными для достижения следующих результатов.
Система последовательной ферментативной дезагрегации исходной ткани позволяет получать максимальное количество жизнеспособных клеток одинакового фенотипа с незначительной примесью гетеротопных клеток.
Режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют максимально наращивать количество, аггрекан- и коллаген II-экспресирующих клеток.
Режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют получать гомогенную клеточную культуру с содержанием аггрекан- и коллаген II-экспресирующих клеток не менее 80%.
Режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют при многократном пассировании максимально наращивать гомогенную клеточную культуру недифференцированных клеток.
Режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют сохранить плюрипотентность клеточных культур.
Режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют получить большое количество клеток для трансплантации (серию), что обеспечивает воспроизводимость результатов лечения.
В качестве биотрансплантата используют свежеполученную клеточную культуру или после ее криоконсервации. В качестве криопротектора используют 7% диметилсульфоксид.
Для приготовления биотрансплантата, содержащего культуру фетальных гепатоцитов, используют фетальный абортивный материал (ткань печени эмбрионов человека 1-2 триместра беременности), полученный при искусственном прерывании беременности у здоровых, предварительно обследованных на наличие вирусных и бактериальных инфекций женщин. Фетальный материал переносят в стерильный сосуд с раствором Хэнкса и гентамицина (80 мг/л). Дальнейшая работа производится в стерильных условиях ламинарного бокса. Выделенная с помощью хирургических инструментов ткань печени тщательно отмывается от сгустков крови, максимально отделяется соединительнотканная капсула и ее перемычки. Полученную ткань печени измельчают до кусочков не менее 1 мм. куб. Затем подвергают ферментативной и механической дезагрегации - освобождение клеточных элементов от тканевого матрикса.
Способ дезагрегации заключается в использовании 0,25% раствора диспазы, 0,05% раствора коллагеназы, в одномоментном инкубировании кусочков ткани печени в течение 30-40 мин в двухкомпонентном (1:1) ферментном растворе с последующим измельчением путем многократного пипетирования до получения одноклеточной суспензии. Полученная суспензия трижды отмывается путем центрифугирования при 700 оборотов в минуту. Суспензию первичных диссоциированных клеток печени, полученных из фетальной ткани печени, культивируют на непокрытых носителями культуральных чашках Петри в среде, содержащей ростовую среду RPMI+F12 (1:1), 10% эмбриональной телячьей сыворотки (НПП ПанЭко), 1% ИТС (1 мкг/мл инсулина, 10 мкг/мл трансферрина, селенит), 10 мкг/мл гентамицина, 5 мкг/мл амфотерицина В с добавлением дексаметазона 0.00125 мл/мл и глутамина 0.11 мг/мл, через 24-48 часов неприкрепленные клетки смывают с культуральных чашек и продолжают культивировать. Замену среды производят каждые 3 дня. При достижении клеточной культуры конфлюэнтного состояния следует криоконсервация. Пассирование не проводят вследствие изменения фенотипа получаемых клеток.
Способ лечения хронических гепатитов и циррозов печени заключается в том, что ранее указанные биотрансплантаты вводят:
с помощью венозного катетера или пункционно в вены портальной системы;
с помощью артериального катетера в селезеночную артерию;
пункционно в паренхиму селезенки;
интраперитониально;
пункционно в большой сальник.
Биотрансплантаты вводят соответственно в виде суспензии в физиологическом растворе с концентрацией клеточных элементов 1-15 млн. клеток на 1 кг веса пациента.
Мезенхимальные стволовые клетки и фетальные гепатоциты берут в соотношениях от 1:1 до 1:15.
Эффективность предложенного способа подтверждается уменьшением проявлений синдромов цитолиза, холестаза, портальной гипертензии, достоверным улучшением функции печени по биохимическим показателям.
Данный способ лечения эффективен при хронических гепатитах и циррозах печени, развившихся вследствие воздействия гепатотропных вирусов (вирусы гепатита В, С, D, G, F, TTV, CMV, EBV), токсического фактора (алкоголь, лекарства, промышленные вещества и др.), метаболических нарушений (гемохроматоз, болезнь Вильсона-Коновалова, недостаточность α1-антитрипсина, гликогеноз IV типа, галактоземия, наследственный тирозиноз, наследственные гипербилирубинемии), аутоиммунных заболеваний (первичный билиарный цирроз, первичный склерозирующий холангит, аутоиммунный гепатит) и многих других факторов.
Claims (13)
1. Биотрансплантат для лечения хронического гепатита и цирроза печени, характеризующийся тем, что он содержит культуру фетальных гепатоцитов человека из печени эмбрионов человека 1-2-го триместра беременности, селективно размноженных в условиях культивирования и представляет собой суспензию клеточной культуры в физиологическом растворе с концентрацией клеточных элементов 1-15 млн клеток на 1 кг веса пациента.
2. Биотрансплантат по п.1, содержащий свежеприготовленную культуру.
3. Способ получения биотрансплантата для лечения хронического гепатита и цирроза печени, характеризующийся тем, что ткань печени эмбрионов человека 1-2-го триместра беременности измельчают, дезагрегируют, полученную суспензию первичных диссоциированных клеток культивируют в ростовой среде RPMI+F12 (1:1), содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 1% ИТС (1 мкг/мл инсулина, 10 мкг/мл трансферрина, селенит), 10 мкг/мл гентамицина, 5 мкг/мл амфотерицина В с добавлением дексаметазона 0,00125 мл/мл и глутамина 0,11 мг/мл, до достижения клеточной культурой конфлюэнтного состояния.
4. Способ по п.3, где для дезагрегации измельченную ткань печени инкубируют в ферментном растворе, содержащем 0,25%-ный раствор диспазы и 0,05%-ный раствор коллагеназы в соотношении 1:1 в течение 30-40 мин, с последующим измельчением ткани путем многократного пипетирования до получения одноклеточной суспензии, далее последнюю трижды отмывают центрифугированием при 700 об/мин.
5. Биотрасплантат для лечения хронического гепатита и цирроза печени, характеризующийся тем, что он содержит мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального, донорского или аутологичного материала путем дезагрегации ткани с последующим культивированием на ростовой среде, содержащей трансферрин, инсулин, фактор роста фибробластов и гепарин до накопления гомогенной клеточной культуры с содержанием агрекан- и коллаген II экспрессирующих клеток не менее 80%, и представляет собой суспензию указанных клеток в физиологическом растворе с концентрацией клеточных элементов 1-15 млн клеток на 1 кг веса пациента.
6. Биотрансплантат по п.5, в котором в качестве фетального материала используют ткани: костный мозг, тимус, печень, жировую ткань эмбрионов человека 1-го триместра беременности.
7. Биотрансплантат по п.5, в котором в качестве донорского материала используют ткани: костный мозг, тимус, печень, жировую ткань.
8. Биотрансплантат по п.5, в котором в качестве аутологичного материала используют ткани: костный мозг, жировую ткань.
9. Способ получения биотрансплантата для лечения хронического гепатита и цирроза печени, характеризующийся тем, что мехенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального, донорского или аутологичного материала, ферментативно дезагрегируют, полученную клеточную суспензию ресуспендируют в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки и 2 мМ глутамина, далее высевают при плотности посева 1-20 млн мононуклеарных клеток на 1 см2 и инкубируют при 37°С в атмосфере 5% СО2, по достижении культурой 50%-ной конфлуентности монослой трипсинизируют и пересевают с плотностью 10-30 клеток на 1 см2 на ростовую среду, содержащую 10 мкг/мл трансферрина, 1 мкг/мл инсулина, 10 нг/мл фактора роста фибробластов - 2 и 8 ЕД/мл гепарина и с увеличением посевной дозы культивирование ведут до накопления в культуре зрелой стромы.
10. Способ лечения хронического гепатита и цирроза печени, характеризующийся тем, что используют биотрансплантат по п.1 и/или 5, при этом суспензию мезенхимальных стволовых или фетальных гепатоцитов или их комбинацию вводят в виде суспензии в физиологическом растворе с концентрацией клеточных элементов 1-15 млн клеток на 1 кг веса пациента.
11. Способ лечения по п.10, где мезенхимальные стволовые клетки и фетальные гепатоциты берут в соотношениях от 1:1 до 1:15.
12. Способ лечения по п.10, где указанные биотрансплантаты вводят с помощью венозного катетера или пункционно в вены портальной системы; с помощью артериального катетера в селезеночную артерию; пункционно в паренхиму селезенки; интраперитониально; пункционно в большой сальник.
13. Способ лечения по п.10, который может быть использован при лечении хронического гепатита и цирроза печени, развившихся вследствие воздействия гепатотропных вирусов, а именно вируса гепатита В, С, D, G, F, TTV, CMV, EBV; токсического фактора, такого, как алкоголь, лекарства, промышленные вещества, метаболических нарушений вследствие гемохроматоз, болезнь Вильсона-Коновалова, недостаточность α1-антитрипсина, гликогеноз IV типа, галактоземия, наследственный тирозиноз, наследственные гипербилирубинемии; аутоиммунных заболеваний (первичный билиарный цирроз, первичный склерозирующий холангит, аутоиммунный гепатит.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004125094/15A RU2272638C1 (ru) | 2004-08-18 | 2004-08-18 | Биотрансплантат, способ его получения и способ лечения хронического гепатита и цирроза печени (варианты) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004125094/15A RU2272638C1 (ru) | 2004-08-18 | 2004-08-18 | Биотрансплантат, способ его получения и способ лечения хронического гепатита и цирроза печени (варианты) |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2272638C1 true RU2272638C1 (ru) | 2006-03-27 |
Family
ID=36388835
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004125094/15A RU2272638C1 (ru) | 2004-08-18 | 2004-08-18 | Биотрансплантат, способ его получения и способ лечения хронического гепатита и цирроза печени (варианты) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2272638C1 (ru) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2323252C1 (ru) * | 2006-10-25 | 2008-04-27 | Антонина Ивановна Колесникова | Способ культивирования мезенхимальных стволовых клеток человека ex vivo |
| RU2368384C2 (ru) * | 2007-08-24 | 2009-09-27 | Федеральное государственное учреждение "Научный Центр акушерства, гинекологии и перинатологии Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Биотрансплантат, способ лечения хронических заболеваний печени и способ лечения цирроза печени и портальной гипертензии |
| RU2414216C1 (ru) * | 2009-11-05 | 2011-03-20 | Сергей Алексеевич Алексеенко | Способ лечения хронического гепатита, ассоциированного с посттрансфузионной вирусной (ttv) инфекцией |
| RU2425648C1 (ru) * | 2010-03-18 | 2011-08-10 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации | Способ и трансплантат для лечения печеночной недостаточности |
| RU2441284C2 (ru) * | 2008-03-25 | 2012-01-27 | Оксана Валентиновна Вежан | Способ повышения физической выносливости в эксперименте |
| RU2455701C1 (ru) * | 2011-02-28 | 2012-07-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" | Способ стимуляции регенерации печени при фиброзных изменениях в эксперименте |
| WO2012154016A1 (ru) * | 2011-05-11 | 2012-11-15 | Акционерное Общество "Национальный Научный Медицинский Центр" | Способ получения лиофилизата из гепатоцитов человека |
| RU2510276C1 (ru) * | 2012-09-25 | 2014-03-27 | Московский Государственный Университет им. М.В. Ломоносова, Биологический факультет | Способ получения клеток для заместительной клеточной терапии патологий печени |
| RU2510833C1 (ru) * | 2012-11-08 | 2014-04-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт Биологии Развития им. Н.К. Кольцова Российской Академии Наук | Клеточный продукт для лечения и коррекции печеночной недостаточности |
| RU2781448C1 (ru) * | 2021-08-18 | 2022-10-12 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Иркутский научный центр Сибирского отделения Российской Академии наук (ИНЦ СО РАН) | Фармацевтическая композиция для получения лиофилизата культуры клеток печени, обогащенного фактором роста гепатоцитов |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2457632A1 (en) * | 2001-08-15 | 2003-02-27 | Peter Maccallum Cancer Institute | Identification and isolation of somatic stem cells and uses thereof |
| RU2001123226A (ru) * | 1999-01-19 | 2003-05-20 | Юниверсити Оф Норт Каролина Эт Чепел Хилл | Клетки-предшественники человеческой печени |
| RU2002122108A (ru) * | 2000-01-19 | 2004-03-27 | Юниверсити Оф Норт Каролина Эт Чепел Хилл (Us) | Способ обработки донорских тканей |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1147179B1 (en) * | 1999-01-19 | 2008-11-12 | The University of North Carolina at Chapel Hill | Human liver progenitors |
-
2004
- 2004-08-18 RU RU2004125094/15A patent/RU2272638C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2001123226A (ru) * | 1999-01-19 | 2003-05-20 | Юниверсити Оф Норт Каролина Эт Чепел Хилл | Клетки-предшественники человеческой печени |
| RU2002122108A (ru) * | 2000-01-19 | 2004-03-27 | Юниверсити Оф Норт Каролина Эт Чепел Хилл (Us) | Способ обработки донорских тканей |
| CA2457632A1 (en) * | 2001-08-15 | 2003-02-27 | Peter Maccallum Cancer Institute | Identification and isolation of somatic stem cells and uses thereof |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Xin Wang et al. Am.J.Pathol. 2002 Aug. 161 (2): 565-74. * |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2323252C1 (ru) * | 2006-10-25 | 2008-04-27 | Антонина Ивановна Колесникова | Способ культивирования мезенхимальных стволовых клеток человека ex vivo |
| RU2368384C2 (ru) * | 2007-08-24 | 2009-09-27 | Федеральное государственное учреждение "Научный Центр акушерства, гинекологии и перинатологии Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Биотрансплантат, способ лечения хронических заболеваний печени и способ лечения цирроза печени и портальной гипертензии |
| RU2441284C2 (ru) * | 2008-03-25 | 2012-01-27 | Оксана Валентиновна Вежан | Способ повышения физической выносливости в эксперименте |
| RU2414216C1 (ru) * | 2009-11-05 | 2011-03-20 | Сергей Алексеевич Алексеенко | Способ лечения хронического гепатита, ассоциированного с посттрансфузионной вирусной (ttv) инфекцией |
| RU2425648C1 (ru) * | 2010-03-18 | 2011-08-10 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации | Способ и трансплантат для лечения печеночной недостаточности |
| RU2455701C1 (ru) * | 2011-02-28 | 2012-07-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" | Способ стимуляции регенерации печени при фиброзных изменениях в эксперименте |
| WO2012154016A1 (ru) * | 2011-05-11 | 2012-11-15 | Акционерное Общество "Национальный Научный Медицинский Центр" | Способ получения лиофилизата из гепатоцитов человека |
| RU2510276C1 (ru) * | 2012-09-25 | 2014-03-27 | Московский Государственный Университет им. М.В. Ломоносова, Биологический факультет | Способ получения клеток для заместительной клеточной терапии патологий печени |
| RU2510833C1 (ru) * | 2012-11-08 | 2014-04-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт Биологии Развития им. Н.К. Кольцова Российской Академии Наук | Клеточный продукт для лечения и коррекции печеночной недостаточности |
| RU2781448C1 (ru) * | 2021-08-18 | 2022-10-12 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Иркутский научный центр Сибирского отделения Российской Академии наук (ИНЦ СО РАН) | Фармацевтическая композиция для получения лиофилизата культуры клеток печени, обогащенного фактором роста гепатоцитов |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6875605B1 (en) | Modular cell culture bioreactor and associated methods | |
| US6251383B1 (en) | Method for ex-vivo expansion of hematopoietic cells | |
| KR101613478B1 (ko) | 중간엽줄기세포-하이드로겔을 함유하는 조성물 및 이의 제조방법 | |
| US20190264179A1 (en) | Serum-free medium inducing differentiation of umbilical cord mesenchymal stem cell into insulin-secretion-like cell and preparation method and use thereof | |
| EP1999250B1 (en) | Method of cultivation of human mesenchymal stem cells, particularly for the treatment of non-healing fractures, and bioreactor for carrying out this cultivation method | |
| CN104263699A (zh) | 细胞移植用临床治疗级真皮多能干细胞规模化制备培养方法 | |
| CN106754674A (zh) | 从人胎盘羊膜制备羊膜间充质干细胞的方法及其应用 | |
| KR101585032B1 (ko) | 중간엽줄기세포-하이드로겔을 함유하는 조성물 및 이의 제조방법 | |
| CN108004207B (zh) | 从脂肪中获取大量脂肪间充质干细胞的方法 | |
| CN104312970A (zh) | 一种细胞治疗用临床治疗级表皮干细胞应用人类细胞外基质筛选及规模化培养制备方法 | |
| CN104988110A (zh) | 脐带间充质干细胞转化为胰岛细胞的方法 | |
| CN105820998A (zh) | 临床回输级细胞治疗用人脂肪干细胞ADSCs分离提取培养方法 | |
| CN107858329B (zh) | 从脂肪中分离脂肪间充质干细胞的方法和使用的试液 | |
| CN105255822A (zh) | 临床治疗级细胞治疗用毛囊干细胞细胞外基质筛选培养方法 | |
| RU2272638C1 (ru) | Биотрансплантат, способ его получения и способ лечения хронического гепатита и цирроза печени (варианты) | |
| CN110812318B (zh) | 用于化妆品原料的优化的成纤维细胞提取物的制备方法 | |
| CN117286108B (zh) | 一种乳腺癌类器官专用培养基及培养方法 | |
| CN104263698A (zh) | 临床治疗级细胞治疗用成纤维细胞规模化制备人类细胞外基质筛选培养方法 | |
| CN107254431B (zh) | 一种新型组织工程皮肤制备方法 | |
| CN106620855A (zh) | 一种复合组织工程皮肤的构建方法 | |
| RU2323252C1 (ru) | Способ культивирования мезенхимальных стволовых клеток человека ex vivo | |
| WO2009080794A1 (en) | Method for preparing cell-specific extracellular matrices | |
| CN106701670A (zh) | 一种增强间充质干细胞分泌生物活性因子能力及培养液中活性因子的提取方法 | |
| CN111849879A (zh) | 一种细胞培养基及细胞培养方法 | |
| CN101173247A (zh) | 一种利用间充质干细胞联合细胞因子培养破骨细胞的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150819 |