RU2262109C2 - Способ определения концентрации антитромбина iii в плазме крови - Google Patents
Способ определения концентрации антитромбина iii в плазме крови Download PDFInfo
- Publication number
- RU2262109C2 RU2262109C2 RU2002135392/15A RU2002135392A RU2262109C2 RU 2262109 C2 RU2262109 C2 RU 2262109C2 RU 2002135392/15 A RU2002135392/15 A RU 2002135392/15A RU 2002135392 A RU2002135392 A RU 2002135392A RU 2262109 C2 RU2262109 C2 RU 2262109C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- iii
- blood plasma
- concentration
- antithrombin iii
- plasma
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 45
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 title claims abstract description 40
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 title claims abstract description 7
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 title claims abstract description 7
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 title claims abstract description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims abstract description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 7
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims abstract description 6
- 235000021249 α-casein Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims abstract description 4
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 14
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 claims description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 abstract description 7
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract 2
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 208000009190 disseminated intravascular coagulation Diseases 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 4
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 4
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 201000005657 Antithrombin III deficiency Diseases 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 2
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 2
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 206010020608 Hypercoagulation Diseases 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 2
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 2
- 208000033666 hereditary antithrombin deficiency Diseases 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 201000005665 thrombophilia Diseases 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000003130 blood coagulation factor inhibitor Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000009834 selective interaction Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к клинической лабораторной диагностике, а именно к способу количественного определения антитромбина III (AT III) в плазме крови, и может быть использовано для диагностики патологических состояний системы свертывания крови. Сущность способа состоит в том, что используют суспензию сферических частиц карбоксилированного полистирольного латекса, на поверхности которых иммобилизованы специфические поликлональные антитела к AT III, а в качестве балластного белка добавлен α-казеин молока (AT III-латгест), при этом для определения используют последовательные дробные разведения плазмы, и концентрацию AT III в исходном образце рассчитывают по формуле. Техническим результатом является быстрое определение концентрации антитромбина III в плазме крови. 2 табл.
Description
Предлагаемый способ относится к медицине, а именно к способам количественного определения в кровотоке антитромбина III (AT III), и может быть использован для диагностики патологических состояний системы свертывания крови - различного вида тромбофилий, диссеминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС-синдрома).
AT III является основным физиологическим антикоагулянтным фактором системы свертывания крови, блокирующим в присутствии гепарина тромбин, а также другие сериновые протеиназы, участвующие в свертывании крови. На долю AT III приходится более 80% всей противосвертывающей активности крови. Дефицит AT III приводит к развитию различного вида тромбофилий и возникает вследствие снижения его синтеза при тяжелых заболеваниях и повреждениях печени, а также в результате его интенсивного потребления в процессе свертывания крови, например, при ДВС-синдроме, развивающемся при сепсисе, шоке, ожоговой болезни, сочетанных травмах, акушерской патологии, злокачественных новообразованиях, инфекционных заболеваниях, а также при длительном лечении фибринолитиками, гепарином. Уровень содержания AT III в крови в норме составляет 235±25 мкг/мл, у больных он снижается на 25-50%.
В клинико-лабораторной практике применяют, в основном, непрямые (косвенные) способы определения содержания AT III в плазме крови, основанные на оценке его активности, определяемой по остаточной активности стандартного препарата тромбина после его инактивации AT III-гепариновым комплексом. Известен косвенный способ определения содержания AT III в плазме крови, в котором в качестве субстрата для тромбина используют фибриноген, об активности AT III судят по времени образования фибрина [Баркаган З.С., Макаров В.А., Лычов ВТ. Новые методы лабораторной диагностики диссеминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС-синдрома). Методические рекомендации, М., 1989, с.23]. Активность AT III выражают в процентах, за 100% принимают активность смеси плазмы здоровых доноров. У здоровых людей активность AT III, определяемая таким способом, колеблется в пределах 85-115%. Способ доступен и прост в выполнении, но не может считаться достаточно надежным: являясь косвенным, он не обеспечивает строгую специфичность определения, так как на время образования фибрина, кроме остаточной активности тромбина, могут влиять побочные факторы, например медикаментозные средства, циркулирующие в крови, что приводит к искажению результатов определения. Кроме того, недостаточная чувствительность способа не позволяет регистрировать возникновение дефицита AT III на ранних стадиях заболеваний.
Известен косвенный способ оценки активности AT III в плазме крови, основанный на применении строго специфичного тромбину низкомолекулярного хромогенного субстрата [J. Fareed et al. "Application of syntetic chromogenic peptid substrate in the evalution of coagulation enzymes and their inhibitors", 1979]. Обладая достаточной чувствительностью, этот способ, как косвенный, также может давать искаженный результат из-за влияния побочных факторов. Кроме того, применение этого способа ограничено необходимостью использования дорогостоящего специального оборудования и соответствующих наборов реактивов.
Прямые (непосредственные) способы количественного определения AT III в плазме крови обеспечивают высокую чувствительность, строгую специфичность и характеризуются высокой надежностью, однако, как правило, сложны в выполнении, требуют больших затрат труда и времени и специальной аппаратуры и реактивов. Известен иммуноферментный способ прямого количественного определения AT III в плазме крови, осуществляемый как многостадийная последовательность проведения иммунологических и ферментативных реакций [Т. Andersson et al. Thrombos. Res., 1996, v.82, p.109]. AT III взаимодействует со специфичными к нему антителами, иммобилизованными на поверхности лунок полистироловых планшетов. Количественное определение AT III проводят спектрометрическим анализом образующихся окрашенных продуктов ферментативного гидролиза. Несмотря на высокую чувствительность и специфичность, способ не используют в повседневной лабораторной практике, т.к. он сложен в выполнении и требует дорогостоящего оборудования и реактивов.
Известен способ лазерной нефелометрии, в котором образование иммунных комплексов AT III со специфическими к нему антителами протекает в растворе и сопровождается увеличением светорассеяния [К. Akiyata et al. Thrombos. Res., 1993, v.72, p.193]. Способ обеспечивает быстрое получение результата, характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью, однако требует использования крайне дорогостоящего импортного оборудования, поэтому недоступен для применения в повседневной медицинской практике.
Наиболее близким к предлагаемому способу определения содержания AT III в плазме крови является выбранный за прототип способ радиальной иммунодифузии. (Энциклопедия клинических лабораторных тестов./ Под ред. Н. Тица, пер. с англ. М., Из-во Лаб. Информ., 1997, с.1137]. Способ основан на взаимодействии AT III со специфичными к нему поликлональными антителами, помещенными в 1%-ный агаровый гель. Образцы плазмы крови заливают в пробитые в геле лунки, а затем проводят инкубацию во влажной камере в течение 20 часов. Содержание AT III определяют на основании измерения диаметра визуально наблюдаемых кольцевых зон преципитации. Способ обеспечивает высокую чувствительность, не требует сложного оборудования, однако для получения результата требуется не менее 18-20 часов, что ограничивает его использование в клинико-лабораторной практике и делает непригодным для экспресс-анализа. В основном этот способ используют в научно-исследовательских целях.
Задачей настоящего изобретения является сокращение времени определения содержания AT III в плазме крови при сохранении высокой чувствительности и при малых затратах труда без использования специальной дорогостоящей аппаратуры.
Поставленная задача решается с применением иммунолатексного диагностикума "AT III-латтеста", представляющего собой суспензию сферических частиц карбоксилированного полистирольного латекса, на поверхности которых иммоблизованы специфические поликлональные антитела к AT III, а в качестве балластного белка добавлен α-казеин молока. Избирательное взаимодействие специфических антител с AT III приводит к наглядному склеиванию (агглютинации) латексных частиц.
"AT III-латтест" готовят следующим образом [Заявка №2002113997 от 29.05.2002 на изобретение "Иммунодиагностикум на основе полистирольного латекса"]. К 2%-ой суспензии сферических частиц (0 0,5 мкм) полистирольного карбоксилированного латекса с иммобилизованными на их поверхности специфическими поликлональными антителами к AT III человека в 0.1М глициновом буфере рН 8,2 (далее - буфер) прибавляют равный объем раствора α-казеина в буфере (концентрация 10 мг/мл), приготовленного следующим образом: α-казеин растворяют в рассчитанном количестве буфера, прогревают 30 минут при 37°С, раствор осветляют центрифугированием в течение 15 мин при 5000 об/мин. Смесь латексной суспензии с раствором α-казеина тщательно встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 30 минут, после чего помещают в холодильник. Через 24 часа иммунодиагностикум готов. Чувствительность иммунодиагностикума определяют по стандартной методике [Иммунологические методы. Под ред. М.Фримеля, М., Мир, 1978] титрованием препарата AT III с известной исходной концентрацией. Конечная концентрация раствора AT III, еще вызывающая реакцию агглютинации латексных частиц, составляет 1 мкг/мл, что является чувствительностью иммунодиагностикума "AT III-латтеста". "AT III-латтест" может храниться без потери чувствительности при +4°С в течение двух лет.
Предлагаемый способ определения AT III в плазме крови состоит в следующем: исследуемый образец бестромбоцитарной нитратной плазмы крови предварительно разводят буфером, затем дозатором по 1 капле (10 мкл) каждого разведения проносят на стеклянную пластину, к каждой дозе добавляют равный объем (10 мкл) "AT III-латтеста" и тщательно перемешивают стеклянной палочкой; реакцию агглютинации учитывают визуально через 2-3 мин: при положительной реакции латексные частицы склеиваются между собой и в капле образуется зернистость, при отрицательной реакции склеивание частиц не происходит и капля состоит из однородной взвеси латексных частиц, напоминая молоко.
Концентрацию AT III в исходной плазме определяют по формуле:
C=a׃,
где С - концентрация AT III в исследуемом образце плазмы крови (мкг/мл);
а - чувствительность "AT III-латтеста";
ƒ - фактор разведения, определяемый как значение последнего разведения исследуемой плазмы, еще дающего агглютинацию.
Например: при α=1 мкг/мл и ƒ=240 С=1 мкг/мл ×240=240 мкг/мл.
Определение содержания AT III в образце плазмы предлагаемым способом занимает несколько минут, что позволяет использовать метод в экстренных случаях. Способ не требует применения специального дорогостоящего оборудования и реактивов, поэтому доступен для широкого использования в клинико-лабораторной практике, а при необходимости - в полевых условиях. Высокая чувствительность предлагаемого способа позволяет осуществлять своевременную диагностику патологических состояний системы свертывания крови, поскольку позволяет фиксировать небольшие изменения содержания AT III в кровотоке на ранних стадиях заболеваний.
Возможность практического осуществления предлагаемого способа определения содержания AT III в плазме крови человека и возможность достижения заявляемого технического результата иллюстрируются следующими примерами:
Пример 1. Определение содержания AT III в плазме крови здоровых доноров.
Для определения содержания AT III используют бестромбоцитарную цитратную плазму крови, приготовленную прибавлением к 9-ти частям крови 1 части 0,11М раствора лимоннокислого натрия с последующим центрифугированием в течение 20 мин при 2000 об/мин. Исследуемый образец разводят рабочим буфером с рН 8,2, содержащим на литр раствора 0,1М глицина, 0,15M NaCl и 0,02% азида натрия. Готовят образец для анализа, смешивая 0,1 мл бестромбоцитарной цитратной плазмы крови, приготовленной, как описано выше, с 15,9 мл рабочего буфера, т.е. разбавляют исходный образец в 160 раз. Затем делают последовательные дробные разведения: 1:176, 1:192, 1:208, 1:224, 1:240, 1:256 и т.д. Далее по 10 мкл каждого разведения переносят на стеклянную пластину и к каждой пробе добавляют по 10 мкл суспензии "AT III-латтеста", тщательно перемешивают каждый образец стеклянной палочкой и наблюдают за развитием реакции агглютинации в течение 2 минут, непрерывно покачивая пластину. В качестве контроля используют заведомо отрицательную пробу, в которой образец плазмы заменяют рабочим буфером. После окончания реакции определяют величину фактора разведения ƒ - последнего разведения, еще дающего агглютинацию, и рассчитывают по приведенной выше формуле концентрацию AT III в исследуемом образце.
Результаты определений содержания AT III в плазме 5-ти здоровых доноров приведены в таблице 1. Для сравнения в таблице представлены результаты определения AT III в тех же образцах, полученные косвенным способом с использованием коммерческого набора "Bechring AT III" для определения активности AT III на хромогенном субстрате, а также с результатами прямого количественного определения содержания AT III в плазме крови методом радиальной иммунодиффузии, взятым за прототип.
| Таблица 1. Сравнение результатов определения AT III в плазме крови здоровых доноров различными способами |
|||
| Образцы плазмы крови здоровых доноров | "AT III-латтест" Концентрация AT III, мкг/мл | "Bechring AT ЦГ (на хромогенном субстрате) Активность AT III,% | Радиальная иммунодиффузия Концентрация AT III, мкг/мл |
| Донор 1 | 256 | 112 | 240 |
| Донор 2 | 224 | 96 | 230 |
| Донор 3 | 208 | 92 | 200 |
| Донор 4 | 256 | 117 | 255 |
| Донор 5 | 240 | 99 | 235 |
| Среднее значение | 237±21 | 103±12 | 232±23 |
| Время выполнения теста | 2-3 мин | Более 1 часа | 18 часов |
Учитывая, что 100% активности AT III соответствуют содержанию 235 мкг/мл AT III в плазме крови, приведенные данные указывают на хорошую корреляцию результатов определения AT III предлагаемым способом и известными способами, применяемыми в клинико-лабораторной и научно-исследовательской практике. При этом время, затраченное на получение результата предлагаемым способом, несопоставимо меньше времени, необходимого для проведения анализа способами, применяемыми в настоящее время.
Пример 2. Определение содержания AT III в плазме крови больных, страдающих ДВС-синдромом.
Исследуют образцы плазмы больных, у которых ДВС-синдром развивался на фоне гнойного менингита (больные 1 и 2), при травматическом хирургическом вмешательстве (больной 3), при акушерско-гинекологической патологии (больные 4 и 5), на фоне длительной терапии фибринолитиками и гепарином (больные 6-8). Во всех случаях ДВС-синдром был верифицирован по известным клиническим и лабораторным критериям.
Определение AT III проводят в бестромбоцитарной цитратной плазме крови, приготовленной, как в примере 1. Исходное разведение плазмы 1:80, последующие - 1:88, 1:96, 1:104, 1:112, 1:120 и т.д. Ход определения аналогичен описанному в примере 1. Сравнительные результаты, полученные теми же способами, что и в примере 1, представлены в таблице 2.
| Таблица 2. Определение AT III в плазме крови больных, страдающих ДВС-синдромом. |
|||
| Образцы плазмы крови больных, страдающих ДВС-синдромом | "AT III-латтест" Концентрация AT III, мкг/мл | "Bechring AT III"(на хромогенном субстрате) Активность AT III,% | Радиальная иммунодиффузия Концентрация AT III, мкг/мл |
| Больной 1 | 160 | 71 | 170 |
| Больной 2 | 152 | 65 | 155 |
| Больной 3 | 176 | 74 | 180 |
| Больной 4 | 136 | 57 | 140 |
| Больной 5 | 128 | 55 | 135 |
| Больной 6 | 192 | 70 | 180 |
| Больной 7 | 160 | 62 | 155 |
| Больной 8 | 144 | 55 | 140 |
| Здоровые доноры | 238±21 | 103±12 | 232±23 |
Приведенные данные показывают, что определяемое предлагаемым способом содержание AT III в плазме крови больных значительно ниже нормы и хорошо коррелирует с количеством AT III, определенным известными способами. Таким образом, предлагаемый способ позволяет надежно диагностировать патологические состояния системы свертывания крови.
Приведенные данные показывают, что в отличии от известных, используемых в настоящее время способов предлагаемый способ определения антитромбина III в плазме крови сочетает высокую чувствительность и надежность с доступностью, простотой и быстротой выполнения. Для его осуществления не требуется специального оборудования, а используемый в методе "AT-III латтест" имеет длительный срок хранения и может быть использован без дополнительной подготовки. Таким образом, способ может быть использован в любой лаборатории, позволяет проводить определение в экспресс-режиме, а при необходимости - и в полевых условиях.
Claims (1)
- Способ определения концентрации антитромбина III (AT III) в плазме крови, включающий взаимодействие AT III со специфическими к нему поликлональными антителами, отличающийся тем, что используют суспензию сферических частиц карбоксилированного полистирольного латекса, на поверхности которых иммобилизованы специфические поликлональные антитела к AT III, а в качестве балластного белка добавлен α-казеин молока (AT III-латгест), при этом для определения используют последовательные дробные разведения плазмы, а концентрацию AT III в исходном образце рассчитывают по формулеС=a·ƒгде С - концентрация AT III в исследуемом образце плазмы крови (мкг/мл);а - чувствительность AT III-латтеста;ƒ - фактор разведения, определяемый как значение последнего разведения исследуемой плазмы, еще дающего агглютинацию.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2002135392/15A RU2262109C2 (ru) | 2002-12-30 | 2002-12-30 | Способ определения концентрации антитромбина iii в плазме крови |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2002135392/15A RU2262109C2 (ru) | 2002-12-30 | 2002-12-30 | Способ определения концентрации антитромбина iii в плазме крови |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2002135392A RU2002135392A (ru) | 2004-07-20 |
| RU2262109C2 true RU2262109C2 (ru) | 2005-10-10 |
Family
ID=35851426
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2002135392/15A RU2262109C2 (ru) | 2002-12-30 | 2002-12-30 | Способ определения концентрации антитромбина iii в плазме крови |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2262109C2 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9593166B2 (en) | 2013-03-14 | 2017-03-14 | Bayer Healthcare Llc | Monoclonal antibodies against antithrombin β |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5320945A (en) * | 1989-07-14 | 1994-06-14 | Boehringer Mannheim Gmbh | Method and reagent for the determination of antithrombin III |
-
2002
- 2002-12-30 RU RU2002135392/15A patent/RU2262109C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5320945A (en) * | 1989-07-14 | 1994-06-14 | Boehringer Mannheim Gmbh | Method and reagent for the determination of antithrombin III |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| МАРКОВА О.А. и др. Определение концентрации антитромбина III в моче. Урология и нефрология, 1990, №4, с.43-46. * |
| Энциклопедия клинических лабораторных тестов/ Под ред. Н.Тица. М.: Лаб. Информ., 1997, с.1137-1138. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9593166B2 (en) | 2013-03-14 | 2017-03-14 | Bayer Healthcare Llc | Monoclonal antibodies against antithrombin β |
| US9908942B2 (en) | 2013-03-14 | 2018-03-06 | Bayer Healthcare, Llc | Monoclonal antibodies against antithrombin β |
| US10144784B2 (en) | 2013-03-14 | 2018-12-04 | Bayer Healthcare Llc | Monoclonal antibodies against antithrombin beta |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5525477A (en) | Method for diagnosing blood clotting disorders | |
| JPS63500264A (ja) | 哺乳動物およびその代りのテストキットにおける病理学的条件の存在とモニタリングを決定する方法 | |
| US20130065260A1 (en) | Compositions, Methods and Uses for Simultaneous Assay of Thrombin and Plasmin Generation | |
| JP2003505678A (ja) | 全血の凝固因子活性を測定する方法 | |
| Kubo et al. | Increased cleavage of von Willebrand factor by ADAMTS13 may contribute strongly to acquired von Willebrand syndrome development in patients with essential thrombocythemia | |
| CN106771253A (zh) | 肝素结合蛋白测定试剂盒 | |
| US4814247A (en) | Method for determining the existance and/or the monitoring of a pathological condition in a mammal | |
| US6156530A (en) | Method for analysis of haemostatic activity | |
| US4900679A (en) | Method for determining the existence and/or the monitoring of a pathological condition in a mammal and a test kit therefor | |
| AU782577B2 (en) | Procedure for the determination of the activity of the protease which activates factor VII from protein solutions | |
| JPH11504718A (ja) | 血栓症リスクのテスト | |
| RU2262109C2 (ru) | Способ определения концентрации антитромбина iii в плазме крови | |
| Fadairo et al. | Assessment of some coagulation indices among type II diabetic subjects in a tertiary facility in South West Region, Nigeria | |
| JP4875495B2 (ja) | 血小板血栓症又は臓器障害の検出方法 | |
| Tsuchida et al. | Characterization and usefulness of clot-fibrinolysis waveform analysis in critical care patients with enhanced or suppressed fibrinolysis | |
| RU2772195C1 (ru) | Способ определения функциональной активности антитромбина iii в плазме крови | |
| US5627038A (en) | Factor IX chromogenic assay | |
| RU2660706C1 (ru) | Скрининг-тест определения контактного пути коагуляции (СТОКПК) | |
| JP4348097B2 (ja) | 動脈血栓症の危険因子としての第ｖｉｉ因子−活性プロテアーゼ（ｆｓａｐ）のマールブルクｉ突然変異体 | |
| Li et al. | Prothrombin fragment F 1+ 2 and oral anticoagulant therapy | |
| RU2835822C1 (ru) | Способ определения антикоагулянтного потенциала плазмы крови для диагностики предтромботических состояний | |
| Parente et al. | The association between Helicobacter pylori infection and ischemic heart disease: facts or fancy? | |
| JP7749035B2 (ja) | 瘢痕診断試薬及びその応用 | |
| Clancy | Molecular Markers in Haematological and Haemostasis disorders of Animals | |
| RU2176794C2 (ru) | Способ иммунодиагностики инфекций |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191231 |