RU2248574C1 - Способ прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза - Google Patents
Способ прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2248574C1 RU2248574C1 RU2003123171/15A RU2003123171A RU2248574C1 RU 2248574 C1 RU2248574 C1 RU 2248574C1 RU 2003123171/15 A RU2003123171/15 A RU 2003123171/15A RU 2003123171 A RU2003123171 A RU 2003123171A RU 2248574 C1 RU2248574 C1 RU 2248574C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tnf
- cll
- patients
- course
- dna
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000011161 development Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 title claims abstract 4
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims abstract description 40
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 25
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims abstract description 19
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 claims abstract description 4
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 claims abstract 2
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 56
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 claims description 54
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 54
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 13
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 claims description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 8
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 claims description 6
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 claims description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 19
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 11
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 9
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 8
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 7
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 7
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 7
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000009096 combination chemotherapy Methods 0.000 description 3
- 108010000506 endodeoxyribonuclease NlaIII Proteins 0.000 description 3
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 3
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010008805 Chromosomal abnormalities Diseases 0.000 description 2
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 2
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 description 2
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 206010024378 leukocytosis Diseases 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 2
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 2
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000011359 Chromosome disease Diseases 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 206010019842 Hepatomegaly Diseases 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 206010025280 Lymphocytosis Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010063092 Trisomy 12 Diseases 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000003190 augmentative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024971 chromosomal disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- QTCANKDTWWSCMR-UHFFFAOYSA-N costic aldehyde Natural products C1CCC(=C)C2CC(C(=C)C=O)CCC21C QTCANKDTWWSCMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- ISTFUJWTQAMRGA-UHFFFAOYSA-N iso-beta-costal Natural products C1C(C(=C)C=O)CCC2(C)CCCC(C)=C21 ISTFUJWTQAMRGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000002205 phenol-chloroform extraction Methods 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и касается способа прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза. Сущность изобретения заключается в том, что из лимфоцитов периферической крови выделяют ДНК методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК, проводят генотипирование полиморфизма промоторной области гена TNF-α и TNF-β. При выявлении генотипа LT*22, характеризующегося наличием мутации гена TNF-β в гомозиготном состоянии, выявляют лиц, предрасположенных к развитию хронического лимфолейкоза, а при определении комбинаций генотипов TNF*22/LT*22 или TNF*12/LT*11 у больных хроническим лимфолейкозом прогнозируют агрессивное течение заболевания. Преимущество изобретения заключается в повышении точности прогнозирования. 3 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза.
Согласно современным представлениям хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) является опухолью кроветворной системы, характеризующейся пролиферацией и аккумуляцией морфологически зрелых лимфоцитов, в большинстве случаев имеющих фенотип В-лимфоцитов, реже - Т-лимфоцитов. При классической форме ХЛЛ наблюдается прогрессирующий лимфатический лейкоцитоз, диффузная зрелоклеточная пролиферация в лимфоузле и трепанобиоптате костного мозга, увеличение лимфоузлов, селезенки, нередко печени.
По новой переработанной и дополненной классификации гемобластозов лимфатической природы А.И. Воробьева и М.Д. Бриллиант (1999) хронический В-клеточный лейкоз относится к зрелоклеточным опухолям лимфатической системы. Согласно этой классификации больные были разделены на 2 группы - с агрессивным и доброкачественным течением заболевания [Воробьев А.И., Кременецкая А.М., Д.В. //Гематол. и трансфузиол. - 2000, -Т.45, N 3. -C.4-14].
Все формы с агрессивным течением требуют назначения полихимиотерапии, при данном течении прогноз неблагоприятный, наблюдается лекарственная резистентность. Таким образом, раннее определение прогноза позволило бы:
- оптимизировать терапию данного заболевания;
- повлиять на качество жизни этих пациентов;
- снизить количество затрачиваемых средств государством на лечение данных больных.
Известны традиционные способы прогнозирования развития ХЛЛ, например:
Критерии прогнозирования ХЛЛ.: [Nelson К., Bruce D. Cheson /The Oncologist 1999; 4:352-369]
- Удвоение времени лимфоцитов (<12 месяцев - прогноз хуже);
- Диффузная инфильтрация лимфоцитами костного мозга в биопсийном материале (плохой прогноз);
- Сывороточный β-2 микроглобуллин (повышенный уровень - прогноз хуже);
- Растворимый CD23 в сыворотке и ЛДГ (повышенный уровень - прогноз хуже).
Аналогом предлагаемого изобретения является способ прогнозирования течения ХЛЛ путем определения хромосомных нарушений. По мнению большинства исследователей, наличие дополнительной хромосомы 12 прогностически неблагоприятно [Juliusson G., Меrup М. Sem. OncoL-1998. -Vol.25. -P.19-26]. Существует точка зрения, что дополнительная хромосома не влияет на прогноз [Geisler С., Philip P., Christensen В. et al Leuk. Res. -1997. -Vol.21. -P.1011-1023]. Также есть мнение, что хронический лимфолейкоз с трисомией 12 представляет собой отдельный вариант болезни с атипичной морфологией лимфоцитов и относительно неблагоприятным течением [Oscier D.G. In: VIII intemat Worksh. On CLL. Darwin medical Communication Ltd.-Oxford Chise, U.K., 1999 -P.17]. Крайне неблагоприятны в прогностическом отношении и делеции хромосомы 11 [Neilson J., Auer R., White D. et al. Leukemia. -1997. -Vol.11. -P.1929-1932]. Медиана выживаемости у данных больных 64 мес.
Недостатками данных способов является следующее.
1. Дороговизна и значительная трудоемкость выполнения данной методики как в амбулаторных, так и в условиях стационара.
2. Достаточно большой выбор неблагоприятных в прогностическом отношении хромосомных нарушений.
3. Большое количество противоречивых литературных данных относительно возможного прогностического значения того или иного хромосомного нарушения.
Другой аналог предлагаемого изобретения - способ прогнозирования развития ХЛЛ путем определения сывороточного уровня интерлейкина-6 (ИЛ-6), который является индикатором активности течения ХЛЛ [Robak Т., Wierzbowska A., Blasinska-Morawiec M et al: Mediators inflamm. - 1999. -Vol. 8(6). - P.277-86]. Так в работе [Fayad L, Keating M.J., Reuben M.J. at al: Blood. - 2001. - Vol.97(1).-P.256-63] показано, что уровень ИЛ-6 и ИЛ-10 был выше у пациентов с ХЛЛ по сравнению с контролем. Пациенты с повышенным уровнем ИЛ-6 и/или ИЛ-10 имели худшую медиану или 3-х летнюю выживаемость и неблагоприятные характеристики (предшествующая температура, увеличение уровня бета-2 микроглобулина или лактат-дегидрогеназы или стадию заболевания по Раи III или IV. Результаты [Hulkkonen J., Vilpo J., Vilpo L. et al: Br J Haematol. - 1998. - Vol.100 (3). - P.478-83] свидетельствуют, что различная способность продуцировать ИЛ-6 и фактора некроза опухоли-альфа (TNF-α) может играть роль при В-ХЛЛ прогрессии и клинической манифестации этого заболевания.
Вместе с тем к недостаткам способа следует отнести следующие:
1) относительно высокую вариабельность сывороточного уровня (СУ) ИЛ-6 даже в течение суток у одного и того же пациента (например, утреннее или послеобеденное время);
2) наличие сопутствующих заболеваний у пациентов может существенно влиять на регистрируемый СУ ИЛ-6. Главным недостатком способа является невозможность выделить группы благоприятного (неблагоприятного) течения заболевания на начальной стадии и тем самым осуществить своевременные профилактические мероприятия (адекватная химиотерапия).
Прототипом данного изобретения является метод, описанный Demeter J. и др. (Demeter J., Porzolt F., Ramiisch S., Schmidt D., Schmidt M., Messer G. Polymorphism of the tumor necrosis factor-alfa and lymphotoxin-alpha genes in chronic lymphocytic leukaemia. // Br. J. Haematol, 1997, Apr; 97(1):107-12), сообщающий о повышении частоты полиморфизма гена TNF-альфа и TNF-бета у больных ХЛЛ по сравнению с контрольной группой. Было выявлено значительное увеличение частоты встречаемости аллели TNF 1 полиморфизма гена TNF-alfa -308G в группе 73 больных ХЛЛ по сравнению с контролем (RR=3.18, границы 95% доверительного интервала 1,57-8,3; р=0.006). А также было выявлено увеличение частоты аллея TNF-beta LT*2 у больных ХЛЛ (р=0.004). На основании полученных данных авторы сделали заключение о вовлечении иммуногенетической ассоциации с вовлечением полиморфизма генов цитокинов TNF/LT как паракринных и аутокринных факторов роста в патогенез ХЛЛ.
Недостатками данного метода является следующее.
1. Отсутствие данных о полиморфизме указанных генов при ХЛЛ в зависимости от вариантов течения заболевания.
2. Отсутствие данных об изучении особенности комбинаций генотипов по локусам TNF-α и β у больных ХЛЛ.
Технический результат - повышение точности прогнозирования развития и течения ХЛЛ. Технический результат достигается тем, что на ранней стадии развития заболевания проводят генотипирование полиморфизма промоторной области гена TNF-alfa и TNF-betta и при выявлении генотипа LT*22 выявляют лиц, предрасположенных к развитию ХЛЛ, а при определении комбинации генотипов TNF*22/LT*22 и TNF*12/LT*11 прогонозируют у больных ХЛЛ агрессивное течение заболевания.
Способ осуществляется следующим образом.
Выделение ДНК из лимфоцитов периферической крови.
Материалом для молекулярно-генетического исследования служили образцы ДНК крови. Кровь набирали в пробирки со стандартным консервантом (1 мл глюгицира) в соотношении 4:1. До выделения ДНК кровь хранили при температуре +4°С не более 1 месяца. ДНК выделяли из лимфоцитов периферической венозной крови методом фенольно-хлороформной экстракции (Mathew С.С., 1984). Для этого к 4 мл крови добавляли 50 мл лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% тритона Х 100, 5 мМ MgCl2, 10 мМ трис-HCl рН 7,6. Ядра лимфоцитов осаждали центрифугированием при 4°С и 4000 об/мин в течение 20 минут; к осадку добавляли 8 мл раствора, содержащего 25 мМ EDTA (рН=8,0), суспендировали, добавляли 0,8 мл 10% SDS и протеиназу К до конечной концентрации 100 мкг/мл, затем инкубировали при 42°С 16 часов. Очистка ДНК от белков производилась с помощью последовательной эктракции раствора ДНК забуференным фенолом (рН=7,8), смесью фенол-хлороформа (1:1) и хлороформом. При этом фенол активно денатурирует белки, смесь фенол-хлороформа полностью ингибирует РНК-зную активность, в результате последней экстракции хлороформом из препарата ДНК удаляют остатки фенола. Экстракцию производили, смешивая раствор ДНК и растворитель до образования эмульсии. Разделение фаз проводили ценрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 мин. Осаждение ДНК производилось добавлением двух объемов охлажденного 96% этанола. Осажденную ДНК дважды промывали 70% этанолом, удаляли этанол из пробирки и подсушенный осадок ДНК растворяли в деионизированной Н2О. Раствор ДНК хранили при -20°С.
Проведение полимеразной цепной реакции синтеза ДНК.
Анализ полиморфных локусов генов -308G→A промоторного участка гена фактора некроза опухолей α (-308TNF-α) и +252А→G интрона 1 гена фактора некроза опухолей β(+252TNF-β) проводили методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР) на термоциклере в автоматическом режиме с использованием локусспецифических олигонуклеотидных праймеров Полиморфизм -308G→A промоторной области гена TNF-α выявляли с использованием праймеров, один из которых содержит искусственную однонуклеотидную замену для создания сайта рестрикции в нативной последовательности ДНК для рестриктазы NcoI (Wilson A.G. et al., 1993). Условия ПЦР и состав ПЦР-смеси идентичны вышеизложенным. Продукт ПЦР длиной 108 пн подвергали ферментному гидролизу рестриктазой Ncol при температуре 37°С. Аллель TNF-α*22 размером 108 пн (генотип АА) типировался на электрофорезе в 7% ПААГ по отсутствию сайта рестрикции, аллель TNF-α*11 (генотип GG), содержал сайт рестрикции и идентифицировался по наличию двух фрагментов длиной 88 и 20 пн (Wilson A.G.et аl., 1993).
Полиморфизм +252A→G интрона 1 гена ФНО-β выявляли методом ПЦР с использованием специфических олигонуклеотидных праймеров. Условия ПЦР и состав ПЦР-смеси идентичны вышеизложенным. Продукт ПЦР длиной 300 пн подвергали ферментному гидролизу рестриктазой Ncol при температуре 37°С. Аллель TNF*12 размером 300 пн (генотип АА) типировался на электрофорезе в 7% ПААГ по отсутствию сайта рестрикции, тогда как при наличии сайта рестрикции идентифицировался мутантный аллель TNF-β*22 (генотип GG).
В качестве контроля обследовали группу здоровых индивидов, проживающих на территории республики Башкортостан (101 человек), у которых отсутствовали какие-либо злокачественные заболевания.
В группу с доброкачественным течением ХЛЛ вошли больные с медленным нарастанием лейкоцитоза, очаговым типом роста в костном мозге, незначительным увеличением периферических лимфоузлов и селезенки. В начальной стадии заболевания лечение больным данной группы не назначается.
В группу с агрессивным течением ХЛЛ вошли больные с прогрессирующей формой (быстрое увеличение лимфоузлов и селезенки, диффузный или диффузно-интерстициальный рост опухоли в костном мозге), опухолевой формой ХЛЛ (наличие больших плотных конгломератов лимфоузлов, диффузный рост опухоли в костном мозге) и абдоминальной формой (отличающейся наличием конгломератов лимфоузлов в брюшной полости и диффузной пролиферации в трепанате). Данным категориям больных требовалось назначение полихимиотерапии.
Группа больных ХЛЛ с доброкачественным течением составила 54 человека, группа с агрессивным течением заболевания - 50 человек. В качестве контроля обследована группа практически здоровых доноров, подобранных в соответствии с возрастом и полом исследуемых групп больных.
Молекулярно-генетическое изучение полиморфного локуса -308G→А промоторного участка гена TNF-α. В табл.1 приведены результаты изучения полиморфного локуса -308G→A промоторного участка гена TNF-α. В группе больных ХЛЛ частота генотипа TNF*2/2 гомозиготного по мутантным аллелям и определяющего повышенный уровень экспрессии гена ФНО-α, составила 2,88%, частота аллеля TNF*2 - 22,31%, что не имеет достоверных отличий по сравнению с контрольной группой, где на долю генотипа TNF*2/2 и аллеля TNF*2 приходится 2,13 и 19,29% соответственно. Полученные результаты согласуются с аналогичными литературными данными, представленные в работах Mainou-Fowler Т. и Wihiborg С. [Mainou-Fowler Т., Dickinson A. M., Taylor P.R. et al. // Leuk Lymphoma 2000 Aug; 38(5-6):547-52; Wihiborg C., Sjoberg J., Intaglietta M., et al. //Br. J. Haematol 1999 Feb;104(2):346-9]. Авторами этих исследований был изучен полиморфизм гена TNF-α у больных с В-ХЛЛ и болезнью Ходжкина. Результаты этих работ показали отсутствие достоверных различий между группами больных и контролем по распределению частот аллелей.
В результате изучения характера распределения частот генотипов у больных ХЛЛ в зависимости от степени тяжести клинического течения заболевания выявлено увеличение частоты встречаемости мутантного генотипа TNF*2 полиморфного локуса - 308G→A TNF-α у больных с агрессивным течением ХЛЛ до 4,0% по сравнению с доброкачественным течением заболевания, 1,9%. Хотя применение критерия χ2 не выявило достоверных различий по частотам аллелей между больными хроническим лимфолейкозом и контрольной группой (χ2=0,01; р=0,95), что может быть обусловлено недостаточностью выборки, повышение частоты мутантного генотипа у больных с опухолевой формой свидетельствует о возможной прогностической значимости данного генетического маркера.
| Таблица 1 Распределение частот генотипов и аллелей полиморфного локуса -308G→A промоторного участка гена TNF-α |
||||||
| Обследованные группы | Объем выборки | Частота генотипов (%) | Частота аллелей (%) | |||
| TNF*11 | TNF*12 | TNF*22 | TNF*1 | TNF*2 | ||
| Контроль | 101 | 76,59 | 21,28 | 2,13 | 80,71 | 19,29 |
| Больные ХЛЛ, в целом | 104 | 72,12 | 25,00 | 2,88 | 77,69 | 22,31 |
| Доброкачественное течение | 54 | 72,2 | 25,9 | 1,9 | 77,9 | 22,1 |
| Агрессивное течение | 50 | 72,0 | 24,0 | 4,0 | 77,4 | 22,6 |
Молекулярно-генетическое изучение полиморфного локуса +252А→G гена TNF-P. В табл.2 приведены результаты изучения полиморфного локуса +252А→G гена TNF-β. Как видно из полученных данных, только один генотип, а именно генотип LT*22, характеризующийся наличием мутации гена ФНО-β в гомозиготном состоянии, у больных хроническим лимфолейкозом встречался более чем в 2 раза чаще по сравнению с контролем (9,00% и 3,55% соответственно). Применение критерия χ2 показало достоверность различий (χ2=3,82; р=0,05). Для генотипа LT*22 был рассчитан показатель OR, который для больных хроническим лимфолейкозом составил 2,68, что указывает на повышение вероятности развития хронического лимфолейкоза у данной категории индивидов.
| Таблица 2 Распределение частот генотипов и аллелей полиморфного локуса +252A→G промоторного участка гена TNF-β |
||||||
| Обследованные группы | Объем выборки | Частота генотипов (%) | Частота аллелей (%) | |||
| LT*11 | LT*12 | LT*22 | LT*1 | LT*2 | ||
| Контроль | 101 | 55,03 | 41,42 | 3,55 | 68,21 | 31,79 |
| Больные ХЛЛ, в целом | 104 | 55,00 | 36,00 | 9,00 | 66,91 | 33,09 |
| Доброкачественное течение | 52 | 53,84 | 36,54 | 9,62 | 66,19 | 33,80 |
| Агрессивное течение | 48 | 56,25 | 35,42 | 8,33 | 67,69 | 32,31 |
Анализ комбинаций генотипов по локусам TNF-α и TNF-β больных хроническим лимфолейкозом. Принимая во внимание, что гены TNF-α и TNF-β расположены на одной хромосоме в непосредственной близости (локус 6р21.3), целесообразным представлялось изучить особенности комбинаций генотипов по изученным локусам и характер сцепления между ними. Данные по распределению комбинаций генотипов приведены в табл. 3.
В качестве прогностически неблагоприятных комбинаций генотипов по локусам TNF-α и TNF-β следует отметить варианты TNF*22/LT*22 и TNF*12/LT*11, частота которых при агрессивном течении ХЛЛ оказалась почти в 2 раза выше, чем при доброкачественной форме заболевания. Показатели OR в отношении агрессивного течения ХЛЛ составили 2,22 для сочетания TNF*22/LT*11 и 2,27 для комбинации генотипов TNF*12/LT*11. Полученные результаты позволяют использовать данные комбинации генотипов по локусам TNF-α и β в качестве генетических маркеров предрасположенности к агрессивному течению ХЛЛ.
| Таблица 3 Распределение генотипов по локусам TNF-α и TNF-β у больных хроническим лимфолейкозом и в контроле |
||||
| Комбинации генотипов -308/+252 | Частота (%) | |||
| Контроль (n=101) | Больные ХЛЛ, в целом (n=104) | Доброкачественное течение (n=52) | Агрессивное течение(n=48) | |
| TNF*11/LT*11 | 44,94 | 47,12 | 50,0 | 47,92 |
| TNF*11/LT*12 | 18,35 | 18,27 | 15,38 | 22,92 |
| TNF*11/LT*22 | 1,89 | 3,85 | 5,77 | 2,08 |
| TNF*22/LT*11 | 1,27 | - | - | - |
| TNF*22/LT*12 | 0,63 | - | - | - |
| TNF*22/LT*22 | 0.63 | 2,88 | 1,92 | 4,17 |
| TNF*12/LT*11 | 9,49 | 5,77 | 3,85 | 8,33 |
| TNF*12/LT*12 | 21,52 | 16,35 | 21,15 | 12,5 |
| TNF*12/LT*22 | 1,27 | 1,92 | 1,92 | 2,08 |
Таким образом, определение генотипа LT*22, характеризующегося наличием мутации гена TNF-β в гомозиготном состоянии, позволит выявлять лица, предрасположенные к возникновению ХЛЛ.
В качестве прогностических маркеров для выявления лиц, предрасположенных к агрессивному течению ХЛЛ должны определяться комбинации генотипов TNF*22/LT*22 и TNF*12/LT*11 у больных ХЛЛ.
Для иллюстрации приведем некоторые клинические примеры.
Б-ая М-о., 1937 года рождения, город Белебей, Республика Башкортостан. Диагноз ХЛЛ установлен в апреле 1996 года, подтвержден стернальной пункцией, костный мозг богат клеточными элементами, представлен зрелыми лимфоцитами 89%. Регулярно получает полихимиотерапию с включением циклофосфана, преднизолона. В настоящее время диагноз ХЛЛ, стадия по К.Rai III, продолжает принимать лечение, наблюдается прогрессирование течения заболевания, увеличение количества лимфоузлов, увеличение их до 2 см в диаметре, группирование их в конгломераты, при пальпации отмечается болезненность. При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 8 мл венозной крови с последующим выделением ДНК и амплификацией полиморфных участков генов TNF-α и β в реакционной смеси, содержащей примерно 0.1 мкг геномной ДНК, 1 ед. Taq-полимеразы, 0.25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата в 25 мкл однократного буфера для ПЦР. После рестрикции амплифицированных ПЦР-продуктов эндонуклеазой Hsp92II провели электрофорез фрагментов при постоянном напряжении 250 вольт после 15-минутного преэлектрофореза. После окончания электрофореза гель окрасили раствором бромистого этидия в течение 10 минут и анализировали при ультрафиолетовом освещении на трансиллюминаторе. Исследование полиморфных локусов генов TNF-α и β больной выявило генотип LT*22, свидетельствующий о предрасположенности к возникновению ХЛЛ, а выявление комбинации генотипов TNF*22/LT*22 позволило прогнозировать агрессивное течение заболевания.
Пациентка К-ва 1948 года рождения, г.Учалы, Республика Башкортостан. Диагноз ХЛЛ установлен в сентябре 2000 года, подтвержден стернальной пункцией, 95%-зрелых лимфоцитов. Неоднократно проводилось лечение циклофосфаном и преднизолоном. Смерть наступила в декабре 2002 г, на фоне прогрессирования лимфоцитоза до 250×109/л, анемии -Нв-43 г/л, Тромбоцитопении-Рlt-31×109/л. Гиперсплено-, гепатомегалия. При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 8 мл венозной крови с последующим выделением ДНК и амплификацией полиморфных участков генов TNF-α и β в реакционной смеси, содержащей примерно 0.1 мкг геномной ДНК, 1 ед. Taq-полимеразы, 0.25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата в 25 мкл однократного буфера для ПЦР. После рестрикции амплифицированных ПЦР-продуктов эндонуклеазой Hsp92II провели электрофорез фрагментов при постоянном напряжении 250 вольт после 15-минутного преэлектрофореза. После окончания электрофореза гель окрасили раствором бромистого этидия в течение 10 минут и анализировали при ультрафиолетовом освещении на трансиллюминаторе. При исследовании установлена комбинация генотипов TNF*12/LT*11, что позволило нам прогнозировать агрессивное течение болезни.
Б-ая М-в., 1944 года рождения, город Нефтекамск, Республика Башкортостан. Диагноз ХЛЛ установлен в сентябре 1998 года, подтвержден стернальной пункцией, костный мозг богат клеточными элементами, представлен зрелыми лимфоцитами - 67%. Получает Хлорбутин 5 мг 4 раза в день. В настоящее время диагноз ХЛЛ, стадия по К.Rai II, продолжает принимать лечение, наблюдается стабильное течение заболевания. Увеличены периферические лимфоузлы до 1,0 см в диаметре, при пальпации мягкие, безболезненные. Умеренная гиперспленомегалия, печень по краю реберной дуги. WBC - 106×109/л, RВС - 3,94×1012/л, PLT - 156×109/л, Нв - 123 г/л. При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 8 мл венозной крови с последующим выделением ДНК и амплификацией полиморфных участков генов TNF-α и β в реакционной смеси, содержащей примерно 0.1 мкг геномной ДНК, 1 ед. Taq-полимеразы, 0.25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата в 25 мкл однократного буфера для ПЦР. После рестрикции амплифицированных ПЦР-продуктов эндонуклеазой Hsp92II провели электрофорез фрагментов при постоянном напряжении 250 вольт после 15-минутного преэлектрофореза. После окончания электрофореза гель окрасили раствором бромистого этидия в течение 10 минут и анализировали при ультрафиолетовом освещении на трансиллюминаторе. Исследование полиморфных локусов генов TNF-α и β больной не выявило генотип LT*22 свидетельствующий о предрасположенности к возникновению ХЛЛ. При изучении локусов генов TNF-α и β была выявлена комбинация генотипов TNF*11/LT*11, в данном случае мы не можем точно прогнозировать течение заболевания, возможен был как доброкачественный, так и злокачественный вариант течения болезни; стратегия химиотерапии выбиралась исходя из традиционных критериев.
Таким образом, нами проведено молекулярно-генетическое изучение полиморфных локусов -308G→A и +252A→G промоторных областей генов TNF-α и β у больных с хроническим лимфолейкозом и в контрольной группе. Установлено, что у лиц с выявленным генотипом LT*22 характеризующегося наличием мутации гена TNF-P в гомозиготном состоянии, возможность развития ХЛЛ значительно выше по сравнению с контролем. Определение комбинаций генотипов TNF*22/LT*22 и TNF*12/LT*11 у больных ХЛЛ, позволяют прогнозировать агрессивные варианты течения ХЛЛ на самых ранних стадиях развития заболевания.
Claims (1)
- Способ прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза путем типирования полиморфизма ДНК лимфоцитов, выделенных из крови больного, генов TNF-alfa и TNF-beta, отличающийся тем, что из лимфоцитов периферической крови выделяют ДНК методом полимеразно-цепной реакции синтеза ДНК, проводят генотипирование полиморфных локусов - 308G→А и +252А→G промоторных областей генов TNF-α и β и при выявлении генотипа LT*22, характеризующегося наличием мутации гена TNF-β в гомозиготном состоянии, выявляют лиц, предрасположенных к развитию хронического лимфолейкоза, а при определении комбинаций генотипов TNF*22/LT*22 или TNF*12/LT*11 у больных хроническим лимфолейкозом прогнозируют агрессивное течение заболевания.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003123171/15A RU2248574C1 (ru) | 2003-07-22 | 2003-07-22 | Способ прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003123171/15A RU2248574C1 (ru) | 2003-07-22 | 2003-07-22 | Способ прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2003123171A RU2003123171A (ru) | 2005-01-20 |
| RU2248574C1 true RU2248574C1 (ru) | 2005-03-20 |
Family
ID=34977801
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003123171/15A RU2248574C1 (ru) | 2003-07-22 | 2003-07-22 | Способ прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2248574C1 (ru) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2310201C2 (ru) * | 2005-11-25 | 2007-11-10 | Гематологический научный центр РАМН | Способ прогнозирования прогрессирования хронического лимфолейкоза по количественному содержанию ядрышкового белка в23/нуклеофозмина в лизатах лимфоидных клеток |
| RU2426786C2 (ru) * | 2005-10-27 | 2011-08-20 | Фундасион Пара Эль Эстудио Де Ла Хематолохия И Хемотерапия Де Арагон (Фэхха) | СПОСОБ И УСТРОЙСТВО ДЛЯ АНАЛИЗА in vitro мPHK ГЕНОВ, УЧАСТВУЮЩИХ В РАЗВИТИИ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ НЕОПЛАЗИЙ |
| RU2458349C1 (ru) * | 2011-07-15 | 2012-08-10 | Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Образования И Науки Российской Федерации | Способ прогнозирования формирования хронического лимфолейкоза и развития сочетанных осложнений в дебюте заболевания |
| RU2490642C1 (ru) * | 2012-08-01 | 2013-08-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека" | Способ прогнозирования клинической формы хронического лимфолейкоза |
| RU2496110C1 (ru) * | 2012-07-04 | 2013-10-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека" | Способ прогнозирования "тлеющей" формы хронического лимфолейкоза |
| RU2498313C1 (ru) * | 2012-09-18 | 2013-11-10 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" | Способ прогнозирования общей выживаемости больных хроническим лимфолейкозом |
| RU2508543C1 (ru) * | 2012-09-18 | 2014-02-27 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" | Способ прогнозирования риска развития тромбоцитопении в течении хронического лимфолейкоза |
| RU2788816C1 (ru) * | 2022-11-18 | 2023-01-24 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ прогнозирования течения хронического лимфолейкоза |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2161309C2 (ru) * | 1994-03-18 | 2000-12-27 | Исследовательский Фонд Университета Юты, | Мутации гена мтs в зародышевой линии и способ выявления предрасположенности к злокачественным опухолям в гене мтs |
| RU2164419C2 (ru) * | 1994-03-18 | 2001-03-27 | Мириад Дженетикс, Инк. | Ген mts, мутации данного гена и способы диагностики злокачественных опухолей с использованием последовательности гена mts |
-
2003
- 2003-07-22 RU RU2003123171/15A patent/RU2248574C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2161309C2 (ru) * | 1994-03-18 | 2000-12-27 | Исследовательский Фонд Университета Юты, | Мутации гена мтs в зародышевой линии и способ выявления предрасположенности к злокачественным опухолям в гене мтs |
| RU2164419C2 (ru) * | 1994-03-18 | 2001-03-27 | Мириад Дженетикс, Инк. | Ген mts, мутации данного гена и способы диагностики злокачественных опухолей с использованием последовательности гена mts |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| DEMETER J., et al., Polymorphism of the tumor necrosis factor-alfa and tymphotoxin-alpha genes in chronic lymphocytic leukaemia, Br. J.Haematol, 1997, apr., 97(1), pp.107-112. * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2426786C2 (ru) * | 2005-10-27 | 2011-08-20 | Фундасион Пара Эль Эстудио Де Ла Хематолохия И Хемотерапия Де Арагон (Фэхха) | СПОСОБ И УСТРОЙСТВО ДЛЯ АНАЛИЗА in vitro мPHK ГЕНОВ, УЧАСТВУЮЩИХ В РАЗВИТИИ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ НЕОПЛАЗИЙ |
| RU2310201C2 (ru) * | 2005-11-25 | 2007-11-10 | Гематологический научный центр РАМН | Способ прогнозирования прогрессирования хронического лимфолейкоза по количественному содержанию ядрышкового белка в23/нуклеофозмина в лизатах лимфоидных клеток |
| RU2458349C1 (ru) * | 2011-07-15 | 2012-08-10 | Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Образования И Науки Российской Федерации | Способ прогнозирования формирования хронического лимфолейкоза и развития сочетанных осложнений в дебюте заболевания |
| RU2496110C1 (ru) * | 2012-07-04 | 2013-10-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека" | Способ прогнозирования "тлеющей" формы хронического лимфолейкоза |
| RU2490642C1 (ru) * | 2012-08-01 | 2013-08-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека" | Способ прогнозирования клинической формы хронического лимфолейкоза |
| RU2498313C1 (ru) * | 2012-09-18 | 2013-11-10 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" | Способ прогнозирования общей выживаемости больных хроническим лимфолейкозом |
| RU2508543C1 (ru) * | 2012-09-18 | 2014-02-27 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" | Способ прогнозирования риска развития тромбоцитопении в течении хронического лимфолейкоза |
| RU2788816C1 (ru) * | 2022-11-18 | 2023-01-24 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ прогнозирования течения хронического лимфолейкоза |
| RU2824086C1 (ru) * | 2023-12-29 | 2024-08-01 | ФГБУН "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Способ выявления суррогатных маркеров мутаций генов вариабельных участков тяжелых цепей иммуноглобулинов при хроническом лимфолейкозе |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2003123171A (ru) | 2005-01-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Eng et al. | Point mutation within the tyrosine kinase domain of the RET proto-oncogene in multiple endocrine neoplasia type 2B and related sporadic tumours | |
| CN102575292B (zh) | 与疾病相关的kir单元型的测定 | |
| US20070281300A1 (en) | Thrombomodulin (Thbd) Haplotypes Predict Outcome | |
| CA2881027C (en) | Prognosis biomarkers in cartilage disorders | |
| US6844156B2 (en) | Methods for identifying a preferred liver transplant donor | |
| CN116411059A (zh) | 一种引发溶血性输血反应的类孟买表型的snp位点、应用及试剂 | |
| RU2248574C1 (ru) | Способ прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза | |
| KR102063486B1 (ko) | Rnf213 단일염기다형성과 한국인 모야모야병 발병 위험도의 연관성 | |
| CN108676870B (zh) | 与tia易感性相关的fmo3基因snp的检测方法、检测试剂盒及其应用 | |
| US6248533B1 (en) | Gene diagnosis of diseases wherein TNF-α promotors participate | |
| KR101806025B1 (ko) | 비소세포폐암 환자의 항암제 치료 반응성 및 예후 예측용 ｓｎｐ 마커 및 이의 용도 | |
| CN104862379A (zh) | 一种人类白细胞抗原基因的检测试剂盒 | |
| Watling et al. | Loss of heterozygosity analysis of chromosomes 9, 10 and 17 in gliomas in families | |
| EP2764116B1 (en) | Genetic polymorphisms associated with venous thrombosis in women, methods of detection and uses thereof | |
| US20140141432A1 (en) | Method and kit for diagnosing glaucoma in dogs | |
| US10770183B2 (en) | Methods of assessing a risk of developing necrotizing meningoencephalitis | |
| Tsai et al. | Rapid identification of the ABO genotypes by their single‐stand conformation polymorphism | |
| JP5904501B2 (ja) | ２型糖尿病の検出方法 | |
| KR20180040461A (ko) | Bnip2 유전자 부위의 염기서열 다형성을 이용한 장기이식 후 거부반응 예측 방법 | |
| EP3592860B1 (en) | Rhd gene allele associated with a weak d phenotype and its uses | |
| US20030008301A1 (en) | Association between schizophrenia and a two-marker haplotype near PILB gene | |
| RU2225612C2 (ru) | Способ прогнозирования течения множественной миеломы | |
| KR101700623B1 (ko) | 돼지의 혈액 내 아밀라아제 수준 판단용 snp 마커 및 이의 용도 | |
| RU2282852C1 (ru) | Способ прогнозирования течения множественной миеломы | |
| KR100985984B1 (ko) | Ｃｏｌ4ａ3 유전자를 이용한 만성 폐기능 장애 감수성 진단용 조성물 및 이를 이용한 만성 폐기능 장애 감수성 예측 및 판단 방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090723 |