RU2244719C1 - Peptide composition eliciting immunity regulating property - Google Patents
Peptide composition eliciting immunity regulating property Download PDFInfo
- Publication number
- RU2244719C1 RU2244719C1 RU2003123533/04A RU2003123533A RU2244719C1 RU 2244719 C1 RU2244719 C1 RU 2244719C1 RU 2003123533/04 A RU2003123533/04 A RU 2003123533/04A RU 2003123533 A RU2003123533 A RU 2003123533A RU 2244719 C1 RU2244719 C1 RU 2244719C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- composition
- peptides
- glu
- cys
- peptide
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 69
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 66
- 230000036039 immunity Effects 0.000 title 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 title 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 44
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 30
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 abstract description 24
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 abstract description 12
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 abstract description 12
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 8
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 abstract description 7
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 abstract description 7
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 abstract description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 abstract description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 12
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 description 10
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 10
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- -1 benzyl ester Chemical class 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 5
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- KSDTXRUIZMTBNV-INIZCTEOSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)butanedioic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 KSDTXRUIZMTBNV-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- PVFCXMDXBIEMQG-JTQLQIEISA-N (2s)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)pentanedioic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 PVFCXMDXBIEMQG-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- VZQHRKZCAZCACO-PYJNHQTQSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]propanoyl]amino]prop-2-enoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N VZQHRKZCAZCACO-PYJNHQTQSA-N 0.000 description 1
- QJHMHZVVRVXKOY-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4,5-pentafluoro-6-(2,3,4,5,6-pentafluorophenoxy)benzene Chemical class FC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1OC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1F QJHMHZVVRVXKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.C=CC1=CC=CC=C1C=C CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXAMGRAIZSSWIH-UHFFFAOYSA-N 2-[3-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1,2,4-oxadiazol-5-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1=NOC(=N1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 SXAMGRAIZSSWIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JQMFQLVAJGZSQS-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-N-(2-oxo-3H-1,3-benzoxazol-6-yl)acetamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)NC1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 JQMFQLVAJGZSQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRPAUEVGEGEPFQ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]pyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C=NN(C=1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 ZRPAUEVGEGEPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JVKRKMWZYMKVTQ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]pyrazol-1-yl]-N-(2-oxo-3H-1,3-benzoxazol-6-yl)acetamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C=NN(C=1)CC(=O)NC1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 JVKRKMWZYMKVTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YJLUBHOZZTYQIP-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1=NN=C(O1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 YJLUBHOZZTYQIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APLNAFMUEHKRLM-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]-1-(3,4,6,7-tetrahydroimidazo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1=NN=C(O1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)N=CN2 APLNAFMUEHKRLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 6-[(5S)-5-[[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]methyl]-2-oxo-1,3-oxazolidin-3-yl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C[C@H]1CN(C(O1)=O)C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 125000006847 BOC protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- FUVZXJVXTYAVCN-UHFFFAOYSA-N C1CCC(CC1)N(C2CCCCC2)C(=O)NC(=O)O Chemical compound C1CCC(CC1)N(C2CCCCC2)C(=O)NC(=O)O FUVZXJVXTYAVCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 108010072051 Glatiramer Acetate Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002502 anti-myelin effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940038717 copaxone Drugs 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000003356 suture material Substances 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 229940099456 transforming growth factor beta 1 Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, в частности к новым биологически активным веществам (БАВ), обладающим иммунорегуляторными свойствами, и может быть использовано в практической медицине, ветеринарии, а также в экспериментальной биохимии.The invention relates to medicine, in particular to new biologically active substances (BAS), having immunoregulatory properties, and can be used in practical medicine, veterinary medicine, as well as in experimental biochemistry.
Известен кополимер-1 (Коп-1), выпускаемый фирмой TEVA под названием “Копаксон” (см. Монографию авторов Е.И.Гусев, Т.Л.Демина и А.Н.Бойко “Рассеянный склероз”, Москва, 1997 г., стр. 317).Known copolymer-1 (Kop-1), manufactured by TEVA under the name “Copaxone” (see Monograph by E.I. Gusev, T.L. Demina and A.N. Boyko “Multiple Sclerosis”, Moscow, 1997 , p. 317).
Этот препарат обладает широкими функциональными возможностями, однако, получение его отличается значительной сложностью из-за высокого молекулярного веса, что удорожает его производство.This drug has wide functional capabilities, however, obtaining it is of considerable complexity due to the high molecular weight, which makes its production more expensive.
Известна фармацевтическая композиция, применяемая для лечения рассеянного склероза путем нейтрализации антимиелиновых антител (см. патент РФ №2121850, кл. А 61 L 38/10 от 22.10.91 г.).Known pharmaceutical composition used to treat multiple sclerosis by neutralizing antimyelin antibodies (see RF patent No. 2121850, class A 61 L 38/10 from 10/22/91).
Однако известная композиция не обладает иммунорегуляторными свойствами.However, the known composition does not have immunoregulatory properties.
Техническим результатом является разработка новой синтетической композиции, обладающей иммунорегуляторными возможностями и простотой получения.The technical result is the development of a new synthetic composition having immunoregulatory capabilities and ease of preparation.
Для решения этой технической задачи предлагается композиция, обладающая иммунорегуляторным свойством, включающая по крайней мере два пептида, формулы Arg-Gly-Asp и H-Tyr-X-Y-Glu-OH, где Х - Glu и/или Gln, Y - Cys и/или Cys(acm), причем пептиды могут быть взяты в равных долях или в долях, соотношение которых составляет 1:4 соответственно.To solve this technical problem, a composition is proposed having an immunoregulatory property, including at least two peptides, the formulas Arg-Gly-Asp and H-Tyr-XY-Glu-OH, where X is Glu and / or Gln, Y is Cys and / or Cys (acm), and the peptides can be taken in equal shares or in shares, the ratio of which is 1: 4, respectively.
Сущность изобретения заключается в том, что использование композиции с вышеуказанной формулой позволяет обеспечить расширенные функциональные возможности воздействия на мононуклеарные клетки путем способности индуцировать секрецию высокоактивных иммуносупрессорных цитокинов.The essence of the invention lies in the fact that the use of a composition with the above formula allows for enhanced functionality of exposure to mononuclear cells by the ability to induce the secretion of highly active immunosuppressive cytokines.
Кроме того, невысокий молекулярный вес компонентов предлагаемой композиции определяет простоту ее изготовления.In addition, the low molecular weight of the components of the proposed composition determines the simplicity of its manufacture.
Сравнение предлагаемой композиции с ближайшим аналогом позволяет утверждать о соответствии критерию “новизна”, а отсутствие в аналогах отличительных признаков говорит о соответствии критерию “изобретательский уровень”.Comparison of the proposed composition with the closest analogue allows us to claim compliance with the criterion of “novelty”, and the absence of distinctive features in the analogues indicates the compliance with the criterion of “inventive step”.
Предварительные испытания позволяют утверждать о возможности широкого промышленного производства и использования в медицине.Preliminary tests suggest the possibility of wide industrial production and use in medicine.
Получение заявляемой композиции может быть осуществлено известными способами пептидного синтеза.Obtaining the claimed composition can be carried out by known methods of peptide synthesis.
Пептиды, составляющие заявляемую композицию согласно настоящему изобретению, могут быть получены в соответствии с обычными и хорошо известными методами синтеза полипептидов. Для синтеза использовали активизированные аминокислоты с защищенными функциональными группами (фирмы: Sigma, Merk).The peptides that make up the inventive composition according to the present invention can be obtained in accordance with conventional and well-known methods for the synthesis of polypeptides. For the synthesis, activated amino acids with protected functional groups were used (firms: Sigma, Merk).
Синтез пептидов осуществляли обычно принятыми методами твердофазного синтеза: в частности, по Fmoc-схеме образования пептидной связи, которая предусматривает использование для временного маскирования альфа-аминогрупп флюоренилметилоксикарбонильной (Fmoc) группы, стабильной в кислой среде, но отщепляемой основаниями. Первый пептид RGD-аргинил-глицил-аспарагиновая кислота - (Arg-Gly-Asp) синтезировали в форме свободной кислоты на РАС-полимере фирмы MilliGen/Biosearch (США) с присоединенным к нему стартовым С-концевым аминокислотным остатком Fmoc-аспарагиновой кислоты. Реакция конденсации осуществлялась методом 1-оксибензотриазоловых или пентафторфениловых эфиров, последовательно используя соответствующие эфиры глицина и аргинина. Полноту прохождения реакции контролировали с помощью нингидринового теста. В случае неполного прохождения реакции проводили повторную конденсацию. Для отщепления пептида от полимера использовали смесь трифторуксусной кислоты (ТФА) и фенола (95/5). Очистку пептида проводили гельфильтрацией на сефадексе G-10 и характеризовали данными количественного аминокислотного анализа, аналитической обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии и тонкослойной хроматографии.Peptides were synthesized by commonly accepted methods of solid-phase synthesis: in particular, according to the Fmoc scheme of peptide bond formation, which involves the use of a fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) group, which is stable in an acidic environment but cleaved by bases, for temporary masking of alpha-amino groups. The first peptide, RGD-arginyl-glycyl-aspartic acid - (Arg-Gly-Asp) was synthesized in the free acid form on a PAC polymer from MilliGen / Biosearch (USA) with the starting C-terminal amino acid residue of Fmoc-aspartic acid attached to it. The condensation reaction was carried out by the method of 1-hydroxybenzotriazole or pentafluorophenyl ethers, sequentially using the corresponding esters of glycine and arginine. The completeness of the reaction was monitored using the ninhydrin test. In the case of an incomplete reaction, re-condensation was carried out. A mixture of trifluoroacetic acid (TFA) and phenol (95/5) was used to remove the peptide from the polymer. The peptide was purified by gel filtration on Sephadex G-10 and characterized by quantitative amino acid analysis, analytical reverse phase high performance liquid chromatography and thin layer chromatography.
Синтез второго пептида предлагаемой композиции также осуществляли на твердой фазе. При этом применяли стиролдивинилбензольную смолу, к которой по типу образования бензилового эфира присоединяли глутаминовую кислоту, используя N-СВZ-1-глутамат-α-N-гидроксисукцинимид эфир, с последующей обработкой соединения N-t-ВОС-S-ацетамидометил-1-цистеином в присутствии дициклогексил карбодиимида в диоксане, с последующим отмыванием твердофазного полимера, удалением ВОС-защитной группы и образовавшейся дициклогексил карбоксимочевины.The synthesis of the second peptide of the proposed composition was also carried out on the solid phase. In this case, a styrene-divinylbenzene resin was used, to which glutamic acid was added by the type of benzyl ester formation using N-CBZ-1-glutamate-α-N-hydroxysuccinimide ether, followed by treatment with Nt-BOC-S-acetamidomethyl-1-cysteine in the presence of dicyclohexyl carbodiimide in dioxane, followed by washing the solid phase polymer, removing the BOC-protecting group and the resulting dicyclohexyl carboxyurea.
Далее к твердофазному полимеру добавляли N-CBZ-1-глутамин-α-N-гидроксисукцинимид эфир, и на конечном этапе после удаления CBZ-защитной группы обрабатывали N-t-BOC-1-тирозин-N-гидросисукцинимид эфиром. После удаления ВОС защитной группы проводили отщепление образовавшегося пептида путем щелочного гидролиза.Next, N-CBZ-1-glutamine-α-N-hydroxysuccinimide ether was added to the solid phase polymer, and finally, after removal of the CBZ-protecting group, N-t-BOC-1-tyrosine-N-hydrosuccinimide ether was treated. After removal of the BOC of the protective group, the resulting peptide was cleaved by alkaline hydrolysis.
Второй пептид перекристаллизовывали и лиофилизировали. Присутствие и последовательность аминокислот, а также чистоту пептида проверяли методом тонкослойной хроматографии, используя как цельный пептид, так и продукты его частичного и полного гидролиза. Полученный второй пептид 1-го типа соответствовал формуле: H-Tyr-Gln-Cys(acm)-Glu-OH, где асm-ацетамидометил, защитная группа для серы цистеина, которую не снимали, так как она спонтанно легко удаляется в условиях организма и в клеточных культурах, в результате чего действующим началом является пептид с формулой H-Tyr-Gln-Cys(asm)-Glu-OH.The second peptide was recrystallized and lyophilized. The presence and sequence of amino acids, as well as the purity of the peptide was checked by thin-layer chromatography using both the whole peptide and the products of its partial and complete hydrolysis. The obtained second peptide of the 1st type corresponded to the formula: H-Tyr-Gln-Cys (acm) -Glu-OH, where asm-acetamidomethyl, a protective group for cysteine sulfur, which was not removed, since it is spontaneously easily removed under the conditions of the body and in cell cultures, whereby the active principle is a peptide of the formula H-Tyr-Gln-Cys (asm) -Glu-OH.
Н - начало пептида; Туr - аминокислотный остаток тирозина; Gln - аминокислотный остаток глутамина; Cys - аминокислотный остаток цистеина, Glu - глутаминовая кислота (глутамат) или ее остаток, ОН -конец пептида.H is the beginning of the peptide; Tur is the amino acid residue of tyrosine; Gln is the amino acid residue of glutamine; Cys is the amino acid residue of cysteine, Glu is glutamic acid (glutamate) or its residue, OH is the end of the peptide.
Для синтеза второго пептида 2-го типа с формулой H-Tyr-Glu-Cys(acm)-Glu-OH использовали тот же принцип с заменой на соответствующем этапе добавления N-CBZ-глутамин-N-гидроксисукцинимид эфира на N-СВZ-глутамат-α-N-гидроксисукцинимид эфир. Все реактивы и активированные аминокислоты с защищенными группами были фирменными (Sigma, Merk).For the synthesis of the second type 2 peptide with the formula H-Tyr-Glu-Cys (acm) -Glu-OH, the same principle was used with the replacement of N-CBZ-glutamine-N-hydroxysuccinimide ester with N-CBZ-glutamate at the corresponding stage -α-N-hydroxysuccinimide ester. All reagents and activated amino acids with protected groups were branded (Sigma, Merk).
Обрабатывая пептиды с вышеуказанными формулами в присутствии ионов ртути снимают ацетоамидометильную группу, освобождая SH группу цистеина. При этом получают пептиды с формулой без (asm).Processing peptides with the above formulas in the presence of mercury ions remove the acetoamidomethyl group, releasing the SH group of cysteine. In this case, peptides with the formula without (asm) are obtained.
При получении композиции по п.2 формулы смешивают первый пептид со вторым пептидом каждого типа в отдельности в соотношении долей, равном 1:4 соответственно.Upon receipt of the composition according to claim 2 of the formula, the first peptide is mixed with the second peptide of each type individually in a ratio of fractions equal to 1: 4, respectively.
При получении композиции по п.3 формулы смешивают первый пептид со вторым пептидом каждого типа в отдельности в равных долях.Upon receipt of the composition according to claim 3 of the formula, the first peptide is mixed with the second peptide of each type individually in equal proportions.
В результате могут быть получены композиции четырех различных типов. Кроме того, для получения композиции других типов использовали вместо Х у второго пептида одновременно смесь Gln и Glu. Следует отметить, что осуществляли приготовление композиции из двух пептидов в различных неравных долях. Однако преимуществ получения композиции перед композицией с пептидами в долях, соотношение которых равно 1:4, не было замечено.As a result, compositions of four different types can be obtained. In addition, to obtain compositions of other types, instead of X, the second peptide used a mixture of Gln and Glu at the same time. It should be noted that the preparation of the composition of two peptides was carried out in different unequal proportions. However, the advantages of obtaining the composition over the composition with peptides in fractions, the ratio of which is 1: 4, were not noticed.
Биологическая активность заявляемой композиции каждого из четырех типов определялась следующим образом.The biological activity of the claimed composition of each of the four types was determined as follows.
Пример 1Example 1
1. Исследовали действие композиции, состоящей из двух пептидов с формулами Arg-Gly-Asp и H-Tyr-X-Y-Glu-OH, где Х - Glu, Y - Cys(acm), на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Воуum 1969 г.1. The effect of a composition consisting of two peptides with the formulas Arg-Gly-Asp and H-Tyr-XY-Glu-OH, where X is Glu, Y is Cys (acm), on the proliferative activity of peripheral blood mononuclear cells isolated by Wowum method 1969
Диапазон используемых доз составлял 0,03 - 3,00 мкг/мл.The range of doses used was 0.03 - 3.00 μg / ml.
Результаты исследований отражены в таблице 1.The research results are shown in table 1.
Результаты показали, что данная композиция подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванных фитогемагглютинином (ФГА).The results showed that this composition inhibits the proliferative activity of peripheral blood mononuclear cells caused by phytohemagglutinin (PHA).
2. Исследовали влияние композиции на способность индуцировать супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови.2. The effect of the composition on the ability to induce the suppressor activity of peripheral blood mononuclear cells was investigated.
На первом этапе получают суспензию МНК методом седиментации клеток в одноступенчатом градиенте фиколл-уротрасте (метод Воуum).At the first stage, a suspension of MNCs is obtained by the method of cell sedimentation in a single-stage gradient of ficoll-urotrust (Vowum method).
Периферическую кровь берут у донора путем венопункции в одно и то же время и помещают в пробирки с раствором гепарина из расчета 1 мл крови - 20-30 ед. гепарина. Далее кровь разводят раствором Хенкса без Са++ и Mg++ в соотношении 1:2 и наслаивают на градиент фиколл-уротраст (плотность 1,078).Peripheral blood is taken from the donor by venipuncture at the same time and placed in test tubes with a heparin solution at the rate of 1 ml of blood - 20-30 units. heparin. Then the blood is diluted with Hanks solution without Ca ++ and Mg ++ in a ratio of 1: 2 and layered on a ficoll-urotrust gradient (density 1.078).
Затем проводят центрифугирование в режиме 400 g в течение 30 мин. Взвесь МНК из интерфазы переносят в центрифужную пробирку, добавляют раствор Хенкса без Са++ и Mg++ и производят 3 последовательных центрифугирования по 10 мин для отмывания клеток от раствора фиколл-уротраст. После 3-го центрифугирования осадок МНК ресуспензируют в 1 мл среды 199 и подсчитывают количество мононуклеарных клеток с помощью камеры Горяева.Then, centrifugation is carried out at 400 g for 30 minutes. A suspension of MNCs from the interphase is transferred to a centrifuge tube, Hanks solution without Ca ++ and Mg ++ is added and 3 consecutive centrifugations of 10 minutes are performed to wash the cells from the ficoll-urotrast solution. After the third centrifugation, the MNC pellet was resuspended in 1 ml of medium 199 and the number of mononuclear cells was counted using a Goryaev chamber.
На втором этапе МНК делят на две равные части, первую из которых культивируют без активатора супрессоров, вторую - с активатором супрессоров, в качестве которого используют исследуемую композицию, состоящую из 2-х пептидов.At the second stage, MNCs are divided into two equal parts, the first of which is cultured without a suppressor activator, the second with a suppressor activator, which is used as a test composition consisting of 2 peptides.
МНК культивируют в пенициллиновых флаконах, закрытых резиновыми пробками №14,5 при температуре 37°С. Среда культивирования RPM1-1640 с добавлением 20% сыворотки IV АВ группы крови и глютамина.MNCs are cultivated in penicillin vials closed with rubber stoppers No. 14.5 at a temperature of 37 ° C. Cultivation medium RPM1-1640 with the addition of 20% serum IV AB blood group and glutamine.
В каждом флаконе культивируют 5×106 клеток в 2,0 мл полной среды. К культуре для индукции супрессоров добавляют композицию из 2-х пептидов в дозах 0,03-3,0 мкг/мл.In each vial, 5 × 10 6 cells are cultured in 2.0 ml of complete medium. A composition of 2 peptides in doses of 0.03-3.0 μg / ml is added to the culture for the induction of suppressors.
Культивирование клеток осуществляют 48 ч. После этого МНК отмывают от среды культивирования и осуществляют блокировку пролиферации путем обработки митомицином С - 40 мкг/мл в течение 30 мин при 37°С. Затем отмывают средой 199 с 5% сыворотки IV АВ (охлажденной) трижды. Осадок клеток ресуспензируют, подсчитывают количество ядросодержащих клеток, определяют процент жизнеспособности клеток с помощью 0,1%-ного трипанового синего раствора и разводят до необходимой концентрации. При этом все операции делают раздельно с контрольными клетками и со стимулированными композициями, а для отмывания клеток используют силиконированную посуду.Cell cultivation is carried out for 48 hours. After this, MNCs are washed from the culture medium and proliferation is blocked by treatment with mitomycin C - 40 μg / ml for 30 min at 37 ° C. Then washed with medium 199 with 5% serum IV AB (chilled) three times. The cell pellet is resuspended, the number of nucleated cells is counted, the percentage of cell viability is determined using a 0.1% trypan blue solution and diluted to the desired concentration. At the same time, all operations are done separately with control cells and stimulated compositions, and silicone dishes are used to wash cells.
На следующем этапе в каждую часть контрольных и стимулированных композицией МНК добавляют свежевыделенные МНК, стимулированные фитогемагглютинином (ФГА), которые служат отвечающими тест-клетками в равных соотношениях (0,5×106:0,5×106 клеток/мл) для получения тест-культур. Культивирование их проводят в течение 72 ч. После этого с помощью Н3-тимидина оценивают пролиферацию тест-культур и о величине супрессии судят по степени снижения пролиферации в них. Индекс супрессии (ИС) определяют по формуле:At the next stage, freshly isolated MNCs stimulated with phytohemagglutinin (PHA) are added to each part of the control and composition-stimulated MNCs, which serve as answering test cells in equal proportions (0.5 × 10 6 : 0.5 × 10 6 cells / ml) to obtain test cultures. Their cultivation is carried out for 72 hours. After this, the proliferation of test cultures is evaluated using H 3 -thymidine and the amount of suppression is judged by the degree of decrease in proliferation in them. The suppression index (IP) is determined by the formula:
Результаты исследований влияния композиции, состоящей из двух пептидов с формулами Arg-Gly-Asp и H-Tyr-X-Y-Glu-OH, где Х - Glu, Y - Cys(acm), на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 2.The results of studies on the effect of a composition consisting of two peptides with the formulas Arg-Gly-Asp and H-Tyr-X-Y-Glu-OH, where X is Glu, Y is Cys (acm), on the ability to induce MHC suppressor activity are shown in Table 2.
Диапазон доз 0,02-3,6 мкг/мл.The dose range is 0.02-3.6 μg / ml.
Установлено, что данная композиция в дозах 0,03 мкг/мл - 3,00 мкг/мл индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови.It was found that this composition in doses of 0.03 μg / ml - 3.00 μg / ml induces the suppressor activity of peripheral blood mononuclear cells.
Пример 2.Example 2
При исследовании композиции 2-го типа (Arg-Gly-Asp и H-Tyr-X-Y-Glu-OH, где Х - Gln, Y - Сys(acm), повторили действия п.1 и п.2 примера 1.When examining a composition of the 2nd type (Arg-Gly-Asp and H-Tyr-X-Y-Glu-OH, where X is Gln, Y is Cys (acm), steps 1 and 2 of Example 1 were repeated.
Результаты исследований отражены в таблицах 3 и 4.The research results are shown in tables 3 and 4.
Действие композиции, состоящей из двух пептидов с формулами (Arg-Gly-Asp и H-Tyr-X-Y-Glu-OH, где Х - Gln, Y - Cys(acm) на пролиферативную активность МНК.Table 3.
The effect of a composition consisting of two peptides with the formulas (Arg-Gly-Asp and H-Tyr-XY-Glu-OH, where X is Gln, Y is Cys (acm) on the proliferative activity of MNCs.
Влияние композиции, состоящей из двух пептидов с формулами (Н-Arg-Gly-Asp-OH и H-Tyr-X-Y-Glu-OH, где Х - Gln, Y - Cys(acm) на способность индуцировать супрессорную активность МНК.Table 4.
The effect of a composition consisting of two peptides with the formulas (H-Arg-Gly-Asp-OH and H-Tyr-XY-Glu-OH, where X is Gln, Y is Cys (acm) on the ability to induce the suppressor activity of MNCs.
В результате получили, что данная композиция также подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванных ФГА, и индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови при использовании в дозах 0,03 мкг/мл-3,00 мкг/мл.As a result, it was found that this composition also suppresses the proliferative activity of peripheral blood mononuclear cells caused by PHA and induces the suppressor activity of peripheral blood mononuclear cells when used in doses of 0.03 μg / ml-3.00 μg / ml.
Пример 3.Example 3
При исследовании действия композиции 3-го и 4-го типов из 2-х пептидов с Arg-Gly-Asp и H-Tyr-Gln-Cys-Glu-OH и Arg-Gly-Asp и Н-Туr-Glu-Cys(acm)-Glu-OH, взятых в равных долях и в соотношении 1:4, повторили действия п.1 и п.2 примера 1.In studying the effects of compositions of the 3rd and 4th types of 2 peptides with Arg-Gly-Asp and H-Tyr-Gln-Cys-Glu-OH and Arg-Gly-Asp and H-Tur-Glu-Cys ( acm) -Glu-OH, taken in equal proportions and in a ratio of 1: 4, repeated the steps 1 and 2 of example 1.
Результаты исследований действия композиции из двух пептидов с Arg-Gly-Asp и H-Tyr-Gln-Cys-Glu-OH на пролиферативную активность и на способность индуцировать супрессорную активность МНК отражены в таблицах 5 и 6.The results of studies of the effect of the composition of two peptides with Arg-Gly-Asp and H-Tyr-Gln-Cys-Glu-OH on proliferative activity and on the ability to induce suppressor activity of MNCs are shown in tables 5 and 6.
Диапазон доз 0,02-3,6 мкг/мл.The dose range is 0.02-3.6 μg / ml.
Результаты исследований действия композиции из двух пептидов с Arg-Gly-Asp и H-Tyr-Glu-Cys(acm)-Glu-OH на пролиферативную активность и на способность индуцировать супрессорную активность МНК отражены в таблицах 7 и 8.The results of studies of the effect of the composition of two peptides with Arg-Gly-Asp and H-Tyr-Glu-Cys (acm) -Glu-OH on proliferative activity and on the ability to induce suppressor activity of MNCs are shown in tables 7 and 8.
Диапазон доз 0,02-3,6 мкг/мл.The dose range is 0.02-3.6 μg / ml.
В результате получили, что данные композиции подавляют пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванных ФГА, и индуцируют супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови при использовании в дозах 0,03 мкг/мл - 3,00 мкг/мл.As a result, it was found that these compositions suppress the proliferative activity of peripheral blood mononuclear cells caused by PHA and induce the suppressor activity of peripheral blood mononuclear cells when used in doses of 0.03 μg / ml - 3.00 μg / ml.
Кроме того, исследовались и другие типы (варианты) заявляемой композиции, состоящей из 2-х пептидов, которые также подтвердили их способность подавлять пролиферативную активность и индуцировать супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови человека. Следует отметить значительную простоту получения всех вариантов композиций из 2-х пептидов.In addition, we investigated other types (variants) of the claimed composition, consisting of 2 peptides, which also confirmed their ability to inhibit proliferative activity and induce suppressor activity of mononuclear cells in human peripheral blood. It should be noted the significant simplicity of obtaining all variants of the compositions of 2 peptides.
Пример 4Example 4
Исследовали влияние композиции, состоящей из 2-х пептидов с формулами (Arg-Gly-Asp и H-Tyr-X-Y-Glu-OH, где Х - Gln и/или Glu, Y - Cys(acm) и/или Cys на способность индуцировать продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 (ТФР-β1) и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови.The effect of a composition consisting of 2 peptides with the formulas (Arg-Gly-Asp and H-Tyr-XY-Glu-OH, where X is Gln and / or Glu, Y is Cys (acm) and / or Cys on the ability induce the production of cytokines-transforming growth factor beta 1 (TGF-β1) and interleukin-10 (IL-10) by peripheral blood mononuclear cells (MNCs).
На первом этапе получали суспензию МНК методом седиментации клеток в одноступенчатом градиенте фиколл-утротраста (метод Воyum).At the first stage, a suspension of MNC was obtained by the method of cell sedimentation in a single-stage gradient of ficoll utrotrust (Boyum method).
МНК делили на 2 равные части, первую из которых культивировали без композиции, состоящей из 2-х пептидов, вторую с композицией, состоящей из 2-х пептидов.MNCs were divided into 2 equal parts, the first of which was cultured without a composition consisting of 2 peptides, the second with a composition consisting of 2 peptides.
МНК культивируют в пенициллиновых флаконах, закрытых резиновыми пробками №14,5 при температуре 37°С. Среда культивирования RPMI-1640 с добавлением 20% сыворотки IV АВ группы крови и глютамина.MNCs are cultivated in penicillin vials closed with rubber stoppers No. 14.5 at a temperature of 37 ° C. Cultivation medium RPMI-1640 with the addition of 20% serum IV AB blood group and glutamine.
В каждом флаконе культивировали 5×106 МНК в 1 мл полной среды. К культуре МНК для индукции выработки цитокинов ТФР-β1 и ИЛ-10 добавляли композицию, состоящую из 2-х пептидов.In each vial, 5 × 10 6 MNCs were cultured in 1 ml of complete medium. A composition consisting of 2 peptides was added to the culture of MNCs to induce the production of TGF-β1 and IL-10 cytokines.
Культивирование клеток осуществляли 24 часа. После этого культуральную среду отделяли от клеток путем центрифугирования 1000 g 10 минут и из нее забирали 500 мкл, необходимой для выполнения анализа.Cell cultivation was carried out 24 hours. After that, the culture medium was separated from the cells by centrifugation of 1000 g for 10 minutes and 500 μl necessary for the analysis was taken from it.
При определении количества ТФР-β1 в культуральной среде первоначально производили экстракцию образцов. Этот этап анализа позволяет освободить ТФР-β1 из комплексов, сделав его доступным для анализа.When determining the amount of TGF-β1 in the culture medium, samples were initially extracted. This stage of the analysis allows the release of TGF-β1 from the complexes, making it available for analysis.
Для этого в полипропиленовую пробирку вносили 0,25 мл (250 мкл) культуральной среды и 0,05 (50 мкл) экстрагирующего раствора. Перемешивали содержимое на вортексе. Инкубировали 30 минут при 4°С. Добавляли в пробирку 250 мкл рабочего буферного раствора для разведения стандартов. На этом этапе происходит разбавление культуральной среды в 2,2 раза.For this, 0.25 ml (250 μl) of the culture medium and 0.05 (50 μl) of the extraction solution were added to the polypropylene tube. Vortexed the contents. Incubated for 30 minutes at 4 ° C. 250 μl of working buffer solution was added to the tube for dilution of standards. At this stage, the culture medium is diluted 2.2 times.
Далее брали требуемое для проведения анализа число 8 луночных стрипов из разборного микропланшета, покрытого антителами к ТФР-β1.Next, the required number of 8 hole strips required for analysis was taken from a collapsible microplate coated with antibodies to TGF-β1.
Для повышения достоверности результатов анализа исследуемые и контрольные образцы ставили в дубликатах, используя для каждого образца две лунки. Вносили по 200 мкл каждого стандарта и экстрагированного образца или клотрона в соответствующие лунки. Добавляли по 500 мкл биотинилированных антител к ТФР-β1 во все лунки, перемешивали путем постукивания по планшету. Закрывали планшету пленкой и инкубировали 30 минут при комнатной температуре. Полностью удаляли содержимое лунок. Промывали все лунки 4 раза рабочим буферным раствором, добавляя его каждый раз по 400 мл во все лунки. При этом каждый раз полностью заполняли и удаляли из лунок стрипов раствор. После завершения промывки от остатков влаги освобождали постукивая перевернутыми стрипами по фильтровальной бумаге. Добавляли 100 мкл рабочего раствора конъюгата стрептавидин-пероксидазы в каждую лунку, за исключением хромогенного бланка. Закрывали планшету пленкой и инкубировали 30 минут при комнатной температуре. Полностью удаляли содержимое лунок. Промывали лунки 4 раза рабочим буферным раствором. Далее вносили во все лунки по 100 мкл хромогенного раствора тетраметилбензидина (ТМБ). Инкубировали 20-30 минут при комнатной температуре в темноте до появления голубой окраски в лунках с калибровочной пробой с максимальным содержанием ТФР-β1.To increase the reliability of the analysis results, the test and control samples were placed in duplicates using two wells for each sample. 200 μl of each standard and extracted sample or clotron were added to the respective wells. 500 μl of biotinylated anti-TGF-β1 antibodies were added to all wells, mixed by tapping on a plate. The plate was covered with a film and incubated for 30 minutes at room temperature. The contents of the wells were completely removed. Wash all wells 4 times with working buffer, adding 400 ml each time to all wells. At the same time, each time the solution was completely filled and removed from the holes of the strips. After washing was completed, the remaining moisture was freed by tapping inverted strips on filter paper. 100 μl of streptavidin peroxidase conjugate working solution was added to each well, with the exception of the chromogenic blank. The plate was covered with film and incubated for 30 minutes at room temperature. The contents of the wells were completely removed. The wells were washed 4 times with working buffer solution. Then, 100 μl of a chromogenic solution of tetramethylbenzidine (TMB) were added to all wells. They were incubated for 20-30 minutes at room temperature in the dark until a blue color appeared in the wells with a calibration sample with a maximum TGF-β1 content.
Вносили в каждую лунку по 100 мкл стоп раствора (раствор 1Н серной кислоты) для остановки ферментативной реакции. Перемешивали реагенты путем осторожного постукивания по держателю стрипов. Цвет раствора изменялся с голубого на желтый.100 μl of stop solution (1N sulfuric acid solution) was added to each well to stop the enzymatic reaction. The reagents were mixed by gently tapping the strip holder. The color of the solution changed from blue to yellow.
Регистрацию результатов проводили фотометрически на фотометре для иммуноферментного анализа при длине волны 450 нм сразу после остановки ферментативной реакции.The results were recorded photometrically on a photometer for enzyme immunoassay at a wavelength of 450 nm immediately after stopping the enzymatic reaction.
Для определения концентрации ТФР-β1 в исследуемых образцах строили калибровочную кривую в координатах: ось абсцисс - концентрация ТФР-β1 в калибровочных пробах (рг/мл); ось ординат - соответствующее значение оптической плотности.To determine the concentration of TGF-β1 in the studied samples, a calibration curve was constructed in the coordinates: abscissa axis — concentration of TGF-β1 in calibration samples (rg / ml); the ordinate axis is the corresponding value of the optical density.
По калибровочной кривой, исходя из полученного значения оптической плотности, определяли концентрацию ТФР-β1 в исследуемых образцах. Если образцы были предварительно разбавлены, полученные значения концентраций умножали на коэффициент разведения (10, 100,1000 и т.п.).Using the calibration curve, based on the obtained optical density, the concentration of TGF-β1 in the studied samples was determined. If the samples were previously diluted, the obtained concentration values were multiplied by a dilution factor (10, 100.1000, etc.).
Для определения количества ИЛ-10 в культуральной среде брали требуемое для проведения анализа число 8 луночных стрипов из разборного микропланшета, покрытого антителами к ИЛ-10.To determine the amount of IL-10 in the culture medium, the number of 8 hole strips required for analysis was taken from a collapsible microplate coated with antibodies to IL-10.
Для повышения достоверности результатов анализа исследуемые и контрольные образцы ставили в дубликатах, используя для каждого образца две лунки.To increase the reliability of the analysis results, the test and control samples were placed in duplicates using two wells for each sample.
Вносили 50 мкл каждого стандарта, испытуемого образца или контрольного образца в соответствующие лунки. Добавляли по 50 мкл инкубационного буфера для лунок, содержащих стандарты, и 50 мкл разбавляющего рабочего раствора в лунки, содержащие культуральную среду. Закрывали планшет пленкой и инкубировали 2 часа при комнатной температуре. Полностью удаляли содержимое лунок.50 μl of each standard, test sample, or control was added to the appropriate wells. 50 μl of standard incubation well buffer and 50 μl of dilution working solution were added to wells containing culture medium. The plate was covered with film and incubated for 2 hours at room temperature. The contents of the wells were completely removed.
Промывали все лунки 4 раза рабочим буферным раствором, добавляя его каждый раз по 400 мкл во все лунки. При этом каждый раз полностью заполняли и удаляли из лунок стрипов раствор. Добавляли по 100 мкл биотинилированных антител к ИЛ-10 во все лунки, перемешивали путем постукивания по планшету.Wash all wells 4 times with working buffer, adding 400 μl each time to all wells. At the same time, each time the solution was completely filled and removed from the holes of the strips. 100 μl of biotinylated anti-IL-10 antibodies were added to all wells, mixed by tapping the plate.
Закрывали планшет пленкой и инкубировали 2 часа при комнатной температуре. Полностью удаляли содержимое лунок. Промывали все лунки 4 раза рабочим буферным раствором. Добавляли 100 мкл рабочего раствора конъюгата стрептавидин-пероксидаза в каждую лунку за исключением хромогенного бланка.The plate was covered with film and incubated for 2 hours at room temperature. The contents of the wells were completely removed. Washed all wells 4 times with working buffer solution. 100 μl of streptavidin peroxidase conjugate stock solution was added to each well except for the chromogenic blank.
Закрывали планшет пленкой и инкубировали 30 минут при комнатной температуре. Полностью удаляли содержимое лунок. Промывали лунки 4 раза рабочим буферным раствором.The plate was covered with film and incubated for 30 minutes at room temperature. The contents of the wells were completely removed. The wells were washed 4 times with working buffer solution.
Далее вносили во все лунки по 100 мкл хромогенного раствора тетраметилбензидина (ТМБ).Then, 100 μl of a chromogenic solution of tetramethylbenzidine (TMB) were added to all wells.
Инкубировали 20-30 минут при комнатной температуре в темноте до появления голубой окраски в лунках с калибровочной пробой с максимальным содержанием ИЛ-10.They were incubated for 20-30 minutes at room temperature in the dark until a blue color appeared in the wells with a calibration sample with a maximum content of IL-10.
Вносили в каждую лунку по 100 мкл стоп раствора (раствор 1Н серной кислоты) для остановки ферментативной реакции. Перемешивали реагенты путем осторожного постукивания по держателю стрипов. Цвет раствора изменялся с голубого на желтый.100 μl of stop solution (1N sulfuric acid solution) was added to each well to stop the enzymatic reaction. The reagents were mixed by gently tapping the strip holder. The color of the solution changed from blue to yellow.
Регистрацию результатов также проводили фотометрически на фотометре для иммуноферментного анализа при длине волны 450 нм сразу после остановки ферментативной реакции.The results were also recorded photometrically on a photometer for enzyme immunoassay at a wavelength of 450 nm immediately after stopping the enzymatic reaction.
Для определения концентрации ИЛ-10 в исследуемых образцах строили калибровочную кривую в координатах: ось абсцисс - концентрация ИЛ-10 в калибровочных пробах (рг/мл); ось ординат - соответствующее значение оптической плотности.To determine the concentration of IL-10 in the studied samples, a calibration curve was constructed in the coordinates: abscissa axis — concentration of IL-10 in calibration samples (rg / ml); the ordinate axis is the corresponding value of the optical density.
По калибровочной кривой, исходя из полученного значения оптической плотности, определяли концентрацию ИЛ-10 в исследуемых образцах. Если образцы были предварительно разбавлены, полученные значения концентраций должны быть умножены на коэффициент разведения (10, 100, 1000 и т.п.).Using the calibration curve, based on the obtained optical density, the concentration of IL-10 in the samples was determined. If the samples were previously diluted, the obtained concentration values should be multiplied by a dilution factor (10, 100, 1000, etc.).
В результате проведенных исследований было установлено, что композиция, состоящая из 2-х пептидов, обладает способностью индуцировать продукцию одновременно 2-х цитокинов - ТФР-β1 и ИЛ-10 мононуклеарными клетками периферической крови.As a result of the studies, it was found that the composition consisting of 2 peptides has the ability to induce the production of 2 cytokines simultaneously - TGF-β1 and IL-10 by peripheral blood mononuclear cells.
Пример 5-1Example 5-1
Действие композиции, состоящей из двух пептидов с формулами Arg-Gly-Asp и H-Tyr-X-Y-Glu-OH, где Х - Glu, Y - Cys (acm), на пролиферативную активность МНК при соотношении первого пептида со вторым 4:1.The effect of a composition consisting of two peptides with the formulas Arg-Gly-Asp and H-Tyr-XY-Glu-OH, where X is Glu, Y is Cys (acm), on the proliferative activity of MNCs in the ratio of the first peptide to the second 4: 1 .
Диапазон используемых доз составлял 0,02 мкг/мл-3,6 мкг/мл.The dose range used was 0.02 μg / ml-3.6 μg / ml.
Результаты исследований отражены в таблице 9.The research results are shown in table 9.
Пример 5-2.Example 5-2.
Результаты исследований влияния композиции, состоящей из двух пептидов с формулами Arg-Gly-Asp и H-Tyr-X-Y-Glu-OH, где Х - Glu, Y - Cys(acm), на способность индуцировать супрессорную активность МНС при соотношении первого пептида со вторым пептидом 4:1 отражены в таблице 10. Диапазон доз 0,02-3,6 мкг/мл.The results of studies of the effect of a composition consisting of two peptides with the formulas Arg-Gly-Asp and H-Tyr-XY-Glu-OH, where X is Glu, Y is Cys (acm), on the ability to induce the suppressor activity of MHC at the ratio of the first peptide with the second peptide 4: 1 is shown in table 10. The dose range is 0.02-3.6 μg / ml.
Пример 6-1 и 6-2.Example 6-1 and 6-2.
Результаты исследований действия композиции, состоящей из двух пептидов с формулами Arg-Gly-Asp и H-Tyr-X-Y-Glu-OH, где Х - Gln, Y - Cys(acm), на пролиферативную активность и на способность индуцировать супрессорную активность МНК при соотношении первого пептида со вторым пептидом 10:1 отражены в таблицах 11 и 12.The results of studies of the effect of a composition consisting of two peptides with the formulas Arg-Gly-Asp and H-Tyr-XY-Glu-OH, where X is Gln, Y is Cys (acm), on proliferative activity and on the ability to induce suppressor activity of MNCs the ratio of the first peptide to the second peptide 10: 1 are shown in tables 11 and 12.
Диапазон доз 0,02-3,6 мкг/мл.The dose range is 0.02-3.6 μg / ml.
Пример 7-1 и 7-2.Example 7-1 and 7-2.
Результаты исследований действия композиции из двух пептидов с Arg-Gly-Asp и H-Tyr-Gln-Cys-Glu-OH на пролиферативную активность и на способность индуцировать супрессорную активность МНК при соотношении первого пептида со вторым пептидом 1:4 отражены в таблицах 13 и 14.The results of studies of the effect of the composition of two peptides with Arg-Gly-Asp and H-Tyr-Gln-Cys-Glu-OH on proliferative activity and on the ability to induce suppressor activity of MNCs with a ratio of the first peptide to the second peptide 1: 4 are shown in tables 13 and 14.
Диапазон доз 0,02-3,6 мкг/мл.The dose range is 0.02-3.6 μg / ml.
Пример 8-1 и 8-2.Example 8-1 and 8-2.
Результаты исследований действия композиции из двух пептидов с Arg-Gly-Asp и H-Tyr-Glu-Cys(acm)-Glu-OH на пролиферативную активность и на способность индуцировать супрессорную активность МНК при соотношении первого пептида со вторым пептидом 1:10 отражены в таблицах 15 и 16. Диапазон доз 0,02-3,6 мкг/мл.The results of studies of the effect of the composition of two peptides with Arg-Gly-Asp and H-Tyr-Glu-Cys (acm) -Glu-OH on proliferative activity and on the ability to induce suppressor activity of MNCs with a ratio of the first peptide to the second peptide 1:10 are reflected in tables 15 and 16. The dose range is 0.02-3.6 μg / ml.
Таким образом примеры 5-1, 5-2, 6-1, 6-2, 7-1, 7-2, 8-1, 8-2, в которых пептиды смешивались в соотношении 4:1, 10:1, 1:4 и 1:10, свидетельствуют об отсутствии преимуществ получения данных композиций перед композицией с пептидами в долях, соотношение которых равно 1:1.Thus, examples 5-1, 5-2, 6-1, 6-2, 7-1, 7-2, 8-1, 8-2, in which the peptides were mixed in a ratio of 4: 1, 10: 1, 1 : 4 and 1:10, indicate the absence of advantages of obtaining these compositions over the composition with peptides in fractions, the ratio of which is 1: 1.
Пример 9.Example 9
Исследовали влияние композиции всех вышеуказанных типов, состоящей из 2-х пептидов, на выживаемость кожного аллотрансплантата.The effect of a composition of all the above types, consisting of 2 peptides, on the survival of a skin allograft was investigated.
Были взяты 2 группы нелинейных мышей - одна контрольная, другая опытная. У всех мышей иссекали кожный лоскут размером 1,5×2 см и пересаживали другой мыши, у которой также были иссечены участки кожи такого же размера. Все операции производились в условиях асептики (стерильный шовный материал, инструменты и т.д.). Кожный лоскут до приживания обрабатывали в растворе антисептиков. Препарат (композиция из 2-х пептидов) вводили в стерильных условиях. Помещение, в котором находились мыши в послеоперационном периоде, два раза в сутки подвергалось обработке бактерицидной лампой (животные в этот период находились в другой комнате).2 groups of nonlinear mice were taken - one control, the other experimental. All mice had a 1.5 × 2 cm skin flap excised and another mouse transplanted, which also had similar skin size sections. All operations were performed under aseptic conditions (sterile suture material, instruments, etc.). The skin flap before engraftment was treated with a solution of antiseptics. The drug (composition of 2 peptides) was administered under sterile conditions. The room in which the mice were in the postoperative period was treated twice a day with a bactericidal lamp (the animals in this period were in another room).
Первая группа мышей после трансплантации участка кожи получала инъекции физиологического раствора - контрольные мыши. Другой группе мышей после трансплантации участка кожи инъецировали подкожно 1 раз в день композицию, состоящую из 2-х пептидов, ежедневно в течение 10 дней. При этом в контрольной группе, начиная с 4-8 дня кожный трансплантат сморщивался, подсыхая, и на 10 день наступало полное отторжение (у одной мыши на 6 день). А в опытной группе кожный трансплантат прижился и отторжение наступило только на 30 день.The first group of mice after transplantation of a skin site received injections of saline - control mice. After transplantation of a skin site, another group of mice was injected subcutaneously once a day with a composition consisting of 2 peptides daily for 10 days. Moreover, in the control group, starting from 4-8 days, the skin graft shriveled, drying up, and on day 10 there was complete rejection (in one mouse on day 6). And in the experimental group, the skin graft took root and rejection occurred only on day 30.
Таким образом, введение композиции всех вышеуказанных типов, состоящей из 2-х пептидов, опытным мышам, которым была произведена аллотрансплантация участка кожи способствует продлению выживания трансплантата.Thus, the introduction of a composition of all the above types, consisting of 2 peptides, to experimental mice that underwent allotransplantation of a skin site helps to prolong the survival of the graft.
С целью изучения безопасности заявляемой композиции из 2-х пептидов проводили изучение ее острой токсичности. Изучение острой токсичности проводили в соответствии с Методическими рекомендациями Фармакологического комитета РФ “Требования к доклиническому изучению общетоксичного действия новых фармакологических веществ”, Москва, 2001 г. Результаты исследования показали, что при внутрибрюшинном введении 1000 кратной дозы композиции не оказывалось острого токсичного действия и при этих дозах оказалось невозможным достигнуть его LD50. Таким образом, предлагаемая композиция, состоящая из 2-х пептидов, не является токсичной.In order to study the safety of the claimed composition of 2 peptides conducted a study of its acute toxicity. The study of acute toxicity was carried out in accordance with the Methodological Recommendations of the Pharmacological Committee of the Russian Federation “Requirements for the preclinical study of the general toxic effect of new pharmacological substances”, Moscow, 2001. The results of the study showed that with an intraperitoneal administration of a 1000 multiple dose of the composition, there was no acute toxic effect at these doses it was impossible to reach his LD 50 . Thus, the proposed composition, consisting of 2 peptides, is not toxic.
Согласно настоящему изобретению все типы композиции формулы Arg-Gly-Asp и H-Tyr-X-Y-Glu-OH, где Х - Glu и/или Gln, Y - Cys и/или Cys(acm), обладают биологической активностью, описанной в примерах, и могут найти применение в медицине и биологии.According to the present invention, all types of compositions of the formula Arg-Gly-Asp and H-Tyr-XY-Glu-OH, where X is Glu and / or Gln, Y is Cys and / or Cys (acm), have the biological activity described in the examples , and can find application in medicine and biology.
Хотя приведенное выше изобретение было описано довольно подробно для иллюстрации, для среднего специалиста в данной области будет вполне понятно, в свете описания этого изобретения, что могут быть сделаны определенные изменения и модификации изобретения без отхода от идеи или сферы действия предлагаемой формулы изобретения.Although the above invention has been described in sufficient detail to illustrate, for a person skilled in the art it will be quite clear, in light of the description of this invention, that certain changes and modifications of the invention can be made without departing from the idea or scope of the proposed claims.
Claims (3)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003123533/04A RU2244719C1 (en) | 2003-07-29 | 2003-07-29 | Peptide composition eliciting immunity regulating property |
| PCT/RU2004/000247 WO2005009455A1 (en) | 2003-07-29 | 2004-06-28 | Peptide compound exhibiting an immunoregulatory property |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003123533/04A RU2244719C1 (en) | 2003-07-29 | 2003-07-29 | Peptide composition eliciting immunity regulating property |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2244719C1 true RU2244719C1 (en) | 2005-01-20 |
| RU2003123533A RU2003123533A (en) | 2005-02-27 |
Family
ID=34978080
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003123533/04A RU2244719C1 (en) | 2003-07-29 | 2003-07-29 | Peptide composition eliciting immunity regulating property |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2244719C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2119354C1 (en) * | 1996-01-05 | 1998-09-27 | Виктор Савельевич Гуревич | Method of directed transport of pharmacological preparations by their conjugation with arginyl-glycyl-aspartyl (rvd)-containing peptides |
| RU2121850C1 (en) * | 1991-10-22 | 1998-11-20 | Дзе Гавернос оф дзе Юниверсити оф Алберта | Pharmaceutical composition and a method of treatment of patients with cerebrospinal sclerosis |
-
2003
- 2003-07-29 RU RU2003123533/04A patent/RU2244719C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2121850C1 (en) * | 1991-10-22 | 1998-11-20 | Дзе Гавернос оф дзе Юниверсити оф Алберта | Pharmaceutical composition and a method of treatment of patients with cerebrospinal sclerosis |
| RU2119354C1 (en) * | 1996-01-05 | 1998-09-27 | Виктор Савельевич Гуревич | Method of directed transport of pharmacological preparations by their conjugation with arginyl-glycyl-aspartyl (rvd)-containing peptides |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Гусев Е.И., Демина Т.Л., Бойко А.Н., "Рассеянный склероз", Москва, 1997, стр.317. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2003123533A (en) | 2005-02-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Davidson | Estimation of the survival-rate of anopheline mosquitoes in nature | |
| Marks et al. | Protein breakdown in the brain. Subcellular distribution and properties of neutral and acid proteinases | |
| Felczykowska et al. | Selective inhibition of cancer cells' proliferation by compounds included in extracts from Baltic Sea cyanobacteria | |
| Arokiyaraj et al. | Phytochemical screening, antibacterial and free radical scavenging effects of Artemisia nilagirica, Mimosa pudica and Clerodendrum siphonanthus–An in–vitro study | |
| US6506414B2 (en) | Low molecular weight components of shark cartilage, processes for their preparation and therapeutic uses thereof | |
| CN118256582A (en) | Preparation method and application of Xue's sea dragon peptide | |
| Insanu et al. | Curcacycline A and B–new pharmacological insights to an old drug | |
| EP2667887B1 (en) | Pharmaceutical composition comprising the peptide glu-asp-gly and use for treating helicobacter pylori induced gastroduodenal diseases | |
| DK166806B1 (en) | APPLICATION OF PLANT PULP EXTRACTS FOR THE PREPARATION OF PHARMACEUTICAL TUMOR CELL GROWTH PREPARATIONS | |
| EP0792886A1 (en) | Novel peptide and therapeutic agent | |
| RU2244719C1 (en) | Peptide composition eliciting immunity regulating property | |
| Ababsa et al. | Chemical characterization and biological study of the species Senecio cineraria | |
| RU2266297C1 (en) | Peptide composition possessing immunoregulatory property | |
| CN106317170B (en) | Perilla seed antioxidant peptide and application thereof | |
| CN110204594B (en) | Protein kinase polypeptide inhibitor | |
| RU2210382C1 (en) | Peptide with immunoregulating property and composition based on thereof | |
| RU2747024C1 (en) | Composition with anti-inflammatory and immunosuppressive activity based on the secretome of multipotent mesenchymal stromal cells and a method for its preparation | |
| CN117338856B (en) | Preparation method of lycium ruthenicum anthocyanin composition, product and application of lycium ruthenicum anthocyanin composition | |
| CN118440143B (en) | A kind of nereid antioxidant peptide and its preparation method and application | |
| CN113698451B (en) | Microalgae polypeptide and preparation method and application thereof | |
| WO1991016345A1 (en) | Cyclic peptides and their use | |
| EP1041997B1 (en) | Use of citrulline peptides derived from filaggrin for treating autoimmune diseases | |
| CN100406058C (en) | A kind of placenta factor and its preparation method and application | |
| FR2597107A1 (en) | TRIPEPTIDE HAVING AN IMMUNOSTIMULATING ACTIVITY | |
| Cole et al. | Chromatographic fractions of bee venom: Cytotoxicity for mouse bone marrow stem cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090730 |