RU2138288C1 - Method of preparing tetanus anatoxin polymeric fraction - Google Patents
Method of preparing tetanus anatoxin polymeric fraction Download PDFInfo
- Publication number
- RU2138288C1 RU2138288C1 RU98110853A RU98110853A RU2138288C1 RU 2138288 C1 RU2138288 C1 RU 2138288C1 RU 98110853 A RU98110853 A RU 98110853A RU 98110853 A RU98110853 A RU 98110853A RU 2138288 C1 RU2138288 C1 RU 2138288C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- stage
- concentrate
- carried out
- filtrate
- ultrafiltration
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 title abstract description 3
- SGNXVBOIDPPRJJ-PSASIEDQSA-N 1-[(1r,6r)-9-azabicyclo[4.2.1]non-4-en-5-yl]ethanone Chemical compound CC(=O)C1=CCC[C@@H]2CC[C@H]1N2 SGNXVBOIDPPRJJ-PSASIEDQSA-N 0.000 title abstract 3
- 239000003948 anatoxin Substances 0.000 title abstract 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 16
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims abstract description 12
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000011034 membrane dialysis Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 8
- 241000193449 Clostridium tetani Species 0.000 claims abstract description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 claims description 9
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 8
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 claims description 6
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 2
- 229920005597 polymer membrane Polymers 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 6
- 238000004064 recycling Methods 0.000 abstract description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000003822 epoxy resin Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229920000647 polyepoxide Polymers 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- GCLGEJMYGQKIIW-UHFFFAOYSA-H sodium hexametaphosphate Chemical compound [Na]OP1(=O)OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])O1 GCLGEJMYGQKIIW-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 235000019982 sodium hexametaphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 description 1
- 231100000033 toxigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицинской промышленности, а именно к вакцинно-сывороточному делу, и касается совершенствования процесса производства прививочных препаратов. The invention relates to the medical industry, namely to the vaccine-whey case, and for improving the process of production of vaccination preparations.
Столбнячный анатоксин является препаратом для профилактики столбняка. Процесс его получения включает несколько стадий: культивирование токсигенного штамма Clostridium tetani, частичное обезвреживание анатоксина, собранного из культуральной среды, переосаждение частично обезвреженного токсина гексаметафосфатом натрия в изоэлектрической точке и дообезвреживание формалином до состояния анатоксина (см. "Руководство по вакцинному и сывороточному делу", п/р ак. П.Н. Бургасова, М., Медицина, 1978, с. 103-133). Хотя процесс получения препарата известен давно и в достаточной степени отработан, однако воспроизводимость его низка: конечный продукт не всегда имеет требуемые показатели удельной специфической активности (отношение антигенности к содержанию белкового азота), соответствующие рекомендациям ВОЗ (не ниже 1000 ЕС/мг белкового азота), что предопределено наличием в исходном полупродукте различных молекулярных форм анатоксина (полимерной, олигомерной и т.д.), а также примесных продуктов микробного происхождения. Tetanus toxoid is a drug for tetanus prophylaxis. The process of its preparation includes several stages: the cultivation of the toxigenic strain of Clostridium tetani, the partial neutralization of the toxoid collected from the culture medium, the reprecipitation of the partially neutralized toxin with sodium hexametaphosphate at the isoelectric point and the formalin neutralization to the toxoid state (see the “Vaccine and Serum Administration Guide” / r.Ac. P.N. Burgasova, M., Medicine, 1978, p. 103-133). Although the process of obtaining the drug has been known for a long time and has been sufficiently developed, its reproducibility is low: the final product does not always have the required specific specific activity indicators (the ratio of antigenicity to protein nitrogen content), consistent with WHO recommendations (at least 1000 EU / mg protein nitrogen), which is predetermined by the presence in the initial intermediate of various molecular forms of toxoid (polymer, oligomeric, etc.), as well as impurity products of microbial origin.
Известен способ получения полимерной и олигомерной фракций столбнячного анатоксина, полученного при культивировании штамма Clostridium tetani, путем выделения фракций методом двухступенчатой ультрафильтрации с использованием особым образом выполненных мембран (RU 2065765 C1, B 01 D 71/56, 27.08.96). На первой стадии фракции очищают на половолоконной мембране типа УАВ-0,2 100М, на второй стадии - на плоских мембранах с эксклюзионным пределом 300 кД. Указанное изобретение может быть принято в качестве ближайшего аналога патентуемого способа. A known method for producing polymer and oligomeric fractions of tetanus toxoid obtained by culturing a strain of Clostridium tetani by isolating fractions by two-stage ultrafiltration using specially made membranes (RU 2065765 C1, B 01 D 71/56, 08/27/96). At the first stage, the fractions are purified on a hollow fiber membrane of the UV-0.2 100M type, and at the second stage, on flat membranes with an exclusion limit of 300 kD. The specified invention can be taken as the closest analogue of the patented method.
Однако в процессе упомянутой двухступенчатой ультрафильтрации и многократного мембранного диализа (отмывок) фракций анатоксина стандартным 0,05 М фосфатным буферным раствором во многих случаях ухудшается стабильность препарата и в итоге удельная специфическая активность остается ниже установленных требований. Это происходит потому, что в процессе многократного мембранного диализа могут нарушаться параметры молекулярной конформации, задаваемые по технологии, отработанной применительно к условиям равновесного диализа. Не исключена также вероятность взаимодействия в этих условиях имеющихся в концентрате балластных белков с молекулами анатоксина. Именно поэтому и в конечном препарате не достигаются граничные показатели удельной специфической активности. However, in the process of the aforementioned two-stage ultrafiltration and repeated membrane dialysis (washing) of the toxoid fractions with the standard 0.05 M phosphate buffer solution, in many cases the stability of the preparation worsens and as a result, the specific specific activity remains below the established requirements. This is because in the process of multiple membrane dialysis, the molecular conformation parameters set by the technology developed in relation to the conditions of equilibrium dialysis can be violated. It is also possible that under these conditions the interaction of ballast proteins in the concentrate with toxoid molecules can occur. That is why in the final preparation boundary indicators of specific specific activity are not reached.
Задачей изобретения является получение полимерной фракции столбнячного анатоксина, характеризующейся более высокой степенью очистки, и вследствие этого, более высокими удельной специфической и протективной активностями, соответствующими требованиям ВОЗ. The objective of the invention is to obtain a polymer fraction of tetanus toxoid, characterized by a higher degree of purification, and as a result, higher specific and protective activity corresponding to WHO requirements.
Технический результат изобретения обеспечивается тем, что способ предусматривает проведение двухступенчатой ультрафильтрационной очистки концентрата дообезвреженного фильтрата культуры Clostridium tetani штамма Копенгаген через полупроницаемые полимерные мембраны с эксклюзионными пределами до 100 кД (на первой ступени) и до 300 кД (на второй ступени) с последующим мембранным диализом 0,05 М фосфатным буферным раствором. Особенность способа состоит в том, что мембранный диализ концентрата на первой ступени проводят фосфатным буферным раствором, который дополнительно содержит 0,13-0,17% формалина и 0,3 М хлорида натрия. The technical result of the invention is ensured by the fact that the method provides for a two-stage ultrafiltration purification of a concentrate of a pre-treated filtrate culture of Clostridium tetani strain Copenhagen through semipermeable polymer membranes with exclusion limits of up to 100 kD (in the first stage) and up to 300 kD (in the second stage) followed by membrane dialysis 0 , 05 M phosphate buffered saline. A feature of the method is that the membrane dialysis of the concentrate in the first stage is carried out with a phosphate buffer solution, which additionally contains 0.13-0.17% formalin and 0.3 M sodium chloride.
Дополнительный технический результат - уменьшение потерь полимерной фракции анатоксина обеспечивается за счет проведения рециклинга и подбора оптимальных условий для его реализации. Это достигается тем, что фильтрат со второй ступени ультрафильтрационного процесса направляют на вход первой ступени, при этом ионную силу фосфатного буфера снижают до значений, соответствующих концентрации хлорида натрия в интервале 0,04-0,06 М. An additional technical result - a decrease in the loss of the polymer fraction of the toxoid is ensured by recycling and selection of optimal conditions for its implementation. This is achieved by the fact that the filtrate from the second stage of the ultrafiltration process is sent to the inlet of the first stage, while the ionic strength of the phosphate buffer is reduced to values corresponding to the concentration of sodium chloride in the range of 0.04-0.06 M.
Применение модифицированного буферного раствора, состав которого подобран экспериментально, позволяет, с одной стороны, стабилизировать полимерную фракцию и обеспечить максимальный ее выход на второй ступени ультрафильтрации (с мембраной с эксклюзионным пределом 300 кД). С другой стороны, использование буферного раствора с повышенной ионной силой (за счет добавления 0,3 М хлорида натрия) позволяет наиболее полно освободиться от белковых балластных примесей уже на первой ступени ультрафильтрации на мембране с эксклюзионным пределом 100 кД. The use of a modified buffer solution, the composition of which is selected experimentally, allows, on the one hand, to stabilize the polymer fraction and ensure its maximum yield at the second stage of ultrafiltration (with a membrane with an exclusion limit of 300 kD). On the other hand, the use of a buffer solution with increased ionic strength (due to the addition of 0.3 M sodium chloride) allows one to most completely free of protein ballast impurities already at the first stage of ultrafiltration on a membrane with an exclusion limit of 100 kD.
Пример реализации. Implementation example.
Процесс получения полимерной фракции столбнячного анатоксина проводят в две стадии. The process of obtaining the polymer fraction of tetanus toxoid is carried out in two stages.
На первой ступени процесс проводят на установках типа АУФ-01 с половолоконной мембраной марки УАВ-0,2 100 М на основе полиметафенилентереизофталамида, модифицированного водорастворимым реагентом и эпоксидной смолой. Исходный анатоксин берут в объеме 10 - 12 литров, его удельная специфическая активность составляет от 400 до 750 ЕС/мг белкового азота. Фильтрацию проводят при рабочем давлении 0,6 - 0,7 МПа. Сконцентрированный в 5 раз анатоксин промывают 8 - 10 раз двукратными объемами раствора модифицированного 0,05 М фосфатного буфера, дополнительно содержащего 0,15% формалина и 0,3 М хлорида натрия, контролируя степень отмывки по изменению величины оптической плотности промывочного фильтрата. Затем концентрат собирают, а фильтрат отбрасывают. At the first stage, the process is carried out in installations of the AUF-01 type with a hollow fiber membrane of the UAV-0.2 100 M brand based on polymethaphenylene tereisophthalamide modified with a water-soluble reagent and epoxy resin. The initial toxoid is taken in a volume of 10 - 12 liters, its specific specific activity is from 400 to 750 EU / mg of protein nitrogen. Filtration is carried out at a working pressure of 0.6 - 0.7 MPa. A 5-fold concentrated toxoid is washed 8 to 10 times with two volumes of a solution of a modified 0.05 M phosphate buffer, additionally containing 0.15% formalin and 0.3 M sodium chloride, controlling the degree of washing by changing the optical density of the washing filtrate. Then the concentrate is collected, and the filtrate is discarded.
Далее, полученный концентрат подвергают очистке на второй ступени ультрафильтрации через мембрану с эксклюзионным пределом 300 кД. Next, the resulting concentrate is subjected to purification at the second stage of ultrafiltration through a membrane with an exclusion limit of 300 kD.
В ячейку аппарата типа "Amicon 2000" с мембраной марки "Diaflo ХМ-300" заливают 2 литра концентрата, ранее очищенного на первой ступени. Включают магнитную мешалку со скоростью вращения 30-40 об/мин и газообразным азотом создают в ячейке избыточное давление в диапазоне 0,06-0,07 МПа. В ячейке аппарата оставляют 300-500 мл концентрата, который промывают 3 - 5 раз стандартным 0,05 М фосфатным буферным раствором и отбирают. Фильтрат, продавленный через мембрану, собирают в мерный цилиндр для дальнейшего использования в рециклинге: в последующем его вновь направляют на вход первой ступени, снижая ионную силу фосфатного буфера приблизительно в два раза. Для этого готовят фосфатный буферный раствор на растворе хлорида натрия заданной концентрации
Таким образом, методом последовательной двухступенчатой ультрафильтрации удается во всех случаях повысить удельную активность анатоксина до 1000 ЕС/мг белкового азота, получив в изолированном виде полимерную фракцию столбнячного анатоксина (см. таблицу). Препараты столбнячного анатоксина, дополнительно очищенные по вышеописанному способу, прошли комиссионную проверку в ГИСК им. Тарасевича. Подтверждены их высокие удельная специфическая и протективная активности.In the cell of the apparatus of the type "Amicon 2000" with a membrane of the brand "Diaflo XM-300" pour 2 liters of concentrate, previously purified in the first stage. Turn on a magnetic stirrer with a rotation speed of 30-40 rpm and gaseous nitrogen create an excess pressure in the cell in the range of 0.06-0.07 MPa. 300-500 ml of concentrate is left in the cell of the apparatus, which is washed 3-5 times with standard 0.05 M phosphate buffer solution and taken. The filtrate, pressed through the membrane, is collected in a graduated cylinder for further use in recycling: in the subsequent it is again sent to the entrance of the first stage, reducing the ionic strength of the phosphate buffer by about half. To do this, prepare a phosphate buffer solution on a solution of sodium chloride of a given concentration
Thus, by the method of sequential two-stage ultrafiltration, it is possible in all cases to increase the specific activity of the toxoid to 1000 EC / mg of protein nitrogen, having obtained in isolation the polymer fraction of tetanus toxoid (see table). Tetanus toxoid preparations, additionally purified by the above method, passed a commission check at the GISK them. Tarasevich. Their high specific and protective activity was confirmed.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98110853A RU2138288C1 (en) | 1998-06-03 | 1998-06-03 | Method of preparing tetanus anatoxin polymeric fraction |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98110853A RU2138288C1 (en) | 1998-06-03 | 1998-06-03 | Method of preparing tetanus anatoxin polymeric fraction |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2138288C1 true RU2138288C1 (en) | 1999-09-27 |
Family
ID=20206956
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98110853A RU2138288C1 (en) | 1998-06-03 | 1998-06-03 | Method of preparing tetanus anatoxin polymeric fraction |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2138288C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2206337C1 (en) * | 2002-10-29 | 2003-06-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Токсины и сопутствующие продукты" | Medicinal preparation for treatment of muscle dystonia and method for its preparing |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0253912A1 (en) * | 1986-07-22 | 1988-01-27 | Brade, Helmut, Dr. med. | Oligosaccharides, method for their manufacture and their use |
| GB2228262A (en) * | 1989-01-25 | 1990-08-22 | Nat Inst Immunology | Antigenic derivative of GnRH |
| WO1992011030A1 (en) * | 1990-12-19 | 1992-07-09 | Schering Corporation | Use of il-4 to enhance immune response to immunogens in vaccines |
| WO1994003206A1 (en) * | 1992-07-31 | 1994-02-17 | The Wellcome Foundation Limited | Tetanus vaccine production |
| RU2065765C1 (en) * | 1994-09-30 | 1996-08-27 | Московская медицинская академия им.И.М.Сеченова | Method for production of polymer and oligomer fraction of tetanus anatoxin |
| RU2078572C1 (en) * | 1992-06-22 | 1997-05-10 | Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н.Габричевского | Method of antitetanus immunoglobulin preparing |
-
1998
- 1998-06-03 RU RU98110853A patent/RU2138288C1/en active IP Right Revival
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0253912A1 (en) * | 1986-07-22 | 1988-01-27 | Brade, Helmut, Dr. med. | Oligosaccharides, method for their manufacture and their use |
| GB2228262A (en) * | 1989-01-25 | 1990-08-22 | Nat Inst Immunology | Antigenic derivative of GnRH |
| WO1992011030A1 (en) * | 1990-12-19 | 1992-07-09 | Schering Corporation | Use of il-4 to enhance immune response to immunogens in vaccines |
| RU2078572C1 (en) * | 1992-06-22 | 1997-05-10 | Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н.Габричевского | Method of antitetanus immunoglobulin preparing |
| WO1994003206A1 (en) * | 1992-07-31 | 1994-02-17 | The Wellcome Foundation Limited | Tetanus vaccine production |
| RU2065765C1 (en) * | 1994-09-30 | 1996-08-27 | Московская медицинская академия им.И.М.Сеченова | Method for production of polymer and oligomer fraction of tetanus anatoxin |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2206337C1 (en) * | 2002-10-29 | 2003-06-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Токсины и сопутствующие продукты" | Medicinal preparation for treatment of muscle dystonia and method for its preparing |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1146862A (en) | Multivalent pneumococcal vaccine and preparation thereof | |
| ES2614249T3 (en) | Abbreviated purification procedure for the production of capsular polysaccharides of Streptococcus pneumoniae | |
| CN105153297B (en) | Method for separating and purifying α 2-macroglobulin from Cohn component IV precipitate | |
| EP1848746A2 (en) | Purification of streptococcal capsular polysaccharide | |
| CN104027797B (en) | A kind of preparation method of diphtheria vaccine | |
| CN116970095A (en) | A kind of preparation method of pneumococcal capsular polysaccharide | |
| RU2138288C1 (en) | Method of preparing tetanus anatoxin polymeric fraction | |
| US10702596B2 (en) | Polysaccharide purification for vaccine production using lytic enzymes, tangential flow filtration, and multimode chromatography | |
| CN114805504B (en) | Preparation method of low-polymerization tetanus toxoid | |
| DE3152621C2 (en) | ||
| US3798320A (en) | Precipitation of bacterial cells with polymers | |
| NO159394B (en) | PROCEDURE FOR THE PREPARATION OF IMMUNOGENIC CAPSULATED POLYOSIDES FROM Capsule Bacteria. | |
| RU2065765C1 (en) | Method for production of polymer and oligomer fraction of tetanus anatoxin | |
| US11926853B2 (en) | Botulinum toxin producing method | |
| CN108948171B (en) | Preparation method of high molecular weight silk fibroin chain segment | |
| CN109438585B (en) | Purification process of type b haemophilus polysaccharide | |
| RU2230325C2 (en) | Method for preparing purified preparation of botulinic toxin type a | |
| CN108251445B (en) | Large-scale preparation process and application of GCRV II S9 and S10 recombinant proteins | |
| US4409103A (en) | Method for the preparation of calcium heparinate | |
| CN105624134A (en) | Method for preparing restrictive thrombin | |
| RU2041716C1 (en) | Method for obtaining myelopid | |
| CN112137071B (en) | Method for reducing salt content in soy sauce based on membrane filtration technology | |
| Holt | The purification of staphylococcus toxoid | |
| RU2584601C1 (en) | Method of extracting proteolytic terrilytin enzyme | |
| Cox | New Method for the Large-Scale Preparation of Diptheria Toxoid: Purification of Toxin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070604 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20100310 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner |