RU2138268C1 - Agent suppressing proliferation and causing death of tumor cells and protecting normal cells - Google Patents
Agent suppressing proliferation and causing death of tumor cells and protecting normal cells Download PDFInfo
- Publication number
- RU2138268C1 RU2138268C1 RU97115918A RU97115918A RU2138268C1 RU 2138268 C1 RU2138268 C1 RU 2138268C1 RU 97115918 A RU97115918 A RU 97115918A RU 97115918 A RU97115918 A RU 97115918A RU 2138268 C1 RU2138268 C1 RU 2138268C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- avermectins
- normal cells
- concentration
- tumor cells
- Prior art date
Links
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 35
- 230000034994 death Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 5
- 239000005660 Abamectin Substances 0.000 claims description 44
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 3
- 230000004224 protection Effects 0.000 abstract description 3
- 241001468227 Streptomyces avermitilis Species 0.000 abstract description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 abstract description 2
- 229940041033 macrolides Drugs 0.000 abstract description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 2
- 241000186046 Actinomyces Species 0.000 abstract 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 abstract 1
- 229940058299 avermectines Drugs 0.000 abstract 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 abstract 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 7
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 4
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 4
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N diphenylamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC1=CC=CC=C1 DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 4
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 238000013528 artificial neural network Methods 0.000 description 2
- RRZXIRBKKLTSOM-XPNPUAGNSA-N avermectin B1a Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@]11O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C2)[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 RRZXIRBKKLTSOM-XPNPUAGNSA-N 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 2
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 102100027562 39S ribosomal protein L36, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940127291 Calcium channel antagonist Drugs 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 101000650297 Homo sapiens 39S ribosomal protein L36, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101710186630 Insulin-1 Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002141 anti-parasite Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000480 calcium channel blocker Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001964 calcium overload Effects 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- VWVSBHGCDBMOOT-IIEHVVJPSA-N desoximetasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H](C(=O)CO)[C@@]1(C)C[C@@H]2O VWVSBHGCDBMOOT-IIEHVVJPSA-N 0.000 description 1
- 229960002593 desoximetasone Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002480 immunoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 239000002438 stress hormone Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 241001446247 uncultured actinomycete Species 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
- C12P19/623—Avermectin; Milbemycin; Ivermectin; C-076
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к фармакологии, а именно к биологически активным веществам, получаемым путем микробиологического синтеза, которые могут применяться в медицине и ветеринарии при разработке лекарственных средств для лечения различных онкологических заболеваний, в качестве иммуно- и кардиопротекторов, а также в биологических исследованиях. The invention relates to pharmacology, in particular to biologically active substances obtained by microbiological synthesis, which can be used in medicine and veterinary medicine in the development of drugs for the treatment of various oncological diseases, as immuno-and cardioprotectors, as well as in biological studies.
Известно, что актиномицет Streptomyces avermitilis при культивировании в присутствии источников углерода, азота и фосфора при постоянной аэрации продуцирует восемь близких по строению веществ, названных авермектинами (патент GB 1573955, 1980 г.). Все авермектины по химическому строению являются 16-членными макролидами и отличаются между собой заместителями у 5 и 26 атомов углеродного кольца. Индивидуальные авермектины получили обозначения A1a, A1b, A2a, A2b, B1a, B1b, B2a и B2b. Известно их антипаразитарное действие, что позволяет использовать авермектины в препаратах для защиты животных и растений (патенты US 4310519, 1982 г.; US 5376678, 1994 г.; RU 2048250, 1995 г.; RU 2054483, 1996 г. и другие).It is known that Streptomyces avermitilis actinomycete, when cultured in the presence of carbon, nitrogen, and phosphorus sources under constant aeration, produces eight structurally similar substances called avermectins (GB patent 1573955, 1980). All avermectins in chemical structure are 16-membered macrolides and differ among themselves with substituents at 5 and 26 carbon ring atoms. Individual avermectins are designated A 1a , A 1b , A 2a , A 2b , B 1a , B 1b , B 2a and B 2b . Their antiparasitic action is known, which allows the use of avermectins in preparations for the protection of animals and plants (patents US 4310519, 1982; US 5376678, 1994; RU 2048250, 1995; RU 2054483, 1996 and others).
Применение авермектинов по другому назначению до настоящего времени описано не было. The use of avermectins for other purposes has not yet been described.
Предлагаемое изобретение основано на ранее неизвестных свойствах авермектинов, выявленных экспериментальным путем. The present invention is based on previously unknown properties of avermectins, identified experimentally.
В частности, установлено, что авермектины вызывают гибель опухолевых клеток, подавляют их пролиферацию, защищают иммунные клетки от повреждения ионизирующим излучением и гормонами стресса, защищают сердечные клетки от Ca перегрузки в гиперкальциевых условиях, а также подавляют вход ионов кальция через потенциал-зависимые каналы. In particular, it was found that avermectins cause the death of tumor cells, inhibit their proliferation, protect immune cells from damage by ionizing radiation and stress hormones, protect cardiac cells from Ca overload in hypercalcium conditions, and also inhibit the entry of calcium ions through voltage-dependent channels.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения. Information confirming the possibility of carrying out the invention.
Пример 1. Клетки лимфолейкоза P-388 лимфоидного происхождения привили мышам (около 106 клеток на мышь) и выращивали в брюшной полости мышей. Через 7 дней после прививки клетки извлекли из брюшной полости, отмыли центрифугированием и инкубировали при 37oC в среде RPMJ-1640 с добавлением 10%-ной эмбриональной сыворотки, 10 мМ HEPES и 40 мкг/мл гентамицина при концентрации 106 клеток/мл. Авермектины растворили в 96%-ном этаноле (1 мг/мл).Example 1. Cells of lymphoid leukemia P-388 of lymphoid origin were inoculated into mice (about 10 6 cells per mouse) and grown in the abdominal cavity of mice. 7 days after inoculation, cells were removed from the abdominal cavity, washed by centrifugation and incubated at 37 ° C in RPMJ-1640 medium with the addition of 10% fetal serum, 10 mM HEPES and 40 μg / ml gentamicin at a concentration of 10 6 cells / ml. Avermectins were dissolved in 96% ethanol (1 mg / ml).
Действие авермектинов на выживаемость клеток лимфолейкоза оценивали по изменению количества живых клеток через 22 ч инкубации. Мертвые клетки определяли по окраске 0,04%-ным раствором трипанового синего. При концентрации авермектинов 0,2 мкг/мл выживаемость клеток P-388 снизилась по сравнению с контрольным опытом на 50%. The effect of avermectins on the survival of lymphocytic leukemia cells was evaluated by the change in the number of living cells after 22 hours of incubation. Dead cells were determined by staining with a 0.04% trypan blue solution. When the concentration of avermectins 0.2 μg / ml, the survival of P-388 cells decreased by 50% compared with the control experiment.
Однако в аналогичном опыте с клетками асцитной карциномы Эрлиха авермектины не оказали заметного влияния на выживаемость указанных клеток. However, in a similar experiment with Ehrlich ascites carcinoma cells, avermectins did not significantly affect the survival of these cells.
Пример 2. Клетки мышиной миеломы NS/0 вырастили in vitro в среде DMEM с добавлением 10%-ной эмбриональной телячьей сыворотки, 80 мкг/мл гентамицина. Авермектины растворили в 96%-ном этаноле (1 мг/мл). Действие авермектинов оценивали по влиянию на пролиферацию клеток в течение трех суток. При концентрации 0,01 мкг/мл рост клеток незначительно, но достоверно ускорялся за счет сокращения лаг-фазы: клетки после посева без задержки вступали в миотический цикл (в контроле задержка 4 ч). При больших концентрациях авермектины подавляли рост клеток. Эффект прогрессивно увеличивался с ростом концентрации. При концентрации 0,25 мкг/мл рост клеток подавлялся полностью: через трое суток инкубации количество клеток равнялось исходному. При дальнейшем повышении концентрации количество клеток уменьшалось по сравнению с исходным, что указывает на цитотоксическое действие авермектинов. Example 2. Cells of murine NS / 0 myeloma were grown in vitro in DMEM medium supplemented with 10% fetal calf serum, 80 μg / ml gentamicin. Avermectins were dissolved in 96% ethanol (1 mg / ml). The action of avermectins was evaluated by the effect on cell proliferation for three days. At a concentration of 0.01 μg / ml, cell growth was slightly, but significantly accelerated due to the reduction of the lag phase: the cells, after plating, without delay entered the myotic cycle (in the control, the delay was 4 h). At high concentrations, avermectins suppressed cell growth. The effect progressively increased with increasing concentration. At a concentration of 0.25 μg / ml, cell growth was completely suppressed: after three days of incubation, the number of cells was equal to the original. With a further increase in concentration, the number of cells decreased compared to the initial one, which indicates the cytotoxic effect of avermectins.
Пример 3. Клетки мышиной нейробластомы NB-103 вырастили in vitro в среде DMEM с добавлением 10%-ной телячьей сыворотки и антибиотиков (100 ед./мл). Авермектины растворили в 96%-ном этаноле (1 мг/мл). Действие авермектинов оценивали по влиянию на пролиферацию клеток в течение 3 суток. Example 3. Cells of mouse neuroblastoma NB-103 were grown in vitro in DMEM supplemented with 10% calf serum and antibiotics (100 units / ml). Avermectins were dissolved in 96% ethanol (1 mg / ml). The action of avermectins was evaluated by the effect on cell proliferation for 3 days.
Характерной особенностью опухолевых клеток линии NB-103 является зависимость скорости роста клеток от их концентрации в среде. При концентрации 100 тыс./мл и меньше клетки практически не размножаются и при культивировании в течение нескольких суток дифференцируются, выбрасывая отростки и образуя нейронную сеть. При 200 тыс./мл клетки интенсивно пролиферируют с периодом удвоения порядка 10 ч и к концу третьих суток образуют монослой. A characteristic feature of tumor cells of the NB-103 line is the dependence of the cell growth rate on their concentration in the medium. At a concentration of 100 thousand / ml or less, the cells practically do not multiply, and during cultivation for several days they differentiate, ejecting processes and forming a neural network. At 200 thousand / ml, cells proliferate intensively with a doubling period of about 10 hours and form a monolayer by the end of the third day.
При концентрации клеток 100 тыс. /мл авермектины в концентрации 0,25 мкг/мл достоверно не влияли на образование отростков и нейронной сети в культуре. При концентрации клеток 200 тыс./мл авермектины в той же концентрации 0,25 мкг/мл в первые 48 ч резко подавляли пролиферацию, а к концу третьих суток приводили к 100%-ной гибели всех клеток, в то время как в контроле наблюдалось образование монослоя. At a cell concentration of 100 thousand / ml, avermectins at a concentration of 0.25 μg / ml did not significantly affect the formation of processes and the neural network in culture. At a cell concentration of 200 thousand / ml avermectins in the same concentration of 0.25 μg / ml, proliferation was sharply suppressed in the first 48 hours, and by the end of the third day they led to 100% death of all cells, while in the control monolayer.
Пример 4. Исследовали действие авермектинов в широком диапазоне концентраций на выживаемость и фрагментацию ДНК контрольных, обработанных дексаметазоном и облученных ионизирующим излучением тимоцитов крыс-самцов Вистар (160 г). После декапитации животных тимус протирали через капроновую ткань и центрифугированием отделяли тимоциты. Инкубацию тимоцитов при 37oC проводили в среде RPMJ-1640 c добавлением 10%-ной бычей сыворотки, 10 мМ HEPES и 40 мкг/мл гентамицина в 96-луночных планшетах при концентрации 1,5•107 клеток/мл. Авермектины растворили в 96%-ном этаноле (1 мг/мл).Example 4. The effect of avermectins was studied in a wide range of concentrations on the survival and fragmentation of control DNAs treated with dexamethasone and irradiated with ionizing radiation from Wistar male rat thymocytes (160 g). After decapitation of the animals, the thymus was rubbed through nylon tissue and thymocytes were separated by centrifugation. Thymocytes were incubated at 37 ° C in RPMJ-1640 medium supplemented with 10% bovine serum, 10 mM HEPES and 40 μg / ml gentamicin in 96-well plates at a concentration of 1.5 x 10 7 cells / ml. Avermectins were dissolved in 96% ethanol (1 mg / ml).
Изучали действие авермектинов на апоптоз - программируемую гибель тимоцитов. Такая форма гибели характерна для лимфоидных клеток. Ее показателем является межнуклеосомная фрагментация ДНК, которую в данном примере определяли по доле низкомолекулярной ДНК в клетках. ДНК разделяли центрифугированием (13000g, 30 мин), окрашивали дифениламином и количественно определяли по поглощению при λ = 600 нм на спектрофотометре. Апоптоз инициировали с помощью ионизирующего излучения и аналога глюкокортикоидных гормонов - дексаметазона. We studied the effect of avermectins on apoptosis - the programmed death of thymocytes. This form of death is characteristic of lymphoid cells. Its indicator is internucleosomal DNA fragmentation, which in this example was determined by the proportion of low molecular weight DNA in the cells. DNA was separated by centrifugation (13000g, 30 min), stained with diphenylamine and quantified by absorption at λ = 600 nm on a spectrophotometer. Apoptosis was initiated using ionizing radiation and an analogue of glucocorticoid hormones - dexamethasone.
После облучения с дозой 4 Гр доля фрагментированной ДНК увеличилась за 6 ч инкубации до 50% (в контрольном опыте без облучения за тот же срок инкубации - 18%). Авермектины подавляли фрагментацию ДНК и гибель клеток, инициированную облучением. Эффективная доза, снижающая фрагментацию ДНК на 50% (ЭД50) составила 0,14 мкг/мл.After irradiation with a dose of 4 Gy, the fraction of fragmented DNA increased up to 50% after 6 h of incubation (18% in the control experiment without irradiation during the same incubation period). Avermectins suppressed DNA fragmentation and cell death initiated by irradiation. An effective dose that reduces DNA fragmentation by 50% (ED 50 ) was 0.14 μg / ml.
Обработка тимоцитов дексаметазоном (2•10-7 М) снижала выживаемость тимоцитов до 68±5% и увеличивала фрагментацию ДНК до 39±3%. Авермектины защищали клетки по обоим показателям повреждения. Доза авермектина, снижающая фрагментацию ДНК на 50% (ЭД50), равна 0,1 мкг/мл.Treatment of thymocytes with dexamethasone (2 • 10 -7 M) reduced thymocyte survival to 68 ± 5% and increased DNA fragmentation to 39 ± 3%. Avermectins protected the cells on both indicators of damage. The dose of avermectin, which reduces DNA fragmentation by 50% (ED 50 ), is 0.1 μg / ml.
Пример 5. Изолированные сердечные клетки крысы, полученные ферментативной обработкой целого сердца, сохраняли в среде с повышенной концентрацией ионов Ca2+ (5 мМ). Авермектины растворили в 96%-ном этаноле (1 мг/мл). Действие авермектинов оценивали по влиянию на гибель кардиоцитов в течение 10 ч методами световой микроскопии по ультраструктуре и окраске 0,04%-ным раствором трипанового синего. Авермектины в концентрации 0,25 мкг/мл более чем вдвое замедляли скорость гибели клеток. После трех часов инкубации в среде с авермектинами содержалось вдвое больше функционально активных, сохранивших нормальную морфологию клеток. После шести часов инкубации в контроле функционально активных клеток не наблюдалось, в то время как в среде с авермектинами их количество составляло 20-25% от исходного числа.Example 5. Isolated rat heart cells obtained by enzymatic treatment of a whole heart were kept in a medium with an increased concentration of Ca 2+ ions (5 mM). Avermectins were dissolved in 96% ethanol (1 mg / ml). The action of avermectins was evaluated by the effect on the death of cardiocytes for 10 hours by light microscopy using ultrastructure and staining with a 0.04% trypan blue solution. Avermectins at a concentration of 0.25 μg / ml more than doubled the rate of cell death. After three hours of incubation, the medium with avermectins contained twice as many functionally active cells that retained normal cell morphology. After six hours of incubation in the control, functionally active cells were not observed, while in the medium with avermectins their number was 20-25% of the initial number.
Пример 6. Методом фиксации потенциала на мембране регистрировали Ca2+ токи на изолированных сердечных клетках крысы в контроле и в присутствии авермектинов в различных концентрациях (от 0,08 до 8,0 мкг/мл). Авермектины в исследуемых концентрациях уменьшали Ca2+ токи. При концентрации 0,08 мкг/мл уменьшение пикового тока составило 10%, при концентрации 0,8 мкг/мл - 23%, при 8,0 мкг/мл - 30%.Example 6. By the method of fixing the potential on the membrane, Ca 2+ currents were recorded on isolated rat cardiac cells in the control and in the presence of avermectins in various concentrations (from 0.08 to 8.0 μg / ml). Avermectins in the studied concentrations reduced Ca 2+ currents. At a concentration of 0.08 μg / ml, the decrease in the peak current was 10%, at a concentration of 0.8 μg / ml - 23%, at 8.0 μg / ml - 30%.
Пример 7. Кусочки нормальной ткани толстого кишечника человека поместили в условия инкубирования органной культуры на среде следующего состава: среда Игла и среда RPMJ (1:1) - 80%, эмбриональная телячья сыворотка - 15%, сыворотка крови донора - 1,5%, глютамин - 0,5 мг/мл, дезоксиметазон - 10-6 М, инсулин - 1 мг/мл, гентамицин - 120 ед/мл. Культивирование проводили в течение трех недель. Через две недели после начала культивирования в культуру добавили авермектин в концентрации 0,3 мг/мл. В процессе дальнейшего культивирования наблюдали состояние ядер клеток. На 21-й день культивирования эксплантант окрасили прижизненным красителем (этидиум бромид) и обследовали под люминесцентным микроскопом. В этом случае живые ядра окрашиваются в зеленый цвет, а мертвые - в красный. В данном примере красных ядер не было совсем, что свидетельствует об отсутствии негативного влияния авермектинов на нормальные клетки.Example 7. Pieces of normal tissue of the large intestine of a person were placed in conditions of incubation of organ culture on the medium of the following composition: Wednesday Needle and medium RPMJ (1: 1) - 80%, fetal calf serum - 15%, donor blood serum - 1.5%, glutamine - 0.5 mg / ml, deoxymethasone - 10 -6 M, insulin - 1 mg / ml, gentamicin - 120 units / ml. Cultivation was carried out for three weeks. Two weeks after the start of cultivation, avermectin was added to the culture at a concentration of 0.3 mg / ml. During further cultivation, the state of cell nuclei was observed. On the 21st day of cultivation, the explant was stained with intravital stain (ethidium bromide) and examined under a luminescent microscope. In this case, living nuclei turn green, and dead ones turn red. In this example, there were no red nuclei at all, which indicates the absence of the negative effect of avermectins on normal cells.
Пример 8. Изучали влияние авермектинов на нормальные тимоциты крысы. Авермектины в концентрациях 0,03 - 3,0 мкг/мл добавляли в культуральную жидкость изолированных тимоцитов крысы породы Вистар и инкубировали клетки в течение суток при 37oC. После этого определяли жизнеспособность клеток по их прокрашиванию раствором трипанового синего. Также определяли фрагментацию ДНК путем выделения ДНК из клеток с последующим разделением при центрифугировании интактной ДНК (осадок) и мелких фрагментов ДНК (супернатант), специфическим прокрашиванием полученных фракций дифениламином и спектрофотометрическим определением доли поврежденной ДНК.Example 8. The effect of avermectins on normal rat thymocytes was studied. Avermectins at concentrations of 0.03 - 3.0 μg / ml were added to the culture fluid of isolated Wistar rat thymocytes and the cells were incubated for 24 hours at 37 ° C. After that, the cell viability was determined by staining them with a trypan blue solution. DNA fragmentation was also determined by isolating DNA from cells, followed by separation by centrifugation of intact DNA (precipitate) and small DNA fragments (supernatant), specific staining of the obtained fractions with diphenylamine and spectrophotometric determination of the fraction of damaged DNA.
Во всем диапазоне изученных концентраций жизнеспособность клеток, обработанных авермектинами, оставалась на уровне контрольных клеток (94-100%), а доля фрагментированной ДНК не превышала контрольных значений 14 ± 1,5%. То есть в условиях опытов авермектины не оказывали негативного влияния на нормальные тимоциты крысы. Over the entire range of studied concentrations, the viability of cells treated with avermectins remained at the level of control cells (94-100%), and the fraction of fragmented DNA did not exceed the control values of 14 ± 1.5%. That is, under the experimental conditions, avermectins did not adversely affect normal rat thymocytes.
Пример 9. Изолированные сердечные клетки крысы культивировали в нормальной среде (содержание Ca2+ составляло 1,8 мМ). Авермектины добавили в концентрации 0,25 мкг/мл. Действие авермектинов на кардиоциты оценивали методом световой микроскопии по ультраструктуре и окраске 0,04%-ным раствором трипанового синего. В присутствии авермектинов кардиоциты переживали в течение 18 ± 5 ч, тогда как при культивировании без авермектинов их переживание наблюдалось только в течение 10 ± 3 ч.Example 9. Isolated rat heart cells were cultured in normal medium (Ca 2+ content was 1.8 mM). Avermectins were added at a concentration of 0.25 μg / ml. The effect of avermectins on cardiocytes was evaluated by light microscopy according to ultrastructure and staining with a 0.04% trypan blue solution. In the presence of avermectins, cardiocytes survived for 18 ± 5 hours, while when cultured without avermectins, their experience was observed only for 10 ± 3 hours.
Полученные данные показывают возможность применения авермектинов в качестве вещества, обладающего избирательным противоопухолевым и иммунопротекторным действием, а также в качестве мягкого кальциевого антагониста в клинической медицине. The data obtained show the possibility of using avermectins as a substance with selective antitumor and immunoprotective effects, as well as a mild calcium antagonist in clinical medicine.
Claims (1)
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU97115918A RU2138268C1 (en) | 1997-09-22 | 1997-09-22 | Agent suppressing proliferation and causing death of tumor cells and protecting normal cells |
| PCT/RU1998/000293 WO1999015185A1 (en) | 1997-09-22 | 1998-09-21 | Agent for modifying the proliferation, functional activity and death of natural and tumoral cells |
| AU92860/98A AU9286098A (en) | 1997-09-22 | 1998-09-21 | Agent for modifying the proliferation, functional activity and death of natural and tumoral cells |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU97115918A RU2138268C1 (en) | 1997-09-22 | 1997-09-22 | Agent suppressing proliferation and causing death of tumor cells and protecting normal cells |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU97115918A RU97115918A (en) | 1999-06-27 |
| RU2138268C1 true RU2138268C1 (en) | 1999-09-27 |
Family
ID=20197431
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU97115918A RU2138268C1 (en) | 1997-09-22 | 1997-09-22 | Agent suppressing proliferation and causing death of tumor cells and protecting normal cells |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| AU (1) | AU9286098A (en) |
| RU (1) | RU2138268C1 (en) |
| WO (1) | WO1999015185A1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2185172C2 (en) * | 2000-04-10 | 2002-07-20 | Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН | Method of blood index correction and span life of animals with t-lympholeukosis sick |
| RU2250775C2 (en) * | 2002-11-06 | 2005-04-27 | Мосин Владимир Александрович | Means stimulating chemopreparation anti-tumor activity and method for treating oncological diseases |
| RU2350333C2 (en) * | 2003-04-24 | 2009-03-27 | Галдерма С.А. | Ivermectine application for treatment of dermatological disorders |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011011632A1 (en) * | 2009-07-22 | 2011-01-27 | Tufts University | Methods and compositions for modulating membrane potential to influence cell behavior |
| EP2704709B1 (en) | 2011-05-02 | 2020-09-02 | Altaba, Ariel Ruiz | Macrocyclic lactones and use thereof |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5089480A (en) * | 1985-07-27 | 1992-02-18 | Pfizer Inc. | Antiparasitic agents |
| WO1992005262A1 (en) * | 1990-09-14 | 1992-04-02 | The John Hopkins University | Methods and compositions for genetic therapy and potentiation of anti-tumor immunity |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2533827A1 (en) * | 1982-09-30 | 1984-04-06 | Anvar | Composition possessing immunoregulatory properties, in particular of non-specific immunological adjuvants, based on muramyl peptide and an aluminium derivative |
| US5189026A (en) * | 1991-06-07 | 1993-02-23 | Fractal Laboratories, Inc. | Treatment of human diseases involving dysregulation or dysfunction of the nervous system |
| GB9201749D0 (en) * | 1992-01-28 | 1992-03-11 | Smithkline Beecham Plc | Medicaments |
| AU3972493A (en) * | 1993-04-01 | 1994-10-24 | Sam Amer & Co., Inc. | Inhibition of anoxia or hypoxia-induced endothelium-mediated vasospasm with avermectins |
| DE4324877A1 (en) * | 1993-07-25 | 1995-01-26 | Leskovar Peter Dr Dr Habil | Novel therapeutic mixtures, based on the prevention of intracellular Ca<2+>i overloading and Ca<2+>i independent influencing of the intracellular pHi of immunocompetent cells |
-
1997
- 1997-09-22 RU RU97115918A patent/RU2138268C1/en not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-09-21 AU AU92860/98A patent/AU9286098A/en not_active Abandoned
- 1998-09-21 WO PCT/RU1998/000293 patent/WO1999015185A1/en not_active Ceased
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5089480A (en) * | 1985-07-27 | 1992-02-18 | Pfizer Inc. | Antiparasitic agents |
| WO1992005262A1 (en) * | 1990-09-14 | 1992-04-02 | The John Hopkins University | Methods and compositions for genetic therapy and potentiation of anti-tumor immunity |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 3. Вядро М.М., Навашин С.М. Новые противоопухолевые антибиотики. Новые аналоги, модификаторы биологических реакций, ингибиторы онкогенов. Антибиотики и химиотерапия. - М.: Медицина, 1991, т.36, N 2, с.44-48. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2185172C2 (en) * | 2000-04-10 | 2002-07-20 | Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН | Method of blood index correction and span life of animals with t-lympholeukosis sick |
| RU2250775C2 (en) * | 2002-11-06 | 2005-04-27 | Мосин Владимир Александрович | Means stimulating chemopreparation anti-tumor activity and method for treating oncological diseases |
| RU2350333C2 (en) * | 2003-04-24 | 2009-03-27 | Галдерма С.А. | Ivermectine application for treatment of dermatological disorders |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU9286098A (en) | 1999-04-12 |
| WO1999015185A1 (en) | 1999-04-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lieberman et al. | A probable role for protein synthesis in intestinal epithelial cell damage induced in vivo by cytosine arabinoside, nitrogen mustard, or X-irradiation | |
| Allen et al. | Analysis of sister chromatid exchange formation in vivo in mouse spermatogonia as a new test system for environmental mutagens | |
| DE69028694T2 (en) | METHOD AND PREPARATIONS FOR TREATING CANCER WITH OLIGONUCLEOTIDES | |
| Berlowitz | Correlation of genetic activity, heterochromatization, and RNA metabolism | |
| Simard | Specific nuclear and nucleolar ultrastructural lesions induced by proflavin and similarly acting antimetabolites in tissue culture | |
| Hibasami et al. | Isolation of five types of flavonol from seabuckthorn (Hippophae rhamnoides) and induction of apoptosis by some of the flavonols in human promyelotic leukemia HL-60 cells | |
| Furmanowa et al. | Rhodiola rosea L.(Roseroot): In vitro regeneration and the biological activity of roots | |
| MD | The effect of CNS depressants on mitosis | |
| Ózsvári et al. | A myristoyl amide derivative of doxycycline potently targets cancer stem cells (CSCs) and prevents spontaneous metastasis, without retaining antibiotic activity | |
| RU2138268C1 (en) | Agent suppressing proliferation and causing death of tumor cells and protecting normal cells | |
| Tepper et al. | Teniposide induces nuclear but not mitochondrial DNA degradation | |
| KR101591429B1 (en) | Novel composition for treating and preventing an alcohol hangover and hepatoprotection | |
| EP2331092B1 (en) | Methods and compositions for administration of 3-halopyruvate and related compounds for the treatment of cancer | |
| Silverman | DNA methyltransferase inhibitors in myelodysplastic syndrome | |
| Horwitz et al. | Chemosterilant action of anthramycin: A proposed mechanism | |
| CN114685414A (en) | Glycolipids for therapeutic use and pharmaceutical compositions thereof | |
| WO2005087798A1 (en) | D-ser!8-cyclosporine modified on the hydroxyl group having a switchable inhibiting effect on protein phosphatase calcineurine and specific manipulipulatability obtained therewith of the immunosuppressive effect while maintaining inhibition of peptidyl-prolyl-cis-trans-isomerase (ppi) e.g. for the treatment of autoimmune d | |
| Peng et al. | The heme oxygenase-1 pathway is involved in calcitonin gene-related peptide-mediated delayed cardioprotection induced by monophosphoryl lipid A in rats | |
| Sakamoto et al. | Stimulators of Gambierdiscus toxicus (Dinophyceae) growth: the possible role of gambieric acid-A as an endogenous growth enhancer | |
| Abolhassani et al. | Characterization of the release of DNA by a human leukemia-cell line hl-60 | |
| Jeong et al. | Apoptosis induction of human leukemia cells by Streptomyces sp. SY-103 metabolites through activation of caspase-3 and inactivation of Akt | |
| Chaube et al. | Protective effect of deoxycytidylic acid (CdMP) on hydroxyurea‐induced malformations in rats | |
| Lampidis et al. | Nuclear and mitochondrial effects of adriamycin in singly isolated pulsating myocardial cells | |
| US20030104007A1 (en) | Pseudopterosin compounds of Symbiodinium spp isolated from Pseudopterogorgia elisabethae | |
| Goodman et al. | Nucleoprotein methylation in salivary gland chromosomes of Sciara coprophila: Correlation with DNA synthesis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150923 |