[go: up one dir, main page]

RU2136746C1 - Method of cultivating yeast for alcohol production - Google Patents

Method of cultivating yeast for alcohol production Download PDF

Info

Publication number
RU2136746C1
RU2136746C1 RU98115662/13A RU98115662A RU2136746C1 RU 2136746 C1 RU2136746 C1 RU 2136746C1 RU 98115662/13 A RU98115662/13 A RU 98115662/13A RU 98115662 A RU98115662 A RU 98115662A RU 2136746 C1 RU2136746 C1 RU 2136746C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
yeast
cultivation
nutrient medium
concentration
culture
Prior art date
Application number
RU98115662/13A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
нов В.М. Емель
В.М. Емельянов
Р.Р. Шайхутдинов
И.С. Владимирова
Н.К. Филиппова
Р.Т. Валеева
И.Е. Табаков
Original Assignee
Емельянов Виктор Михайлович
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Емельянов Виктор Михайлович filed Critical Емельянов Виктор Михайлович
Priority to RU98115662/13A priority Critical patent/RU2136746C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2136746C1 publication Critical patent/RU2136746C1/en

Links

Images

Classifications

    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02EREDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10Biofuels, e.g. bio-diesel

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: alcoholic industry. SUBSTANCE: method comprises cultivating yeast under aerobic conditions on sterile culture medium containing 4-6% of sugar. Cultivation is carried out to attain concentration of yeast cells of 500-1000 mln/ml in culture liquid in each cultivation stage. Last stage culture liquid is kept under anaerobic conditions for 2-3 hours. Method makes it possible to increase concentration of yeast cells by 8 times. EFFECT: more efficient cultivation method. 3 cl, 1 dwg, 1 tbl

Description

Изобретение относится к спиртовой промышленности, в частности к способу культивирования дрожжей для спиртового производства. The invention relates to the alcohol industry, in particular to a method for cultivating yeast for alcohol production.

Известен способ культивирования дрожжей для спиртового производства, заключающийся в том, что культивирование дрожжей ведут в анаэробных условиях на пастеризованном сусле в течение 80 часов, концентрацию дрожжевых клеток получают 110-120 млн/мл. A known method of culturing yeast for alcohol production, which consists in the fact that the cultivation of yeast is carried out under anaerobic conditions on pasteurized wort for 80 hours, the concentration of yeast cells receive 110-120 million / ml

Недостатками способа являются низкая концентрация дрожжевых клеток, высокая вероятность инфицирования дрожжей посторонней микрофлорой в связи с продолжительностью процесса (см. книга "Технология спирта" авторов Маринченко В.А. и др., М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981, с. 218-219). The disadvantages of the method are the low concentration of yeast cells, the high likelihood of yeast infection by extraneous microflora in connection with the duration of the process (see the book "Technology of alcohol" authors Marinchenko VA and others, M .: Light and food industry, 1981, S. 218 -219).

Наиболее близким по технической сущности является способ культивирования дрожжей для спиртового производства на питательной среде, в котором культивирование ведут в анаэробных условиях на пастеризованной питательной среде, в качестве питательной среды используют сусло, культивирование дрожжей вначале ведут до 95-105 млн/мл при последующем пересеве с каждой предыдущей ступени на последующую и постепенным увеличением концентрации дрожжей, поддерживая ее на первой ступени 100-110 млн/мл, на второй 105-115 млн/мл, на третьей 110-120 млн/мл, после чего объем последней ступени передают в головной ферментер; в процессе культивирования ведут подпитку питательной средой без пастеризации, но с обработкой антибиотиком - лактоцидом (см. Авторское свидетельство СССР N 566872, МПК 2 C 12 C 11/08, 1976). 30.07.77. The closest in technical essence is a method of cultivating yeast for alcohol production on a nutrient medium, in which cultivation is carried out under anaerobic conditions on a pasteurized nutrient medium, wort is used as a nutrient medium, yeast is cultivated first up to 95-105 mln / ml with subsequent reseeding with each previous stage to the next and a gradual increase in the concentration of yeast, maintaining it in the first stage of 100-110 million / ml, in the second 105-115 million / ml, in the third 110-120 million / ml, after which the volume of the last step is transferred to the head fermenter; in the process of cultivation, they are fed with a nutrient medium without pasteurization, but with treatment with an antibiotic - lacticide (see USSR author's certificate N 566872, IPC 2 C 12 C 11/08, 1976). 07/30/77.

Недостатком данного способа является низкая концентрация дрожжевых клеток. The disadvantage of this method is the low concentration of yeast cells.

Задачей изобретения является создание способа культивирования дрожжей для спиртового производства, позволяющего получить чистую дрожжевую культуру с высокой концентрацией дрожжевых клеток и высокой бродильной активностью. The objective of the invention is to provide a method of culturing yeast for alcohol production, which allows to obtain a pure yeast culture with a high concentration of yeast cells and high fermentation activity.

Техническая задача решается способом культивирования дрожжей для спиртового производства на питательной среде, в котором культивирование ведут в аэробных условиях на стерильной питательной среде с содержанием сахара 4-6%, в качестве питательной среды используют продукт декантации послеспиртовой барды и сусло или сахарозу до достижения концентрации дрожжевых клеток в культуральной жидкости на каждой ступени культивирования 500-1000 млн/мл, после чего культуральную жидкость последней ступени выдерживают в анаэробных условиях в течение 2-3 часов, в процессе культивирования ведут подпитку стерильным суслом или раствором сахарозы в продукте декантации послеспиртовой барды до содержания сахара в питательной среде 4-6%. The technical problem is solved by the method of culturing yeast for alcohol production on a nutrient medium, in which cultivation is carried out under aerobic conditions on a sterile nutrient medium with a sugar content of 4-6%, as a nutrient medium, the product is used for decantation of post-alcohol stillage stillage and must or sucrose until the concentration of yeast cells is reached in the culture fluid at each stage of cultivation 500-1000 million / ml, after which the culture fluid of the last stage is kept under anaerobic conditions for 2-3 hours, in the process of cultivation are fed with sterile wort or sucrose solution in the product of decantation of post-alcohol stillage to sugar content in the nutrient medium 4-6%.

Решение технической задачи позволяет увеличить концентрацию дрожжевых клеток до 8 раз и получить дрожжи с высокой бродильной активностью. The solution to the technical problem allows you to increase the concentration of yeast cells up to 8 times and get yeast with high fermentation activity.

В заявляемом способе используют продукт декантации послеспиртовой барды, полученной после ректификации бражки на сырцовой ректификационной установке. Послеспиртовая барда является отходом производства (см. журнал "Биотехнология" N 6, 1997, с.43-46). The inventive method uses the product of the decantation of post-alcohol stillage obtained after distillation of mash on a raw distillation unit. Post-alcohol bard is a waste product (see the journal "Biotechnology" N 6, 1997, S. 43-46).

Сусло готовится в соответствии с Регламентом производства спирта из крахмалистого сырья часть 1 - М.: ЦНИИТЭИпищепром, 1979. The wort is prepared in accordance with the Rules for the production of alcohol from starchy raw materials, Part 1 - M .: TSNIITEpishcheprom, 1979.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения. The invention is illustrated by the following examples of specific performance.

Пример 1. Чистую культуру спиртовых дрожжей, выращенную на сусле-агаре, пересевают в качалочные колбы объемом 750 мл на стерильную питательную среду объемом 50 мл с содержанием сахара 6%, в качестве питательной среды используют продукт декантации послеспиртовой барды и сахарозу. Example 1. A pure culture of alcoholic yeast grown on wort agar is transferred to 750 ml rocking flasks on a 50 ml sterile culture medium with a sugar content of 6%, the product of decantation of distillery stillage and sucrose is used as a culture medium.

Частота встряхивания качалочных колб 220 об/мин. Rocking flask shaking frequency 220 rpm.

В процессе культивирования ведут подпитку раствором сахарозы в продукте декантации послеспиртовой барды до содержания сахара в питательной среде 6%. При достижении концентрации дрожжевых клеток в культуральной жидкости 1000 млн/мл полученную дрожжевую культуру переносят в ферментер объемом 10 литров. Культивирование дрожжей ведут в ферментере на стерильной питательной среде с содержанием сахара 6%, в качестве которой используют продукт декантации послеспиртовой барды и сахарозу. In the process of cultivation are fed with a solution of sucrose in the product of decantation of post-alcohol stillage to the sugar content in the nutrient medium of 6%. When the concentration of yeast cells in the culture fluid reaches 1000 million / ml, the resulting yeast culture is transferred to a 10 liter fermenter. The cultivation of yeast is carried out in a fermenter on a sterile nutrient medium with a sugar content of 6%, which is used as a product of decantation of post-alcohol stillage and sucrose.

Процесс ведут при постоянной аэрации и перемешивании. Расход воздуха составляет 30-40 м3/час на 1 м3 среды, скорость перемешивания - 300 об/мин.The process is carried out with constant aeration and stirring. Air consumption is 30-40 m 3 / h per 1 m 3 of medium, stirring speed is 300 rpm.

Концентрацию сахара (PB%) в культуральной жидкости определяют методом Бертрана, количество дрожжевых клеток - подсчетом клеток в камере Гаряева (см. книгу "Микробиологический контроль гидролизно-дрожжевого производства". - М. : Экология, 1991, с. 44-50; "Практикум по микробиологии" - М.: Изд-во Моск. ун-та, 1976, с. 174-176). The sugar concentration (PB%) in the culture fluid is determined by the Bertrand method, the number of yeast cells is determined by counting the cells in the Garyaev chamber (see the book "Microbiological control of hydrolysis and yeast production. - M.: Ecology, 1991, S. 44-50;" Workshop on Microbiology "- Moscow: Publishing House of Moscow University, 1976, p. 174-176).

В процессе культивирования проводят подпитку раствором сахарозы в продукте декантации послеспиртовой барды, возвращая содержание сахара в питательной среде к начальному значению. In the process of cultivation, they are fed with sucrose solution in the product of decantation of post-alcohol stillage, returning the sugar content in the nutrient medium to the initial value.

При достижении концентрации дрожжевых клеток, равной 1000 млн/мл, дрожжевую культуру направляют на следующую ступень в ферментер объемом 500 литров и ведут процесс в аэробных условиях на стерильной питательной среде аналогично предыдущей ступени. When the concentration of yeast cells is equal to 1000 million / ml, the yeast culture is sent to the next stage in a fermenter with a volume of 500 liters and the process is carried out under aerobic conditions on a sterile nutrient medium similar to the previous stage.

На последней ступени при достижении концентрации дрожжевых клеток 1000 млн/мл аэрацию культуральной жидкости прекращают и выдерживают культуру в анаэробных условиях при перемешивании в течение 3 часов в питательной среде с содержанием сахара 6%. At the last stage, when the concentration of yeast cells reaches 1000 million / ml, the aeration of the culture fluid is stopped and the culture is maintained under anaerobic conditions with stirring for 3 hours in a nutrient medium with a sugar content of 6%.

Бродильную активность и качество дрожжей определяют газометрическим методом (см. журнал "Пищевая промышленность", N 11, 1989, с. 37-38; книга "Контроль производства хлебопекарных дрожжей" автора Бакушинской О.А. - М.: Пищевая пром-ть, 1978). Качество выращенных дрожжей - хорошее. Fermentation activity and yeast quality are determined by the gasometric method (see the journal "Food Industry", N 11, 1989, pp. 37-38; the book "Control of the production of baking yeast" by O. Bakushinskaya - M .: Food industry, 1978). The quality of the grown yeast is good.

Пример 2. Культуру спиртовых дрожжей, выращенную в пробирках на сусле-агаре, пересевают в качалочные колбы объемом 750 мл на стерильную питательную среду объемом 50 мл с содержанием сахара 4%, в качестве питательной среды используют продукт декантации послеспиртовой барды и сусло. Скорость качания качалочных колб - 220 об/мин. В процессе культивирования ведут подпитку стерильным суслом до содержания сахара в питательной среде 4%. Example 2. The culture of alcoholic yeast grown in test tubes on wort agar, is transferred to rocking flasks with a volume of 750 ml on a sterile culture medium with a volume of 50 ml with a sugar content of 4%, the product of decantation of post-alcohol stillage and wort is used as a nutrient medium. The swing speed of the rocking flasks is 220 rpm. In the process of cultivation are fed sterile wort to a sugar content in the nutrient medium of 4%.

При достижении концентрации дрожжевых клеток в культуральной жидкости 750 млн/мл дрожжевую культуру переносят в ферментер объемом 10 литров. Культивирование дрожжей ведут на стерильной питатальной среде с содержанием сахара 4%, в качестве которой используют продукт декантации послеспиртовой барды и сусло. When the concentration of yeast cells in the culture fluid reaches 750 million / ml, the yeast culture is transferred to a 10 liter fermenter. Yeast is cultivated on a sterile nutrient medium with a sugar content of 4%, which is used as a product of decantation of post-alcohol stillage and wort.

Процесс ведут при постоянной аэрации и перемешивании. Расход воздуха составляет 30-40 м3/час на 1 м3 среды, скорость перемешивания 300 об/мин.The process is carried out with constant aeration and stirring. Air consumption is 30-40 m 3 / h per 1 m 3 of medium, stirring speed 300 rpm

В процессе культивирования проводят подпитку стерильным суслом до содержания сахара в питательной среде 4%. During the cultivation process, sterile wort is fed to a sugar content of 4% in the nutrient medium.

При достижении концентрации дрожжевых клеток 750 млн/мл дрожжевую культуру передают на следующую ступень, в ферментер объемом 500 литров. Культивирование ведут в аэробных условиях на стерильной питательной среде аналогично описанному выше в 10 л ферментере. When the concentration of yeast cells reaches 750 million / ml, the yeast culture is transferred to the next stage, to a 500 liter fermenter. Cultivation is carried out under aerobic conditions on a sterile nutrient medium as described above in a 10 l fermenter.

На последней ступени при достижении концентрации дрожжевых клеток 750 млн/мл аэрацию культуральной жидкости прекращают и выдерживают культуру в анаэробных условиях при перемешивании в течение 2 часов в питательной среде с содержанием сахара 4%. Качество выращенных дрожжей - хорошее. At the last stage, when the concentration of yeast cells reaches 750 million / ml, the aeration of the culture fluid is stopped and the culture is maintained under anaerobic conditions with stirring for 2 hours in a nutrient medium with a sugar content of 4%. The quality of the grown yeast is good.

Пример 3. Культивирование дрожжевой культуры ведут также, как и в примере 2, но при содержании сахара в питательной среде 5%. Концентрация дрожжевых клеток составляет 500 млн/мл. Качество выращенных дрожжей - хорошее. Дрожжи по примерам 1 - 3 обладают высокой бродильной активностью. Example 3. Cultivation of yeast culture is the same as in example 2, but with a sugar content in the nutrient medium of 5%. The concentration of yeast cells is 500 million / ml. The quality of the grown yeast is good. The yeast in examples 1 to 3 have a high fermentation activity.

Концентрация и качество дрожжей приведены в таблице в конце описания. The concentration and quality of the yeast are shown in the table at the end of the description.

Таким образом, предлагаемый способ культивирования дрожжей позволяет вырастить чистую дрожжевую культуру в любых объемах за счет последовательного пересева с предыдущей ступени на последующую к тому же с высокой концентрацией дрожжевых клеток 500-1000 млн/мл и высокой бродильной активностью. Заявленный способ прост в технологическом исполнении; питательная среда, используемая в способе, содержит основной компонент - продукт декантации послеспиртовой барды, являющийся отходом производства. Thus, the proposed method for culturing yeast allows you to grow a pure yeast culture in any volume due to successive reseeding from the previous stage to the next one with a high concentration of yeast cells of 500-1000 million / ml and high fermentation activity. The claimed method is simple in technological design; the nutrient medium used in the method contains the main component - the product of decantation of post-alcohol stillage, which is a waste product.

Claims (1)

Способ культивирования дрожжей для спиртового производства на питательной среде, отличающийся тем, что культивирование ведут в аэробных условиях на стерильной питательной среде с содержанием сахара 4 - 6%, в качестве питательной среды используют продукт декантации послеспиртовой барды и сусло или сахарозу до достижения концентрации дрожжевых клеток в культуральной жидкости на каждой ступени культивирования 500 - 1000 млн/мл, после чего культуральную жидкость последней ступени выдерживают в анаэробных условиях в течение 2 - 3 ч, в процессе культивирования ведут подпитку стерильным суслом или раствором сахарозы в продукте декантации послеспиртовой барды до содержания сахара в питательной среде 4 - 6%. A method of culturing yeast for alcohol production on a nutrient medium, characterized in that the cultivation is carried out under aerobic conditions on a sterile nutrient medium with a sugar content of 4-6%, as a nutrient medium, the product is used for decantation of post-alcohol stillage stillage and must or sucrose until the concentration of yeast cells in the culture fluid at each stage of cultivation is 500-1000 million / ml, after which the culture fluid of the last stage is kept under anaerobic conditions for 2 to 3 hours, during tivirovaniya lead feeding sterile wort or sucrose in the product DDGS decantation until sugar in the culture medium 4 - 6%.
RU98115662/13A 1998-08-17 1998-08-17 Method of cultivating yeast for alcohol production RU2136746C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU98115662/13A RU2136746C1 (en) 1998-08-17 1998-08-17 Method of cultivating yeast for alcohol production

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU98115662/13A RU2136746C1 (en) 1998-08-17 1998-08-17 Method of cultivating yeast for alcohol production

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2136746C1 true RU2136746C1 (en) 1999-09-10

Family

ID=20209647

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU98115662/13A RU2136746C1 (en) 1998-08-17 1998-08-17 Method of cultivating yeast for alcohol production

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2136746C1 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2378365C2 (en) * 2007-06-15 2010-01-10 Общество с ограниченной ответственностью "Биотехконсалтинг" Method of culturing brewing yeast
RU2495926C2 (en) * 2006-03-17 2013-10-20 Этаблиссман Ж. Суффле Nutritional additive for alcohol fermentation medium
RU2528872C2 (en) * 2012-09-10 2014-09-20 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Самарский государственный технический университет Bakery yeast cultivation method

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3120474A (en) * 1961-03-22 1964-02-04 Consolidation Coal Co Process for preparing hydrocarbonaceous products from coal
SU566872A1 (en) * 1976-03-25 1977-07-30 Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Продуктов Брожения Method of preparation of yeast for spiritus fermentation
US4910144A (en) * 1987-07-27 1990-03-20 Tax Administration Agency, Ministry Of Finance Yeast strain with high power to produce alcohol by fermentation

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3120474A (en) * 1961-03-22 1964-02-04 Consolidation Coal Co Process for preparing hydrocarbonaceous products from coal
SU566872A1 (en) * 1976-03-25 1977-07-30 Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Продуктов Брожения Method of preparation of yeast for spiritus fermentation
US4910144A (en) * 1987-07-27 1990-03-20 Tax Administration Agency, Ministry Of Finance Yeast strain with high power to produce alcohol by fermentation

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Маринченко В.А., Смирнов В.А. и др. Технология спирта.-М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981, с.218-220. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2495926C2 (en) * 2006-03-17 2013-10-20 Этаблиссман Ж. Суффле Nutritional additive for alcohol fermentation medium
RU2378365C2 (en) * 2007-06-15 2010-01-10 Общество с ограниченной ответственностью "Биотехконсалтинг" Method of culturing brewing yeast
RU2528872C2 (en) * 2012-09-10 2014-09-20 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Самарский государственный технический университет Bakery yeast cultivation method

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109415751A (en) Composition and method for microbial co culture
FR2924126A1 (en) Culturing heterotrophic microalgae comprises preparing inoculum by culturing strain of microalgae, inoculating the culture medium in photobioreactor with inoculum and culturing microalgae in autotrophic/mixotrophic culture conditions
CN112391418A (en) Industrialized fermentation production method of raspberry ketone
CN115927023A (en) Abnormal yeast Weikehan and application thereof, and wolfberry wine and preparation method thereof
CN107488615B (en) Pseudomonas capable of producing lipase at high yield and fermentation enzyme production method thereof
CN107354102A (en) The sugared Pichia guilliermondii bacterial strain of the resistance to height of one kind and its application
RU2136746C1 (en) Method of cultivating yeast for alcohol production
FI85502B (en) FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV POLYOLER GENOM PAO INDUSTRIELL SKALA BASERAD FERMENTATION AV SOCKER.
CN110317734A (en) A kind of monascus and its isolated culture method and the application of high-yield glucoamylase, Esterified Enzyme and protease
CN107446904B (en) Lipase, and production method and application thereof
CN108587923B (en) A kind of method to improve malic acid fermentation performance
CN109852555A (en) A kind of acid-fast yeast and its application
CN116144515A (en) A Saccharomyces cerevisiae strain that can be fermented with soybean molasses and its application
FI85503B (en) FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV POLYOLER GENOM PAO INDUSTRIELL SKALA BASERAD FERMENTATION AV SOCKER.
RU2378365C2 (en) Method of culturing brewing yeast
CN114634882A (en) A method of promoting yeast growth and fermentation
CN107034169B (en) A kind of Enterobacter 10-17 and its application in ethanol production
WO2004087934A1 (en) Fermentation processes with low concentrations of carbon- and nitrogen-containing nutrients
RU2830602C1 (en) Saccharomyces cerevisiae uz-15 vkpm u-5163 yeast strain for cider production
SU1460076A1 (en) Strain of saccharomyces vini yeast used in producing effervescent wine
SU1707072A1 (en) Strain of bacteria acetobacter aceti subsp orleanensis - a producer of vinegar and a method of vinegar production
CN108865942A (en) CaCO is not added in one kind3The formula and caproic acid bacteria cultural method of Caproic Acid Bacteria Culture
CN1233824C (en) Method for increasing yield of heat and alkaline resistant catalase prepared by microbiological method
RU2103346C1 (en) Fungus strain aspergillus niger - a producer of citric acid
CN1069066A (en) Alcohol yeast culture by engymolysis of starch and device

Legal Events

Date Code Title Description
PC4A Invention patent assignment

Effective date: 20060925

MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20070818

NF4A Reinstatement of patent

Effective date: 20100427

MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20120818

BF4A Cancelling a publication of earlier date [patents]

Free format text: PUBLICATION IN JOURNAL SHOULD BE CANCELLED

MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20130818