RU2123046C1 - Donor of nitrogen oxide and activator of guanylate cyclase soluble form - Google Patents
Donor of nitrogen oxide and activator of guanylate cyclase soluble form Download PDFInfo
- Publication number
- RU2123046C1 RU2123046C1 RU97121604A RU97121604A RU2123046C1 RU 2123046 C1 RU2123046 C1 RU 2123046C1 RU 97121604 A RU97121604 A RU 97121604A RU 97121604 A RU97121604 A RU 97121604A RU 2123046 C1 RU2123046 C1 RU 2123046C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nitrogen oxide
- donor
- guanylate cyclase
- activator
- dioxide
- Prior art date
Links
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 42
- 239000012190 activator Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 108010078321 Guanylate Cyclase Proteins 0.000 title claims abstract description 5
- 102000014469 Guanylate cyclase Human genes 0.000 title claims abstract description 5
- ANSXAPJVJOKRDJ-UHFFFAOYSA-N furo[3,4-f][2]benzofuran-1,3,5,7-tetrone Chemical compound C1=C2C(=O)OC(=O)C2=CC2=C1C(=O)OC2=O ANSXAPJVJOKRDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 9
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 2
- 102000007637 Soluble Guanylyl Cyclase Human genes 0.000 abstract 2
- 108010007205 Soluble Guanylyl Cyclase Proteins 0.000 abstract 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 125000005605 benzo group Chemical group 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 3',5'-cyclic GMP Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=C(NC2=O)N)=C2N=C1 ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- DNICYJAAAVXQCV-UHFFFAOYSA-N 1,2-dioxido-3,5-diphenylpyrazole-1,2-diium-4-one Chemical compound [O-][N+]=1[N+]([O-])=C(C=2C=CC=CC=2)C(=O)C=1C1=CC=CC=C1 DNICYJAAAVXQCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzenesulfonic acid Chemical compound NC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001204 N-oxides Chemical class 0.000 description 2
- DRBBFCLWYRJSJZ-UHFFFAOYSA-N N-phosphocreatine Chemical compound OC(=O)CN(C)C(=N)NP(O)(O)=O DRBBFCLWYRJSJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SNIOPGDIGTZGOP-UHFFFAOYSA-N Nitroglycerin Chemical compound [O-][N+](=O)OCC(O[N+]([O-])=O)CO[N+]([O-])=O SNIOPGDIGTZGOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000006 Nitroglycerin Substances 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 229960003711 glyceryl trinitrate Drugs 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 239000002840 nitric oxide donor Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N theophylline Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2 ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VTSBIKDWXIRAAH-UHFFFAOYSA-N 3,4-Dicyanofuroxan Chemical compound [O-][N+]=1ON=C(C#N)C=1C#N VTSBIKDWXIRAAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 3,4-disubstituted furoxanes Chemical class 0.000 description 1
- KSFYDUYYZMNBNE-UHFFFAOYSA-N 3-oxido-[1,2,5]oxadiazolo[3,4-g][2,1,3]benzoxadiazol-3-ium Chemical compound C1=CC2=NON=C2C2=NO[N+]([O-])=C21 KSFYDUYYZMNBNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMYJGTWUVVVOFO-UHFFFAOYSA-N 4-phenyl-3-furoxancarbonitrile Chemical class N#CC1=[N+]([O-])ON=C1C1=CC=CC=C1 PMYJGTWUVVVOFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WJOXYPNQASUCHB-UHFFFAOYSA-N 5-oxido-4-phenyl-1,2,5-oxadiazol-5-ium-3-carbonitrile Chemical compound O1N=C(C#N)C(C=2C=CC=CC=2)=[N+]1[O-] WJOXYPNQASUCHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- NULAJYZBOLVQPQ-UHFFFAOYSA-N N-(1-naphthyl)ethylenediamine Chemical compound C1=CC=C2C(NCCN)=CC=CC2=C1 NULAJYZBOLVQPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ONPNMZDHBLEONO-UHFFFAOYSA-N [1,2,5]thiadiazolo[3,4-g][2,1,3]benzoxadiazole Chemical compound C1=CC2=NSN=C2C2=NON=C12 ONPNMZDHBLEONO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000002744 anti-aggregatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006149 azo coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- XEYBHCRIKKKOSS-UHFFFAOYSA-N disodium;azanylidyneoxidanium;iron(2+);pentacyanide Chemical compound [Na+].[Na+].[Fe+2].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].[O+]#N XEYBHCRIKKKOSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- MOYKHGMNXAOIAT-JGWLITMVSA-N isosorbide dinitrate Chemical compound [O-][N+](=O)O[C@H]1CO[C@@H]2[C@H](O[N+](=O)[O-])CO[C@@H]21 MOYKHGMNXAOIAT-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000015909 regulation of biological process Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 229940083618 sodium nitroprusside Drugs 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229950000244 sulfanilic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960000278 theophylline Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000304 vasodilatating effect Effects 0.000 description 1
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 1
- 230000002883 vasorelaxation effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биохимии, в частности к применению бензо[1,2-с: 3,4-с']бис[1,2.5]оксадиазол-1,6-диоксида формулы I
в качестве донора оксида азота и активатора растворимой формы гуанилатциклазы (рГЦ).The invention relates to biochemistry, in particular to the use of benzo [1,2-s: 3,4-s'] bis [1,2.5] oxadiazole-1,6-dioxide of the formula I
as a donor of nitric oxide and an activator of a soluble form of guanylate cyclase (rHC).
Изобретение может быть использовано в биохимии для изучения регуляторных эффектов оксида азота и механизма действия рГЦ и других NO-зависимых ферментов. The invention can be used in biochemistry to study the regulatory effects of nitric oxide and the mechanism of action of RHC and other NO-dependent enzymes.
Гуанилатциклаза /КФ 4.6.1.2. ; гуанозин-5'-трифосфат-пирофосфатлиаза (циклизующая)/ является ферментом, катализирующим биосинтез гуанозин-3'-5'-циклофосфата (цГМФ)-универсального регулятора внутриклеточного метаболизма [1]. Guanylate cyclase / CF 4.6.1.2. ; guanosine-5'-triphosphate-pyrophosphatliase (cyclizing) / is an enzyme that catalyzes the biosynthesis of guanosine-3'-5'-cyclophosphate (cGMP), a universal regulator of intracellular metabolism [1].
ГЦ существует в двух формах - мембранной и растворимой. В настоящее время установлено, что рГЦ является основной мишенью фармакологического действия наиболее распространенных нитровазодиляторов (нитроглицерина, нитросорбида, нитропруссида натрия) и играет ключевую роль в регуляции таких физиологических процессов, как сокращение и расслабление гладких мышц кровеносных сосудов и агрегация тромбоцитов. Показано, что лечебный эффект вышеуказанных фармпрепаратов связан со стимуляцией активности рГЦ в результате взаимодействия оксида азота, образующегося при их биотрансформации, с атомом железа гема, входящего в состав фермента, и образования комплекса нитрозил-гем. HZ exists in two forms - membrane and soluble. It has now been established that RHC is the main target of the pharmacological action of the most common nitrovasodilators (nitroglycerin, nitrosorbide, sodium nitroprusside) and plays a key role in the regulation of physiological processes such as contraction and relaxation of the smooth muscles of blood vessels and platelet aggregation. It was shown that the therapeutic effect of the above pharmaceuticals is associated with stimulation of the activity of RHCs as a result of the interaction of nitric oxide formed during their biotransformation with the heme iron atom, which is part of the enzyme, and the formation of the nitrosyl-heme complex.
Существенным недостатком известных вазодилятаторов на основе органических нитратов является возникновение толерантности при их длительном применении. В связи с этим изучение молекулярного механизма регуляции активности рГЦ с помощью новых соединений, способных генерировать NO в живом организме и/или вызывать активацию фермента NO-независимым путем, является перспективным подходом для поиска и создания новых более эффективных антигипертензивных и антиагрегантных фармпрепаратов. A significant drawback of the known organic nitrate-based vasodilators is the occurrence of tolerance during prolonged use. In this regard, the study of the molecular mechanism of regulation of RHC activity with the help of new compounds capable of generating NO in a living organism and / or causing activation of an enzyme in an NO-independent way is a promising approach for the search and creation of new, more effective antihypertensive and antiaggregant pharmaceuticals.
Известны различные N-оксиды и близкие к ним по строению соединения, являющиеся донорами оксида азота и/или его биологически активных форм (восстановленной формы -NO-/HNO, нитрозотиолов), активаторами рГЦ и оказывающие фармакологическое действие на сердечно-сосудистую систему [2].Various N-oxides and structurally similar compounds are known, which are donors of nitric oxide and / or its biologically active forms (reduced form —NO - / HNO, nitrosothiols), activators of RHCs and having a pharmacological effect on the cardiovascular system [2] .
Так, известны 3,4-дизамещенные фуроксаны, в частности, 1,2,5-оксадиазол-3,4-динитрил-2-оксид, 3-фенил-1,2,5-оксадиазол-4-нитрил-2-оксид и его изомер общей формулы II
где
R1=CN;
R2=CN или C6H5
или R1=C6H5 и R2=CN,
являющиеся донорами оксида азота и активирующие рГЦ из легких крысы в концентрации 0,5 мМ и в присутствии 5 мМ L-цистеина [3]. Действие данных соединений при более низких концентрациях не изучено.Thus, 3,4-disubstituted furoxanes are known, in particular 1,2,5-oxadiazole-3,4-dinitrile-2-oxide, 3-phenyl-1,2,5-oxadiazole-4-nitrile-2-oxide and its isomer of the general formula II
Where
R 1 = CN;
R 2 = CN or C 6 H 5
or R 1 = C 6 H 5 and R 2 = CN,
donors of nitric oxide and activating rHCs from rat lungs at a concentration of 0.5 mM and in the presence of 5 mM L-cysteine [3]. The effect of these compounds at lower concentrations has not been studied.
Наиболее близким к соединению формулы I в ряду трициклических производных N, N'-диоксидов является 3,5-дифенилпиразол-4-он-1,2-диоксид формулы III
где
R1=R2=C6H5, генерирующий оксид азота и активирующий рГЦ [4].The closest to the compound of formula I in the series of tricyclic derivatives of N, N'-dioxides is 3,5-diphenylpyrazol-4-one-1,2-dioxide of the formula III
Where
R 1 = R 2 = C 6 H 5 generating nitric oxide and activating RHC [4].
Недостатками данного соединения являются невысокая степень генерации NO и активации рГЦ (в 2,5 раза в концентрации 10 мкМ, см. пример 2). The disadvantages of this compound are the low degree of NO generation and activation of rHC (2.5 times at a concentration of 10 μM, see example 2).
Известен бензо[1,2-с: 3,4-с'] бис[1,2,5]оксадиазол-1,6-диоксид вышеуказанной формулы I, проявляющий выраженное сосудорасширяющее (вазорелаксантное) действие в условиях in vitro и обладающий высокой гипотензивной активностью, превосходящей аналогичный эффект нитроглицерина в эксперименте in vivo [5]. Known benzo [1,2-s: 3,4-s'] bis [1,2,5] oxadiazole-1,6-dioxide of the above formula I, which exhibits a pronounced vasodilating (vasorelaxant) effect in vitro and having a high hypotensive activity superior to the similar effect of nitroglycerin in an in vivo experiment [5].
Биохимические свойства данного соединения (в частности, способность генерировать NO данным соединением и влияние на активность рГЦ) до настоящего времени не изучены. The biochemical properties of this compound (in particular, the ability to generate NO by this compound and the effect on the activity of RHCs) have not yet been studied.
Целью описываемого изобретения является поиск нового донора оксида азота и активатора рГЦ, обладающего более выраженными биохимическими свойствами. The aim of the described invention is the search for a new donor of nitric oxide and activator RHC, with more pronounced biochemical properties.
Указанная цель достигается применением известного бензо[1,2-с:3,4-с']бис[1,2,5] оксадиазол-1,6-диоксида формулы I в качестве донора оксида азота и активатора рГЦ. This goal is achieved by using the known benzo [1,2-s: 3,4-s'] bis [1,2,5] oxadiazole-1,6-dioxide of the formula I as a nitric oxide donor and an activator of RHC.
Бензо[1,2-с: 3,4-с']бис[1,2,5]оксадиазол-1,6-диоксид формулы I был получен известным способом, основанным на реакции 4-нитро-5-хлорбензофуроксана с азидом натрия в среде водного метанола [5,6]. Показано, что в растворе бензо[1,2-с:3,4-с']бис[1,2.5]оксадиазол-1,6-диоксид формулы I существует в равновесии со своим изомером бензо[1,2-с:3,4-с']бис[1,2,5]оксадиазол-3,6-диоксидом [6]. Benzo [1,2-s: 3,4-s'] bis [1,2,5] oxadiazole-1,6-dioxide of the formula I was obtained in a known manner based on the reaction of 4-nitro-5-chlorobenzofuroxane with sodium azide in aqueous methanol [5,6]. It has been shown that in a solution of benzo [1,2-s: 3,4-s'] bis [1,2.5] oxadiazole-1,6-dioxide of the formula I exists in equilibrium with its benzo isomer [1,2-s: 3 , 4-c '] bis [1,2,5] oxadiazole-3,6-dioxide [6].
Изобретение иллюстрируется следующими примерами. The invention is illustrated by the following examples.
Пример 1. Генерация оксида азота из бензо[1,2-с:3,4-']бис[1,2,5]оксадиазол-1,6-диоксида формулы I. Example 1. The generation of nitric oxide from benzo [1,2-c: 3,4 - '] bis [1,2,5] oxadiazole-1,6-dioxide of the formula I.
Для определения оксида азота использовали известный способ, основанный на реакции оксида азота с кислородом воздуха в водной среде с образованием нитрита, количество которого измеряли по интенсивности окрашивания пробы продуктом реакции азосочетания с помощью спектрофотометра. To determine nitric oxide, a known method was used, based on the reaction of nitric oxide with atmospheric oxygen in an aqueous medium to form nitrite, the amount of which was measured by the intensity of staining of the sample with the product of the azo coupling reaction using a spectrophotometer.
Проба конечным объемом 400 мкл содержала 50 мМ калий-фосфатный буфер (pH 7,4) 1 мМ цистеин, изучаемое соединение в концентрации 0,1 мМ и 0,2% ДМСО. В качестве отрицательного контроля использовался водный раствор ДМСО в концентрации 0,2%, а в качестве положительного контроля 0,1 мМ раствор нитрита натрия, содержащий 0,2% ДМСО. Пробы инкубировали 1 час при 20oC и добавляли последовательно 50 мкл 3 М раствора ацетата натрия, 300 мкл 0,92% раствора сульфаниловой кислоты в 30% уксусной кислоте и 300 мкл N-нафтилэтилендиамина. Пробы инкубировали 10 минут и измеряли оптическую плотность при длине волны 554 нм на спектрофотометре.A sample with a final volume of 400 μl contained 50 mM potassium phosphate buffer (pH 7.4) 1 mM cysteine, the studied compound at a concentration of 0.1 mM and 0.2% DMSO. An aqueous solution of DMSO at a concentration of 0.2% was used as a negative control, and a 0.1 mM sodium nitrite solution containing 0.2% DMSO was used as a positive control. Samples were incubated for 1 hour at 20 ° C and 50 μl of a 3 M solution of sodium acetate, 300 μl of a 0.92% solution of sulfanilic acid in 30% acetic acid and 300 μl of N-naphthylethylenediamine were successively added. Samples were incubated for 10 minutes and absorbance was measured at a wavelength of 554 nm on a spectrophotometer.
Бензо[1,2-с:3,4-с']бис[1,2,5]оксадиазол-1,6-диоксид формулы I в вышеуказанных условиях генерировал 0,233 моль нитрита на моль соединения (в отсутствие цистеина образования нитрита не происходит). Известный структурный аналог - 3,5-дифенилпиразол-4-он-1,2-диоксид формулы III в вышеуказанных условиях генерировал 0,08 моль нитрита на моль исходного соединения. Benzo [1,2-s: 3,4-s'] bis [1,2,5] oxadiazole-1,6-dioxide of formula I under the above conditions generated 0.233 mol of nitrite per mole of compound (in the absence of cysteine, nitrite does not form ) The well-known structural analogue, 3,5-diphenylpyrazol-4-one-1,2-dioxide of the formula III, under the above conditions generated 0.08 mol of nitrite per mol of the starting compound.
Пример 2. Активирующее действие бензо[1,2-с:3,4-с']бис[1,2,5]оксадиазол-1,6-диоксида формулы I на рГЦ. Example 2. The activating effect of benzo [1,2-s: 3,4-s'] bis [1,2,5] oxadiazole-1,6-dioxide of the formula I on RHC.
Препарат рГЦ получали из тромбоцитов человека, выделенных из венозной крови доноров известным способом. Активность фермента определяли по количеству образовавшегося цГМФ иммуноферментным способом с использованием наборов реактивов для количественного определения цГМФ АО "Биоиммуноген" (Россия). The RHC preparation was obtained from human platelets isolated from donor venous blood in a known manner. The enzyme activity was determined by the amount of cGMP formed by the enzyme immunoassay using reagent kits for the quantitative determination of cGMP of Bioimmunogen JSC (Russia).
Инкубационная смесь для определения активности (общий объем пробы 150 мкл) приготавливалась при 0-4oC и содержала 50 мМ Трис-HCl (pH 7,6), 1 мМ ГТФ, 4 мМ MgCl2, 4 мМ креатинфосфат, 100 мкг (50 ед/мг) креатинфосфокиназы, 10 мМ теофиллин, ферментный препарат (супернатант 105 000g, 10-20 мкг белка). При определении активирующего действия в среду инкубации вносили изучаемое соединение в виде раствора в водном диметилсульфоксиде (ДМСО). Концентрация соединения в пробе составляла 1 • 10-5 М, ДМСО - 0,02% об. Контрольная проба показала отсутствие влияния ДМСО в указанной концентрации на базальную активность рГЦ. Пробы инкубировали в водяном термостате при 37oC в течение 15 минут. Реакцию останавливали перенесением проб на 2 минуты в кипящую водяную баню с последующим охлаждением в ледяной бане. После отделения денатурированного белка центрифугированием (10 минут при 1500 g) в полученном супернатанте определяли количество образовавшегося цГМФ вышеуказанным способом. Определение белка проводили по способу Лоури, в качестве стандарта использовали бычий сывороточный альбумин.An incubation mixture for determining activity (total sample volume 150 μl) was prepared at 0-4 ° C and contained 50 mM Tris-HCl (pH 7.6), 1 mM GTP, 4 mM MgCl 2 , 4 mM creatine phosphate, 100 μg (50 u / mg) creatine phosphokinase, 10 mM theophylline, enzyme preparation (supernatant 105,000 g, 10-20 μg protein). When determining the activating effect, the studied compound was introduced into the incubation medium in the form of a solution in aqueous dimethyl sulfoxide (DMSO). The concentration of the compound in the sample was 1 • 10 -5 M, DMSO - 0.02% vol. A control sample showed no effect of DMSO in the indicated concentration on the basal activity of the RHC. Samples were incubated in a water thermostat at 37 o C for 15 minutes. The reaction was stopped by transferring the samples for 2 minutes to a boiling water bath, followed by cooling in an ice bath. After separation of the denatured protein by centrifugation (10 minutes at 1500 g), the amount of cGMP formed in the above method was determined in the obtained supernatant. Protein was determined according to the Lowry method, bovine serum albumin was used as a standard.
Эффективность активирующего действия бензо[1,2-с:3,4-с']бис[1,2,5]оксадиазол-1,6-диоксида формулы I в концентрации 1 • 10-5 М оценивали в сравнении с аналогичным эффектом 3,5-дифенилпиразол-4-он-1,2-диоксида. Степень активации рГЦ в вышеуказанных условиях для соединения данного изобретения составляла 1480% (ср. 250% для известного аналога).The activating effectiveness of benzo [1,2-s: 3,4-s'] bis [1,2,5] oxadiazole-1,6-dioxide of the formula I at a concentration of 1 • 10 -5 M was evaluated in comparison with a similar effect 3 , 5-diphenylpyrazol-4-one-1,2-dioxide. The degree of activation of the RHC under the above conditions for the compounds of this invention was 1480% (cf. 250% for the known analogue).
Как вытекает из данных примеров 1 и 2, соединение настоящего изобретения является более эффективным донором оксида азота и оказывает более выраженное активирующее действие на рГЦ, чем его структурный аналог. Таким образом применение бензо[1,2-с:3,4-с']бис[1,2,5]оксадиазол-1,6-диоксида формулы I в биохимии расширяет ассортимент доноров оксида азота и специфических регуляторов активности рГЦ. As follows from the data of examples 1 and 2, the compound of the present invention is a more effective donor of nitric oxide and has a more pronounced activating effect on the RHC than its structural analogue. Thus, the use of benzo [1,2-s: 3,4-s'] bis [1,2,5] oxadiazole-1,6-dioxide of the formula I in biochemistry expands the range of nitric oxide donors and specific regulators of activity of RHCs.
Источники информации
1. Murad, F. Regulation of cytosolic guanylyl cyclase by nitric oxide: The NO-cGMP signal transduction system. Adv. Pharmacol. 1994, v.26, p. 19-33.Sources of information
1. Murad, F. Regulation of cytosolic guanylyl cyclase by nitric oxide: The NO-cGMP signal transduction system. Adv. Pharmacol 1994, v. 26, p. 19-33.
2. Methods in nitric oxide research. Ed. Feelisch, M., Stamler, J., J. Wiley & Sons, 1996, p.71-118. 2. Methods in nitric oxide research. Ed. Feelisch, M., Stamler, J., J. Wiley & Sons, 1996, p. 71-118.
3. Ferioli R., Folco G.C. et al. A new class of furoxan derivatives as NO donors: mechanism of action and biological activity. Brit. J. Pharmacol. 1995, v.ll4, p. 816-820. 3. Ferioli R., Folco G.C. et al. A new class of furoxan derivatives as NO donors: mechanism of action and biological activity. Brit. J. Pharmacol. 1995, v.ll4, p. 816-820.
4. Выложенная заявка ФРГ N 4322545, кл. C 07 D 231/18 1995. 4. The laid out application of Germany N 4322545, cl. C 07 D 231/18 1995.
5. Gosh, P.B., Everitt, B.J. Furzanobenzofuroxan, furazanobenzothiadiazole and their N-oxides. New class ofvasodilatory drugs. J. Med. Chem., 1974, v.l7, p.203-206. 5. Gosh, P.B., Everitt, B.J. Furzanobenzofuroxan, furazanobenzothiadiazole and their N-oxides. New class ofvasodilatory drugs. J. Med. Chem., 1974, v.l7, p.203-206.
6. Bolton, A.J., GripperGray, A.C., Katritzky, A.R. Heterocyclic rearrangements. IV. Furoxano- and furazanobenzofuroxan. J. Chem. Soc., 1965, p. 5958-5964. 6. Bolton, A.J., GripperGray, A.C., Katritzky, A.R. Heterocyclic rearrangements. IV. Furoxano- and furazanobenzofuroxan. J. Chem. Soc., 1965, p. 5958-5964.
Claims (1)
в качестве донора оксида азота и активатора растворимой формы гуанилатциклазы.The use of benzo [1,2-c: 3,4-c '] bis [1,2,5] -oxadiazole-1,6-dioxide of the formula I
as a donor of nitric oxide and an activator of a soluble form of guanylate cyclase.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU97121604A RU2123046C1 (en) | 1997-12-26 | 1997-12-26 | Donor of nitrogen oxide and activator of guanylate cyclase soluble form |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU97121604A RU2123046C1 (en) | 1997-12-26 | 1997-12-26 | Donor of nitrogen oxide and activator of guanylate cyclase soluble form |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2123046C1 true RU2123046C1 (en) | 1998-12-10 |
| RU97121604A RU97121604A (en) | 1999-02-27 |
Family
ID=20200476
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU97121604A RU2123046C1 (en) | 1997-12-26 | 1997-12-26 | Donor of nitrogen oxide and activator of guanylate cyclase soluble form |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2123046C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2280025C2 (en) * | 1999-09-13 | 2006-07-20 | Байер Акциенгезельшафт | New derivatives of aminodicarboxylic acids possessing pharmaceutical properties |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4322545A1 (en) * | 1993-07-07 | 1995-01-12 | Sanol Arznei Schwarz Gmbh | Pyrazolone dioxides and pyrazolone oxime dioxides |
-
1997
- 1997-12-26 RU RU97121604A patent/RU2123046C1/en active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4322545A1 (en) * | 1993-07-07 | 1995-01-12 | Sanol Arznei Schwarz Gmbh | Pyrazolone dioxides and pyrazolone oxime dioxides |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 2. Ed. Feelisch, M., Stamler, J., J. Methods in nitric oxide research Wiley Sons, 1996, p.71-118. 3. Ferioli R., Folco G.C. et al. A new class of furoxan derivaties as NO donors: mechanism of action and biological. Brit. J. Pharmacol. 1995, v.114, p.816-820. 4. Gosh, P.B., Everitt, B.J. Furzanobenzofuroxan, furazanobenzothiadiazole and their N-oxides. New class of vasodilatory drugs. J. Med. Chem., 1974, v.17, p.203-206. 5. Bolton, A.J., GripperGray, A.C., Katritzky, A.R. Heterocyclic rerrangements. IV. Furoxano- and furazanobenzofuroxan. J. Chem. Soc., 1965, p.5958-5964. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2280025C2 (en) * | 1999-09-13 | 2006-07-20 | Байер Акциенгезельшафт | New derivatives of aminodicarboxylic acids possessing pharmaceutical properties |
| RU2280025C9 (en) * | 1999-09-13 | 2008-06-20 | Байер Акциенгезельшафт | New derivatives of aminodicarboxylic acids possessing pharmaceutical properties |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yeaman | The mammalian 2-oxoacid dehydrogenases: a complex family | |
| Loscalzo | N-Acetylcysteine potentiates inhibition of platelet aggregation by nitroglycerin. | |
| Zhang et al. | Nitric oxide stimulates auto-ADP-ribosylation of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase. | |
| Yeates et al. | The reaction between organic nitrates and sulfhydryl compounds. A possible model system for the activation of organic nitrates. | |
| Bentle et al. | P-enolpyruvate carboxykinase ferroactivator. Purification and some properties. | |
| Thorndike et al. | A sensitive assay for glutamyltransferase | |
| Pehlke et al. | Inosinic acid dehydrogenase activity in the Lesch-Nyhan syndrome | |
| Colin et al. | Evidence for simultaneous derepression of messenger RNA and the guanine nucleotide exchange factor in fertilized sea urchin eggs | |
| RU2139932C1 (en) | Donor of nitrogen oxide and activator of soluble form of guanylate cyclase | |
| Johnson et al. | The control of tricarboxylate-cycle oxidations in blowfly flight muscle. The steady-state concentrations of citrate, isocitrate 2-oxoglutarate and malate in flight muscle and isolated mitochondria | |
| RU2123046C1 (en) | Donor of nitrogen oxide and activator of guanylate cyclase soluble form | |
| Bobik et al. | An unusual thiol-driven fumarate reductase in Methanobacterium with the production of the heterodisulfide of coenzyme M and N-(7-mercaptoheptanoyl) threonine-O3-phosphate | |
| Cammer et al. | Oxidation of 3, 3'-diaminobenzidine by rat liver mitochondria | |
| Lynen | New Experiments of Biotin Enzyme | |
| Wallace et al. | Multifunctional role of calmodulin in biologic processes | |
| RU2123526C1 (en) | Activator of guanylate cyclase soluble form | |
| Püschel et al. | Increase of urate formation by stimulation of sympathetic hepatic nerves, circulating noradrenaline and glucagon in the perfused rat liver | |
| Carthew et al. | Formation of transcription preinitiation complexes with an amanitin-resistant RNA polymerase II. | |
| KR100818537B1 (en) | Method for detecting the oxidized form of soluble guanylate cyclase | |
| RU2122582C1 (en) | Activator of guanylate cyclase soluble form | |
| Gehrke et al. | ATP-dependent proteolysis and the role of ubiquitin in rabbit cardiac muscle | |
| Yamaki et al. | Ca2+-independent stimulation of cyclic GMP-dependent protein kinase by calmodulin | |
| RU2151799C1 (en) | Inhibitor of guanylate cyclase soluble form | |
| RU2130490C1 (en) | Specific regulator of activity of nucleotide-dependent enzymes | |
| Tamaoki et al. | Hypoxia impairs nitrovasodilator-induced pulmonary vasodilation: role of Na-K-ATPase activity |