RU2122741C1 - Method of preparing standard panel of sera to control quality of test systems and immunoblots used for serologic diagnostics of antibodies specific for viral infections - Google Patents
Method of preparing standard panel of sera to control quality of test systems and immunoblots used for serologic diagnostics of antibodies specific for viral infections Download PDFInfo
- Publication number
- RU2122741C1 RU2122741C1 RU95106896/14A RU95106896A RU2122741C1 RU 2122741 C1 RU2122741 C1 RU 2122741C1 RU 95106896/14 A RU95106896/14 A RU 95106896/14A RU 95106896 A RU95106896 A RU 95106896A RU 2122741 C1 RU2122741 C1 RU 2122741C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sera
- antibodies
- titer
- panel
- immunospecific
- Prior art date
Links
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims abstract description 58
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 title claims 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 title claims 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 60
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 19
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 16
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000004448 titration Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 21
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 8
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims description 7
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 6
- 239000005862 Whey Substances 0.000 claims description 5
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 claims 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 10
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 abstract 4
- 230000001524 infective effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 7
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 5
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 5
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 4
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000000954 titration curve Methods 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000009477 glass transition Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 1
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии и может быть использовано в технологии изготовления стандартных панелей сывороток, содержащих или не содержащих антитела к определенному антигену, для контроля качества тест-наборов и в научно-исследовательских целях. The invention relates to the field of biotechnology and immunology, and can be used in the technology of manufacturing standard serum panels containing or not containing antibodies to a specific antigen, for quality control of test kits and for research purposes.
Из источников патентной информации известны способы получения стандартных контрольных сывороток, используемых в диагностических анализах [1]. Однако такие сыворотки не могут быть использованы для контроля качества тест-систем и иммуноблотов (ИБ), т.к. они не отвечают предъявляемым к ним критериям при формировании стандартной панели сывороток. From sources of patent information, methods are known for producing standard control sera used in diagnostic assays [1]. However, such sera cannot be used to control the quality of test systems and immunoblots (IB), because they do not meet the criteria for them when forming a standard serum panel.
Известен способ приготовления стандартной панели позитивных к вирусу иммунодефицита человека сывороток крови для оценки чувствительности диагностических иммуноферментных тест-систем [2]. Способ включает приготовление иммунных сывороток, содержащих специфические антитела ко всем основным белкам HIV-I и имеющих разную концентрацию этих антител. Полученная таким способом стандартная панель ГИСК им. Л.А.Тарасевича (OCO 42-28-145-88) включает 50 сывороток крови больных СПИД и носителей ВИЧ-1, выявленных на территории СССР. A known method of preparing a standard panel positive for human immunodeficiency virus serum to assess the sensitivity of diagnostic enzyme immunoassay test systems [2]. The method includes preparing immune sera containing specific antibodies to all major HIV-I proteins and having different concentrations of these antibodies. Obtained in this way the standard panel GISK them. L.A. Tarasevicha (OCO 42-28-145-88) includes 50 blood serums of AIDS patients and HIV-1 carriers detected in the USSR.
Недостатками способа получения указанной панели сывороток являются низкие чувствительность и достоверность контроля тест-систем и иммуноблотов, и невозможность контроля их специфичности, т.к. она составлена только из позитивных сывороток. The disadvantages of the method of obtaining the indicated panel of sera are low sensitivity and reliability of the control of test systems and immunoblots, and the inability to control their specificity, because it is composed only of positive sera.
Это объясняется тем, что данная панель составлена из нативных сывороток, имеющих обычно высокие титры, и тем, что сыворотки находятся в жидком состоянии. Использование в панели нативных сывороток не позволяет в должной мере проконтролировать чувствительность тест-систем, т.к. высоким титрам нативных сывороток сопутствуют очень высокие значения оптических плотностей (ОП) в ИФА. Поэтому панель ГИСКа оказывается малоэффективной в области значений ОП, близких к критическим значениям (ОПкрит). Кроме того, панель OCO 42-28-145-88 из-за малого количества сывороток с низким содержанием антител (1-2 сыворотки из 50) малопригодна для оценки достоверности результатов анализов, например, при дискриминации ложноположительных сывороток, имеющих значения ОП, близкие или совпадающие с ОПкрит. И, наконец, панель включает только позитивные сыворотки и для оценки специфичности тест-систем и ИБ необходимо использовать другие панели сывороток. This is due to the fact that this panel is composed of native sera, which usually have high titers, and the fact that the sera are in a liquid state. The use of native serums in the panel does not allow to adequately control the sensitivity of test systems, because high titers of native sera are accompanied by very high values of optical densities (OD) in ELISA. Therefore, the GISK panel turns out to be ineffective in the region of OP values close to critical values (OPcrit). In addition, the OCO 42-28-145-88 panel, due to the low number of sera with a low antibody content (1-2 sera from 50), is not suitable for assessing the reliability of test results, for example, when discriminating against false positive sera having OD values close to or coinciding with OPcrit. Finally, the panel includes only positive sera, and other serum panels must be used to evaluate the specificity of the test systems and IB.
Наиболее близким техническим решением (прототипом) является способ приготовления панели сывороток фирмы Boston Biomedica Inc., именуемой Anti-HCV Mixed Titer Panel [3]. The closest technical solution (prototype) is a method of preparing a serum panel of the company Boston Biomedica Inc., referred to as Anti-HCV Mixed Titer Panel [3].
Способ включает приготовление иммунных сывороток, содержащих специфические антитела к основным антигенам тестируемого вируса и имеющих разную концентрацию этих антител, а также приготовление донорских сывороток с нулевым титром. Каждая панель включает 25 нативных сывороток в жидкой форме. Сыворотки панели не стабилизированы. По этой причине сыворотки панели должны храниться при минус 10oC или ниже. Запрещено замораживание-размораживание сывороток. Характеристики сывороток панели служат только для информационных целей и фирма не гарантирует воспроизведение указанных характеристик при проведении анализов пользователями. Соответственно эти панели не имеют статуса аттестованных или прошедших сертификацию в Институте стандартов - U.S. Food and Drug Administration (FDA) и область их применения ограничена рамками решения исследовательских задач..The method includes the preparation of immune sera containing specific antibodies to the main antigens of the test virus and having different concentrations of these antibodies, as well as the preparation of donor serums with a zero titer. Each panel includes 25 native serums in liquid form. Serum panels are not stabilized. For this reason, serum panels should be stored at minus 10 o C or lower. It is forbidden to freeze-thaw sera. The characteristics of the panel sera are for informational purposes only and the company does not guarantee the reproduction of these characteristics during user analysis. Accordingly, these panels do not have the status of certified or certified at the Institute of Standards - US Food and Drug Administration (FDA) and their scope is limited to solving research problems.
Стоимость панелей колеблется от 300 до 1200 долларов США. The cost of panels ranges from 300 to 1200 US dollars.
К недостаткам прототипа следует отнести следующее:
- панели составлены из нативных сывороток, имеющих обычно высокие титры;
- сыворотки находятся в жидком состоянии;
- сыворотки не стабилизированы;
- сыворотки не аттестованы.The disadvantages of the prototype include the following:
- panels are composed of native serums, which usually have high titers;
- serums are in a liquid state;
- serum is not stabilized;
- serum is not certified.
Использование в панели нативных сывороток не позволяет в должной мере проконтролировать чувствительность тест-систем, т.к. высоким титрам нативных сывороток сопутствуют очень высокие значения оптических плотностей (ОП) в ИФА. Такие панели оказываются малоэффективными в области значений ОП, близких к критическим значениям (ОПкрит.). Более того, из-за малого количества сывороток с низким содержанием антител (2 сыворотки из 25) панель, изготовленная по способу-прототипу, малопригодна для оценки правильности результатов анализов, например, при дискриминации ложноположительных сывороток, имеющих значения ОП, близкие или совпадающие с ОПкрит (Cut off). The use of native serums in the panel does not allow to adequately control the sensitivity of test systems, because high titers of native sera are accompanied by very high values of optical densities (OD) in ELISA. Such panels turn out to be ineffective in the region of OP values close to critical values (OPcrit.). Moreover, due to the small number of sera with a low antibody content (2 out of 25 sera), a panel made according to the prototype method is of little use for evaluating the correctness of test results, for example, when discriminating against false positive sera having OD values that are close or coincide with OPcrit (Cut off).
Кроме того, большое неудобство доставляет транспортировка и хранение панелей при температурах ниже минус 10oC, но не ниже минус 25oC (т.к. запрещено замораживание-оттаивание сывороток). При условиях перевозок, существующих в России и странах СНГ, такие панели быстро становятся непригодными. Все это, несомненно, связано с тем, что сыворотки панели не стабилизированы. С другой стороны, нестабилизированные сыворотки не могут быть аттестованы, т. к. по правилам ВОЗ биологические референс-материалы должны иметь срок сохранения не более 2-х лет.In addition, transportation and storage of panels at temperatures below minus 10 o C, but not lower than minus 25 o C (since freezing and thawing of sera is prohibited), causes great inconvenience. Under the conditions of transportation existing in Russia and the CIS countries, such panels quickly become unusable. All this, of course, is due to the fact that the serum panels are not stabilized. On the other hand, unstabilized sera cannot be certified, because, according to WHO rules, biological reference materials must have a shelf life of no more than 2 years.
Подводя итоги изложенному выше, следует отметить, что производимые за границей панели сывороток не могут быть рекомендованы к использованию российским производителям тест-систем или работникам станций переливания крови (гематологических центров), т. к. панели не имеют сертификатов даже национальных центров стандартизации, не говоря уже об аттестации их в ВОЗ. Зарубежные панели очень чувствительны к температурным условиям транспортировки и хранения и цены на них традиционно велики. Summing up the above, it should be noted that the serum panels produced abroad cannot be recommended for use by Russian manufacturers of test systems or employees of blood transfusion stations (hematological centers), because the panels do not have certificates even from national standardization centers, not to mention already about their certification in WHO. Foreign panels are very sensitive to temperature conditions of transportation and storage and their prices are traditionally high.
В основу настоящего изобретения поставлена задача создания такого способа, который обеспечивал бы изготовление стандартных низкотитражных панелей сывороток, позволяющих достоверно оценивать качество тест-систем и ИБ в области значений ОП, близких к ОП крит, т.е. повысить степень контроля чувствительности тест-систем и возможность контроля их специфичности. The basis of the present invention is the task of creating such a method that would ensure the production of standard low-volume panels of serums, which allow reliable assessment of the quality of test systems and information security in the range of OD values close to OD crit, i.e. increase the degree of control of the sensitivity of test systems and the ability to control their specificity.
Поставленная задача решается тем, что в способе получения стандартной панели сывороток для контроля качества тест-систем и иммуноблотов, включающем отбор иммуноспецифических сывороток, содержащих антитела к основным антигенам тестируемого вируса и имеющих разную концентрацию этих антител, а также отбор нативных донорских сывороток с нулевым титром, согласно изобретению отбор сывороток для панелей производят по результатам их исследования методом ИБ и/или полимеразной цепной реакции (ПЦР) на наличие инфекционного материала и титрования и ИФА. Причем в качестве иммуноспецифических сывороток выбирают только те, которые в процессе титрования соответствуют закономерному уменьшению величин ОП в ИФА и аналитического сигнала в ПДР. Отобранные иммуноспецифические сыворотки разводят до получения разной концентрации антител разбавителем, не содержащим антитела к тестируемому вирусу. Из нативных донорских сывороток с нулевым титром отбирают для панелей только те, которые не имеют полос преципитации в ИБ, имеют отрицательный результат в ПДР (минус), а в ИФА - оптическую плотность меньше критической оптической плотности (в диапазоне от 0,1 о.е. до ОП крит). The problem is solved in that in the method of obtaining a standard panel of sera for the quality control of test systems and immunoblots, including the selection of immunospecific sera containing antibodies to the main antigens of the test virus and having different concentrations of these antibodies, as well as the selection of native donor sera with a zero titer, according to the invention, the selection of serums for the panels is carried out according to the results of their study by the IB method and / or polymerase chain reaction (PCR) for the presence of infectious material and titer tions and ELISA. Moreover, as immunospecific sera, only those that during the titration correspond to a regular decrease in the OD values in the ELISA and the analytical signal in the PDR are selected. Selected immunospecific sera are diluted to obtain different concentrations of antibodies with a diluent that does not contain antibodies to the test virus. Of the native donor serums with a zero titer, only those that do not have precipitation bands in the IB are selected for the panels, have a negative result in the SDR (minus), and in the ELISA, the optical density is less than the critical optical density (in the range from 0.1 to OP crit).
Разведение иммунных сывороток производят неиммунной сывороткой, причем во все сыворотки панели вводят стабилизатор. Dilution of immune sera is done with non-immune serum, and a stabilizer is introduced into all panel sera.
Образцы иммунных сывороток дополнительно аттестовывают на содержание в них определенных видов антител путем постановки сывороток в лизатном иммуноблоте или путем постановки ИФА с отдельными антигенами исследуемого вируса. По результатам подтверждающих тестов отбирают такое минимальное количество сывороток, которое в формируемой стандартной панели обеспечивает полный спектр антител, соответствующих основным антигенам тестируемого вируса. Samples of immune sera are additionally certified for the content of certain types of antibodies in them by placing sera in a lysate immunoblot or by placing ELISA with individual antigens of the studied virus. According to the results of confirmatory tests, a minimum number of sera is selected which provides a complete spectrum of antibodies corresponding to the main antigens of the test virus in the formed standard panel.
Окончательно для формирования стандартной панели отбирают 25-30% сывороток с нулевым титром, не менее 50% сывороток с титром от 1:100 до 1:200 и не более 20-25% сывороток с титром выше 1:400 при общем количестве сывороток в стандартной панели не менее 24. Finally, for the formation of a standard panel, 25-30% of sera with a titer of at least 50% of sera with a titer of 1: 100 to 1: 200 and no more than 20-25% of sera with a titer higher than 1: 400 are selected with a total number of serums in the standard panels at least 24.
Приготовление сыворотки высушивают до остаточной влажности не более 2,0 мас.% путем лиофилизации. The preparation of whey is dried to a residual moisture content of not more than 2.0 wt.% By lyophilization.
Обоснование уровня техники. Justification of the prior art.
Важным вопросом при аттестации сывороток панели на антитела к некоторым тестируемым вирусам, например, к вирусу гепатита C (ВГС), является процедура дифференциации специфических антител относительно специфических антител к другим вирусным агентам того же или родственного семейства, например, выявление антител к ВГС относительно антител к некоторым видам флавивирусов. An important issue in the certification of panel sera for antibodies to certain test viruses, for example, hepatitis C virus (HCV), is the procedure for differentiating specific antibodies against specific antibodies to other viral agents of the same or related family, for example, identifying antibodies to HCV against antibodies to some types of flaviviruses.
В [4] проведено сравнительное изучение качества тест-систем на антитела к ВГС 1-го поколения, построенных на одном рекомбинантном белке C100, и тест-систем 2-го поколения, построенных на 3-х рекомбинантных белках C100, C33-c и коровом, при анализе сывороток, полученных из крови больных гемофилией и пациентов с диагнозом гепатит ни A, ни B. Чувствительность при переходе к тест-системам 2-го поколения увеличилась от 0,92 до 1,00, а вероятность ложноотрицательных результатов уменьшилась от 0,37 до 0. В [5] показано, что антитела к ВГС обнаруживаются у американских доноров, проверенных тест-системами 1-го поколения: 0,36% (22 подтвержденных позитива из 6 III образцов) среди доноров крови и 10,08% (375 подтвержденных позитивов из 3718 образцов) среди доноров плазмы. Как следует из приведенных примеров, в научной литературе и лечебной практике отсутствуют критерии однозначной идентификации антител к ВГС или диагноза гепатита C, а также к другим вирусам, которые не могут быть наработаны in vitro. In [4], a comparative study was conducted of the quality of test systems for antibodies to HCV of the 1st generation, built on one recombinant protein C100, and test systems of the 2nd generation, built on 3 recombinant proteins C100, C33-c and cow , in the analysis of sera obtained from the blood of patients with hemophilia and patients diagnosed with hepatitis neither A nor B. The sensitivity during the transition to test systems of the 2nd generation increased from 0.92 to 1.00, and the probability of false negative results decreased from 0, 37 to 0. [5] showed that antibodies to HCV are found in American donors verified by 1st generation test systems: 0.36% (22 confirmed positive from 6 III samples) among blood donors and 10.08% (375 confirmed positives from 3718 samples) among plasma donors. As follows from the above examples, in the scientific literature and medical practice there are no criteria for the unambiguous identification of antibodies to HCV or a diagnosis of hepatitis C, as well as to other viruses that cannot be developed in vitro.
В настоящем изобретении предлагается для исследования иммуноспецифических сывороток к таким вирусам использовать в качестве подтверждающего теста результаты анализа в тест-системах 2-го поколения и в ПЦР. При этом сама процедура исследования предусматривает обязательное титрование сывороток от высоких значений оптической плотности (ОП) до ОП крит. И только в том случае, когда аналитический сигнал закономерно уменьшается с разведением в обоих видах анализа, принимается, что регистрируемые антитела являются антителами именно к тестируемому вирусу, например ВГС, а сама сыворотка содержит инфекционный материал. Дополнительным подтверждением этому служит спектр антител к ВГС, который определяют путем постановки рекомбинантного иммунного блотинга или ИФА на отдельных антигенах. Из научной литературы известно [6], что около 90% больных гепатитом C или хронических больных имеют антитела к коровому антигену, а представительство антител к неструктурным антигенам значительно ниже (20-30%) и варьируется в широких пределах. The present invention proposes for the study of immunospecific sera to such viruses to use the results of analysis in test systems of the 2nd generation and in PCR as a confirmatory test. Moreover, the research procedure itself provides for the mandatory titration of sera from high optical density (OD) to OD crit. And only in the case when the analytical signal naturally decreases with dilution in both types of analysis, it is assumed that the antibodies being detected are antibodies specifically to the test virus, for example, HCV, and the serum itself contains infectious material. An additional confirmation of this is the spectrum of antibodies to HCV, which is determined by staging recombinant immune blotting or ELISA on individual antigens. It is known from the scientific literature [6] that about 90% of hepatitis C patients or chronic patients have antibodies to the core antigen, and the representation of antibodies to non-structural antigens is significantly lower (20-30%) and varies widely.
Таким образом, процедура исследования сывороток панели включает три этапа, результаты которых независимы и позволяют надежно идентифицировать антитела к тестируемому вирусу. Thus, the panel sera test procedure includes three stages, the results of which are independent and allow reliable identification of antibodies to the test virus.
Далее стандартную низкотитражную панель приготавливают из исследованных нативных сывороток с различной концентрацией антител. Next, a standard low-panel panel is prepared from the studied native sera with different concentrations of antibodies.
При этом концентрация антител в сыворотках панели нормируется по показателям титра и оптической плотности в ИФА в трех диапазонах:
1. Оптическая плотность сывороток в ИФА от 0,06 до ОП крит, титр нулевой (25-30% сывороток).In this case, the concentration of antibodies in the serum of the panel is normalized by the titer and optical density in ELISA in three ranges:
1. The optical density of the sera in ELISA from 0.06 to OP crit, titer of zero (25-30% of sera).
2. ОП в ИФА - от ОП крит до 0,7, титр 1:100 - 1:200 (не мене 50% сывороток). 2. OD in ELISA - from OD crit to 0.7, titer 1: 100 - 1: 200 (not less than 50% of sera).
3. ОП в ИФА - от 0,7 до 2,0, титр 1:400 - 1:800 (не более 20-25% сывороток). 3. OD in ELISA - from 0.7 to 2.0, titer 1: 400 - 1: 800 (not more than 20-25% of sera).
Нормировку сывороток в диапазонах 2 и 3 осуществляют путем разведения высокотитражных специфических сывороток с титром не менее 1:3200 донорской сывороткой, не содержащей антитела к тестируемому вирусу. The normalization of sera in
По результатам анализа иммунных сывороток в панель собирают сыворотки, имеющие в сумме антитела ко всем антигенам вируса. According to the results of the analysis of immune sera, sera containing a total of antibodies to all antigens of the virus are collected in a panel.
Для сохранения неизменными значений специфических показателей сывороток панели в последние добавляют стабилизатор. Наибольшее количество сывороток приготавливают с концентрациями антител, близкими к критической их концентрации в сыворотках, являющейся границей между положительными и отрицательными сыворотками. Наименьшее количество сывороток в панели имеют концентрацию антител, близкую к их концентрации в нативных сыворотках. После приготовления сыворотки высушивают по специальному режиму методом лиофилизации до уровня остаточной влажности не более 2 мас.%. To keep the values of specific indicators of the serum panels unchanged, a stabilizer is added to the latter. The largest number of sera is prepared with antibody concentrations close to their critical serum concentration, which is the boundary between positive and negative sera. The smallest number of sera in the panel have an antibody concentration close to their concentration in native sera. After preparation, the whey is dried in a special mode by lyophilization to a residual moisture level of not more than 2 wt.%.
Сравнение панели сывороток, приготовленной в соответствии с заявляемым способом, с панелью фирмы Boston Biomedica Inc. того же назначения, приготовленной по способу-прототипу [3], показывает, что отличная от прототипа совокупность существенных признаков обеспечивает новое раннее не известное свойство: возможность формирования стандартной панели из исследованных (аттестованных) сывороток, что позволяет более надежно и правильно контролировать качество изготовляемых тест-систем и иммуноблотов, особенно в области значений ОП, близких к ОП крит. A comparison of a panel of sera prepared in accordance with the claimed method with a panel of Boston Biomedica Inc. of the same purpose, prepared by the prototype method [3], shows that a combination of essential features that is different from the prototype provides a new early unknown property: the ability to form a standard panel from the investigated (certified) sera, which allows more reliable and correct control of the quality of the manufactured test - systems and immunoblots, especially in the range of OD values close to OD crit.
В качестве примеров использования панелей сывороток для контроля качества тест-систем приведены данные для стандартной панели анти-ВИЧ (вирус иммунодефицита человека) сер. 005 и панели анти-ВГС (вирус гепатита С) сер. 002Н. As examples of the use of serum panels for quality control of test systems, data are presented for a standard panel of anti-HIV (human immunodeficiency virus) ser. 005 and anti-HCV panels (hepatitis C virus) ser. 002N.
Работу с сыворотками панели следует проводить в асептических условиях, используя автоматические пипетки и одноразовые сменные наконечники. Work with the panel sera should be carried out under aseptic conditions using automatic pipettes and disposable exchangeable tips.
Во флакон с лиофильно высушенной сывороткой вносят 200 мкл дистиллированной воды. Раствор тщательно перемешивают до полного растворения сыворотки. 200 μl of distilled water are added to a vial with freeze-dried whey. The solution is thoroughly mixed until the serum is completely dissolved.
При проведении контроля качества диагностических тест-систем, применяемых для определения антител к ВИЧ, по тесту чувствительности используют полный комплект - 16 сывороток из стандартной панели. When conducting quality control of diagnostic test systems used to determine antibodies to HIV, a full set of 16 serums from a standard panel is used for the sensitivity test.
Рабочие разведения сывороток готовят в соответствии с инструкцией по применению контролируемой тест-системы. Затем вносят каждую сыворотку панели в две лунки планшета с иммуносорбентом как неизвестные образцы и проводят анализ. Workers diluting sera are prepared in accordance with the instructions for use of a controlled test system. Then, each panel serum is added to two wells of the immunosorbent plate as unknown samples and analyzed.
Учет результатов по образцам из панели следует проводить только в том случае, если величины оптической плотности (ОП) контроля конъюгата (положительного и отрицательного контролей) укладываются в пределах, регламентированныx фaрмакопейной статьей на испытуемую тест-систему. The results should be taken into account from samples from the panel only if the optical density (OD) values of the conjugate control (positive and negative controls) fall within the limits regulated by the pharmacopoeial article on the test test system.
ОП крит (критическая оптическая плотность, или Cut off) вычисляют в соответствии с формулой, приведенной в инструкции по применению тест-системы. Для т/системы "РекомбиБест анти-ВИЧ-1/2" расчет ОП проводят по формуле:
ОП крит = ОП (К-)ср + 0,2,
где
ОП(К-)ср - среднее значение оптической плотности отрицательного контроля
Результаты анализа качества тест-систем с использованием панели сывороток анти-ВИЧ сер. 005 представлены в табл. 1.OD crit (critical optical density, or Cut off) is calculated in accordance with the formula given in the instructions for use of the test system. For the t / system "Recombibest anti-HIV-1/2", the calculation of OD is carried out according to the formula:
OD crit = OD (K-) sr + 0.2,
Where
OP (K-) sr - the average optical density of the negative control
The results of the analysis of the quality of test systems using the panel of serum anti-HIV ser. 005 are presented in table. 1.
Если ОП всех сывороток панели выше значений ОП крит, чувствительность тест-системы принимается за 100%. В случае когда несколько значений ОП оказываются меньше или равными ОП крит, тест-система направляется на повторный контроль, и в случае повторного "неузнавания" хотя бы одной сыворотки панели - бракуется. If the OD of all panel sera is higher than the OD crit values, the sensitivity of the test system is taken as 100%. In the event that several OD values are less than or equal to OD crit, the test system is sent for re-monitoring, and in the event of repeated “unrecognition” of at least one panel serum, it is rejected.
Аналогично проводится контроль качества тест-систем, используемых для диагностики вируса гепатита C. Similarly, quality control of test systems used to diagnose hepatitis C virus is carried out.
Результаты анализа качества тест-систем с использованием панели сывороток анти-ВГС сер. 02НС представлены в табл. 2. The results of the analysis of the quality of test systems using a panel of serum anti-HCV ser. 02НС are presented in table. 2.
Если ОП всех сывороток панели выше значения ОП крит, чувствительность тест-системы принимается за 100%. В случае когда несколько значений ОП оказываются меньше или равными ОП крит, тест-система направляется на повторный контроль, и в случае повторного "неузнавания" хотя бы одной сыворотки панели - бракуется. If the OD of all panel sera is higher than the value of OD crit, the sensitivity of the test system is taken as 100%. In the event that several OD values are less than or equal to OD crit, the test system is sent for re-monitoring, and in the event of repeated “unrecognition” of at least one panel serum, it is rejected.
На основе аттестованных свойств панелей сывороток оцениваются качество и годность тест-систем, используемых в практической медицине. Based on the certified properties of the serum panels, the quality and suitability of the test systems used in practical medicine are evaluated.
При проведении контроля качества тест-систем, основанных на других принципах (иммуноблот, иммунофлуоресценция, агглютинация и др.), количество используемых сывороток стандартной панели и проведение испытаний регламентируются соответствующей НТД на тест-системы. When conducting quality control of test systems based on other principles (immunoblot, immunofluorescence, agglutination, etc.), the amount of standard panel sera used and testing are regulated by the corresponding scientific and technical documentation for test systems.
4. Для подтверждения области притязания приведен дополнительный пример приготовления низкотитражной панели сывороток с различной концентрацией ВИЧ-антител. 4. To confirm the claim area, an additional example of the preparation of a low-panel panel of sera with different concentrations of HIV antibodies is given.
Пример выполнения способа. An example of the method.
Для приготовления низкотитражной панели сывороток с различной концентрацией антител отбирают в процессе первичного скрининга (методом ИФА) 15 иммуноспецифических сывороток крови ВИЧ-инфицированных лиц с ОП 2 о.е. (титр не менее 1: 3200) и 10 донорских сывороток (ОП в диапазоне от 0,1 до ОП крит), антитела, в которых не диагностировались используемыми для отбора (скрининга) тест-системами. Отобранные после первичного скрининга иммуноспецифические сыворотки титруют в тест-системе "РекомбиБест анти-ВИЧ-1,2" (АО "ВекторБест", г. Новосибирск). Причем сыворотки титруют в пяти параллельных определениях на двух планшетах. Одновременно эти же сыворотки исследуют в реакции иммунного блотинга (тест-система "Иммуноблот "ВекторБест"). To prepare a low-panel panel of sera with different concentrations of antibodies, 15 immunospecific blood serums of HIV-infected individuals with an OD of 2 p.u. were selected during the initial screening (ELISA). (titer no less than 1: 3200) and 10 donor sera (OD in the range from 0.1 to OD crit), antibodies in which were not diagnosed by the test systems used for screening. The immunospecific sera selected after the initial screening are titrated in the Recombibest anti-HIV-1.2 test system (VectorBest JSC, Novosibirsk). Moreover, the serum is titrated in five parallel determinations on two tablets. At the same time, these same sera are examined in the immune blotting reaction (test system "Immunoblot" VectorBest ").
В качестве иммуноспецифических сывороток для приготовления панели отбирают те сыворотки, которым в процессе титрования соответствует закономерное уменьшение величин ОП в ИФА и ослабление окраски полос в иммуноблоте. В качестве нативных донорских сывороток с нулевым титром отбирают только те, которые имеют не менее 2-х реактивных полос в иммуноблоте и ОП в ИФА < 0,15 о. е. As immunospecific serums for the preparation of the panel, those sera are selected that correspond to a regular decrease in the OD values in the ELISA and weakening of the color of the bands in the immunoblot during the titration process. As native donor sera with a zero titer, only those that have at least 2 reactive bands in the immunoblot and OD in ELISA <0.15 o are selected. e.
На основании анализа результатов ИФА и иммуноблота устанавливают, что используемые для приготовления панели иммуноспецифические сыворотки содержат антитела к ВИЧ-1,2. Определено, что в девяти иммуноспецифических сыворотках присутствуют антитела ко всем антигенам ВИЧ. Это служит дополнительным доказательством, что сыворотки, отобранные для приготовления панели, являются гомоспецифичными к вирусу иммунодефицита человека. Based on the analysis of the results of ELISA and immunoblot, it is established that the immunospecific serums used for the preparation of the panel contain antibodies to HIV-1,2. It was determined that antibodies to all HIV antigens are present in nine immunospecific sera. This provides additional evidence that the sera selected for the preparation of the panel are homospecific to the human immunodeficiency virus.
По результатам титрования на основе статистической обработки строят усредненные кривые титрования для каждой имуноспецифической сыворотки (аналогично кривой на чертеже). Based on the results of titration, on the basis of statistical processing, average titration curves are constructed for each immunospecific serum (similar to the curve in the drawing).
Для определения кратности разведения выделяют участок прямо пропорциональной зависимости значений ОП от степени разведения (участок АВ на чертеже). На этих участках для каждой сыворотки выбирают значения титра (ОП) в соответствии с требуемой концентрацией специфических антител (требуемым титром). По кривым титрования определяют необходимую степень разведения для каждого номера сыворотки от N 1 до N 16 (всего 16 сывороток). Кратность разведения подбирают таким образом, чтобы значения оптических плотностей при выполнении ИФА лежали в диапазоне от значений ОП крит для выбранной тест-системы "РекомбиБест анти-ВИЧ" (АО "ВекторБест", г. Новосибирск) до значений ОП, равных 2,0 о.е. To determine the multiplicity of dilution, a section is isolated that is directly proportional to the dependence of OD values on the degree of dilution (section AB in the drawing). In these areas, for each serum, titer values (OD) are selected in accordance with the required concentration of specific antibodies (desired titer). The titration curves determine the necessary dilution degree for each serum number from N 1 to N 16 (a total of 16 sera). The dilution factor is selected so that the values of optical densities when performing an ELISA lie in the range from the OD crit values for the selected test system "Recombest anti-HIV" (VectorBest JSC, Novosibirsk) to the OD values equal to 2.0 ° .e.
На этапе разведения иммунную сыворотку каждого номера смешивают с разводящим раствором донорской сыворотки, в которую заранее добавляют стабилизатор. Смешивание для каждого номера от N 1 до N 16 осуществляют в течение 5-7 мин в колбе объемом 150 см3, установленной на магнитной мешалке. При этом получено 9 иммуноспецифических сывороток с титром в диапазоне от 1:50 до 1: 200 и 5 иммуноспецифических сывороток с титром в диапазонe от 1:200 до 1:600 и 2 сыворотки > 1:600.At the dilution step, the immune serum of each number is mixed with a diluting solution of donor serum, to which a stabilizer is added in advance. Mixing for each number from N 1 to
Все сыворотки разливают по 200 мкм во флаконы и лиофильно высушивают на установке "TG-50" (ФРГ). Режим лиофилизации подбирают по результатам предварительного физико-химического анализа фазовых превращений в разводящей донорской сыворотке со стабилизатором при замораживании. Подготовленные сыворотки панели замораживают со скоростью 0,3-0,5oC/мин до температуры -60oC и выдерживают при этой температуре в течение 10 ч. На этапе сублимации льда температуру материала поддерживают ниже температуры его стеклования (-30oC). Средняя скорость нагревания материала на этапе досушивания составляет 6oC/мин, время выдерживания при 27oC составляет 10 ч.All sera are poured into 200 μm into vials and freeze-dried on the installation "TG-50" (Germany). The lyophilization regimen is selected according to the results of a preliminary physicochemical analysis of phase transformations in diluting donor serum with a stabilizer during freezing. The prepared panel sera are frozen at a rate of 0.3-0.5 o C / min to a temperature of -60 o C and maintained at this temperature for 10 hours. At the stage of sublimation of ice, the temperature of the material is maintained below its glass transition temperature (-30 o C) . The average heating rate of the material at the stage of drying is 6 o C / min, the aging time at 27 o C is 10 hours
Сыворотки панели инактивированы, но с ними необходимо обращаться как с потенциально инфекционным материалом. Panel sera are inactivated, but must be treated as potentially infectious material.
Лиофильно высушенные сыворотки панели имеют остаточное содержание воды около 1,0 мас.%. Флаконы с сыворотками укупоривают под вакуумом. Lyophilized dried whey panels have a residual water content of about 1.0 wt.%. Serum vials are capped under vacuum.
Все сыворотки панели аттестовывают после лиофилизации в тест-системах: "РекомбиБест анти-ВИЧ- 1/2" (АО "ВекторБест"); "Рекомбинант ВИЧ-1/2" (АО "МайСтар"; "Антиген ВИЧ" (АО "ВекторБест"); "Пептострин-2", фирмa "Американд"). All panel sera are certified after lyophilization in test systems: “Recombest Best anti-HIV-1/2” (JSC VectorBest); "Recombinant HIV-1/2" (MayStar JSC; HIV Antigen (JSC VectorBest); Peptostrin-2, Amerikand company).
Установлено, что в процессе лиофилизации специфическая активность сывороток не изменяется. It was found that in the process of lyophilization, the specific activity of sera does not change.
Стабильность сывороток в различных условиях хранения в темноте во флаконах определяют по результатам теста термодеградации при температурах: -20, +4, +20, +37oC. По результатам теста установлено, что сыворотки панели должны сохранить неизменной специфическую активность в течение не менее трех лет.The stability of the sera in different conditions of storage in the dark in vials is determined by the results of the thermal degradation test at temperatures: -20, +4, +20, +37 o C. According to the test results, it was found that the serum panels must remain unchanged for specific activity for at least three years.
Источники информации
1. Заявка ЕПВ N 0062227, МКИ G 01 N 33/96, опубл. 13.10.92 г.; заявка ЕПВ N 0131826, МКИ G 01 N 33/96, опубл. 23.01.85 г.; заявка ФРГ N 3324626, МКИ G 01 N 33/96, опубл. 17.01.85 г.Sources of information
1. Application EPO N 0062227, MKI G 01 N 33/96, publ. 10/13/92; Application EPO N 0131826, MKI G 01 N 33/96, publ. 01/23/85 g; application of Germany N 3324626, MKI G 01 N 33/96, publ. January 17, 85
2. Воробьева М.С., Шаламберидзе А.Г., Ломанова Г.А. и др. "Вопросы вирусологии". - 1990, N 2, с. 125 - 128. 2. Vorobyeva MS, Shalamberidze A.G., Lomanova G.A. and others. "Issues of Virology." - 1990,
3. Информационный бюллетень фирмы Boston Biomedica, Inc., 1994, p. 12. 3. Newsletter of Boston Biomedica, Inc., 1994, p. 12.
4. Bresters D., Cuypers HT., Reesink HW., Schaasberg WP., van-der-Po-lCL. , Mauser-Bunschoten EP., Houghton M, Choo QL., Kuo G., Lesniewski R. et al. - Enhanced sensitivity of a second generation ELISA for antibody to hepatitis C virus. - "Vox-Sang". 1992, v. 62, N 4, p. 213-7. 4. Bresters D., Cuypers HT., Reesink HW., Schaasberg WP., Van-der-Po-lCL. , Mauser-Bunschoten EP., Houghton M, Choo QL., Kuo G., Lesniewski R. et al. - Enhanced sensitivity of a second generation ELISA for antibody to hepatitis C virus. - "Vox-Sang." 1992, v. 62,
5. Dawson GJ., Lesniewski RR., Stewart JL., Boardway KM., Gutierrez RA., Pendy L., Johnson RG., Alcalde X., Rote KV., Devare SG., et al. - Detection of antibodies to hepatitis C virus in U.S. blood donors.-" J-Clin-Microbiol. ", 1991, Mar, v. 29, N 3, p. 551-6. 5. Dawson GJ., Lesniewski RR., Stewart JL., Boardway KM., Gutierrez RA., Pendy L., Johnson RG., Alcalde X., Rote KV., Devare SG., Et al. - Detection of antibodies to hepatitis C virus in U.S. blood donors.- "J-Clin-Microbiol.", 1991, Mar, v. 29,
6. Kudesia, G. et al.-Need for second-generation anti-HCV testing in haemophilia. - "The Lancet", 1992, vol. 339, N 2, p. 501. 6. Kudesia, G. et al.-Need for second-generation anti-HCV testing in haemophilia. - "The Lancet", 1992, vol. 339,
Claims (6)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95106896/14A RU2122741C1 (en) | 1995-04-28 | 1995-04-28 | Method of preparing standard panel of sera to control quality of test systems and immunoblots used for serologic diagnostics of antibodies specific for viral infections |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95106896/14A RU2122741C1 (en) | 1995-04-28 | 1995-04-28 | Method of preparing standard panel of sera to control quality of test systems and immunoblots used for serologic diagnostics of antibodies specific for viral infections |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU95106896A RU95106896A (en) | 1997-02-27 |
| RU2122741C1 true RU2122741C1 (en) | 1998-11-27 |
Family
ID=20167275
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU95106896/14A RU2122741C1 (en) | 1995-04-28 | 1995-04-28 | Method of preparing standard panel of sera to control quality of test systems and immunoblots used for serologic diagnostics of antibodies specific for viral infections |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2122741C1 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2271011C1 (en) * | 2004-06-07 | 2006-02-27 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | METHOD FOR PREPARING WORKING STANDARD SERUM COMPRISING HBsAg AY AND AD SUBTYPES |
| RU2314540C2 (en) * | 2005-12-01 | 2008-01-10 | Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ГНЦ ВБ "ВЕКТОР" Роспотребнадзора). | MASTER-PANELS OF SERA COMPRISING AND NOT COMPRISING HBsAg AND METHOD FOR ITS PREPARING |
| RU2392331C2 (en) * | 2008-08-07 | 2010-06-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности РАСХН | Manufacture method of blood serum standard positive panel for quality control of immunoenzymometric test systems designed for detection of virus-specific antibodies to viral respiratory infections in biological liquids of bovine animals |
| RU2408024C1 (en) * | 2009-03-26 | 2010-12-27 | Федеральное государственное учреждение науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Method for making low-titre serum panel for quality control of test systems and immunoblots used for diagnosing antibodies to various cvh subtypes |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2032907C1 (en) * | 1992-06-08 | 1995-04-10 | Татьяна Игоревна Щербакова | Method of determination of antibodies to the human immunodeficiency virus |
-
1995
- 1995-04-28 RU RU95106896/14A patent/RU2122741C1/en active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2032907C1 (en) * | 1992-06-08 | 1995-04-10 | Татьяна Игоревна Щербакова | Method of determination of antibodies to the human immunodeficiency virus |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Информационный бюллетень фирмы Boston Biomedica Inc., 1994, p. 12. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2271011C1 (en) * | 2004-06-07 | 2006-02-27 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | METHOD FOR PREPARING WORKING STANDARD SERUM COMPRISING HBsAg AY AND AD SUBTYPES |
| RU2314540C2 (en) * | 2005-12-01 | 2008-01-10 | Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ГНЦ ВБ "ВЕКТОР" Роспотребнадзора). | MASTER-PANELS OF SERA COMPRISING AND NOT COMPRISING HBsAg AND METHOD FOR ITS PREPARING |
| RU2392331C2 (en) * | 2008-08-07 | 2010-06-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности РАСХН | Manufacture method of blood serum standard positive panel for quality control of immunoenzymometric test systems designed for detection of virus-specific antibodies to viral respiratory infections in biological liquids of bovine animals |
| RU2408024C1 (en) * | 2009-03-26 | 2010-12-27 | Федеральное государственное учреждение науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Method for making low-titre serum panel for quality control of test systems and immunoblots used for diagnosing antibodies to various cvh subtypes |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU95106896A (en) | 1997-02-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0461462A1 (en) | Solid phase Immunoassay | |
| EP0355099B2 (en) | Immunoglobulin assay method | |
| US4921787A (en) | Detection of antibodies to human immunodeficiency virus by agglutination of antigen coated latex | |
| AU3945893A (en) | Assay for detection of HIV antigen and HIV antibody | |
| US20030180313A1 (en) | EIA test using nondenatured HIV antigen for early detection of HIV infection | |
| US20230072761A1 (en) | Immunoassay for Detecting Zika Virus Infection | |
| Väänänen et al. | Hemolysis‐in‐gel test in immunity surveys and diagnosis of rubella | |
| US5122446A (en) | Method for detecting antibodies to human immunodeficiency virus | |
| RU2122741C1 (en) | Method of preparing standard panel of sera to control quality of test systems and immunoblots used for serologic diagnostics of antibodies specific for viral infections | |
| CA1340405C (en) | Method for detecting antibodies to human immunodeficiency virus | |
| Cremer et al. | Analysis of antibody assay methods and classes of viral antibodies in serodiagnosis of cytomegalovirus infection | |
| RU2179726C2 (en) | Method for producing blood serum control panels for controlling hepatitis b diagnosis quality | |
| US4814269A (en) | Diagnostic testing for antibodies against microorganisms | |
| JPS62278459A (en) | Method of detecting aids virus infection | |
| US5800983A (en) | Peptides for HIV-1 detection | |
| WO1995002186A1 (en) | New diagnostic assay for detection of syphilis | |
| World Health Organization | Rapid laboratory techniques for the diagnosis of viral infections: report of a WHO scientific group [held in Geneva from 29 September to 3 October 1980] | |
| US7919256B2 (en) | Method for detecting Borna disease virus infection | |
| US20050048468A1 (en) | Multiconstituent liquid lgG and IgM calibrators | |
| CN113295864A (en) | Kit and detection method for quantitative combined detection of HIV (human immunodeficiency Virus) antigen and antibody | |
| RU2408024C1 (en) | Method for making low-titre serum panel for quality control of test systems and immunoblots used for diagnosing antibodies to various cvh subtypes | |
| Weissfeld et al. | Comparison of several test systems used for determination of rubella immune status | |
| Vasudevachari et al. | Detection of antibodies to human immunodeficiency virus type 1 in whole blood and saliva by using a passive hemagglutination test | |
| Hilfenhaus et al. | Antibody capture haemadherence tests for parvovirus B19-specific IgM and IgG | |
| Boyd | Laboratory testing in patients with morbilliform viral eruptions |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20051101 |
|
| QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20060818 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE Effective date: 20120314 |
|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE Effective date: 20100326 |