RU2108038C1 - Способ скрининга потенциального противогрибкового агента, противогрибковый агент (варианты), сельскохозяйственная противогрибковая композиция и способ ингибирования грибкового поражения растений - Google Patents
Способ скрининга потенциального противогрибкового агента, противогрибковый агент (варианты), сельскохозяйственная противогрибковая композиция и способ ингибирования грибкового поражения растений Download PDFInfo
- Publication number
- RU2108038C1 RU2108038C1 SU5011724A SU5011724A RU2108038C1 RU 2108038 C1 RU2108038 C1 RU 2108038C1 SU 5011724 A SU5011724 A SU 5011724A SU 5011724 A SU5011724 A SU 5011724A RU 2108038 C1 RU2108038 C1 RU 2108038C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antifungal agent
- fungus
- soil
- infected
- plants
- Prior art date
Links
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 title claims abstract description 37
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 title claims abstract description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 title claims abstract 3
- 239000012871 anti-fungal composition Substances 0.000 title claims description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 title abstract 4
- 230000008654 plant damage Effects 0.000 title 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims abstract description 51
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 37
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 27
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims abstract description 18
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 claims abstract description 15
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 10
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 claims abstract description 8
- 241000233639 Pythium Species 0.000 claims abstract description 8
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 claims abstract description 8
- 241000918584 Pythium ultimum Species 0.000 claims abstract description 6
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 241000172143 Aphanomyces cochlioides Species 0.000 claims abstract description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 38
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 31
- 239000004576 sand Substances 0.000 claims description 17
- 238000009331 sowing Methods 0.000 claims description 12
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 9
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 9
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 9
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 9
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 claims description 8
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 claims description 7
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 claims description 6
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 claims description 6
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 241000813090 Rhizoctonia solani Species 0.000 claims description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 claims description 5
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 claims description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 4
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 claims description 3
- 241000223194 Fusarium culmorum Species 0.000 claims description 2
- 241001503951 Phoma Species 0.000 claims description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 2
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 claims description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 abstract description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 9
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 abstract description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 18
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 18
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 11
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- 239000005807 Metalaxyl Substances 0.000 description 8
- ZQEIXNIJLIKNTD-UHFFFAOYSA-N methyl N-(2,6-dimethylphenyl)-N-(methoxyacetyl)alaninate Chemical compound COCC(=O)N(C(C)C(=O)OC)C1=C(C)C=CC=C1C ZQEIXNIJLIKNTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 7
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 7
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 6
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 6
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 6
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 6
- 241000219843 Pisum Species 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 241000233624 Phytophthora megasperma Species 0.000 description 4
- 239000002361 compost Substances 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- LDVVMCZRFWMZSG-OLQVQODUSA-N (3ar,7as)-2-(trichloromethylsulfanyl)-3a,4,7,7a-tetrahydroisoindole-1,3-dione Chemical compound C1C=CC[C@H]2C(=O)N(SC(Cl)(Cl)Cl)C(=O)[C@H]21 LDVVMCZRFWMZSG-OLQVQODUSA-N 0.000 description 3
- 239000005745 Captan Substances 0.000 description 3
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 229940117949 captan Drugs 0.000 description 3
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 3
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 3
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 3
- 239000003415 peat Substances 0.000 description 3
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 241000975369 Phoma betae Species 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N benzoxaprofen Natural products N=1C2=CC(C(C(O)=O)C)=CC=C2OC=1C1=CC=C(Cl)C=C1 MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 2
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- DQTKCIVHDDGAFK-UHFFFAOYSA-N 2-(5,6-dihydro-4H-cyclopenta[d][1,3]dithiol-2-ylidene)-1,3-dithiole-4,5-dithiol Chemical compound S1C(S)=C(S)SC1=C1SC(CCC2)=C2S1 DQTKCIVHDDGAFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000208818 Helianthus Species 0.000 description 1
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 241001646398 Pseudomonas chlororaphis Species 0.000 description 1
- 241001361634 Rhizoctonia Species 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000037007 arousal Effects 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N benomyl Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)NCCCC)C(NC(=O)OC)=NC2=C1 RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 239000008199 coating composition Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethanethiol Chemical compound CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- KUAZQDVKQLNFPE-UHFFFAOYSA-N thiram Chemical compound CN(C)C(=S)SSC(=S)N(C)C KUAZQDVKQLNFPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/27—Pseudomonas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/38—Pseudomonas
- C12R2001/39—Pseudomonas fluorescens
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/874—Pseudomonas
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/874—Pseudomonas
- Y10S435/876—Pseudomonas fluorescens
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/929—Fusarium
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/939—Rhizopus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к производству фунгицидных средств, используемых для защиты растений от грибковых заболеваний, и касается способа скрининга противогрибкового агента (фунгицида), противогрибкового агента, композиции на основе полученного противогрибкового агента и применения их для ингибирования грибкового поражения растений. Способ скрининга противогрибкового агента предусматривает приготовление патогенного мицелия вида Pythium в слое культуральной среды, помещение слоя стерильной почвы на выросший мицелий, добавление в почву исследуемого противогрибкового агента, инкубирование смеси и оценку ингибирующего действия противогрибкового агента на рост патогенного гриба. Отбирают противогрибковый агент, полностью подавляющий рост гриба в почве. Полученный противогрибковый агент дополнительно исследуют на зараженное патогеном растение. Для этого инокулируют образец почвы патогенным грибком, например Aphanomyces cochlioides, Pythium ultimum, засевают в зараженную почву семена растений, восприимчивых к заражению грибком, соответственно семена сахарной свеклы, гороха, вносят в почву исследуемое противогрибковое средство, проращивают семена и выращивают растение и затем оценивают ингибирующее действие противогрибкового агента путем сравнения состояния зараженных растений с незараженными растениями. На основании вышеописанного способа отобраны штаммы бактерий Pseudomonas fluorescens N C 1 B 40186, N C 1 B 40187, NC 1 B 40188, N C 1 B 40190, создана композиция, содержащая один из вышеуказанных штаммов бактерий и носитель. Один из вышеуказанных штаммов бактерий или композицию используют для ингибирования грибковых поражений растений путем их обработки. 7 с. и 5 з.п.ф-лы, 3 ил., 3 табл.
Description
Изобретение касается способа скрининга потенциального противогрибкового агента посредством оценки ингибирующего действия указанного агента на грибковое заражение двумя тестами, а также новых противогрибковых агентов, сельскохозяйственной противогрибковой композиции, использующей эти агенты в качестве активного начала, а также способа ингибирования грибкового поражения растений.
По нашему опыту традиционный первичный отбор не обеспечивает ни должный, ни достаточный отбор изолятов, которые могли бы пройти последующий скрининг и полевые испытания. Традиционный первичный отбор выдерживает большое число изолятов (как правило, порядка 20%), что указывает на их перспективность, однако в результате последующих испытаний большинство из них оказывается отвернутыми.
Известен способ скрининга противогрибкового агента, предусматривающий оценку ингибирующего действия исследуемого противогрибкового агента на грибковое заражение двумя тестами, второй из которых осуществляют путем инокулирования образца почвы патогенным грибком, засевания в зараженную грибком почву семян растений, восприимчивых к заражению этим грибком, внесения в почву исследуемого противогрибкового агента, проращивания семян и выращивания растений, при этом оценку ингибирующего действия противогрибкового агента проводят посредством сравнения состояния выращенных зараженных растений с незараженными контрольными растениями.
Недостатки известного способа типичны и в целом уже описаны выше.
В связи с изложенным понятно, что существует потребность в новом способе отбора изолятов почвы, который позволял бы выявлять большое количество потенциально хороших изолятов и отвергать как можно больше материалов с низкой активностью.
Для этого предлагается способ описанного типа для отбора потенциальных фунгицидных агентов, имеющий, согласно изобретению, те особенности, что первый тест оценки ингибирующего действия противогрибкового агента предусматривает приготовление патогенного мицелия вида Pythium в слое культуральной среды, помещение слоя стерильной почвы на выросший мицелий, добавление в почву аликвоты исследуемого противогрибкового агента, инкубирование смеси и оценку ингибирующего действия противогрибкового агента на рост патогенного гриба.
Растение, восприимчивое к заражению грибком, может представлять собой сахарную свеклу, а противогрибковый агент представляет собой микроорганизм.
Микроорганизм обычно выделяют из корней растений.
Выделение противогрибкового микроорганизма предпочтительно осуществляют путем помещения в контейнер слоя влажного стерильного песка, нанесения на него образца влажной почвы, посева в почву семян растений, восприимчивых к интересующему грибковому заболеванию, герметизацию контейнера, выращивание растений в условиях, способствующих развитию у них заболевания, до образования корней, проходящих из слоя почвы в слой песка, разрезание контейнера продольно через оба слоя почвы и песка, извлечение корней только из слоя песка и выделение микроорганизмов из извлеченных корней.
Хотя изобретение было разработано конкретно для скрининга микроорганизмов в образцах почвы, тем не менее нет препятствий для его использования с целью отбора подходящих химических противогрибковых агентов.
Предпочтительно, агент, проявляющий ингибирующее действие на патогенный гриб в первых двух тестах, дополнительно подвергают скринингу, используя свеклу, зараженную грибком Aphanomyces cochlioides при 12 - 15oC, семена гороха, зараженные грибком Phytiim ultimum при 12 - 15oC, семена гороха, зараженные грибком Phytiim ultimum при 24 - 27oC, семена гороха, зараженные грибком Rhizoctonia solani при температуре 24 - 27oC, семена пшеницы, зараженные грибком Fusarium culmorum при 18 - 21oC, семена соевых бобов, зараженные грибком Phytophtora megasperma при 20 - 24oC, резаные клубни картофеля, зараженные грибком Fusarium moliniforme при 20 - 24oC, резаные клубни картофеля, зараженные грибком Fusarium sambusinum при 20-24oC, и свеклу, зараженную грибком вида Phoma при 15 - 19oC.
Таким образом, если свести вместе все возможные компоненты изобретения, можно выделить потенциальные АБК по способу, предназначенному только для выделения организмов, активность которых связана с корнями, отобранных в двух предварительных испытаниях, которые идентифицируют организмы с высокой потенциальной активностью, после чего организмы сортируются в ряде жестких тестов, идентифицирующих агенты, которые впоследствии оказываются высокоактивными при проведении испытаний в разнообразных полевых условиях. Это представляет основное преимущество по сравнению с традиционными способами, которые, как установлено ранее, отвергают организмы, успешно выдерживающие тесты по изобретению, и пропускают очень большое количество организмов, которые по данным испытаний изобретения по большей части неактивны или менее активны по сравнению с контролем.
Изобретение далее включает фунгицидный агент, проявляющий такую же или более высокую активность подавления грибковой инфекции по сравнению с сопоставимым химическим агентом, что показывают упомянутые сортировочные испытания по изобретению.
По предлагаемому способу нами выделено и оценено четыре микроорганизма, по нашим данным особенно активных против ряда вызываемых грибами заболеваний, как правило, связанных с выпреванием, и, следовательно, изобретение включает также фунгицидные агенты, включая микроорганизмы вида Peseudomonas fluorescence, штаммы которого депонированы 1 сентября 1989 г. в соответствии с Будапештским договором, и Национальной коллекции промышленных и морских бактерий (National Collection of Industrial and Marine Bacteria Limited, Aberdeen, United Kingdom) с депозитарными номерами 40186, 40187, 40188 и 40190.
Изобретение также включает фунгицидную сельскохозяйственную композицию, содержащую в качестве активного компонента любой, один или более, из указанных микроорганизмов в смеси с композицией носителей, приемлемой для сельскохозяйственной практики.
Примерами типов сельскохозяйственных композиций, применение которых возможно, включают композиции для нанесения покрытия на семена, жидкости для смачивания корней или почвы, а также гранулированные или порошкообразные композиции. Основные материалы этих композиций хорошо известны.
Как пример эффективности отбора по изобретению, мы использовали традиционный метод in vitro для скрининга 7000 изолятов и обнаружили, что скорость "прохождения" составила около 20%, тогда как испытания по нашему изобретению прошло только 4 - 5% изолятов. Однако важным моментом является тот факт, что микроорганизмы, прошедшие каждый из двух минимальных тестов по изобретению, очень похожи, тогда как метод традиционного скрининга на агаре пропускает совершенно различные микроорганизмы. Некоторые микроорганизмы, которые могли бы быть отвергнутыми, если положиться на данные традиционного метода сортировки, показали высокую активность в последующих испытаниях сортировки и в полевых условиях. В этом заключается основное принципиальное преимущество изобретения: первоначальный скрининг уменьшает общее число организмов, нуждающихся в дальнейшем скрининге, и большая часть организмов, представленных для дальнейшего скрининга, впоследствии при полевых испытаниях проявляет высокую искомую активность.
Мы полагаем, что причиной этого является следующее. Условия проведения испытаний, например температура и питательный состав, для традиционного метода оптимизируются так, чтобы способствовать росту микроорганизмов на агаре: такое содержание очень сильно отличается от жестких реальных условий окружающей среды, в которых предполагается использовать микроорганизмы.
Следовательно, многие микроорганизмы, прошедшие первый скрининг, вообще оказываются слабыми, могут выжить только в "тепличных" условиях культуры агара и впоследствии не выдерживают, когда более жесткие повторные и последующие скрининги проводятся в условиях, более близких к реальным полевым. С другой стороны, в серии изолятов всегда должны быть, и наш опыт показывает, что это именно так, штаммы микроорганизмов, предпочитающие полевые условия, где, например, ниже температура или меньше питательных веществ, или другой состав питательных веществ. Такие микроорганизмы плохо развиваются на агаре и обычно их отвергают. Доказательством этого является то, что два скрининга, которые являются основой изобретения, ближе к полевым условиям и поэтому дают более реалистичное указание на способность микроорганизмов процветать в условиях, соответствующих их предполагаемому применению.
Изобретение также обеспечивает способ подавления грибкового заболевания, включающий нанесение на растение, его семя или на среду выращивания эффективной дозы фунгицидного агента по изобретению.
Изобретение обеспечивает также способ защиты культурных растений от грибковой инфекции, включающий нанесение на растения, их корни или семена либо на окружающую растения почву дозировки, обеспечивающей фунгицидный эффект, одного или более штаммов указанного Pseudomonas fluorescence.
Штамм NCIB 40187 выделен из корней пшеницы, собранных от растений, выращенных на полях Великобритании (Badbury 2, Draycott Farm, Chiseldon, Swindon, Wiltshire).
Штаммы NCIB 40186 и 40188 были выделены из почвы, взятой на полях Бельгии (Stockoy Field, Jodoigne).
Штамм NCIN 40190 был выделен из корней ростков пшеницы, полученных с полей Lower Garston, Rushall Farm, Newbury, U.K.
Далее следует описание выделения, характеристики и скрининга бактериальных изолятов на предмет установления их активности против некоторых грибов, которые инфицируют культурные растения. Было выделено очень большое число микроорганизмов, идентифицировано и отсортировано описанным выше способом, причем четыре штамма по изобретению было отобрано из-за выдающихся характеристик при скрининговых испытаниях.
Выделение микроорганизмов.
Используют пробирку из диализной трубки длиной 35 см и шириной 5,5 см, причем на расстоянии 5 - 7 см от одного конца сделан узел. Тонкий песок промывают, высушивают и насыпают трубку на глубину 12 см и увлажняют 20 мл дистиллированной воды. Трубки с песком размещают внутри стеклянных трубок (диаметром 7 см и глубиной 30 см) для поддержки. Затем трубки закрывают снизу с помощью резиновой пробки, покрытой алюминиевой фольгой, и сверху - тампоном из хлопкового волокна, после чего обертывают алюминиевой фольгой. Все трубки выдерживают в автоклаве при 121oC в течение 60 мин.
С целевого места отбирают пробы почвы и выдерживают их при влажности 40% при 4oC до использования, в пределах двух дней после сбора. Пробы почвы просеивают через сито 4 мм и добавляют в трубки до глубины 3 см поверх песка. Засевают семена (горох, пшеница, сахарная свекла, подсолнечник, кукуруза или соевые бобы) и покрывают слоем почвы до общей глубины 6 см. Трубки помещают вертикально в проволочную корзину, которую затем помещают в пластиковый контейнер с дырками, что обеспечивает воздухообмен и сводит до минимума потери влаги испарением. Корзины затем располагают в камеру для выращивания и выдерживают в течение четырех недель при 10-24oC и при относительной влажности 70% при цикле 16-ти часовой день/8-ми часовая ночь.
После выдержки в течение четырех недель пластиковые диализные трубки открывают с помощью предварительно стерилизованного скальпеля. Корни каждого растения освобождают от почвы и песка, и растения помещают в белый пластмассовый лоток. Отрезают крону и верхушки растений и промывают отдельно стерильной водой.
Отрезанные части помещают в стерильные колбы Эрленмейера, в которых содержится 20 мл деионизованной воды и слой стеклянных шариков. Затем колбы встряхивают в орбитальном термостате при 120 об/мин в течение 30 мин. Используя неразбавленный раствор из колб, полученный от промывки корней и корней и крон, приготавливают разбавление 1 : 9 в стерильном растворе Рингера до разбавления 10-3. Затем аликвоты по 100 мл от каждого раствора размазывают по поверхности трех агаровых сред следующего состава:
1/10 триптон - соевый агар.
1/10 триптон - соевый агар.
Триптон - соевый бульон - 3,0 г
Бактериологический агар - 17,5 г
Деионизованная вода - 1000 мл
(Среду выдерживают в автоклаве при 121oC в течение 15 мин).
Бактериологический агар - 17,5 г
Деионизованная вода - 1000 мл
(Среду выдерживают в автоклаве при 121oC в течение 15 мин).
Агар с корневым экстрактом.
Свежие корни пшеницы - 10 г
Агар N 3 - 17,5 г
Деионизированная вода - 1000 мл
(Свежие корни взвешивают и смешивают с малым количеством деионизированной воды, используя для этого хороший смеситель. Затем помещают густую суспензию в сумку, состоящую из четырех слоев плотного муслина, после чего приготавливают суспензию в остатке деионизированной воды в двухлитровом стакане и выдерживают при 20oC в течение 4 дней. Затем муслиновую сумку вынимают и к корневому экстракту добавляют агар. Питательную среду затем выдерживают в автоклаве в течение 15 мин при 121oC.
Агар N 3 - 17,5 г
Деионизированная вода - 1000 мл
(Свежие корни взвешивают и смешивают с малым количеством деионизированной воды, используя для этого хороший смеситель. Затем помещают густую суспензию в сумку, состоящую из четырех слоев плотного муслина, после чего приготавливают суспензию в остатке деионизированной воды в двухлитровом стакане и выдерживают при 20oC в течение 4 дней. Затем муслиновую сумку вынимают и к корневому экстракту добавляют агар. Питательную среду затем выдерживают в автоклаве в течение 15 мин при 121oC.
Агар с почвенным экстрактом.
Проба почвы - 10 г
Агар N 3 - 17,5 г
Деионизированная вода - 1000 мл
(Почву взвешивают и помещают в деионизированную воду в двухлитровый стакан. Выделяют суспензию почвы и термостатируют при 20oC в течение четырех дней, после чего удаляют воду через четыре слоя плотного муслина. Затем добавляют агар и выдерживают питательную среду в автоклаве при 121oC в течение 15 мин).
Агар N 3 - 17,5 г
Деионизированная вода - 1000 мл
(Почву взвешивают и помещают в деионизированную воду в двухлитровый стакан. Выделяют суспензию почвы и термостатируют при 20oC в течение четырех дней, после чего удаляют воду через четыре слоя плотного муслина. Затем добавляют агар и выдерживают питательную среду в автоклаве при 121oC в течение 15 мин).
Делают три копии каждого разбавления. Чашки с агаром термостатируют при 12oC в продолжение периода времени до 5 дней, после чего считают и регистрируют число колоний на каждой чашке. Где это было возможно, для каждого растения, каждой ниши и агаровой комбинации берут чашку, в которой содержится пятьдесят или менее колоний. Когда такой возможности нет, то на каждую чашку наносят решетку с пятьюдесятью пересечениями и отбирают колонии, оказавшиеся на или вблизи от каждого пересечения. Таким образом, отбор колоний является совершенно случайным.
Индивидуальные колонии снимают с чашек с помощью стерильной петли и пересеивают на чашки Петри диаметром 5 см, в которых находился 1/10 триптон - соевый агар (1/10 TSA).
Затем чашки термостатируют при 12oC в течение 5 дней. Затем изоляты проверяют на чистоту. Там, где была обнаружена смешанная культура, делают посев изолята штрихом на скошенном 1/10 TSA, чтобы получить отдельные колонии. Выбирают одну колонию и пересевают на 1/10 TSA. Коллекцию культур хранят при 4oC.
Характеристика микроорганизма.
Морфология.
Микроорганизм отличается следующими морфологическими характеристиками.
Морфология клетки: Грамм - отрицательные палочки.
Морфология колонии: NCIB 40186 не совсем белая, круглая, правильная, целая, мало выпуклая, гладкая, блестящая, полупрозрачная, диаметром 1,5 - 2 мм.
CIB 40187: не совсем белая, круглая, правильной формы, целостная, приподнятая, гладкая, блестящая, полупрозрачная, диаметром 1 мм.
CIB 40188: не совсем белого цвета, круглая, правильной формы, слегка выпуклая, гладкая, блестящая, целая, полупрозрачная, диаметром 1,5 - 2 мм.
CIB 40190: не совсем белого цвета, круглая, правильной формы, целая, плоская, гладкая, блестящая, полупрозрачная, диаметром 1 мм.
Температура роста:
Все штаммы
37oC - +ve
41oC - -ve
45oC - -ve
Флюоресценция. Все штаммы +ve.
Все штаммы
37oC - +ve
41oC - -ve
45oC - -ve
Флюоресценция. Все штаммы +ve.
Каталаза. Все штаммы +ve.
Оксидаза. Все штаммы +ve.
Ферментация в глюкозе OF. Все штаммы + ve.
Экспресс - тест /API/.
Характеристика микроорганизма представлена в табл.1.
Первичная сортировка
Сортировка на почве в чашках Петри.
Сортировка на почве в чашках Петри.
Чашки Петри (диаметром 5 см) наполняют 10 мл агара картофельной декстрозы (PDA). В центре PDA помещают агаровые бляшки (5 мм), взятые из семидневной культуры Pythium ultimum, выращенной при 20oC. Чашки термостатируют при 20oC в течение 5 дней, в продолжение которых в чашке развивается культура P.ultimum.
Выдерживают в автоклаве в течение 60 мин при 120oC (Minster Mendip Loam). К нему добавляют семена пшеницы (1 мас./мас.%) и хорошо перемешивают. В каждую чашку Петри помещают около 8 г почвы, так, чтобы покрыть область распространения Pythium.
Бактерии для проведения теста выращивают на 1/10 TSB или в чашках с 1/10 TSA в течение 48 ч при 12oC.
В каждую чашку Петри вносят 2 мл культуры: приготавливают дубликаты чашек.
Обработка.
Только 1/10 TSB.
Металаксил (100 ppm).
Испытываемый организм.
1/10 TSB, добавленный к почве на PDA, не засеянный Pythium.
Тарелки термостатируют в течение 4 дней при 10oC.
Активность, которую оценивают по шкале от 0 до 3, выбирают на согласовании полного подавления роста грибов в почве.
Сортировка Fuzarium на картофеле.
Диск стерильной фильтровальной бумаги (диаметром 9 см) тщательно увлажняют водой и помещают на дно стерильной чашки Петри. Для каждой обработки приготавливают по две чашки Культуры Fuzarium [Fuzarium Sambusinum, Fuzarium culmorum и Fuzarium moniliforme], выращивают на картофельной декстрозе в течение 14 дней при 20oC на свету, так чтобы получить конидии. Затем приготавливают суспензию конидий в стерильном физиологическом растворе (0,85%) и доводят до величины пропускания 20% при 420 нм спектрофотометра.
Половину петли с бактериями, выращенными на питательном агаре (Oxoid) в течение 24 ч при 20oC, суспендируют в 2,5 мл стерильного физиологического раствора. В качестве контроля приготавливают каптан с концентрацией 2,0 г/л. В качестве контроля используют также чистый физиологический раствор.
В стерильную пробирку микроцентрифуги помещают суспензию Fuzarium (50 мл), по одной пробирке на каждую обработку.
Один ломтик картофеля толщиной менее 10 мм, в котором прорезано с помощью пробочного сверла диаметром 10 мм четыре отверстия, помещают в каждую чашку Петри. Поверхность ломтика картофеля стерилизуют этанолом и высушивают стерильной фильтровальной бумагой. Ломтики используют не позднее чем через 30 мин после отрезания (или через 60 мин, если выдерживать при 4oC).
Пробу суспензии спор, объемом 50 мл (106 конидий/мл) поместили в три из четырех отверстий в картофельном ломтике. Пробу бактериальной суспензии (50 мл, приблизительно 108 клеток на 1 мл) смешивают с суспензией Fuzarium в одном из трех отверстий, в другом - беномил при концентрации 100 ppm, а третье отверстие служит незасеянным контролем.
Чашки Петри закрывают крышками и термостатируют в течение 3 дней при 20oC.
Уровень заражения тканей вычисляют по субъективной шкале от 0 до 3.
Сортировка по отношению к Phoma Betae
Куски сахарной свеклы размером 2,5 • 2,5 • 1,5 мм вырезают изнутри корня и увлажняют приблизительно 13 мл стерильной воды в пластмассовом контейнере.
Куски сахарной свеклы размером 2,5 • 2,5 • 1,5 мм вырезают изнутри корня и увлажняют приблизительно 13 мл стерильной воды в пластмассовом контейнере.
На поверхность кусков выливают пробу культуры Phoma Betae вместе с или без микроорганизма, предположительно обладающего фунгицидной активностью, после чего куски термостатируют в течение 3 недель.
В конце термостатирования пробы свеклы оценивают на гниение.
Сортировка сахарной свеклы/почва.
Естественную почву, которая, как известно, вызывает "выпревание" сахарной свеклы, доводят до влажности 45%. Голые семена сахарной свеклы и семена, покрытые испытываемыми бактериями, засевают в почву. Пробы затем термостатируют в течение 10 дней, освещая в течение 12 ч в день при 15oC.
Фунгицидную активность бактерий оценивают по числу появившихся ростков по сравнению с химическим контролем - Tachigaren/TMTD.,
Повторный скрининг.
Повторный скрининг.
Для испытания эффективности выбранных микроорганизмов используют два вида: Phytium ultimum и Rhizoctonia solani.
Культуры P.ultimum и R. solani выращивают на планшете с PDA в течение 7 дней при 20oC.
Смесь, состоящую из 200 г серебряного песка, 5 г кукурузной муки, 4 г Beemax пшеничных зерен и 40 мл воды, выдерживают в автоклаве при 120oC в течение 20 мин, затем помещают в колбу и засеивают 1/4 тарелки Phytium. Такой же субстрат, но без кукурузной муки, используют для Rhizoctonia.
Колбы термостатируют при 20oC в течение 7 дней.
Ряд разбавлений. Содержимое каждой колбы с Phytium ultimum, смешивают с тонким песком, доведя вес до 300 г.
Одна колба Phytium в 8 л Mendip Minster Loam = двунормальная /2 N/ смесь.
Смесь разбавляют чистой Mendip Loam, так чтобы получить требуемые дальнейшие разбавления. Изоляты подвергают обычной сортировке по отношению к Phythium при разбавлениях N/8 и N/32 при 12-15oC.
3/4 Колбы инокулята Rhizoctohia solani в 6 л Mendip Minster Loam = нормальная смесь. При сортировке используют концентрации N/4 и N/16. Испытания проводят на трехдюймовых горшках, наполненных на 3/4 инфицированной почвой. В каждый горшок сажают пять горошин и покрывают их чистой почвой. В качестве промочки в каждый горшок добавляют 35 мл воды или бактериальной суспензии.
Для каждой обработки приготавливают пять копий. Для АБК - скрининга бактерии выращивают в течение 48 ч при 20oC на 1/10 TSB. В горшки добавляют всю суспензию (35 мл). Контролем служат, как правило, 1/10 TSB и химические агенты. В качестве орошения добавляют: ренцикурон в концентрациях 10, 100 или 200 ppm к Rhyzoctonia, металаксил - к Phytium в концентрации 100 ppm.
Растения для теста выращивают: для R. solani - в течение 7 - 14 дней при 20-25oC, а для Phytium - в течение 14 дней при 12 - 15oC. Еженедельно проверяют появление ростков. Растения ежедневно поливают. Особое внимание уделяют тому, чтобы при проведении испытаний почва была влажной, так как оба заболевания вызывают выпревание.
Скрининг по Phytophthora megasperma.
Бляшку диаметром 5 мм, взятую из планшета с культурой P. megasperma, выращивают на планшете диаметром 9 см на среде V - 8 в течение 13 дней при 25oC. Среда V - 8 представляет собой композицию следующего состава:
Сок V-8 Compbell - 180 мл
CaCO3 - 2,7 г
Дистиллированная вода - 720 мл
Агар Difco - 13,5 г
(Компоненты, кроме агара, смешивают и нагревают паром в течение 30 мин, отфильтровывают, доводят pH до 7,2 добавляют агар и стерилизуют среду при 120oC в течение 20 мин).
Сок V-8 Compbell - 180 мл
CaCO3 - 2,7 г
Дистиллированная вода - 720 мл
Агар Difco - 13,5 г
(Компоненты, кроме агара, смешивают и нагревают паром в течение 30 мин, отфильтровывают, доводят pH до 7,2 добавляют агар и стерилизуют среду при 120oC в течение 20 мин).
Влажное просо (50 г плюс 20 мл дистиллированной воды) дважды стерилизуют при 110oC в течение 45 мин. Пластинку с 1/4 P. megasperma помещают вверх дном на поверхность проса и термостатируют в темноте в течение 28 дней при 25oC.
Просо, инфицированное P. megasperma (массой 22,5 г), тщательно смешивают в гомогенизаторе со стерилизованной почвой (1477,5 г) и водой (112,5 г). Использованная почва представляет собой смесь 1:1:1 (об/об) серебряного песка, полевой почвы с pH 7 и торфа, образовавшегося из лиственного мха; смесь стерилизуют при 100oC в течение 1 ч.
Смесь инфицированного проса и почвы в количестве 500 г помещают в склянки Леонарда, которые затем закрывают пластиковыми пластинами и оставляют до надобности. Водяной резервуар на дне склянки Леонарда заполняют 100 мл дистиллированной воды.
На поверхности смеси просо/почва делают четыре отверстия для посева, в каждое кладут соевый боб (c.v.Azzurra) и накрывают окружающей смесью.
Приготавливают культуры испытываемых организмов на пластинах с питательным агаром, которые выдерживают при 28oC в течение 24 ч и в NB колбах емкостью 250 мл (150 мл NB), которые выдерживают в течение 24 ч при 28oC. Пробу культуры 75 мл центрифугируют при 8000 об/мин в течение 5 мин при 20oC. Снимают супернатант, добавляют следующую пробу 75 мл, еще раз центрифугируют и снова снимают супернатант. Оставшуюся в центрифуге лепешку несколько раз промывают 5 мл порциями физиологического раствора (9,2 г/л). Наконец, лепешку диспергируют в 150 мл физиологического раствора.
В каждую склянку Леонарда впрыскивают, с помощью 60-ти мл шприца 30 мл суспензии в физиологическом растворе.
Для сравнения с химическими агентами в склянки Леонарда, используемые в качестве контроля, вводят 30 мл пробы раствора 285,5 г металаксила 35% (торговая марка APRON) в 500 мл дистиллированной воды.
Неинфицированный контроль получают также на пробах неинфицированной смеси просо/почва.
Семена затем проращивают в камере роста при 20±2oC при освещенности 15 - 17 люкс. Оценку осуществляют путем сравнения процента появления ростков с химическим контролем.
Скрининг Culmorum Fuzarium.
Культуру Fuzarium culmorum выращивают на PDA в течение 10 дней при 20oC, что обеспечивало образование конидий. Конидии собирают и подсчитывают до интервала концентраций 104 - 108 конидий на 1 мл. Из этого источника добавляют 5 мл к 100 г семян пшеницы, находящихся в бутылке, которую затем вращают в течение ночи при 10oC.
Пробу инфицированного семени вводят в смесь испытываемых бактерий и серебряного песка за 60 мин до посева, так чтобы на каждом семени образовалось покрытие из приблизительно 106 клеток на каждое семя. Вторую пробу обрабатывают беномилом (100 ppm) - она представляет собой химический контроль.
Сто семян засевают в компост на основе торфа в лоток для рассады, на глубину 2 см. Компост поливают в начале испытаний, выдерживали при 20oC в течение 2 недель и поливают снова на пятый день после посева. После этого первоначального полива компоста, цель которого вызвать прорастание семян, компост оставляют высыхать, чтобы вызвать развитие заболевания.
Рассаду проверяют на ускорение и развитие заболевания. Симптомы заболевания оценивают по шкале от нуля (симптомы отсутствуют) до 4 (серьезное заболевание).
Результаты. По вышеописанным тестам подвергнуто скринингу около 7000 бактериальных изолятов почвы. В табл. 2 представлены результаты этих тестов. Цифры в столбцах соответствуют шкале от 0 (фунгицидный эффект отсутствует) до 3 (симптомы заболевания не различимы). В табл. 2 также включен сравнительный пример типичного неэффективного штамма бактерий, который обозначен как 53/87.
Данные полевых опытов 1989.
Штаммы, оказавшиеся самыми перспективными по данным первичной и вторичной сортировок, отбирают для проведения полевых опытов на активность в качестве агентов биологического контроля заболеваний "выпревания" у гороха и сахарной свеклы.
Фиг. 1 иллюстрирует результаты, полученные для штамма NCIB 40186, относительно подавления выпревания гороха. Полевые испытания проводились в Великобритании. Данный штамм продемонстрировал контроль заболевания на уровне около 80% от контроля, достигаемого при химической обработке металаксилом (APRON, торговая марка). Штамм NCIB 40187 оказался по большей части неэффективным в данных испытаниях.
На фиг. 2 и 3 показаны результаты полевых опытов на сахарной свекле, в которых использовались штаммы NCIB 40186 и 40190. Эти опыты проводились в Бельгии. Было выбрано шесть областей на поле. Три области (1, 3 и 6) были засеяны сахарной свеклой в марте, тогда как остальные три области - в мае. На фиг. 2 приведены результаты первого подсчета, который был сделан через 3 недели после посева, а на фиг. 3 - результаты, полученные через 6 - 8 недель после посева.
Короче говоря, полученные результаты показывают, что выпревание у гороха, вызываемое Phytium ultimum снижается при нанесении штамма NCIB 40186 в степени, сравнимой с той, которая достигается при химической обработке металаксилом. Результаты, полученные на сахарной свекле, показывают, что при использовании штаммов NCIB 40186 и 40190 укоренение рассады улучшается по сравнению с необработанным контролем во всех шести областях. В трех областях укоренение рассады в присутствии указанных штаммов было сравнимо с тем, которое обеспечивает использование металаксила.
Данные полевых опытов за 1990 г.
В 1990 г. полевые испытания микроорганизмов штаммов NCIB 40186 и 40190 проводились для выявления их способности подавлять Pythium spp. Испытания проводились в Соединенных Штатах Америки, в Бельгии и во Франции, и результаты их проводятся ниже. Для испытания микроорганизмы наносили в виде пропитки семян, после чего семена сушили в песке для опытов в Европе, а также в виде формулы смола/торф для испытаний в США. Затем испытания продолжали в других частях света, в которых заболевания "выпревания" являются эндемическими, например, на растительных культурах в Малайзии. Несмотря на то, что мы не имеем возможности представить результаты испытаний по всему свету, просто вследствие того, что они еще не закончены и что должно быть принято во внимание, не могут быть ускорены вследствие сезонной структуры сельскохозяйственных процессов, от наших испытателей получены благоприятные предварительные указания, так что по крайней мере эти конкретные микроорганизмы обладают большой потенциальной возможностью для применения в качестве промышленных агентов биологического контроля.
Дальнейшие испытания других упомянутых здесь микроорганизмов продолжается в лаборатории и в камере роста в соответствии с обычной практикой обеспечения эффективности и безопасности одновременно и для человека, и для окружающей среды. Имеющиеся в настоящее время результаты подтверждают выявленные ранее перспективы и соответствуют приведенным здесь данным.
Штаммы NCIB 40186 и 40190 испытывали на подавление выпревания у сахарной свеклы, в опытах на девяти делянках в Бельгии и во Франции. Когда посев производили ранней весной, погода была очень теплой и сухой, что затрудняет развитие выпревания у сахарной свеклы. На каждой из опытных делянок было посеяно всего 200 семян. В настоящее время имеются результаты по девяти опытам.
Опыты в Бельгии и во Франции 1990 г.
Культура, на которой проводили испытания: сахарная свекла. Химический контроль: тахигарен/ТМДТ (см. табл. 3).
Опыты во Франции 1990 г.
Культура, на которой проводились испытания: горох.
Химический контроль: показано ниже.
Число растений относится к среднему числу растений, взошедших на полосе длиной 5 м через 22 дня после обработки.
В столбце 2 табл. 3 приводится число растений, которое появилось из 200 семян через 22 дня после посева.
Буквы после чисел указывают на статистическую значимость. Между обозначениями, содержащими общую букву, нет существенной разницы при 5%-ной вероятности.
Контрольные обработки.
Испытания проводились в обычной полевой почве без добавления патогенов.
Обработка - Число всходов
Необработанное семя - 172,58 AC
NCIB 40186 - 107 клеток на семя - 184,75 A
APRON -30 г.а.i/100 кг семян - 171, 50 AC
PIDOMII 2E - полив борозды металаксилом - 181,00 A
Контрольный опыт 100 клеток/семя - 176,00 AC
Обработка тестов
Внесли патоген (Pythium) со скоростью 200 г/м ряда.
Необработанное семя - 172,58 AC
NCIB 40186 - 107 клеток на семя - 184,75 A
APRON -30 г.а.i/100 кг семян - 171, 50 AC
PIDOMII 2E - полив борозды металаксилом - 181,00 A
Контрольный опыт 100 клеток/семя - 176,00 AC
Обработка тестов
Внесли патоген (Pythium) со скоростью 200 г/м ряда.
Обработка - Число всходов
Необработанные семена - 111,25 I
NCIB 40186- 107 клеток на семя - 144,75 DG
APRON - 30 г а. i/100 кг семян - 157,25 BCDF
PID OMII 2E полив борозды металаксилом - 164,25 AD
Контрольные семена 100 клеток/семя - 119,88 HI
Опыты в Калифорнии (США) 1990 г.
Необработанные семена - 111,25 I
NCIB 40186- 107 клеток на семя - 144,75 DG
APRON - 30 г а. i/100 кг семян - 157,25 BCDF
PID OMII 2E полив борозды металаксилом - 164,25 AD
Контрольные семена 100 клеток/семя - 119,88 HI
Опыты в Калифорнии (США) 1990 г.
Культура: горох
Патоген: Pythium при 30 г/м ряда.
Патоген: Pythium при 30 г/м ряда.
Обработка - Взошло,%
Патоген не вносили, без обработки - 93,13 AB
Патоген + NCIB 40186 - 107 клеток/семя - 75,31 BCD
Патоген + контрольные семена - 100 клеток/семя - 51,56 EF
Патоген + APRON - 30 г а. i/100 кг - 92,81 AB
Миссисипи (США), 1990 г.
Патоген не вносили, без обработки - 93,13 AB
Патоген + NCIB 40186 - 107 клеток/семя - 75,31 BCD
Патоген + контрольные семена - 100 клеток/семя - 51,56 EF
Патоген + APRON - 30 г а. i/100 кг - 92,81 AB
Миссисипи (США), 1990 г.
Культура: кукуруза.
Патоген: Fuzarium
/I/ при 10 г/м ряда,
/II/ при 30 г/м ряда.
/I/ при 10 г/м ряда,
/II/ при 30 г/м ряда.
Всхожесть оценивали в процентах через 15 дней после посева.
Обработка - Взошло,%
Патоген не вносили, без обработки - 65,833 C
Патоген не вносили NCIB 40186 107 клеток/семя - 67,917 C
Патоген не вносили, использовали CAPTAN для обработки семян - 69,583 BC
Патоген /I/, без обработки - 51,250 D
Патоген /I/ + NCID 40186 - 107 клеток/семя - 80,000 AB
Патоген /II/, без обработки - 69,375 BC
Патоген /II/ + NCIB 40186 - 107 клеток/семя - 82,708 A
Патоген /II/ + CAPTAN для обработки семян - 63,958 Cс
Патоген не вносили, без обработки - 65,833 C
Патоген не вносили NCIB 40186 107 клеток/семя - 67,917 C
Патоген не вносили, использовали CAPTAN для обработки семян - 69,583 BC
Патоген /I/, без обработки - 51,250 D
Патоген /I/ + NCID 40186 - 107 клеток/семя - 80,000 AB
Патоген /II/, без обработки - 69,375 BC
Патоген /II/ + NCIB 40186 - 107 клеток/семя - 82,708 A
Патоген /II/ + CAPTAN для обработки семян - 63,958 Cс
Claims (12)
1. Способ скрининга потенциального противогрибкового агента, предусматривающий оценку ингибирующего действия исследуемого противогрибкового агента на грибковое заражение двумя тестами, второй из которых осуществляют путем инокулирования образца почвы патогенным грибком, засевания в зараженную грибком почву семян растений, восприимчивых к заражению этим грибком, внесения в почву исследуемого противогрибкового агента, проращивания семян и выращивания растений, при этом оценку ингибирующего действия противогрибкового агента проводят посредством сравнения состояния выращенных зараженных растений с незараженными контрольными растениями, отличающийся тем, что первый тест оценки ингибирующего действия противогрибкового агента предусматривает приготовление патогенного мицелия вида Pythium в слое культуральной среды, помещение слоя стерильной почвы на выросший мицелий, добавление в почву аликвоты исследуемого противогрибкового агента, инкубирование смеси и оценку ингибирующего действия противогрибкового агента на рост патогенного гриба.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что растение, восприимчивое к заражению грибком, представляет собой сахарную свеклу.
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что противогрибковый агент представляет собой микроорганизм.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что противогрибковый микроорганизм выделяют из корней растений.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что выделение противогрибкового микроорганизма осуществляют путем помещения в контейнер слоя влажного стерильного песка, нанесения на него образца влажной почвы, посева в почву семян растений, восприимчивых к интересующему грибковому заболеванию, герметизацию контейнера, выращивание растений в условиях, способствующих развитию у них заболевания, до образования корней, проходящих из слоя почвы в слой песка, разрезание контейнера продольно через оба слоя почвы и песка, извлечение корней только из слоя песка и выделение микроорганизмов из извлеченных корней.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что агент, проявляющий ингибирующее действие на патогенный гриб в первых двух тестах, дополнительно подвергают скринингу, используя свеклу, зараженную грибом Aphanomyces cochlioides, при температуре 12 - 15oС, семена гороха, зараженные грибком Pythium ultimum, при температуре 12 - 15oС, семена гороха, зараженные грибком Pythium ultimum, при температуре 24 - 27oС, семена гороха, зараженные грибком Rhizoctonia solani, при температуре 24 - 27oС, семена пшеницы, зараженные грибком Fusarium culmorum, при температуре 18 - 21oС, семена соевых бобов, зараженные грибком Phytophtora megasperma, при температуре 20 - 24oС, резаные клубни картофеля, зараженные грибком Fusarium moliniforme, при температуре 20 - 24oС, резаные клубни картофеля, зараженные грибком Fusarium sambusinum, при температуре 20 - 24oС и свеклу, зараженную грибком вида Phoma, при температуре 15 - 19oС.
7. Противогрибковый агент, отличающийся тем, что он представляет собой штамм бактерий Pseudomonas fluorescens NCIB 40186.
8. Противогрибковый агент, отличающийся тем, что он представляет собой штамм бактерий Pseudomonas fluorescens NCIB 40187.
9. Противогрибковый агент, отличающийся тем, что он представляет собой штамм бактерий Pseudomonas fluorescens NCIB 40188.
10. Противогрибковый агент, отличающийся тем, что он представляет собой штамм бактерий Pseudomonas fluorescens NCIB 40190.
11. Сельскохозяйственная противогрибковая композиция, содержащая противогрибковый агент и приемлемый носитель, отличающаяся тем, что в качестве противогрибкового агента она содержит один из штаммов бактерий Pseudomonas fluorescens NCIB 40186, 40187, 40188 или 40190.
12. Способ ингибирования грибкового поражения растений, предусматривающий обработку растений противогрибковым агентом, отличающийся тем, что в качестве противогрибкового агента используют один из штаммов бактерий Pseudomonas fluorescens NCIB 40186, 40187, 40188, 40190 или композицию, содержащую один из указанных штаммов бактерий.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB898923407A GB8923407D0 (en) | 1989-10-17 | 1989-10-17 | Antifungal microorganism |
| GB8923407.4 | 1989-10-17 | ||
| PCT/GB1990/001598 WO1991005475A1 (en) | 1989-10-17 | 1990-10-16 | Antifungal microorganism |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2108038C1 true RU2108038C1 (ru) | 1998-04-10 |
Family
ID=10664731
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU5011724A RU2108038C1 (ru) | 1989-10-17 | 1990-10-16 | Способ скрининга потенциального противогрибкового агента, противогрибковый агент (варианты), сельскохозяйственная противогрибковая композиция и способ ингибирования грибкового поражения растений |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5260302A (ru) |
| EP (1) | EP0496791B1 (ru) |
| JP (1) | JPH05501407A (ru) |
| AT (1) | ATE147580T1 (ru) |
| AU (1) | AU652132B2 (ru) |
| BG (1) | BG61671B1 (ru) |
| CZ (2) | CZ284829B6 (ru) |
| DE (1) | DE69029739T2 (ru) |
| DK (1) | DK0496791T3 (ru) |
| ES (1) | ES2095879T3 (ru) |
| FI (1) | FI102615B1 (ru) |
| GB (1) | GB8923407D0 (ru) |
| GR (1) | GR3022295T3 (ru) |
| HU (1) | HU214457B (ru) |
| MY (1) | MY107283A (ru) |
| NO (1) | NO302955B1 (ru) |
| NZ (1) | NZ235711A (ru) |
| PL (2) | PL166864B1 (ru) |
| RU (1) | RU2108038C1 (ru) |
| SK (1) | SK279149B6 (ru) |
| WO (1) | WO1991005475A1 (ru) |
| YU (1) | YU195990A (ru) |
| ZA (1) | ZA908268B (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2618873C2 (ru) * | 2010-10-25 | 2017-05-11 | Синтетик Дженомикс, Инк. | Способ высокоэффективного отбора микробных антагонистов против патогенов |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5662898A (en) * | 1990-08-20 | 1997-09-02 | Ciba-Geigy Corporation | Genes for the synthesis of antipathogenic substances |
| EP0472494A3 (en) * | 1990-08-20 | 1992-10-21 | Ciba Geigy Ag | Anti-pathogenic biocontrol agents, genes encoding antibiotics synthesis and the use of said antibiotics |
| US5639949A (en) * | 1990-08-20 | 1997-06-17 | Ciba-Geigy Corporation | Genes for the synthesis of antipathogenic substances |
| US5670350A (en) * | 1990-08-20 | 1997-09-23 | Novartis Finance Corporation | Genomic DNA encoding a pseudomonas global transcriptional activation element and its use in activating gene expression |
| KR0145740B1 (ko) * | 1991-05-23 | 1998-08-01 | 채영복 | 고정화 미생물 농약과 그의 제조방법 |
| US5348742A (en) * | 1991-05-24 | 1994-09-20 | Ciba-Geigy Corporation | Anti-pathogenic bacterial strains of Pseudomonas fluorescens |
| IT1248095B (it) * | 1991-06-20 | 1995-01-05 | Ministero Dell Uni E Della | Ceppi batterici di pseudomonas (ncimb 40403, ncimb 40376, ncimb 40375,ncimb 40377, ncimb 40402, ncimb 40379) in grado di controllare le infezioni fungine. |
| FI92790C (fi) * | 1991-11-19 | 1995-01-10 | Kemira Oy | Mikrobintorjuntamenetelmä |
| IT1254507B (it) * | 1992-03-06 | 1995-09-25 | Composizione per la confettatura di semi, semi confettati con tale composizione e relativo procedimento di confettatura | |
| GB9207352D0 (en) * | 1992-04-03 | 1992-05-13 | Ici Plc | Method to control fungal disease |
| US5614188A (en) * | 1993-10-06 | 1997-03-25 | Murakashi Lime Industry Co., Ltd. | Anti-fusarium composition containing strains of bacillus Sp., a chitin-containing material, and a powdery material |
| FI95598C (fi) * | 1994-01-31 | 1996-02-26 | Kemira Agro Oy | Mikro-organismi kasvitautien biologiseen torjuntaan |
| US6117670A (en) * | 1994-06-08 | 2000-09-12 | Novartis Finance Corporation | Pyrrolnitrin biosynthesis genes and uses thereof |
| IN186436B (ru) * | 1996-09-03 | 2001-09-01 | Council Scient Ind Res | |
| ES2186963T3 (es) * | 1998-12-24 | 2003-05-16 | Gabriele Dr Berg | Aislados de rizobacterias para su utilizacion contra hongos del suelo fitopatogenos y procedimiento para la utilizacion de aislados de rizobacterias. |
| ATE373090T1 (de) * | 2000-01-04 | 2007-09-15 | Friedrich Felsenstein | Verfahren zur erkennung und charakterisierung von wirkstoffen gegen pflanzen-pathogene |
| WO2011154959A1 (en) * | 2010-06-09 | 2011-12-15 | Patel, Babubhai C. | Advance method of preparation of bacterial formulation using pseudomonas fluorescens for controlling various diseases of crop plant |
| MX361278B (es) | 2013-03-14 | 2018-12-03 | Univ Georgia State Res Found | Inhibición o reducción del crecimiento de hongos. |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0106504B1 (en) * | 1982-09-08 | 1989-04-05 | THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by the Secretary United States Department of Commerce | Method for screening bacteria and application thereof for field control of diseases caused by gaeumannomyces graminis |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4588584A (en) * | 1983-06-01 | 1986-05-13 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Medium for the isolation of Pseudomonas cepacia biotype from soil and the isolated biotype |
| US4647533A (en) * | 1984-09-14 | 1987-03-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Method for screening bacteria and application thereof for field control of Pythium spp. on small grain crops |
| US4798723A (en) * | 1986-07-28 | 1989-01-17 | Lubrizol Genetics, Inc. | Agricultural products from Pseudomonas cepacia strains and methods of preparation |
| US4996049A (en) * | 1988-12-19 | 1991-02-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Biological control of corn seed rot and seedling blight |
-
1989
- 1989-10-17 GB GB898923407A patent/GB8923407D0/en active Pending
-
1990
- 1990-10-16 AU AU66141/90A patent/AU652132B2/en not_active Ceased
- 1990-10-16 DE DE69029739T patent/DE69029739T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-10-16 HU HU9201282A patent/HU214457B/hu not_active IP Right Cessation
- 1990-10-16 RU SU5011724A patent/RU2108038C1/ru active
- 1990-10-16 EP EP90915786A patent/EP0496791B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-10-16 AT AT90915786T patent/ATE147580T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-10-16 ZA ZA908268A patent/ZA908268B/xx unknown
- 1990-10-16 DK DK90915786.9T patent/DK0496791T3/da active
- 1990-10-16 MY MYPI90001811A patent/MY107283A/en unknown
- 1990-10-16 ES ES90915786T patent/ES2095879T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-10-16 JP JP2514815A patent/JPH05501407A/ja active Pending
- 1990-10-16 WO PCT/GB1990/001598 patent/WO1991005475A1/en not_active Ceased
- 1990-10-16 NZ NZ235711A patent/NZ235711A/en unknown
- 1990-10-17 YU YU195990A patent/YU195990A/sh unknown
- 1990-10-17 CZ CZ941524A patent/CZ284829B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1990-10-17 US US07/597,665 patent/US5260302A/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-10-17 PL PL90287369A patent/PL166864B1/pl unknown
- 1990-10-17 CZ CS905035A patent/CZ284515B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1990-10-17 SK SK5035-90A patent/SK279149B6/sk unknown
- 1990-10-17 PL PL90302121A patent/PL166131B1/pl unknown
-
1992
- 1992-04-15 NO NO921519A patent/NO302955B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-04-16 FI FI921722A patent/FI102615B1/fi active
- 1992-04-17 BG BG96249A patent/BG61671B1/bg unknown
-
1997
- 1997-01-16 GR GR960403583T patent/GR3022295T3/el unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0106504B1 (en) * | 1982-09-08 | 1989-04-05 | THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by the Secretary United States Department of Commerce | Method for screening bacteria and application thereof for field control of diseases caused by gaeumannomyces graminis |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2618873C2 (ru) * | 2010-10-25 | 2017-05-11 | Синтетик Дженомикс, Инк. | Способ высокоэффективного отбора микробных антагонистов против патогенов |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2108038C1 (ru) | Способ скрининга потенциального противогрибкового агента, противогрибковый агент (варианты), сельскохозяйственная противогрибковая композиция и способ ингибирования грибкового поражения растений | |
| CN117448192A (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌xu183及其应用 | |
| FI95598B (fi) | Mikro-organismi kasvitautien biologiseen torjuntaan | |
| Yan et al. | Guanggan (Citrus reticulata) shows strong resistance to Phytophthora nicotianae | |
| Booth et al. | Fusarium diseases of cereals: XI. Growth and saprophytic activity of Fusarium nivale in soil | |
| Gollifer et al. | Survival of inoculum of the leaf blight fungus Phytophthora colocasiae infecting taro, Colocasia esculenta in the Solomon Islands | |
| Haruna et al. | Identification and Pathogenicity of Organisms Associated with Anthracnose Disease of Mango in Yola, Adamawa State, Nigeria | |
| Beshir | Evaluation of the potential of Trichoderma viride as biological control agent of root rot disease, Fusarium solani, of faba bean | |
| Machenahalli et al. | Bio-efficacy of new fungicide molecules against coffee brown root disease causing pathogen Phellinus noxius (Corner) G. Cunn. | |
| CA2066309A1 (en) | Antifungal microorganism | |
| MAROTI | CHEMICAL MANAGEMENT OF BULB ROT AND PURPLE BLOTCH OF ONION | |
| CN117721174A (zh) | 绿豆作为寄主在苹果再植病防治上的应用 | |
| NANDINI et al. | studies on endophytic microbial diversity and antagonistic effect on rhizome rot pathogens in turmeric (Curcuma longa L.) | |
| JPH01299207A (ja) | 植物病害用防除菌及びそれによる植物病害の防除方法 | |
| Yamamoto | Seedling blight of Brassaia actinophylla caused by Pythium splendens | |
| Price | A Study of Sclerotinia sclerotiorum From a Variety of Hosts With Special Reference to Pathogenicity | |
| Engelkes | Pathogenicity and survival of AG-2-2 of Rhizoctonia solani on sugarbeet and bean crops | |
| Lo | SOURCES OF INOCULUM AND FACTORS FAVORING INFECTION OF SWEET POTATO BY THE JAVA BLACK ROT PATHOGEN, DIPLODIA GOSSYPINA CKE.(POSTHARVEST DISEASE, WOUND PERIDERM FORMATION, RESISTANCE) | |
| Remand | STUDIES ON BLACK ROT OF CABBAGE | |
| trichostoma Fr | Professor, Plant Pathology Department, North Dakota State University, Fargo, North Dakota 58105 | |
| Schieber et al. | Plant Pathologist, Antigua, Guatemala, and Plant Pathologist and Professor, respectively, University of | |
| Charudattan et al. | C1W CI |