RU2102400C1 - Method for production of hualyronic acid - Google Patents
Method for production of hualyronic acid Download PDFInfo
- Publication number
- RU2102400C1 RU2102400C1 RU95114061A RU95114061A RU2102400C1 RU 2102400 C1 RU2102400 C1 RU 2102400C1 RU 95114061 A RU95114061 A RU 95114061A RU 95114061 A RU95114061 A RU 95114061A RU 2102400 C1 RU2102400 C1 RU 2102400C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- precipitate
- hyaluronic acid
- acid
- solution
- help
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 title abstract 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 27
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 19
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract 2
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 44
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 44
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 44
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 9
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 abstract description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000571 coke Substances 0.000 abstract 1
- 210000001520 comb Anatomy 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 abstract 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 abstract 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 abstract 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000003544 deproteinization Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 229940089982 healon Drugs 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000010525 oxidative degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способа получения гиалуроновой кислоты, которая применяется в различных областях медицины, в том числе в дерматологии, гинекологии, офтальмологии, в косметической практике и в ветеринарии. The invention relates to the pharmaceutical industry and relates to a method for producing hyaluronic acid, which is used in various fields of medicine, including dermatology, gynecology, ophthalmology, in cosmetic practice and in veterinary medicine.
Известны способы получения гиалуроновой кислоты из петушиных гребней. Общим для методов получения гиалуроновой кислоты является последовательное разрушение структур на каждом уровне локализации (тканевом, клеточном, молекулярном). Для обеспечения максимального контакта с экстрагентами проводят измельчение и гомогенизацию тканей. Разрушение клеточных структур обычно проходит с использованием ферментов и органических растворителей. Высвобождение гиалуроновой кислоты из комплексов с другими полисахаридами и белками осуществляется с помощью ферментов, органических растворителей, детергентов целенаправленным воздействием на те или иные связи, удерживающие ее в комплексе. Known methods for producing hyaluronic acid from cocks. Common to methods for the preparation of hyaluronic acid is the sequential destruction of structures at each level of localization (tissue, cellular, molecular). To ensure maximum contact with extractants, grinding and homogenization of tissues is carried out. The destruction of cellular structures usually takes place using enzymes and organic solvents. The release of hyaluronic acid from complexes with other polysaccharides and proteins is carried out with the help of enzymes, organic solvents, detergents by targeted action on certain bonds that hold it in the complex.
Известен способ получения гиалуроновой кислоты, согласно которому гиалуроновую кислоту получают из петушиных гребней путем обескровливания сырья смесью этанола и хлороформа, с последующей повторной экстракцией водой, депротеинизацией экстракта хлороформом в присутствии NaCl при 4 25oC в течение 3 5 ч, отделением водной фазы многократной экстракцией хлороформом или обработкой проназой и осаждением гиалуроновой кислоты этанолом. Выход препарата составляет около 0,08% от массы сырья. Эта гиалуроновая кислота является очень дорогим препаратом с высокой степенью очистки и применяется, в основном, в глазной хирургии. Данная технология послужила основой для разработки первого фармацевтического препарата "Hea lon".A known method of producing hyaluronic acid, according to which hyaluronic acid is obtained from cocks by bleeding the raw material with a mixture of ethanol and chloroform, followed by repeated extraction with water, deproteinization of the extract with chloroform in the presence of NaCl at 4 25 o C for 3-5 hours, separation of the aqueous phase by repeated extraction chloroform or treatment with pronase and precipitation of hyaluronic acid with ethanol. The yield of the drug is about 0.08% by weight of the raw material. This hyaluronic acid is a very expensive drug with a high degree of purification and is mainly used in eye surgery. This technology served as the basis for the development of the first pharmaceutical drug, Hea lon.
Гиалуроновая кислота, используемая в составе разнообразных медицинских, фитотерапевтических, гигиенических, ветеринарных и косметических препаратов, не требует такой высокой степени очистки, как для применения в офтальмологии, поэтому способ извлечения ее может быть упрощен. Hyaluronic acid used in a variety of medical, phytotherapeutic, hygienic, veterinary and cosmetic preparations does not require such a high degree of purification as for use in ophthalmology, therefore, the method of its extraction can be simplified.
Наиболее близким к заявляемому способу прототипом является способ получения гиалуроновой кислоты по авторскому свидетельству СССР N1616926. Гиалуроновую кислоту получают из петушиных гребней следующим образом: сырье обескровливают, измельчают, экстрагируют водой при 90 100oC, после термообработки экстракционную массу охлаждают до 4 60oC в течение 2 4 ч, отделяют липиды, массу фильтруют, отделяют осадок сырья, а в фильтрат вводят активированный уголь в количестве 1 2% от массы исходного сырья, перемешивают 1 2 ч, смесь фильтруют, полученный фильтрат смешивают с осадком сырья и проводят двухстадийную экстракцию водой в течение 18 24 ч при 20 - 22oC в присутствии пенициллина в количестве 0,05 0,07% от массы исходного сырья с последующей сушкой экстракта. Выход препарата составляет 3,8 4% по отношению к массе исходного сырья.Closest to the claimed method, the prototype is a method for producing hyaluronic acid according to the USSR copyright certificate N1616926. Hyaluronic acid is obtained from cocks in the following way: the raw material is bled, crushed, extracted with water at 90 100 o C, after heat treatment the extraction mass is cooled to 4 60 o C for 2 4 h, lipids are separated, the mass is filtered, the raw material precipitate is separated, and activated filtrate is introduced in an amount of 1 2% by weight of the feedstock, stirred for 1 2 hours, the mixture is filtered, the obtained filtrate is mixed with a precipitate of raw materials and two-stage extraction is carried out with water for 18-24 hours at 20 - 22 o C in the presence of penicillin in an amount of 0 , 05 0.0 7% by weight of the feedstock, followed by drying of the extract. The yield of the drug is 3.8 4% relative to the weight of the feedstock.
Недостатками известного способа получения гиалуроновой кислоты является использование в качестве экстрагента дистиллированной воды. Известно, что при выделении из ткани гиалуроновой кислоты водой вместе с гиалуроновой кислотой экстрагируются и нуклеиновые кислоты. Кроме того, данный метод предусматривает термообработку при 90 100oC, что нежелательно, поскольку гиалуроновая кислота чувствительна к нагреванию и кипячение даже в течение незначительного времени приводит к необратимым изменениям ее свойств.The disadvantages of the known method for producing hyaluronic acid is the use of distilled water as an extractant. It is known that, when hyaluronic acid is isolated from a tissue by water, nucleic acids are extracted along with hyaluronic acid. In addition, this method involves heat treatment at 90 100 o C, which is undesirable, since hyaluronic acid is sensitive to heat and boiling even for a short time leads to irreversible changes in its properties.
С целью отделения белка и высвобождения гиалуроновой кислоты из ее комплексов с белками и другими мукополисахаридами авторы используют активированный уголь, хотя известно, что связи гиалуроновая кислота белок достаточно прочны и разрушить их можно лишь органическими растворителями. In order to separate the protein and release hyaluronic acid from its complexes with proteins and other mucopolysaccharides, the authors use activated carbon, although it is known that the bonds of hyaluronic acid are strong enough and they can be destroyed only with organic solvents.
При разработке наиболее рационального способа получения гиалуроновой кислоты следует учитывать чувствительность ее как полимера к различным внешним воздействиям и избегать процедур, способных вызвать деполимеризацию. Между тем, все известные способы препаративного получения гиалуроновой кислоты включают приемы, неизбежно ведущие к ее деполимеризации. Поэтому при обосновании способа выделения гиалуроновой кислоты необходимо учитывать следующие моменты:
1. В процессе получения сырья надо исключить возможность наличия гиалуронидазы и предупредить энзиматическую деградацию гиалуроновой кислоты.When developing the most rational method for producing hyaluronic acid, one should take into account its sensitivity as a polymer to various external influences and avoid procedures that can cause depolymerization. Meanwhile, all known methods for the preparative preparation of hyaluronic acid include techniques that inevitably lead to its depolymerization. Therefore, when substantiating the method for the isolation of hyaluronic acid, the following points must be taken into account:
1. In the process of obtaining raw materials, it is necessary to exclude the possibility of the presence of hyaluronidase and to prevent the enzymatic degradation of hyaluronic acid.
2. Поскольку гиалуроновая кислота чрезвычайно чувствительна к сдвигам pH и температуре, при которой происходит экстракция, необходимо провести эксперименты для выбора оптимального режима экстракции. 2. Since hyaluronic acid is extremely sensitive to pH shifts and the temperature at which extraction occurs, it is necessary to conduct experiments to select the optimal extraction mode.
3. При выделении гиалуроновой кислоты необходимо предупредить возможность загрязнения ее нуклеиновыми кислотами. Так как нуклеиновые кислоты экстрагируются вместе с гиалуроновой кислотой из ткани, предпочтительно использовать экстрагент, в котором нерастворимы ядерные нуклеопротеиды. 3. When isolating hyaluronic acid, it is necessary to prevent the possibility of contamination with nucleic acids. Since nucleic acids are extracted together with hyaluronic acid from the tissue, it is preferable to use an extractant in which nuclear nucleoproteins are insoluble.
4. В связи с наличием белка в экстрактах, содержащих гиалуроновую кислоту, используют органические растворители. Известно, что разрушение уникального природного комплекса гиалуроновая кислота белок при выделении из петушиных гребней совершенно не обязательно в случае применения ее препаратов в дерматологии, ветеринарии и косметологической практике. Имеются убедительные данные о том, что высокого терапевтического эффекта удается достигнуть не только не освобождая препараты гиалуроновой кислоты от белковых веществ, но наоборот, вводя в них дополнительно различные белки. Показано, что присутствие белка в препаратах гиалуроновой кислоты повышает их стабильность, биодоступность. 4. Due to the presence of protein in extracts containing hyaluronic acid, organic solvents are used. It is known that the destruction of the unique natural complex of hyaluronic acid protein during isolation from cocks is not necessary if its preparations are used in dermatology, veterinary medicine and cosmetology practice. There is convincing evidence that a high therapeutic effect can be achieved not only without releasing hyaluronic acid preparations from protein substances, but vice versa by introducing additional proteins into them. It is shown that the presence of protein in hyaluronic acid preparations increases their stability and bioavailability.
Задачей изобретения является разработка способа выделения гиалуроновой кислоты, не деполимеризованной, свободной от нуклеиновых кислот и содержащей комплекс натуральных белков. The objective of the invention is to develop a method for the allocation of hyaluronic acid, not depolymerized, free of nucleic acids and containing a complex of natural proteins.
Сущность предлагаемого способа получения гиалуроновой кислоты. The essence of the proposed method for producing hyaluronic acid.
У петухов, достигших половозрелого возраста, срезают гребни, тщательно промывают от крови. Затем для инактивации гиалуронодазы гребни промывают горячей водой (при температуре свыше 60oC в течение 20 30 мин). Промытые гребни измельчают в гомогенизаторе. Измельченное сырье помещают в емкость и заливают физиологическим раствором в соотношении 1:5, тщательно перемешивают в течение 1 ч для обеспечения максимального контакта ткани с экстрагентами и нагревают до кипения, удаляют образовавшийся на поверхности слой липидов, охлаждают, фильтруют. Осадок сырья вновь заливают физиологическим раствором в соотношении 1: 3, нагревают до 80 90oC, охлаждают, фильтруют, экстракты объединяют. Для осаждения гиалуроновой кислоты в экстракт при постоянном перемешивании медленно добавляют 1 2%-ный раствор уксусной кислоты, оставляют до полного формирования осадка, надосадочную жидкость удаляют. Осадок помещают в емкость, заливают дистиллированной водой в соотношении 1:2, тщательно перемешивают, доводят pH до значения 7,0 -7,3, нагревают до температуры 80oC. Смесь фильтруют или центрифугируют. Фильтрат лиофилизируют.In males that have reached adulthood, crests are cut off, thoroughly washed with blood. Then, to inactivate hyaluronodase, the ridges are washed with hot water (at a temperature of over 60 o C for 20 30 minutes). The washed ridges are ground in a homogenizer. The crushed raw materials are placed in a container and filled with saline in a ratio of 1: 5, thoroughly mixed for 1 h to ensure maximum tissue contact with extractants and heated to boiling, the lipid layer formed on the surface is removed, cooled, filtered. The raw material precipitate is again poured with saline in a ratio of 1: 3, heated to 80 90 o C, cooled, filtered, the extracts are combined. To precipitate hyaluronic acid, 1 2% acetic acid solution is slowly added to the extract with constant stirring, left until the precipitate is completely formed, and the supernatant is removed. The precipitate is placed in a container, filled with distilled water in a ratio of 1: 2, mixed thoroughly, adjusted to pH 7.0 -7.3, heated to a temperature of 80 o C. The mixture is filtered or centrifuged. The filtrate is lyophilized.
Новыми признаками способа выделения гиалуроновой кислоты по сравнению с прототипом являются:
использование в качестве экстрагента физиологического раствора, что предупреждает возможность загрязнения препарата нуклеиновыми кислотами;
проведение процесса при значении pH 7,0 7,3;
проведение процесса в щадящем температурном режиме: медленное нагревание экстракта до 80 90oC;
отсутствие стадии очистки препарата от белка.New features of the method of allocation of hyaluronic acid in comparison with the prototype are:
the use of saline as an extractant, which prevents the possibility of contamination of the drug with nucleic acids;
the process at a pH of 7.0 to 7.3;
the process in gentle temperature conditions: slow heating of the extract to 80 90 o C;
lack of a stage for purification of the drug from protein.
Как видно из табл. 1, 2, получаемый по предлагаемому способу препарат не содержит нуклеиновых кислот, не подвергается деполимеризации, имеет более продолжительный срок хранения и, таким образом, обладает более высоким качеством, чем препарат, получаемый по способу-прототипу. As can be seen from the table. 1, 2, the preparation obtained by the proposed method does not contain nucleic acids, does not undergo depolymerization, has a longer shelf life and, therefore, has a higher quality than the preparation obtained by the prototype method.
Совокупность всех перечисленных признаков экспериментально разработана авторами, не известна из опубликованных источников информации, что позволяет сделать вывод о существенных отличиях предлагаемого метода от известных и соответствии критериям "новизна" и "изобретательский уровень". The totality of all of the above features is experimentally developed by the authors, is not known from published sources of information, which allows us to conclude that the proposed method differs significantly from the known ones and that it meets the criteria of "novelty" and "inventive step".
Изобретение иллюстрируется следующими примерами, подтверждающими возможность его осуществления. The invention is illustrated by the following examples, confirming the possibility of its implementation.
Пример 1. Способ получения гиалуроновой кислоты. В качестве сырья используют петушиные гребни. У петухов, достигших половозрелого возраста, срезают гребни, тщательно промывают от загрязнений холодной водой, затем обрабатывают в течение 30 мин водой при температуре свыше 60oC. Отмытые от крови во избежание окислительной деструкции гребни (0,5 кг сырья) измельчают в гомогенизаторе, заливают 2,5 л физиологического раствора, перемешивают в течение 1 ч и нагревают при 80 90oC, удаляют образовавшийся на поверхности слой липидов, фильтруют через несколько слоев марли, в фильтрат добавляют 1%-ный раствор уксусной кислоты в количестве 50 -60 мл, оставляют до полного формирования осадка, надосадочную жидкость удаляют. Осадок заливают 1 л дистиллированной воды, тщательно перемешивают и раствором едкого натра доводят pH до значения 7,0 -7,3, нагревают до 80oC, фильтруют, фильтрат лиофилизируют.Example 1. A method of obtaining hyaluronic acid. As raw materials, cocks are used. In males that have reached adulthood, ridges are cut off, thoroughly washed from contaminants with cold water, then treated for 30 minutes with water at temperatures above 60 o C. Washed from the blood to prevent oxidative degradation, the ridges (0.5 kg of raw material) are crushed in a homogenizer, pour 2.5 l of physiological saline, mix for 1 h and heat at 80–90 ° C, remove the layer of lipids formed on the surface, filter through several layers of gauze, add a 1% solution of acetic acid in an amount of 50-60 ml to the filtrate left they are poured until the sediment is completely formed, the supernatant is removed. The precipitate is poured into 1 liter of distilled water, thoroughly mixed and the sodium hydroxide solution is adjusted to pH 7.0 -7.3, heated to 80 ° C, filtered, and the filtrate is lyophilized.
Получают 17,5 г гиалуроновой кислоты, что составляет 3,5% от массы исходного сырья. Get 17.5 g of hyaluronic acid, which is 3.5% by weight of the feedstock.
Пример 2. Способ получения гиалуроновой кислоты. 500 г сырья (полученного, как указано в примере 1) гомогенизируют, заливают 2,5 л физиологического раствора, перемешивают в течение 1 ч, нагревают при 80 - 90oC, удаляют липиды, фильтруют. Осадок сырья вновь заливают 1,5 л физиологического раствора, нагревают при 80 90oC, фильтруют. Экстракты объединяют и медленно при постоянном перемешивании добавляют 1%-ный раствор уксусной кислоты из расчета 20 мл на 1 л, оставляют до полного формирования осадка, надосадочную жидкость удаляют, осадок заливают 1 л дистиллированной воды, тщательно перемешивают и 0,1%-ным раствором едкого натра доводят pH до значения 7,0 7,3, нагревают до 80oC, фильтруют, фильтрат лиофилизируют. Получают 20 г гиалуроновой кислоты, что составляет 4,0% от массы исходного сырья.Example 2. A method of obtaining hyaluronic acid. 500 g of raw material (obtained as described in example 1) are homogenized, 2.5 L of physiological saline is poured, stirred for 1 h, heated at 80 - 90 o C, lipids are removed, filtered. The precipitate of raw materials is again poured into 1.5 l of physiological saline, heated at 80 90 o C, filtered. The extracts are combined and slowly added with constant stirring 1% solution of acetic acid at a rate of 20 ml per 1 l, leave until the precipitate is completely formed, the supernatant is removed, the precipitate is poured with 1 l of distilled water, mix thoroughly with a 0.1% solution sodium hydroxide was adjusted to pH 7.0 7.3, heated to 80 ° C, filtered, and the filtrate was lyophilized. Get 20 g of hyaluronic acid, which is 4.0% by weight of the feedstock.
Пример 3. Способ получения гиалуроновой кислоты. У петухов, достигших половозрелого возраста, срезают гребни у основания, тщательно промывают от загрязнений холодной водой, затем обрабатывают в течение 20 мин водой при 80oC. Отмытые гребни измельчают до получения фарша с размером частиц не более 1 мм. 500 г сырья заливают 2 л физиологического раствора, перемешивают 30 мин, нагревают до кипения, удаляют образовавшийся на поверхности слой липидов, фильтруют. Осадок сырья вновь заливают 2 л физиологического раствора, нагревают до кипения (но не кипятят), фильтруют. Экстракты объединяют, медленно при постоянном перемешивании добавляют 2%-ный раствор уксусной кислоты, оставляют до полного формирования осадка, надосадочную жидкость удаляют. Осадок заливают 1 л дистиллированной воды, тщательно перемешивают и 0,1% -ным раствором едкого натра доводят pH до значения 7,0 7,3, медленно нагревают до кипения, фильтруют, фильтрат лиофилизируют. Получают 24 г гиалуроновой кислоты, что составляет 4,8% от массы исходного сырья.Example 3. A method of obtaining hyaluronic acid. In males that have reached adulthood, crests are cut off at the base, thoroughly washed from contaminants with cold water, then treated for 20 minutes with water at 80 o C. The washed crests are crushed to obtain minced meat with a particle size of not more than 1 mm. 500 g of raw material is poured into 2 l of physiological solution, stirred for 30 minutes, heated to a boil, the lipid layer formed on the surface is removed, filtered. The raw material precipitate is again poured into 2 l of physiological saline, heated to boiling (but not boiled), filtered. The extracts are combined; slowly, with constant stirring, a 2% solution of acetic acid is added, left until the precipitate is completely formed, and the supernatant is removed. The precipitate is poured into 1 liter of distilled water, mixed thoroughly and adjusted with a 0.1% sodium hydroxide solution to pH 7.0 7.3, slowly heated to boiling, filtered, and the filtrate lyophilized. Get 24 g of hyaluronic acid, which is 4.8% by weight of the feedstock.
Разработанный способ получения гиалуроновой кислоты достаточно прост, не требует дорогостоящего оборудования и реактивов. Гиалуроновая кислота может быть использована в качестве источника получения высокоочищенной гиалуроновой кислоты для офтальмологии, а также в производстве препаратов для дерматологии и косметологии. Петушиные гребни являются одним из наиболее перспективных видов сырья вследствие их доступности и возможности организации крупномасштабного производства гиалуроновой кислоты. The developed method for producing hyaluronic acid is quite simple, does not require expensive equipment and reagents. Hyaluronic acid can be used as a source of highly purified hyaluronic acid for ophthalmology, as well as in the manufacture of preparations for dermatology and cosmetology. Cocks are one of the most promising types of raw materials due to their availability and the possibility of organizing large-scale production of hyaluronic acid.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95114061A RU2102400C1 (en) | 1995-08-08 | 1995-08-08 | Method for production of hualyronic acid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95114061A RU2102400C1 (en) | 1995-08-08 | 1995-08-08 | Method for production of hualyronic acid |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU95114061A RU95114061A (en) | 1997-02-20 |
| RU2102400C1 true RU2102400C1 (en) | 1998-01-20 |
Family
ID=20171049
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU95114061A RU2102400C1 (en) | 1995-08-08 | 1995-08-08 | Method for production of hualyronic acid |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2102400C1 (en) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2157381C1 (en) * | 1999-03-01 | 2000-10-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное предприятие "Тульская индустрия ЛТД" | Method of preparing hyaluronic acid |
| RU2420295C1 (en) * | 2010-01-11 | 2011-06-10 | Федеральное государственное учреждение "Российский научный центр "Восстановительная травматология и ортопедия" имени академика Г.А. Илизарова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Method of isolating hyaluronic acid from skins |
| WO2015099578A1 (en) | 2013-12-26 | 2015-07-02 | Международная коммерческая компания "НЬЮКРОСС ВЕНТУРЕС ЛТД" | Polyacrylamide hydrogel-based material for medical purposes and method for producing same |
| RU2748071C1 (en) * | 2020-11-10 | 2021-05-19 | Общество с ограниченной ответственностью "АВЕО" | Method for obtaining individual fractions of matrix hyaluronate of various molecular weights of high fractional and chemical purity in a single technological cycle |
| RU2805084C1 (en) * | 2023-03-30 | 2023-10-11 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный университет инженерных технологий" (ФГБОУ ВО "ВГУИТ") | Method for obtaining hyaluronic acid |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4141973A (en) * | 1975-10-17 | 1979-02-27 | Biotrics, Inc. | Ultrapure hyaluronic acid and the use thereof |
-
1995
- 1995-08-08 RU RU95114061A patent/RU2102400C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4141973A (en) * | 1975-10-17 | 1979-02-27 | Biotrics, Inc. | Ultrapure hyaluronic acid and the use thereof |
| US4141973B1 (en) * | 1975-10-17 | 1989-08-08 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2157381C1 (en) * | 1999-03-01 | 2000-10-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное предприятие "Тульская индустрия ЛТД" | Method of preparing hyaluronic acid |
| RU2420295C1 (en) * | 2010-01-11 | 2011-06-10 | Федеральное государственное учреждение "Российский научный центр "Восстановительная травматология и ортопедия" имени академика Г.А. Илизарова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Method of isolating hyaluronic acid from skins |
| WO2015099578A1 (en) | 2013-12-26 | 2015-07-02 | Международная коммерческая компания "НЬЮКРОСС ВЕНТУРЕС ЛТД" | Polyacrylamide hydrogel-based material for medical purposes and method for producing same |
| RU2748071C1 (en) * | 2020-11-10 | 2021-05-19 | Общество с ограниченной ответственностью "АВЕО" | Method for obtaining individual fractions of matrix hyaluronate of various molecular weights of high fractional and chemical purity in a single technological cycle |
| RU2805084C1 (en) * | 2023-03-30 | 2023-10-11 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный университет инженерных технологий" (ФГБОУ ВО "ВГУИТ") | Method for obtaining hyaluronic acid |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU95114061A (en) | 1997-02-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2132199C1 (en) | Method of preparing curative-prophylactic agent from jerusalem artichoke showing biologically active effect on body | |
| HU180898B (en) | Improved process for producing composition containing coagulating faktor viii from undercooled human blood plaska | |
| CN101429254A (en) | Bletilla striata polysaccharide, preparation method and new uses thereof | |
| JPH02215351A (en) | Method for collecting krill phospholipid and functional food and nerve function improving agent having nerve function improving effect | |
| RU2102400C1 (en) | Method for production of hualyronic acid | |
| RU2104702C1 (en) | Method of preparing the biologically active polypeptide complex normalizing brain functions from animal raw, pharmacological composition and its using | |
| CN102188692A (en) | Bone peptide composition, preparation thereof, preparation method thereof and application | |
| CN101020715A (en) | Process of extracting and preparing deer nerve growth factor (DEER NGF) | |
| PL244350B1 (en) | Method of obtaining hyaluronidase from animal testes and the product obtained in this way | |
| CN101623313A (en) | Method for preparing traditional Chinese medicine preparation for tonifying blood | |
| JPH10140154A (en) | Antioxidant | |
| JP2001519657A (en) | A bifurcation method for processing whole aloe leaves | |
| RU2151605C1 (en) | Agent "tserebral" for treatment of patient with insult and method of its preparing | |
| KR101863511B1 (en) | A Manufacturing Method Of Kongjindan Injection Liquid | |
| RU2089204C1 (en) | Method of preparing peptides recovering the prostate gland function | |
| SU1158201A1 (en) | Method of obtaining stimulator from mammalia spleen | |
| RU2562581C1 (en) | Method of producing biologically active agent from sea cucumber, having general tonic and immunomodulating properties | |
| RU2671537C2 (en) | Hyaluronidase preparation and method of its preparation | |
| RU2000061C1 (en) | Method for production of proteins affinite to opiate receptors | |
| US5707657A (en) | Food supplement containing animal fetal mesenchymal matter and animal fetal organ extracts | |
| CN107753520B (en) | Method for preparing hypolipidemic capsule from squid viscera | |
| RU2055079C1 (en) | Method for production of preparation of hyaluronic acid | |
| CN106220709B (en) | A kind of easy synthetic peptide through blood-brain barrier | |
| RU2142284C1 (en) | Method of preparing agent showing adaptogenic and antiradiation effect | |
| RU2157381C1 (en) | Method of preparing hyaluronic acid |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20120320 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20130809 |