RU2102472C1 - Method of plague microbe biomass preparing - Google Patents
Method of plague microbe biomass preparing Download PDFInfo
- Publication number
- RU2102472C1 RU2102472C1 RU94027451A RU94027451A RU2102472C1 RU 2102472 C1 RU2102472 C1 RU 2102472C1 RU 94027451 A RU94027451 A RU 94027451A RU 94027451 A RU94027451 A RU 94027451A RU 2102472 C1 RU2102472 C1 RU 2102472C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- biomass
- nutrient medium
- sedimentation
- plague
- volume
- Prior art date
Links
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 title claims abstract description 37
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 title claims abstract description 23
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 17
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 22
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 17
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract 2
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 abstract 2
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 abstract 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000011265 semifinished product Substances 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 2
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005202 decontamination Methods 0.000 description 1
- 230000003588 decontaminative effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002366 mineral element Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам получения биомассы чумного микроба и может быть использовано при приготовлении вакцин или для выделения клеточных структур чумного микроба. The invention relates to the microbiological industry, and in particular to methods for producing plague microbe biomass and can be used in the preparation of vaccines or for isolation of plague microbe cell structures.
Известен способ получения биомассы чумного микроба штамма ЕВ на плотной питательной среде из перевара Хоттингера в АКМ-III, используемой для приготовления чумной живой сухой вакцины [1]
К недостаткам данного способа следует отнести большую продолжительность культивирования (до 48 час), использование плотной питательной среды и низкий выход биомассы с объема среды.A known method of producing biomass of the plague microbe of strain EB on a solid nutrient medium from a Hottinger digest in AKM-III used to prepare a plague live dry vaccine [1]
The disadvantages of this method include the long duration of cultivation (up to 48 hours), the use of a dense nutrient medium and low biomass yield from the medium volume.
Наиболее близким к предлагаемому способу по технической сущности и достигаемому результату является способ получения биомассы чумного микроба в жидкой питательной среде глубинным культивированием [2]
К недостаткам данного способа следует отнести то, что культуральная жидкость после извлечения биомассы автоклавируется и сливается в канализацию. Кроме того, культуральная жидкость (полуфабрикат чумной вакцины), по каким-либо причинам не соответствующая требованиям РП 377-92 и забракованная для дальнейшего использования, также автоклавируется и сливается в канализацию.Closest to the proposed method according to the technical nature and the achieved result is a method for producing biomass of plague microbe in a liquid nutrient medium by deep cultivation [2]
The disadvantages of this method include the fact that the culture fluid after biomass extraction is autoclaved and discharged into the sewer. In addition, the culture fluid (semi-finished product of the plague vaccine), for some reason not complying with the requirements of RP 377-92 and rejected for further use, is also autoclaved and discharged into the sewer.
Задачей изобретения является сокращение объема сточных вод и повышение выхода биомассы. The objective of the invention is to reduce the volume of wastewater and increase the yield of biomass.
Поставленная задача достигается тем, что в качестве питательной среды используется смесь, состоящая из супернатанта культуральной жидкости, полученной со стадии деконтации суспензии клеток после культивирования, и/или культуральной жидкости после выбраковки полуфабриката чумной вакцины по техническим параметрам и порции свежей питательной среды, составляющей не менее 15-20% от исходного объема среды. The task is achieved in that a nutrient mixture is used, consisting of the supernatant of the culture fluid obtained from the stage of decontamination of the cell suspension after cultivation, and / or the culture fluid after culling the semi-finished plague vaccine according to technical parameters and a portion of fresh nutrient medium of at least 15-20% of the initial volume of the medium.
Осуществление предлагаемого способа возможно благодаря тому, что в процессе производства чумной живой сухой вакцины для ее приготовления применяют биомассу чумного микроба штамма ЕВ, выращенную глубинным способом в жидкой питательной среде (РП 377-92), после чего полученную биомассу концентрируют путем седиментации, а оставшуюся жидкость (супернатант в количестве 80-85% от исходного объема) автоклавируют в канализацию. Однако в отработанной культуральной жидкости, по нашим данным (см. табл.1), находятся до 50% неизрасходованных свободных аминокислот, а также минеральные элементы, стимуляторы и другие вещества, необходимые для роста и размножения микробных клеток. Состав исходной питательной среды, культуральной жидкости после седиментации клеток и после введения в нее свежей порции среды, приведен в табл.1. The implementation of the proposed method is possible due to the fact that in the production process of the plague live dry vaccine for its preparation, the biomass of the plague microbe of strain EB grown in a deep way in a liquid nutrient medium (RP 377-92) is used, after which the resulting biomass is concentrated by sedimentation, and the remaining liquid (supernatant in an amount of 80-85% of the original volume) is autoclaved into the sewer. However, according to our data (see Table 1), up to 50% of unspent free amino acids, as well as mineral elements, stimulants, and other substances necessary for the growth and reproduction of microbial cells, are found in the spent culture fluid. The composition of the initial nutrient medium, the culture fluid after sedimentation of the cells and after introducing a fresh portion of the medium into it, is given in table 1.
Кроме того, повторно может быть использована культуральная жидкость (полуфабрикат чумной вакцины), по каким-либо причинам не соответствующая требованиям РП 377-92 и забракованная для дальнейшего использования на стадии приготовления вакцины, т.к. в ней находится достаточное количество аминокислот (табл.2). In addition, culture fluid (prefabricated plague vaccine) can be reused, which for some reason does not meet the requirements of RP 377-92 and rejected for further use at the stage of preparation of the vaccine, because it contains a sufficient amount of amino acids (Table 2).
Сущность предложенного способа заключается в следующем. The essence of the proposed method is as follows.
Выращивают биомассу чумного микроба в реакторе вместимостью 0,25 м3 по режимам, изложенным в РП 377-92. По окончании выращивания отделяют микробную суспензию путем седиментации, а отработанную жидкость собирают в реактор, куда вводят дополнительную порцию свежей питательной среды в количестве не менее 15-20% по объему, стерилизуют, охлаждают до 28oC, вносят посевной материал и проводят повторное выращивание в соответствии с требованиями РП 377-92.Plague microbe biomass is grown in a reactor with a capacity of 0.25 m 3 according to the modes set forth in RP 377-92. At the end of the cultivation, the microbial suspension is separated by sedimentation, and the spent liquid is collected in the reactor, where an additional portion of fresh nutrient medium is added in an amount of at least 15-20% by volume, sterilized, cooled to 28 ° C, the seed is introduced and re-grown in accordance with the requirements of RP 377-92.
Полученную по данному способу биомассу концентрируют путем седиментации и используют для приготовления чумной живой сухой вакцины. Obtained by this method, the biomass is concentrated by sedimentation and used to prepare a plague live dry vaccine.
В выбракованную на стадии культивирования по технологическим параметрам культуральную жидкость вводят дополнительную порцию свежей питательной среды не менее 15-20% от объема жидкой среды, стерилизуют, охлаждают до 28oC, вносят посевной материал и проводят повторное выращивание в соответствии с требованиями РП 377-92. Полученную по данному способу биомассу концентрируют путем седиментации и используют для приготовления чумной живой сухой вакцины.An additional portion of fresh nutrient medium of at least 15-20% of the volume of the liquid medium is introduced into the culture fluid culled at the stage of cultivation according to the technological parameters, sterilized, cooled to 28 ° C, seed is introduced and re-growing is carried out in accordance with the requirements of RP 377-92 . Obtained by this method, the biomass is concentrated by sedimentation and used to prepare a plague live dry vaccine.
Предложенный способ позволяет на 80% повысить выход биомассы с единицы питательной среды и в 2 раза сократить объем сточных вод. The proposed method allows to increase by 80% the yield of biomass per unit of the nutrient medium and halve the volume of wastewater.
Наличие причинно-следственной связи между совокупностью существенных признаков заявляемого объекта и достигаемым техническим результатом показано в табл.3. The presence of a causal relationship between the set of essential features of the claimed object and the achieved technical result is shown in table 3.
Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами. The possibility of carrying out the claimed invention is shown by the following examples.
Пример 1. Получение биомассы на культуральной жидкости, используемой повторно. Example 1. Obtaining biomass on the culture fluid reused.
В реактор вместимостью 0,25 м3 заливают 150 л жидкой питательной среды, стерилизуют ее, охлаждают до температуры 28oC и вводят посевной материал из расчета не менее 0,4 млрд кл. в мл. Культуру выращивают при температуре (27±1)oC, аэрации 0,2 объема воздуха на объем среды в минуту в течение 27 час. По окончании выращивания биомассу концентрируют путем седиментации в течение 6 час в реакторе при температуре (15±2)oC. Суспензию клеток (примерно 15-20% по объему от всей культуральной жидкости) отбирают и используют для приготовления чумной сухой вакцины. В оставшуюся отработанную культуральную жидкость вводят свежую порцию жидкой питательной среды (20% по объему), стерилизуют при 110oC в течение 20 мин, охлаждают до 28oC и вносят посевной материал из расчета 0,1 млрд кл. в мл. Повторно выращивают биомассу по режимам, изложенным выше. По окончании выращивания биомассу концентрируют путем седиментации и используют для приготовления чумной живой сухой вакцины. В табл. 4 приведена характеристика полученной биомассы.150 l of liquid nutrient medium is poured into a reactor with a capacity of 0.25 m 3 , it is sterilized, cooled to a temperature of 28 o C and seed is introduced at the rate of at least 0.4 billion cells. in ml The culture is grown at a temperature of (27 ± 1) o C, aeration of 0.2 volume of air per volume of medium per minute for 27 hours. At the end of the cultivation, the biomass is concentrated by sedimentation for 6 hours in a reactor at a temperature of (15 ± 2) o C. A cell suspension (approximately 15-20% by volume of the total culture fluid) is taken and used to prepare a plague dry vaccine. A fresh portion of the liquid nutrient medium (20% by volume) is introduced into the remaining spent culture fluid, sterilized at 110 ° C for 20 minutes, cooled to 28 ° C, and seed seeded at the rate of 0.1 billion cells. in ml Re-grow biomass according to the modes described above. At the end of the cultivation, the biomass is concentrated by sedimentation and used to prepare the plague live dry vaccine. In the table. 4 shows the characteristic of the obtained biomass.
Из данных табл. 4 следует, что биомасса, полученная по определенному способу, соответствует требованиям РП 377-92 и не отличается от контроля. From the data table. 4 it follows that the biomass obtained by a certain method, meets the requirements of RP 377-92 and does not differ from the control.
Пример 2. Получение биомассы на культуральной жидкости, содержащей выбракованный полуфабрикат чумной вакцины (по pH). Example 2. Obtaining biomass on a culture fluid containing a rejected semi-finished plague vaccine (pH).
В культуральную жидкость, забракованную по величине pH в процессе культивирования, вводят дополнительно 20% по объему свежей порции питательной среды, стерилизуют при температуре 110oC в течение 20 мин, охлаждают до 28oC и вносят посевной материал из расчета 0,4-1,0 кл. в мл. Культуру выращивают в течение 27 час при температуре (27±1)oC, постоянном перемешивании и аэрации 0,2 объема воздуха на объем культуры в минуту. По окончании выращивания биомассу концентрируют путем седиментации и используют для приготовления чумной живой сухой вакцины.An additional 20% by volume of a fresh portion of the nutrient medium is introduced into the culture fluid, which was rejected by pH during cultivation, sterilized at a temperature of 110 ° C for 20 minutes, cooled to 28 ° C, and seed seeded at a rate of 0.4-1 , 0 cl. in ml The culture is grown for 27 hours at a temperature of (27 ± 1) o C, constant stirring and aeration of 0.2 volume of air per volume of culture per minute. At the end of the cultivation, the biomass is concentrated by sedimentation and used to prepare the plague live dry vaccine.
В табл. 4 приведена характеристика полученной биомассы. In the table. 4 shows the characteristic of the obtained biomass.
Из данных табл. 4 следует, что биомасса, полученная по предложенному способу, соответствует требованиям РП 377-92 и не отличается от контроля. From the data table. 4 it follows that the biomass obtained by the proposed method meets the requirements of RP 377-92 and does not differ from the control.
Пример 3. Получение биомассы на культуральной жидкости, содержащей выбракованный полуфабрикат (по температуре). Example 3. Obtaining biomass on a culture fluid containing culled semi-finished product (temperature).
В культуральную жидкость, выбракованную по отклонениям температуры в процессе культивирования от (27±1)oC, вводят 15% по объему свежей порции питательной среды, автоклавируют при 110oC в течение 20 мин, охлаждают до температуры 28oC и вносят посевной материал из расчета 0,4-1,0 млрд кл. в мл.15% by volume of a fresh portion of the nutrient medium are introduced into the culture fluid, culled by temperature deviations during cultivation from (27 ± 1) o C, autoclaved at 110 o C for 20 min, cooled to a temperature of 28 o C, and seed seeded based on 0.4-1.0 billion cells. in ml
Культуру выращивают, как в примере 2. Полученную биомассу (после седиментации) используют для приготовления чумной живой сухой вакцины. В табл. 4 приведена характеристика полученной биомассы. Из данных табл. 4 следует, что биомасса, полученная по определенному способу, соответствует требованиям РП 377-92 и не отличается от контроля. The culture is grown, as in example 2. The resulting biomass (after sedimentation) is used to prepare a plague live dry vaccine. In the table. 4 shows the characteristic of the obtained biomass. From the data table. 4 it follows that the biomass obtained by a certain method, meets the requirements of RP 377-92 and does not differ from the control.
Пример 4. Получение биомассы в питательной среде, состоящей из смеси культуральной жидкости, полученной после седиментации, и культуральной жидкости после выбраковки полуфабриката чумной вакцины со свежей питательной средой. Example 4. Obtaining biomass in a nutrient medium consisting of a mixture of culture fluid obtained after sedimentation and culture fluid after culling the semi-finished plague vaccine with fresh nutrient medium.
Культуральные жидкости, полученные после седиментации биомассы и после выбраковки полуфабриката, смешивают в любых соотношениях, вводят 20% по объему свежей порции питательной среды, автоклавируют при 110oC в течение 20 мин, охлаждают до температуры 28oC и вносят посевной материал из расчета 0,4 1,0 млрд кл. в мл. Культуру выращивают, как в примере 2. В табл. 4 приведена характеристика полученной биомассы. Из данных табл. 4 следует, что биомасса, полученная по предложенному способу, соответствует требованиям РП 337-92 и не отличается от контроля.The culture liquids obtained after sedimentation of biomass and after rejection of the semi-finished product are mixed in any proportions, 20% by volume of a fresh portion of the nutrient medium are introduced, autoclaved at 110 ° C for 20 minutes, cooled to a temperature of 28 ° C and seed seeded at the rate of 0 , 4 1.0 billion cells. in ml The culture is grown, as in example 2. In the table. 4 shows the characteristic of the obtained biomass. From the data table. 4 it follows that the biomass obtained by the proposed method meets the requirements of RP 337-92 and does not differ from the control.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94027451A RU2102472C1 (en) | 1994-07-19 | 1994-07-19 | Method of plague microbe biomass preparing |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94027451A RU2102472C1 (en) | 1994-07-19 | 1994-07-19 | Method of plague microbe biomass preparing |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU94027451A RU94027451A (en) | 1996-09-27 |
| RU2102472C1 true RU2102472C1 (en) | 1998-01-20 |
Family
ID=20158762
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU94027451A RU2102472C1 (en) | 1994-07-19 | 1994-07-19 | Method of plague microbe biomass preparing |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2102472C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102634457A (en) * | 2012-04-28 | 2012-08-15 | 徐长欣 | Semi-finished culture medium and preparation method thereof |
| RU2595407C2 (en) * | 2010-12-07 | 2016-08-27 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Method of obtaining polypeptide and method of producing reduced amount of glycoform g(0) and/or amount of glycoform g(1) of polypeptide |
-
1994
- 1994-07-19 RU RU94027451A patent/RU2102472C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 1. Регламент производства. Вакцина чумная живая сухая. РП-37 - 86. 2. Регламент производства, Вакцина чумная живая сухая. РП-377-92. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2595407C2 (en) * | 2010-12-07 | 2016-08-27 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Method of obtaining polypeptide and method of producing reduced amount of glycoform g(0) and/or amount of glycoform g(1) of polypeptide |
| US10837042B2 (en) | 2010-12-07 | 2020-11-17 | Hoffman-La Roche Inc. | Feed mixing device and its use |
| CN102634457A (en) * | 2012-04-28 | 2012-08-15 | 徐长欣 | Semi-finished culture medium and preparation method thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU94027451A (en) | 1996-09-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Feder et al. | The large-scale cultivation of mammalian cells | |
| Proper et al. | Mass culture of the protozoa Colpoda steinii | |
| US5391491A (en) | Avian embryo cell aggregate biomass for producing tick-born encephalitis virus/virus antigen | |
| Mitchell et al. | Optimization of a growth medium for Spirulina based on cattle waste | |
| Kiy et al. | Continuous high-cell-density fermentation of the ciliated protozoon Tetrahymena in a perfused bioreactor | |
| RU2102472C1 (en) | Method of plague microbe biomass preparing | |
| CN108441442A (en) | A method of it directly extracting microorganism fungus kind from soil and prepares calcium carbonate | |
| RU2085212C1 (en) | Method of preparing the common brucellosis antigen for pa, pck and pdck | |
| RU2160718C1 (en) | Method of purification of soil and water from oil and products | |
| Nilsson et al. | [35] Entrapment of animal cells | |
| RU2119952C1 (en) | Method of yeast production | |
| CN1244689C (en) | Method for forming block from divided sponge organs | |
| JP3542366B2 (en) | Method for separating microorganisms and method for measuring microorganism population | |
| JP3542367B2 (en) | Method for separating, purifying and recovering microorganism, method for measuring microorganism population, and method for recovering nucleic acid of microorganism | |
| RU2595401C2 (en) | Method of recycling wastes of cattle-breeding complexes | |
| SU1564183A1 (en) | Method of preparing nutrient medium for yeast growing | |
| RU2772586C1 (en) | Method for cultivation of the necessary microorganisms and the corresponding installation | |
| US3449209A (en) | Method of preparing brucella abortus vaccines | |
| RU2353649C2 (en) | Method of leptospira cultivation | |
| US20060172376A1 (en) | Method and device for the continuous production of biomolecules | |
| JP2001517429A (en) | Fermentation method for producing valuable biological substances using continuous mass culture of ciliates (protozoa) | |
| RU2215033C2 (en) | Method for preparing concentrate of bacterial cells in production of anti-plague vaccines | |
| RU2074253C1 (en) | Method of preparing biomass for food addition production | |
| SU789581A1 (en) | Method of preparing dioxyacetone | |
| JPS605279B2 (en) | Microorganism production method |