RU2197953C1 - Agent normalizing skin tissue cell function - Google Patents
Agent normalizing skin tissue cell function Download PDFInfo
- Publication number
- RU2197953C1 RU2197953C1 RU2001134287A RU2001134287A RU2197953C1 RU 2197953 C1 RU2197953 C1 RU 2197953C1 RU 2001134287 A RU2001134287 A RU 2001134287A RU 2001134287 A RU2001134287 A RU 2001134287A RU 2197953 C1 RU2197953 C1 RU 2197953C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lactic acid
- acid bacteria
- skin
- skin tissue
- hydrolysis
- Prior art date
Links
- 230000003915 cell function Effects 0.000 title 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 74
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 38
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims abstract description 37
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 37
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims abstract description 26
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims abstract description 26
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 claims abstract description 23
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims abstract description 17
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 claims description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 16
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 11
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 abstract description 31
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 abstract description 5
- 230000032683 aging Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 206010013786 Dry skin Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000037336 dry skin Effects 0.000 abstract description 3
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000037311 normal skin Effects 0.000 abstract 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 abstract 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 32
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 17
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 5
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 4
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 description 4
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 3
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 3
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 3
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000008278 cosmetic cream Substances 0.000 description 3
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 3
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 241001116389 Aloe Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007866 Chamaemelum nobile Nutrition 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 244000042664 Matricaria chamomilla Species 0.000 description 1
- 235000007232 Matricaria chamomilla Nutrition 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 N-acetyl-muramyl Chemical group 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 235000011399 aloe vera Nutrition 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000000093 cytochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000000887 hydrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 238000000554 physical therapy Methods 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 229940043274 prophylactic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000010497 wheat germ oil Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Cosmetics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области косметологии и дерматологии и касается лечебных средств, благотворно влияющих на функционирование клеток ткани кожи. The invention relates to the field of cosmetology and dermatology and relates to therapeutic agents that have a beneficial effect on the functioning of skin tissue cells.
Кожа представляет собой наружный защитный покров тела, выполняющий многообразные физиологические функции. Она защищает тело от вредных внешних влияний, регулирует температуру тела, препятствует проникновению микробов и вырабатывает защитные вещества против инфекционных агентов, выполняет роль выделительного органа, участвует в процессе дыхания и в общем обмене веществ и пр. The skin is the outer protective cover of the body, performing a variety of physiological functions. It protects the body from harmful external influences, regulates body temperature, prevents the penetration of microbes and produces protective substances against infectious agents, acts as an excretory organ, participates in the breathing process and in the general metabolism, etc.
В результате неблагоприятных внешних воздействий, заболеваний, старения функциональная активность клеток кожи может снижаться, что влечет за собою и нежелательные изменения внешнего вида кожных покровов, проявляющиеся в возникновении косметических дефектов. As a result of adverse external influences, diseases, aging, the functional activity of skin cells may decrease, which entails undesirable changes in the appearance of the skin, manifested in the appearance of cosmetic defects.
Для устранения косметических недостатков кожи и для их профилактики используют разнообразные методы - водные и тепловые процедуры, массаж, физиотерапию, хирургические методы, применение косметических средств разного механизма и различной направленности действия, предпочтительно на основе природных продуктов растительного, животного иди минерального происхождения [Д.Ласс. Уход за кожей лица. - М.: Аквариум - 1994, - 288 с.]. A variety of methods are used to eliminate cosmetic skin imperfections and to prevent them - water and thermal procedures, massage, physiotherapy, surgical methods, the use of cosmetics of different mechanisms and different directions of action, preferably based on natural products of plant, animal or mineral origin [D. Lass . Facial skin care. - M .: Aquarium - 1994, - 288 p.].
Состав конкретных рецептур косметических средств прямо зависит от характера косметического дефекта, его выраженности, состояния кожных покровов, индивидуальных особенностей организма пациента, от других обстоятельств. The composition of specific formulations of cosmetics directly depends on the nature of the cosmetic defect, its severity, condition of the skin, the individual characteristics of the patient’s body, and other circumstances.
Поскольку состояние кожных покровов определяется общим состоянием организма, наряду с чисто косметическими процедурами рекомендуются обычно и процедуры общеукрепляющего характера, а иногда даже прием лекарственных препаратов. Since the condition of the skin is determined by the general condition of the body, along with purely cosmetic procedures, generally restorative procedures, and sometimes even taking medications, are usually recommended.
Одни косметические средства предназначены для устранения видимых проявлений дефектов кожи, например высушивающие или шелушащие маски для борьбы с угревой сыпью, другие используют для воздействия на промежуточные звенья патологического процесса, в том числе для нормализации обменных процессов в ткани кожи. Some cosmetics are designed to eliminate visible manifestations of skin defects, for example, drying or peeling masks to combat acne, others are used to influence the intermediate parts of the pathological process, including normalization of metabolic processes in skin tissue.
Известны многочисленные косметические средства, улучшающие обмен веществ в ткани кожи и включающие комплексы витаминов ["Косметика. Потребитель", 1998 г. , 3, стр. 8], регулирующие водный обмен в ткани кожи и обладающие гидратирующим действием, содержащие растительные масла, экстракты алоэ и ромашки ["Косметика и парфюмерия", 2001 г., 15, стp. 6l-63, 57], стимулирующие регенеративные процессы при повреждениях клеток кожи за счет присутствия масла зародышей пшеницы ["Косметика. Потребитель", 1998 г., 3, стр. 6]. Numerous cosmetics are known that improve the metabolism in the skin tissue and include vitamin complexes ["Cosmetics. Consumer", 1998, 3, p. 8], which regulate water metabolism in the skin tissue and have a hydrating effect, containing vegetable oils, aloe extracts and chamomiles ["Cosmetics and Perfumes", 2001, 15, p. 6l-63, 57], stimulating regenerative processes in case of damage to skin cells due to the presence of wheat germ oil ["Cosmetics. Consumer", 1998, 3, p. 6].
По большей части активными началами этих косметических препаратов, позитивно влияющих на состояние кожных покровов, являются вещества природного происхождения. For the most part, the active ingredients of these cosmetic preparations that positively affect the condition of the skin are substances of natural origin.
Используются в косметологии и соединения, ранее применяемые в медицинских целях, которые проявляют при этом зачастую весьма специфические свойства. Compounds previously used for medical purposes, which often exhibit very specific properties, are also used in cosmetology.
В частности, было установлено, что ранее известные как переносчики кислорода перфторуглероды способны существенным образом влиять на протекание метаболических процессов в ткани кожи и изменять их таким образом, что соотношение метаболитов становится близким к таковому, характерному для ткани более молодого возраста. In particular, it was found that perfluorocarbons, previously known as oxygen carriers, are able to significantly affect the course of metabolic processes in skin tissue and change them in such a way that the ratio of metabolites becomes close to that characteristic of tissue of a younger age.
Целью настоящего изобретения является изыскание средств, способных специфически нормализовывать функции клеток ткани кожи, чтобы использовать эти соединения в интересах косметологии и дерматологии. The aim of the present invention is to find means capable of specifically normalizing the functions of skin tissue cells in order to use these compounds in the interests of cosmetology and dermatology.
Эта цель была достигнута в результате установления того нового факта, что комбинация продукта гидролиза клеточных стенок молочнокислых бактерий лизоцимом и внеклеточных водорастворимых пептидогликанов, выделяемых растущими молочнокислыми бактериями в культуральную среду, оказалась способной позитивным образом влиять на пролиферативную и на биосинтетическую активность фибробластов ткани кожи. This goal was achieved as a result of the establishment of the new fact that the combination of the hydrolysis product of the cell walls of lactic acid bacteria with lysozyme and extracellular water-soluble peptidoglycans secreted by growing lactic acid bacteria into the culture medium was able to positively influence the proliferative and biosynthetic activity of skin tissue fibroblasts.
Технический результат, достигаемый от практического использования изобретения, состоит в том, что косметические и/или дерматологические средства, приготовленные на основе комбинации продукта гидролиза клеточных стенок молочнокислых бактерий лизоцимом и внеклеточных водорастворимых пептидогликанов, выделяемых растущими молочнокислыми бактериями в культуральную среду, оказалась эффективным и новым средством для нормализации нарушенных по разным причинам функций клеток ткани кожи, пригодным для лечения и профилактики широкого круга заболеваний и повреждений кожи. The technical result achieved from the practical use of the invention is that cosmetic and / or dermatological preparations prepared on the basis of a combination of the product of hydrolysis of the cell walls of lactic acid bacteria with lysozyme and extracellular water-soluble peptidoglycans secreted by growing lactic acid bacteria into the culture medium turned out to be an effective and new tool to normalize disturbed for various reasons, the functions of skin tissue cells suitable for the treatment and prevention of a wide range of and diseases and skin lesions.
Сущность настоящего изобретения состоит в следующем. The essence of the present invention is as follows.
Предварительными исследованиями было установлено, что продукт гидролиза клеточной стенки молочнокислых бактерий лизоцимом обладает выраженной способностью стимулировать in vitro функциональную активность фибробластов ткани кожи. Preliminary studies have found that the product of hydrolysis of the cell wall of lactic acid bacteria by lysozyme has a pronounced ability to stimulate the in vitro functional activity of skin tissue fibroblasts.
Продукт гидролиза клеточной стенки молочнокислых бактерий лизоцимом как таковой ранее был известен и описан. Его получали, например, путем инкубирования культуры молочнокислых бактерий Lactobacillus bulgaricus с лизоцимом в течение 1-48 часов при температуре 15-37 градусов и при значении рН 4-8 с последующим отделением от суспензии взвешенных частиц. Полученный таким образом фильтрат содержал N-ацетил-мурамил-пептиды, являющиеся продуктом гидролиза пептидогликанов клеточной стенки молочнокислых бактерий, и при энтеральном применении проявлял иммуностимулирующую активность [патент США 5185321, А 61 К 037/18, 1990 г.]. The product of hydrolysis of the cell wall of lactic acid bacteria by lysozyme as such was previously known and described. It was obtained, for example, by incubating a culture of lactic acid bacteria Lactobacillus bulgaricus with lysozyme for 1-48 hours at a temperature of 15-37 degrees and at a pH value of 4-8, followed by separation of suspended particles from the suspension. The filtrate thus obtained contained N-acetyl-muramyl peptides, which are the product of the hydrolysis of peptidoglycans of the cell wall of lactic acid bacteria, and showed an immunostimulating activity upon enteral administration [US Patent 5185321, A 61 K 037/18, 1990].
Полученный этим известным методом продукт гидролиза клеточной стенки Lactobacillus bulgaricus лизоцимом испытывался на культуре изолированных фибробластов кожи человека. The product of the hydrolysis of the cell wall of Lactobacillus bulgaricus lysozyme obtained by this known method was tested on a culture of isolated human skin fibroblasts.
На фиг. 1 показано влияние испытуемого продукта на пролиферативную активность фибробластов ткани кожи человека. In FIG. Figure 1 shows the effect of the test product on the proliferative activity of fibroblasts in human skin tissue.
Для проведения подобных исследований суспензию фибробластов в среде Игла с 10% эмбриональной телячьей сыворотки вносили в лунки 24-луночного плоскодонного планшета из расчета 2•105 клеток/мл. Эти клетки инкубировали 72 часа при температурю 37oС в атмосфере 3-5% углекислого газа, после чего производили замену среды на среду Игла, содержащую 0,5% сыворотки. Через 48 часов инкубации стимулировали синтез ДНК внесением свежей питательной среды с 0,5% сыворотки, содержащей продукт гидролиза клеточных стенок молочнокислых бактерий лизоцимом.For such studies, a suspension of fibroblasts in Eagle's medium with 10% fetal calf serum was introduced into the wells of a 24-well flat-bottom plate at a rate of 2 × 105 cells / ml. These cells were incubated for 72 hours at a temperature of 37 ° C. in an atmosphere of 3-5% carbon dioxide, after which the medium was replaced with Eagle’s medium containing 0.5% serum. After 48 hours of incubation, DNA synthesis was stimulated by introducing fresh nutrient medium with 0.5% serum containing the product of hydrolysis of the cell walls of lactic acid bacteria by lysozyme.
Концентрация испытуемого продукта гидролиза составляла 250 мкг/мл, 5 мкг/мл и 0,1 мкг/мл, а контролем служила среда Игла без продукта гидролиза. The concentration of the test hydrolysis product was 250 μg / ml, 5 μg / ml and 0.1 μg / ml, and the Eagle medium without the hydrolysis product served as a control.
В каждую из проб вносили 1 мкКи/мл 3Н-тимидина и продолжали инкубирование еще 48 часов, после чего монослой клеток тщательно промывали, клетки фиксировали 5%-ной охлажденной трихлоруксусной кислотой и лизировали добавлением в лунки 0,1 н раствора NаOH. 1 μCi / ml 3H-thymidine was added to each sample and incubation continued for 48 hours, after which the cell monolayer was thoroughly washed, the cells were fixed with 5% chilled trichloroacetic acid and lysed by adding 0.1 N NaOH solution to the wells.
Клетки выдерживали 30 минут при температуре 37oС, а затем лизат в объеме 100 мкл вносили в 2 мл сцинтилляционной жидкости, выдерживали в холодильнике 30 минут и определяли радиоактивность включившегося в ДНК тимидина на жидкостно-сцинтилляционном счетчике.The cells were kept for 30 minutes at a temperature of 37 o C, and then a lysate in a volume of 100 μl was added to 2 ml of scintillation fluid, kept in a refrigerator for 30 minutes and the radioactivity of thymidine incorporated into the DNA was determined on a liquid scintillation counter.
Из полученных результатов следует, что продукт гидролиза клеточных стенок молочнокислых бактерий лизоцимом оказывает выраженный дозозависимый эффект на пролиферативную активность фибробластов и в концентрации 250 мкг/мл увеличивает пролиферацию фибробластов в 2 раза. From the obtained results it follows that the product of hydrolysis of the cell walls of lactic acid bacteria with lysozyme has a pronounced dose-dependent effect on the proliferative activity of fibroblasts and at a concentration of 250 μg / ml increases the proliferation of fibroblasts by 2 times.
На фиг. 2 показано влияние испытуемого продукта на биосинтетическую активность фибробластов ткани кожи человека. In FIG. Figure 2 shows the effect of the test product on the biosynthetic activity of fibroblasts in human skin tissue.
Как частный пример проявления биосинтетической активности был выбран тест на белоксинтезирующую активность фибробластов. As a particular example of the manifestation of biosynthetic activity, a test for the protein synthesizing activity of fibroblasts was chosen.
Для проведения этого опыта суспензию фибробластов в среде Игла с 10% эмбриональной телячьей сыворотки вносили в лунки 24-луночного плоскодонного планшета из расчета 2•105 клеток/мл. Клетки инкубировали 48 часов при температуре 37oС в атмосфере 3-5% углекислого газа до образования сплошного монослоя, после чего производили замену среды на среду Игла, не содержащую сыворотки. Через 24 часа вносили продукт гидролиза клеточных стенок молочнокислых бактерий лизоцимом в концентрации 5 мкг/мл, растворенный в свежей питательной среде Игла без сыворотки.To conduct this experiment, a suspension of fibroblasts in Eagle's medium with 10% fetal calf serum was introduced into the wells of a 24-well flat-bottom plate at a rate of 2 × 105 cells / ml. Cells were incubated for 48 hours at a temperature of 37 o C in an atmosphere of 3-5% carbon dioxide until a continuous monolayer was formed, after which the medium was replaced with a serum-free Eagle medium. After 24 hours, a product of hydrolysis of the cell walls of lactic acid bacteria with lysozyme at a concentration of 5 μg / ml, dissolved in fresh nutrient medium Eagle without serum, was introduced.
В качестве контроля фибробласты помещали в среду Игла, не содержащую испытуемого продукта. As a control, fibroblasts were placed in an Eagle medium containing no test product.
Клетки инкубировали 48 часов при температуре 37oС в атмосфере 3-5% углекислого газа, после чего монослой тщательно промывали и лизировали клетки добавлением в лунки 0,1 н NаOH.Cells were incubated for 48 hours at a temperature of 37 ° C in an atmosphere of 3-5% carbon dioxide, after which the monolayer was thoroughly washed and the cells were lysed by adding 0.1 n NaOH to the wells.
Лизат выдерживали 30 минут при 37oС и затем определяли в лизате содержание суммарного белка методом Лоури.The lysate was held for 30 minutes at 37 ° C. and then the total protein content in the lysate was determined by the Lowry method.
Полученные результаты показывают, что даже такая относительно малая концентрация продукта гидролиза клеточных стенок молочнокислых бактерий лизоцимом как 5 мкг/мл обеспечивает прирост синтеза белка культурой фибробластов на 22,5%. The results show that even such a relatively low concentration of the product of hydrolysis of the cell walls of lactic acid bacteria with lysozyme as 5 μg / ml provides an increase in protein synthesis by fibroblast culture by 22.5%.
Нет оснований полагать, что достигаемые биологические эффекты присущи исключительно гидролизату клеточных стенок Lactobacillus bulgaricus и аналогичные результаты следует ожидать при использовании гидролизатов клеточных стенок и других молочнокислых бактерий, чувствительных к лизоциму. There is no reason to believe that the achieved biological effects are inherent exclusively in the hydrolyzate of the cell walls of Lactobacillus bulgaricus and similar results should be expected when hydrolysates of cell walls and other lactic acid bacteria sensitive to lysozyme are used.
Было известно, что помимо пептидогликанов, формирующих клеточную стенку, молочнокислые бактерии биосинтезируют и внеклеточные водорастворимые пептидогликаны, выделяемые растущими бактериями в культуральную среду. It was known that in addition to peptidoglycans that form the cell wall, lactic acid bacteria biosynthesize and extracellular water-soluble peptidoglycans secreted by growing bacteria into the culture medium.
Обоснованным казалось предположение, что совместное применение продукта гидролиза пептидогликанов клеточной стенки и внеклеточных пептидогликанов может оказаться более эффективным, чем использование каждого из них порознь. It seemed reasonable that the combined use of the product of hydrolysis of cell wall peptidoglycans and extracellular peptidoglycans may be more effective than using each of them separately.
В дальнейшем это предположение подтвердилось и было установлено, что при комбинировании продукта гидролиза клеточных стенок молочнокислых бактерий лизоцимом с внеклеточными водорастворимыми пептидогликанами, выделяемыми растущими молочнокислыми бактериями в культуральную среду, отмечалось усиление пролиферативной и биосинтетической активности фибробластов примерно на 10% по сравнению с результатами, достигаемыми при испытании только продукта гидролиза клеточных стенок молочнокислых бактерий. Further, this assumption was confirmed and it was found that when combining the product of hydrolysis of the cell walls of lactic acid bacteria with lysozyme and extracellular water-soluble peptidoglycans secreted by growing lactic acid bacteria into the culture medium, the proliferative and biosynthetic activity of fibroblasts was increased by approximately 10% compared with the results compared to testing only the product of hydrolysis of the cell walls of lactic acid bacteria.
Внеклеточные водорастворимые пептидогликаны, выделяемые растущими молочнокислыми бактериями в культуральную среду, при желании и необходимости могут быть извлечены из культуральной среды известными методами и средствами. Однако в простейшем случае препаратом внеклеточных пептидогликанов мог служить концентрированный фильтрат культуральной жидкости молочнокислых бактерий. Extracellular water-soluble peptidoglycans secreted by growing lactic acid bacteria into the culture medium, if desired and necessary, can be extracted from the culture medium by known methods and means. However, in the simplest case, a concentrated filtrate of the culture fluid of lactic acid bacteria could serve as a preparation of extracellular peptidoglycans.
Поскольку фибробласты составляют основу ткани кожи, было высказано обоснованное предположение, что косметические и дерматологические средства на основе комбинации описанных продуктов окажутся эффективными при лечении заболеваний и состояний, связанных с нарушениями нормального функционирования кожной ткани. Since fibroblasts form the basis of skin tissue, a reasonable assumption has been made that cosmetic and dermatological products based on a combination of the described products will be effective in treating diseases and conditions associated with impaired normal functioning of skin tissue.
Исследования, проведенные в Научно-исследовательском институте медицины труда РАН на практически здоровых добровольцах, не имеющих каких-либо патологических кожных изменений, показали, в частности, что при использовании косметического крема с комбинацией продуктов гидролиза лизоцимом клеточных стенок молочнокислых бактерий и внеклеточных водорастворимых пептидогликанов, выделяемых растущими молочнокислыми бактериями в культуральную среду, практически у половины добровольцев с сухой кожей наблюдалась тенденция к нормализации уровня липидов и гидрантности в поверхностных слоях кожи. Studies conducted at the Research Institute of Occupational Medicine of the Russian Academy of Sciences on healthy volunteers who do not have any pathological skin changes showed, in particular, that when using a cosmetic cream with a combination of lysozyme hydrolysis products of the cell walls of lactic acid bacteria and extracellular water-soluble peptidoglycans secreted growing lactic acid bacteria into the culture medium, almost half of the volunteers with dry skin showed a tendency to normalize hearing lipids and hydration in the surface layers of the skin.
Было отмечено также, что наличие в косметических кремах комбинации упомянутых продуктов придает кремам способность оптимизировать свободнорадикальные процессы в ткани кожи и осуществлять их антиоксидантную защиту. It was also noted that the presence of a combination of these products in cosmetic creams gives creams the ability to optimize free radical processes in skin tissue and to provide their antioxidant protection.
Цитохимическое обследование показателей метаболической активности иммунокомпетентных клеток показало, что известная иммуностимулирующая способность продукта гидролиза лизоцимом клеточных стенок молочнокислых бактерий сохраняется и при применении этого соединения наружно в составе косметических средств, что вытекает из результатов, представленных в таблице. A cytochemical examination of the metabolic activity of immunocompetent cells showed that the known immunostimulating ability of the product of lysozyme hydrolysis of the cell walls of lactic acid bacteria also remains when using this compound externally as a part of cosmetics, which follows from the results presented in the table.
Из представленных результатов следует, в частности, что даже в условиях кратковременного опыта (длительность 3 недели) отмечается тенденция повышения активности ферментов энергетического обмена у здоровых людей при местном воздействии на кожу продукта гидролиза лизоцимом клеточных стенок молочнокислых бактерий. From the presented results it follows, in particular, that even under short-term experience (duration 3 weeks), there is a tendency to increase the activity of energy metabolism enzymes in healthy people with local effects on the skin of the hydrolysis product of lysozyme cell walls of lactic acid bacteria.
Прирост активности исследованных ферментов при дополнительном включении в состав испытуемого косметического средства внеклеточных водорастворимых пептидогликанов, выделяемых растущими молочнокислыми бактериями в культуральную среду, составлял 3-5%. При этом следует иметь в виду, что исследования проводились на здоровых добровольцах, не имеющих иммунных нарушений, и оснований ожидать более высоких результатов не имелось. The increase in the activity of the studied enzymes with the additional inclusion of extracellular water-soluble peptidoglycans secreted by growing lactic acid bacteria into the culture medium in the composition of the test cosmetic was 3-5%. It should be borne in mind that the studies were conducted on healthy volunteers who did not have immune disorders, and there was no reason to expect higher results.
Таким образом, показано, что комбинация продукта гидролиза клеточных стенок молочнокислых бактерий лизоцимом и внеклеточных водорастворимых пептидогликанов, выделяемых растущей культурой молочнокислых бактерий в культуральную среду, способна нормализовывать функции клеток ткани кожи путем различных биохимических механизмов и включение этой комбинации продуктов в состав косметических и дерматологических препаратов придает дополнительные полезные свойства как профилактическим, так и лечебным препаратам. Thus, it has been shown that the combination of the product of hydrolysis of the cell walls of lactic acid bacteria with lysozyme and extracellular water-soluble peptidoglycans secreted by a growing culture of lactic acid bacteria in the culture medium is able to normalize the functions of skin tissue cells by various biochemical mechanisms and the inclusion of this combination of products in cosmetic and dermatological preparations gives additional useful properties of both prophylactic and therapeutic drugs.
Приводимый ниже пример только иллюстрирует сущность предложения и не должен носить ограничивающего характера. The following example only illustrates the essence of the proposal and should not be restrictive.
Пример. Для получения биомассы молочнокислых бактерий культуру Lactobacillus bulgaricus выращивают на обезжиренном молоке в течение 10 часов при температуре 45oС. Полученная таким образом культуральная жидкость содержит 7,5•1010 клеток/мл.Example. To obtain the biomass of lactic acid bacteria, the culture of Lactobacillus bulgaricus is grown in skim milk for 10 hours at a temperature of 45 o C. The culture fluid obtained in this way contains 7.5 • 1010 cells / ml.
Культуральную жидкость сепарируют, концентрируют путем упаривания и лиофильно высушивают, а отделенную биомассу молочнокислых бактерий подвергают трем циклам "замораживание-оттаивание" для разрушения клеток, после чего осадок отделяют центрифугированием при 3000 g. The culture fluid is separated, concentrated by evaporation and freeze-dried, and the separated biomass of lactic acid bacteria is subjected to three freeze-thaw cycles to destroy the cells, after which the precipitate is separated by centrifugation at 3000 g.
Осадок заливают ацетоном (из расчета 1 л ацетона на 1 кг осадка), смесь перемешивают на магнитной мешалке и затем ацетон удаляют декантацией, добиваясь в конечном счете освобождения продукта от липидов. The precipitate is poured with acetone (at the rate of 1 l of acetone per 1 kg of precipitate), the mixture is stirred on a magnetic stirrer and then acetone is removed by decantation, ultimately achieving the liberation of the product from lipids.
Полученный порошок суспендируют в воде и инкубируют с лизоцимом (из расчета 1 г лизоцима на 1 л раствора) при температуре 37oС в течение 10 часов для гидролиза клеточных стенок бактерий.The resulting powder is suspended in water and incubated with lysozyme (based on 1 g of lysozyme per 1 liter of solution) at a temperature of 37 o C for 10 hours to hydrolyze the bacterial cell walls.
После завершения гидролиза взвешенные частицы удаляют центрифугированием при 3000 g, а раствор, содержащий продукты гидролиза клеточных стенок молочнокислых бактерий, лиофильно высушивают. After hydrolysis is complete, the suspended particles are removed by centrifugation at 3000 g, and the solution containing the hydrolysis products of the cell walls of lactic acid bacteria is freeze-dried.
Полученный описанным образом продукт гидролиза лизоцимом клеточных стенок молочнокислых бактерий и концентрат внеклеточных пептидогликанов включают в состав косметического крема, содержащего 0,05 г продукта гидролиза лизоцимом клеточных стенок молочнокислых бактерий, 1,0 г концентрата внеклеточных водорастворимых пептидогликанов, 0,4 г карбопола, 2 г глицерина, 1 г гермабена, 2,5 г пропиленгликоля, 2 г сорбитола, 0,35 г триэтаноламина, 0,1 г аквафтема и воду до 100 г. The product of hydrolysis of cell walls of lactic acid bacteria by lysozyme and the extracellular peptidoglycan concentrate obtained as described above are included in a cosmetic cream containing 0.05 g of product of hydrolysis of cell walls of lactic acid bacteria by lysozyme, 1.0 g of extracellular water-soluble peptidoglycans concentrate, 0.4 g of carbopol, 2 g glycerol, 1 g of germaben, 2.5 g of propylene glycol, 2 g of sorbitol, 0.35 g of triethanolamine, 0.1 g of aquaftem and water up to 100 g.
Приготовленный таким образом крем представляет собою однородную гелеобразную полупрозрачную массу. The cream prepared in this way is a homogeneous gel-like translucent mass.
Этот крем предназначен для ухода за нормальной и сухой кожей, в особенности при признаках старения и увядания кожи. This cream is designed to care for normal to dry skin, especially with signs of aging and aging of the skin.
В доступной патентной и научно-технической литературе заявитель не обнаружил сведений о стимулирующем влиянии продукта гидролиза клеточной стенки молочнокислых бактерий лизоцимом или его комбинации с внеклеточными водорастворимыми пептидогликанами, выделяемыми растущими молочнокислыми бактериями в культуральную среду, на функциональную активность фибробластов и об использовании такого или аналогичного продукта для нормализации нарушенных функций ткани кожи в косметологической и дерматологической практике. In the patent and scientific literature available, the applicant did not find information on the stimulating effect of the product of hydrolysis of the cell wall of lactic acid bacteria with lysozyme or its combination with extracellular water-soluble peptidoglycans secreted by growing lactic acid bacteria in the culture medium on the functional activity of fibroblasts and on the use of such or similar product normalization of impaired functions of skin tissue in cosmetology and dermatological practice.
На этом основании заявитель полагает, что его предложение соответствует требованиям, предъявляемым к изобретению. On this basis, the applicant believes that his proposal meets the requirements of the invention.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001134287A RU2197953C1 (en) | 2001-12-21 | 2001-12-21 | Agent normalizing skin tissue cell function |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001134287A RU2197953C1 (en) | 2001-12-21 | 2001-12-21 | Agent normalizing skin tissue cell function |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2197953C1 true RU2197953C1 (en) | 2003-02-10 |
Family
ID=20254777
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001134287A RU2197953C1 (en) | 2001-12-21 | 2001-12-21 | Agent normalizing skin tissue cell function |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2197953C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2290169C1 (en) * | 2005-06-23 | 2006-12-27 | Открытое Акционерное Общество "Фаберлик" | Cosmetic and/or dermatological agent and antioxidant |
| RU2299724C1 (en) * | 2005-11-14 | 2007-05-27 | Открытое Акционерное Общество "Фаберлик" | Agent improving physiological state of skin cells |
| RU2314792C1 (en) * | 2006-06-23 | 2008-01-20 | Александр Иванович Леляк | Curative-cosmetic preparation |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2026665C1 (en) * | 1992-01-29 | 1995-01-20 | Межотраслевой научно-производственный комплекс "Приоритет" | Method of curative prophylactic treatment of facial and cervical skin |
| RU2110182C1 (en) * | 1997-04-03 | 1998-05-10 | Сергей Петрович Маев | Method of preparing biologically active complex for the food or cosmetic agent making |
| RU97118172A (en) * | 1997-10-30 | 1999-08-10 | Закрытое акционерное общество Научно-производственный центр "Сибирская природная косметика" | COSMETIC CREAM FOR SKIN CARE ON THE BASIS OF CELLULAR DETRITIS OF MILK-ACID BACTERIA |
| RU2140256C1 (en) * | 1997-06-10 | 1999-10-27 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственный центр "Сибирская природная косметика" | Cosmetic agent didilia for skin |
| RU2161887C1 (en) * | 2000-07-06 | 2001-01-20 | Алешкин Владимир Андрианович | Biologically-active additive |
-
2001
- 2001-12-21 RU RU2001134287A patent/RU2197953C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2026665C1 (en) * | 1992-01-29 | 1995-01-20 | Межотраслевой научно-производственный комплекс "Приоритет" | Method of curative prophylactic treatment of facial and cervical skin |
| RU2110182C1 (en) * | 1997-04-03 | 1998-05-10 | Сергей Петрович Маев | Method of preparing biologically active complex for the food or cosmetic agent making |
| RU2140256C1 (en) * | 1997-06-10 | 1999-10-27 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственный центр "Сибирская природная косметика" | Cosmetic agent didilia for skin |
| RU97118172A (en) * | 1997-10-30 | 1999-08-10 | Закрытое акционерное общество Научно-производственный центр "Сибирская природная косметика" | COSMETIC CREAM FOR SKIN CARE ON THE BASIS OF CELLULAR DETRITIS OF MILK-ACID BACTERIA |
| RU2161887C1 (en) * | 2000-07-06 | 2001-01-20 | Алешкин Владимир Андрианович | Biologically-active additive |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Косметика и потребитель, 1998, №3, с.8. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2290169C1 (en) * | 2005-06-23 | 2006-12-27 | Открытое Акционерное Общество "Фаберлик" | Cosmetic and/or dermatological agent and antioxidant |
| RU2299724C1 (en) * | 2005-11-14 | 2007-05-27 | Открытое Акционерное Общество "Фаберлик" | Agent improving physiological state of skin cells |
| RU2314792C1 (en) * | 2006-06-23 | 2008-01-20 | Александр Иванович Леляк | Curative-cosmetic preparation |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR20210066750A (en) | Novel use of milk exosome | |
| WO2020002429A1 (en) | Lactobacillus plantarum for skin care | |
| WO2021104214A1 (en) | Use of exosome derived from carcass in skin regulation product | |
| CN111278326A (en) | Yeast-based mask for skin, hair and scalp health | |
| KR20180108504A (en) | Fermented product of colostrum and a cosmetic composition using the same | |
| KR101336804B1 (en) | Fermented ear shell using mushroom, manufacturing method thereof and cosmetic composition comprising the same | |
| KR101929657B1 (en) | Skin external agent for improving skin wrinkle comprising an extract of fermented wheat germ | |
| KR101263547B1 (en) | Cosmetic composition comprising green tea seed coater extract having anti-oxidative or anti-inflammatory activity | |
| KR101911078B1 (en) | Composition for improving acneform skin conditions Comprising Complex Extracts of Swallow's Nest as Active Ingredient | |
| KR102311097B1 (en) | Aerobic fermented product of colostrum | |
| KR101437997B1 (en) | Fermented caviar extract and its cosmetic usage | |
| KR20220073983A (en) | Composition for enhancing the skin microbiome function comprising the fermented rice using lactobacillus | |
| RU2197953C1 (en) | Agent normalizing skin tissue cell function | |
| JP2024525082A (en) | Bacterial strains for topical skin care | |
| JP2003012532A (en) | Hyaluronidase inhibitor, hexosaminidase liberation inhibitor, cyclic amp phosphodiesterase inhibitor and cosmetic for ameliorating skin roughening | |
| KR101293007B1 (en) | Anti-oxidant and anti-wrinkle composition comprising a fermented juice of jujube fruit | |
| KR101292944B1 (en) | skin-whitening, anti-bacterial and anti-inflammatory composition comprising a fermented juice of grape | |
| KR100773411B1 (en) | NH herbal composition showing antioxidant, anticancer and antimicrobial effects | |
| RU2197225C1 (en) | Preparation normalizing the functions of cutaneous tissue cells | |
| KR100714172B1 (en) | Cosmetic composition having the effect of inhibiting wrinkles and improving | |
| KR20230043873A (en) | Bombax costatum flower extract rich in polysaccharides | |
| KR100723370B1 (en) | Cosmetic composition containing golden and yellow lotus extract having skin moisturizing and antibacterial effect | |
| CN120005777B (en) | Kruskal Lactobacillus W182, W182 lysate and their applications | |
| KR100773406B1 (en) | CH composition showing antioxidant, anticancer and antimicrobial effects | |
| KR102661205B1 (en) | Cosmetic compostion for improving skin immune system, and its preparation method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20071222 |