[go: up one dir, main page]

RU2195666C2 - Method of integrated diagnostics of allergy in children with infection pathology - Google Patents

Method of integrated diagnostics of allergy in children with infection pathology

Info

Publication number
RU2195666C2
RU2195666C2 RU2000123618A RU2000123618A RU2195666C2 RU 2195666 C2 RU2195666 C2 RU 2195666C2 RU 2000123618 A RU2000123618 A RU 2000123618A RU 2000123618 A RU2000123618 A RU 2000123618A RU 2195666 C2 RU2195666 C2 RU 2195666C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
allergy
children
allergies
histidine
igg
Prior art date
Application number
RU2000123618A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2000123618A (en
Inventor
Н.С. Мотавкина
Г.И. Чубенко
Original Assignee
Амурская государственная медицинская академия
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Амурская государственная медицинская академия filed Critical Амурская государственная медицинская академия
Priority to RU2000123618A priority Critical patent/RU2195666C2/en
Publication of RU2000123618A publication Critical patent/RU2000123618A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2195666C2 publication Critical patent/RU2195666C2/en

Links

Images

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: pediatrics. SUBSTANCE: invention consists in determining histidine-decarboxylase activity in microorganism culture obtained from patient, levels of IgG and IgE, eosinophiles, basophiles, and index of total allergic tendency of organism. Allergy is diagnosed when values of all characteristics exceed age norms. EFFECT: enabled integrated character of diagnostics. 4 tbl, 4 ex

Description

Изобретение относится к области медицины, в частности к комплексной диагностике аллергической патологии у детей. The invention relates to medicine, in particular to a comprehensive diagnosis of allergic pathology in children.

Известны способы диагностики аллергического статуса клиническими методами, основанными на испытании аллергенов непосредственно на больном (1). Недостатками известных методов являются определенная опасность для здоровья, провокация обострения заболевания, реактогенность, большое число испытуемых аллергенов, длительная возможность подбора специфического аллергена для десенсибилизации, постановка in vivo и др. Known methods for diagnosing allergic status with clinical methods based on testing allergens directly on the patient (1). The disadvantages of the known methods are a certain health hazard, provocation of an exacerbation of the disease, reactogenicity, a large number of allergens tested, the long-term possibility of selecting a specific allergen for desensitization, in vivo formulation, etc.

Предлагаемый способ диагностики аллергических состояний отличается рядом преимуществ перед существующими: полностью исключается опасность для здоровья, реактогенность, провокация обострений, постановка его осуществляется in vitro доступными методами. The proposed method for the diagnosis of allergic conditions has a number of advantages over the existing ones: the health hazard, reactogenicity, aggravation of exacerbations are completely eliminated, its formulation is carried out in vitro by available methods.

Формирование аллергического статуса у ребенка может быть следствием перенесенной инфекции, сенсибилизации промежуточными или конечными продуктами обмена, микробными или другими аллергенами. Внешние проявления аллергии могут носить разный характер. The formation of an allergic status in a child can be a consequence of a previous infection, sensitization by intermediate or final metabolic products, microbial or other allergens. External manifestations of allergies can be of a different nature.

Индикаторами формирования аллергии как патогенетического фактора могут служить свидетели аллергической настроенности организма - эозинофилы, базофилы, реагины из числа иммуноглобулинов различных классов, в частности IgЕ, IgG, обнаружение аллергоопасных биологически активных веществ, освобождаемых микроорганизмами под влиянием гистидин-декарбоксилазы (гистамин). Indicators of the formation of allergies as a pathogenetic factor can be witnesses of the body's allergic mood - eosinophils, basophils, reagins from among immunoglobulins of various classes, in particular IgE, IgG, detection of allergically biologically active substances released by microorganisms under the influence of histidine decarboxylase (histamine).

Целью настоящего изобретения явилась разработка комплексного способа диагностики аллергии у детей на основе изучения гистидиндекарбоксилазной активности возбудителей основного или сопутствующих инфекционных заболеваний, уровня индикаторов аллергии - эозинофилов и базофилов, также изучения концентрации наиболее доступных и частых участников аллергических процессов особенно цитотоксического генеза-IgG. The aim of the present invention was to develop a comprehensive method for diagnosing allergies in children based on the study of histidine decarboxylase activity of pathogens of the main or concomitant infectious diseases, the level of allergy indicators - eosinophils and basophils, as well as studying the concentration of the most accessible and frequent participants in allergic processes, especially cytotoxic genesis of IgG.

Диагностическое значение перечисленного комплекса отработано нами на примере или модели острых и хронических кишечных инфекций у детей с разнообразной этиологией - шигеллезной (разных видов), сальмонеллезной, гастроэнтеритах, вызванных условно-патогенной микрофлорой: разными видами стафилококков, представителями семейства Enterobacteriaceae (эшерихии, клебсиеллы, цитробактеры, эдвардсиеллы и др.)
Примеры конкретного действия.
The diagnostic value of the above complex was worked out by us as an example or model of acute and chronic intestinal infections in children with a variety of etiologies - shigellosis (of various types), salmonella, gastroenteritis caused by opportunistic microflora: different types of staphylococci, representatives of the Enterobacteriaceae family (Escherichia, Klebsbella, , edwardsiella, etc.)
Examples of specific action.

Выполнение способа производится в несколько этапов, последовательных или одновременных:
1 этап может быть выполнен в двух вариантах:
1.1 Выделение в баклаборатории чистых культур возбудителей производится по традиционной схеме с последующей идентификацией микробного рода и вида (Равич-Биргер, 1994);
1.2 Посев культуры, инкубация в термостате, смыв выросших микробов 0,5% изотоническим раствором NaCl или 0,85% физиологическим раствором.
The implementation of the method is carried out in several stages, sequential or simultaneous:
Stage 1 can be performed in two versions:
1.1 Isolation in the laboratory of pure cultures of pathogens is carried out according to the traditional scheme with subsequent identification of the microbial genus and species (Rawicz-Birger, 1994);
1.2 Sowing culture, incubation in a thermostat, washing off the grown microbes with 0.5% isotonic NaCl or 0.85% saline.

2 этап. Определение гистидиндекарбоксилазной активности чистой выделенной культуры микробов или смытой микробной взвеси ускоренным методом в описании В. М. Никитина (1986)(3). Поскольку метод малоизвестен, описываем его принципы и последовательность. 2 stage. Determination of histidine decarboxylase activity of a pure isolated microbial culture or washed microbial suspension by the accelerated method in the description of V.M. Nikitin (1986) (3). Since the method is little known, we describe its principles and sequence.

Принцип метода заключается во взаимодействии бактериальных гистидиндекарбоксилаз с аминокислотой гастидином, в процессе которого происходит его дезаминирование. Под влиянием добавленного реактива Несслера освобождаются амины, в данном случае гистамин, выпадающие в виде мутного осадка, который регистрируется либо простым глазом, либо на аппарате ФЭК-56. The principle of the method is the interaction of bacterial histidine decarboxylases with the amino acid gastidine, during which its deamination occurs. Under the influence of the added Nessler reagent, amines are released, in this case histamine, which precipitates in the form of a cloudy precipitate, which is recorded either with a simple eye or with an FEK-56 apparatus.

Последовательность выполнения реакции:
1. Суточную культуру микробов (или смесь) смывают изотоническим раствором, или дистиллированной водой, или ацетатным буфером с рН 5,4. Дважды отмывают в нем центрифугированием.
Reaction sequence:
1. The daily microbial culture (or mixture) is washed off with an isotonic solution, or with distilled water, or with an acetate buffer with a pH of 5.4. It is washed twice by centrifugation.

2. Отмытый бактериальный осадок ресуспендируют в 5-6 мл ацетатного буфера и разливают по 2 пробиркам по 1,5-2 мл. 2. The washed bacterial sediment is resuspended in 5-6 ml of acetate buffer and poured into 2 test tubes of 1.5-2 ml each.

3. В первую пробирку вносят 0,1 мл 0,02 М раствора гистидина. Во второй пробирке (контроль) культуру убивают кипячением, остужают и также добавляют ту же аминокислоту. 3. In the first test tube add 0.1 ml of a 0.02 M histidine solution. In the second test tube (control), the culture is killed by boiling, cool and the same amino acid is also added.

4. Пробирки встряхивают, инкубируют при + 37oС в течение часа.4. The tubes are shaken, incubated at + 37 o C for one hour.

5. Пробирки с содержимым центрифугируют при 2000-3000 тыс. об/мин. в течение 10-20 мин. 5. Tubes with contents are centrifuged at 2000-3000 thousand rpm. within 10-20 minutes

6. Берут 0,1-0,2 мл надосадочного субстрата приливают дистиллированную воду до 2 мл и 0,2 мл реактива Несслера. 6. Take 0.1-0.2 ml of the supernatant; pour distilled water to 2 ml and 0.2 ml of Nessler's reagent.

7. Учет результатов проводят на ФЭК-56 против контрольной (кипяченой) пробы при длине волны 400 нм. 7. The results are taken into account on FEK-56 against the control (boiled) sample at a wavelength of 400 nm.

3 этап. Определение IgG и IgЕ по Mancini с соавт. (1965) (4) проводится традиционно способом иммунодиффузии реагентов- антигена (сыворотка крови больного) с антителами (антиглобулиновая сыворотка) при наличии и в сравнении с заведомо положительными пробами. 3 stage. Determination of IgG and IgE by Mancini et al. (1965) (4) is carried out traditionally by the method of immunodiffusion of antigen reagents (patient's blood serum) with antibodies (antiglobulin serum) in the presence and in comparison with obviously positive samples.

Учет результатов производится в отличие от традиционного с учетом возрастной нормы по Ig G (Лебедев К.А, Понякина И.Д., 1990)(2). The results are taken into account in contrast to the traditional one, taking into account the age norm for Ig G (Lebedev K.A., Ponyakina I.D., 1990) (2).

Дети до 1 года 4,24±0,15 г/л;
1-3 года 9,45±0,27 г/л;
7-10 лет 7,82±0,35 г/л;
11-14 лет 9,25±0,38 г/л;
взрослые 6-12 г/л.
Children under 1 year of age 4.24 ± 0.15 g / l;
1-3 years 9.45 ± 0.27 g / l;
7-10 years old 7.82 ± 0.35 g / l;
11-14 years old 9.25 ± 0.38 g / l;
adults 6-12 g / l.

4 этап. Цитограммное содержание индикаторных клеток в мазке крови, окрашенном по Романовскому-Гимзе. Поиск с помощью микроскопа или автоматического анализатора. Подсчет клеток крови осуществляется традиционно. Но при оценке результатов также должна учитываться возрастная норма (Лебедев К.А. с соавт, 1990) (см. табл. А). 4th stage. Cytogram content of indicator cells in a blood smear stained by Romanovsky-Giemsa. Search using a microscope or an automatic analyzer. Blood cell counting is carried out traditionally. But when evaluating the results, the age norm should also be taken into account (K. Lebedev et al., 1990) (see Table A).

При использовании способа для диагностики аллергии у взрослого контингента больных возрастные нормы Ig и клеток крови можно найти в том же руководстве. When using the method for diagnosing allergies in an adult population of patients, the age-related norms of Ig and blood cells can be found in the same manual.

Комплексная оценка полученных данных и постановка диагноза проводится по совокупности превышения показателей уровней IgG, IgЕ, удельного веса клеточных индикаторов аллергии - эозинофилов и базофилов, а также гистидин-декарбоксилазной активности возбудителей и(или)сопутствующей микрофлоры. Последний показатель весьма важен как для специфической десенсибилизации организма, так и для патогенетической терапии (гистаминаза). A comprehensive assessment of the obtained data and diagnosis is made on the basis of the excess of indicators of IgG, IgE levels, the specific gravity of cellular allergy indicators - eosinophils and basophils, as well as histidine-decarboxylase activity of pathogens and (or) concomitant microflora. The latter indicator is very important both for specific desensitization of the body, and for pathogenetic therapy (histaminase).

Пример II конкретного действия
При выделении чистой культуры возбудителей и контроля их гистидиндекарбоксилазной активности следует ориентироваться на родо-видовую принадлежность испытуемых культур, частоту дезаминирования ими аминокислоты гистидина (табл.1).
Case Study II
When isolating a pure culture of pathogens and controlling their histidine decarboxylase activity, one should be guided by the genus-species affiliation of the tested cultures, the frequency of deamination of histidine amino acids by them (Table 1).

Пример III конкретного действия
При различной тяжести течения дисбиозов степень дезаминирования гистидина бактериями неоднозначна. Это необходимо учитывать в процессе оценки возможной природы аллергического статуса (табл.2).
Case Study III
With varying severity of the course of dysbiosis, the degree of histamine deamination by bacteria is ambiguous. This must be taken into account in the process of assessing the possible nature of allergic status (Table 2).

Исходя из приведенных данных, аллергозы при I степени дисбиоза практически не возникают, за исключением случаев стафилококковой природы, которые в 1/4 части связаны с дезаминирующей активностью декарбоксилаз. Не отмечено последней и при участии в этиологии дисбиозов III степени тяжести микробов родов Acinetobacter, Edwardsiella, Providencia. Based on the data presented, allergoses with I degree of dysbiosis practically do not occur, with the exception of cases of staphylococcal nature, which are 1/4 related to the deaminating activity of decarboxylases. Not noted last and with the participation in the etiology of dysbiosis III severity of microbes of the genera Acinetobacter, Edwardsiella, Providencia.

Пример IV конкретного действия способа, связанный с применением его с учетом клинических проявлений аллергозов, сочетанных или возникающих на фоне дисбиоза (табл.3)
Очень важное значение в оценке аллергических состояний имеет еще один показатель реактивности - функциональная оценка аллергической настроенности организма - АНО, которое рассчитывается по данным гемограммы согласно формулы Н.П. Мель (1984).
Example IV of the specific action of the method associated with its application, taking into account the clinical manifestations of allergies, combined or occurring against the background of dysbiosis (table 3)
Another indicator of reactivity is very important in assessing allergic conditions - a functional assessment of the body’s allergic mood - ANO, which is calculated according to the hemogram according to the formula N.P. Mel (1984).

Figure 00000001

Для чего подсчитывается число эозинофилов, базофилов и находится их соотношение с общим количеством лейкоцитов.
Figure 00000001

Why is the number of eosinophils, basophils counted and their ratio with the total number of leukocytes is found.

Примером характеристики АНО при аллергозах разного типа на фоне дисбиозов у детей могут служить следующие показатели (табл.4). The following indicators can serve as an example of the characteristics of ANO for allergies of a different type against the background of dysbiosis in children (Table 4).

Используемая литература
1. Адо А.Д. Общая и частная аллергология, М., Медгиз, 1983.
Used Books
1. Ado A.D. General and private allergology, M., Medgiz, 1983.

2. Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунограмма в клинической практике, М., Изд. "Наука", 254 с. 2. Lebedev K.A., Ponyakina I.D. The immunogram in clinical practice, M., Ed. Science, 254 pp.

3. Никитин В.М. Справочник методов биохимической экспресс-индикации микробов 1986, с.201. 3. Nikitin V.M. Handbook of methods for biochemical express indication of microbes 1986, p. 2018.

4. Mancini G, Carbonare А.О., Haremans J.F. Immunochemical guatiation of antigens by single radial diffusion. - Immunochemistry, 1965, v.2, p.235. 4. Mancini G, Carbonare A.O., Haremans J.F. Immunochemical guatiation of antigens by single radial diffusion. - Immunochemistry, 1965, v. 2, p. 235.

Claims (1)

Способ комплексной клинико-лабораторной диагностики аллергии у детей с инфекционным заболеванием, отличающийся тем, что определяют гистидин-декарбоксилазную активность культуры микроорганизма, выделенного от больного, уровень IgG, IgE, а также уровень цитологических индикаторов аллергии-эозинофилов, базофилов, их интегральную роль в развитии общей аллергической настроенности организма (АНО) и при превышении определяемыми величинами возрастной нормы диагностируют аллергию. A method for the comprehensive clinical and laboratory diagnosis of allergies in children with an infectious disease, characterized in that the histidine-decarboxylase activity of the culture of the microorganism isolated from the patient is determined, the level of IgG, IgE, as well as the level of cytological indicators of allergy-eosinophils, basophils, their integral role in the development the general allergic mood of the body (ANO) and when exceeding the defined values of the age norm, allergies are diagnosed.
RU2000123618A 2000-09-13 2000-09-13 Method of integrated diagnostics of allergy in children with infection pathology RU2195666C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2000123618A RU2195666C2 (en) 2000-09-13 2000-09-13 Method of integrated diagnostics of allergy in children with infection pathology

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2000123618A RU2195666C2 (en) 2000-09-13 2000-09-13 Method of integrated diagnostics of allergy in children with infection pathology

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2000123618A RU2000123618A (en) 2002-08-20
RU2195666C2 true RU2195666C2 (en) 2002-12-27

Family

ID=20240045

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2000123618A RU2195666C2 (en) 2000-09-13 2000-09-13 Method of integrated diagnostics of allergy in children with infection pathology

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2195666C2 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2266046C1 (en) * 2004-12-20 2005-12-20 Пашковский Олег Евгеньевич Method for diagnosing allergy cases
RU2299440C1 (en) * 2005-12-28 2007-05-20 Александр Васильевич Куяров Determination of bacterial histidine decarboxylase activity

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2464559C1 (en) * 2011-06-16 2012-10-20 Государственное общеобразовательное учреждение высшего профессионального образования Ставропольский государственный университет Method for assessing morphofunctional activity of eosinophils in helminthosis

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2098826C1 (en) * 1994-06-29 1997-12-10 Нижегородский научно-исследовательский институт гигиены и профпатологии Method for diagnosing allergic diseases
US5714338A (en) * 1993-12-10 1998-02-03 Genentech, Inc. Methods for diagnosis of allergy

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5714338A (en) * 1993-12-10 1998-02-03 Genentech, Inc. Methods for diagnosis of allergy
RU2098826C1 (en) * 1994-06-29 1997-12-10 Нижегородский научно-исследовательский институт гигиены и профпатологии Method for diagnosing allergic diseases

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ТИТОВ Л.П. и др. Особенности иммунного статуса у часто и длительно болеющих детей с сопутствующей аллергической патологией. - Иммунология, 2000, №3, с.29-33. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2266046C1 (en) * 2004-12-20 2005-12-20 Пашковский Олег Евгеньевич Method for diagnosing allergy cases
RU2299440C1 (en) * 2005-12-28 2007-05-20 Александр Васильевич Куяров Determination of bacterial histidine decarboxylase activity

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Casals et al. Significance of antibody to DNA in systemic lupus erythematosus
Stoneham et al. Measurement of serum amyloid A in the neonatal foal using a latex agglutination immunoturbidimetric assay: determination of the normal range, variation with age and response to disease
LEWIS et al. Hemagglutination in the diagnosis of toxoplasmosis and amebiasis
Card PPLO of human genital origin: serological classification of strains and antibody distribution in man
Devi et al. A new serum hydatid antigen detection test for diagnosis of cystic echinococcosis
Kelly et al. Qualitative testing for circulating immune complexes by use of zone electrophoresis on agarose.
Schaus GRIESS'NITRITE TEST IN DIAGNOSIS OF URINARY INFECTION
Silliker et al. The Fluorescent Antibody Techniaue as a Means of Detecting Salmonellae in Foods
RU2195666C2 (en) Method of integrated diagnostics of allergy in children with infection pathology
Van Vleck et al. A study of the reactions of human polymorphonuclear leukocytes to various allergens
RU2018844C1 (en) Method for diagnostics anemia at children
RU2206092C2 (en) Method for in vitro detecting intolerance to nutrient antigen
RU2289138C2 (en) Method for allergodiagnostics by the values of chemiluminescent phosphorescence of neutrophils
JP2000088854A (en) High sensitive immunological detection measuring method for microorganism (bacteria, fungus, virus, producing substance) and quantitative method
RU2144190C1 (en) Method of diagnosis of staphylococcus infection
RU2008684C1 (en) Method for diagnosis of yersiniosis
RU2136000C1 (en) Method of immunodiagnosis of infections
Kleine‐Tebbe et al. Comparison of fiberglass‐based histamine assay with a conventional automated fluorometric histamine assay, case history, skin prick test, and specific serum IgE in patients with milk and egg allergic reactions
RU2009492C1 (en) Method for correction of syphilis treatment
SU1197640A1 (en) Method of diagnosis of allergy
JPS59501229A (en) Novel diagnostic reagent for parasitic diseases and allergic diseases, method for producing the same, and method for diagnosing parasitic diseases and allergic diseases using the reagents
US20200347430A1 (en) Methods and compositions for improving detection of microorganisms
RU2239191C2 (en) Method for evaluating indirect antigen-specific rosette-formation in neutrophils at astrakhan fever and viral hepatitis b
SU1749834A1 (en) Method for phagocytic activity of neutrophils
Dave Identification of different diseases by lateral flow assay