[go: up one dir, main page]

RU2185191C1 - Method of preparing antigenic preparation haemophilus influenzae type b (hib) - Google Patents

Method of preparing antigenic preparation haemophilus influenzae type b (hib) Download PDF

Info

Publication number
RU2185191C1
RU2185191C1 RU2001102923A RU2001102923A RU2185191C1 RU 2185191 C1 RU2185191 C1 RU 2185191C1 RU 2001102923 A RU2001102923 A RU 2001102923A RU 2001102923 A RU2001102923 A RU 2001102923A RU 2185191 C1 RU2185191 C1 RU 2185191C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
hib
polysaccharide
preparing
antigenic preparation
haemophilus influenzae
Prior art date
Application number
RU2001102923A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Э.А. Яговкин
Б.Ф. Вачаев
А.П. Шепелев
С.В. Головина
В.В. Алешня
Н.В. Медуницын
Р.П. Чупрынина
Т.И. Немировская
Н.И. Храмова
Original Assignee
Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии
Научно-производственное предприятие "Биомед"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии, Научно-производственное предприятие "Биомед" filed Critical Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии
Priority to RU2001102923A priority Critical patent/RU2185191C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2185191C1 publication Critical patent/RU2185191C1/en

Links

Images

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

FIELD: medicinal microbiology, vaccines. SUBSTANCE: for preparing an antigenic preparation type B (Hib) microorganisms are cultured in liquid nutrient media and exogenous polysaccharide is extracted from obtained biomass by ultrafiltration on molecular fiber filters. Cell concentrate is treated with of sodium chloride 2.5% solution with EDTA sodium salt and capsule polysaccharide Hib in its complex with protein is isolated from obtained extract by ultrafiltration followed by combination of capsule polysaccharide with exogenous polysaccharide Hib in ratio 1:1. Method ensures to prepare an antigenic preparation showing high antigenic activity that is useful for immunization and development of immunobiological preparation. Invention can be used for vaccine preparations preparing. EFFECT: improved method of preparing, high antigenic activity. 2 dwg, 3 tbl, 4 ex

Description

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к способу получения антигенов Haemophilus influenzae типа В (Hib) и может быть использовано для изготовления вакцинирующих препаратов. The invention relates to medical microbiology, in particular to a method for producing Haemophilus influenzae type B antigens (Hib) and can be used for the manufacture of vaccine preparations.

Известен способ получения антигенов Hib, применяемых для изготовления вакцин против Hib-инфекции (R.Schneerson, О.Barrens, А.Sutton et al. Preparation, characterisation and immunogenecity of Haemophilus influenzae type b polysaccharide-protein conjugates. The goumal of experimental medicine, 1980, V.152, Р.361-374). A known method of producing Hib antigens used for the manufacture of vaccines against Hib infection (R. Schneerson, O. Barrens, A. Sutton et al. Preparation, characterization and immunogenecity of Haemophilus influenzae type b polysaccharide-protein conjugates. The goumal of experimental medicine, 1980, V.152, P.361-374).

Этот способ включает культивирование микроорганизмов, их концентрирование центрифугированием, экстракцию капсульного полисахарида солевым раствором с катион-активным детергентом - цитавлоном, с последующей ферментативной обработкой нуклеазами, спиртовым фракционированием и полученный капсульный полисахарид конъюгируют с помощью сложных химических реакций с белком, в качестве которого используют столбнячный или дифтерийный анатоксины. This method involves the cultivation of microorganisms, their concentration by centrifugation, extraction of the capsular polysaccharide with salt solution with a cationic active detergent - cytavlon, followed by enzymatic treatment with nucleases, alcohol fractionation and the resulting capsular polysaccharide is conjugated using complex chemical reactions with a protein such as tetanus diphtheria toxoids.

Однако этот способ является сложным в выполнении, многоэтапным, требует применения сложных химических методов конъюгации с использованием токсичных реагентов, что делает способ небезопасным, и, кроме того, требующим специфических сложных методов контроля остаточных количеств на применяемые реактивы и реагенты. However, this method is difficult to perform, multi-stage, requires the use of complex chemical conjugation methods using toxic reagents, which makes the method unsafe, and, in addition, requiring specific complex methods for controlling residual quantities of the reagents and reagents used.

Целью предлагаемого способа является упрощение получения антигенного препарата Hib, при сохранении уровня высокой антигенной активности, а также обеспечение безопасных условий его получения. The aim of the proposed method is to simplify the production of Hib antigenic drug, while maintaining a high level of antigenic activity, as well as ensuring safe conditions for its production.

Настоящая цель достигается тем, что из клеток микроорганизмов Hib, получаемых при культивировании на жидких синтетических средах, извлекают специфический экскретируемый клетками Hib экзогенный полисахарид ультрафильтрацией на молекулярных волоконных фильтрах фирмы НПО "Химволокно". This goal is achieved in that a specific exogenous polysaccharide excreted by Hib cells by ultrafiltration on molecular fiber filters manufactured by NPO Khimvolokno is extracted from Hib microorganism cells obtained by cultivation in liquid synthetic media.

Концентрат клеток обрабатывают 2,5%-ным раствором натрия хлорида с ЭДТА и полученный экстракт подвергают ультрафильтрации на молекулярных волоконных фильтрах фирмы НПО "Химволокно", а полученный капсульный полисахарид в комплексе с белком Hib смешивают с экзогенным полисахаридом в соотношении 1:1. The cell concentrate is treated with a 2.5% solution of sodium chloride with EDTA and the obtained extract is ultrafiltered on molecular fiber filters of the company NPO Khimvolokno, and the obtained capsular polysaccharide in combination with Hib protein is mixed with an exogenous polysaccharide in a 1: 1 ratio.

Пример 1. Получение натигенного препарата. Example 1. Obtaining natigennogo drug.

Штамм Haemophilus influenzae тип В 423 выращивают в течение 10 ч на твердой питательной среде (шоколадный питательный агар). Культуру смывают физиологическим раствором и инокулят засевают на жидкую питательную среду следующего состава: бульон казаминовых кислот - 10 г/д, глюкоза - 5 г/л, диализат дрожжевого экстракта - 2 г/л, гемин - 0,0010 г/л, НАД (никотинамиддинуклеотид) - 0,008 г/л, витамин В12-0,0005 г/л, рН 7,2-7,4. Инкубацию посевов ведут в атмосфере, насыщенной СО2, в течение 8-10 ч. Выращенную биомассу обрабатывают 0,1%-ным водным раствором формалина, выдерживая в течение 1-2 ч, а клетки отделяют ультрафильтрацией на молекулярных волоконных фильтрах фирмы МПО "Химволокно", г.Москва. Экзогенный полисахарид Hib, находящийся в ультрафильтрате (без клеток) и концентрируют на этих молекулярных волоконных фильтрах и лиофилизируют. Концентрат клеток, полученный после ультрафильтрации на молекулярных волоконных фильтрах, экстрагируют раствором, содержащим 2,5% натрия хлорида, с натриевой солью этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) (рН 7,2). Экстракт, содержащий капсульный полисахарид в комплексе с белком Hib, отделяют от клеток центрифугированием при 6000 об/мин 40 мин на холоду, очищают и концентрируют путем ультрафильтрации на молекулярных волоконных фильтрах и лиофилизируют. Полученный концентрат, содержащий капсульный полисахарид в комплексе с белком Hib (см. фиг. 1, 2), диализуют против дистиллированной воды и лиофилизируют.The strain Haemophilus influenzae type B 423 is grown for 10 hours on solid nutrient medium (chocolate nutrient agar). The culture is washed off with physiological saline and the inoculum is inoculated on a liquid nutrient medium of the following composition: casamino acid broth - 10 g / d, glucose - 5 g / l, yeast extract dialysate - 2 g / l, hemin - 0.0010 g / l, NAD ( nicotinamide dinucleotide) - 0.008 g / l, vitamin B12-0.0005 g / l, pH 7.2-7.4. The crops are incubated in an atmosphere saturated with CO 2 for 8-10 hours. The grown biomass is treated with a 0.1% aqueous formalin solution for 1-2 hours, and the cells are separated by ultrafiltration on molecular fiber filters from MPO Khimvolokno ", Moscow city. The exogenous Hib polysaccharide in ultrafiltrate (no cells) is concentrated on these molecular fiber filters and lyophilized. The cell concentrate obtained after ultrafiltration on molecular fiber filters is extracted with a solution containing 2.5% sodium chloride with sodium salt of ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) (pH 7.2). The extract containing the capsular polysaccharide in complex with the Hib protein is separated from the cells by centrifugation at 6000 rpm for 40 minutes in the cold, purified and concentrated by ultrafiltration on molecular fiber filters and lyophilized. The resulting concentrate containing the capsular polysaccharide in complex with the Hib protein (see Fig. 1, 2) is dialyzed against distilled water and lyophilized.

Для получения препарат для иммунизации объединяют в соотношении 1:1 (в/в) низкомолекулярную фракцию, содержащую экскреторный полисахарид и высокомолекулярную фракцию, содержащую в основном капсульный полисахарид в комплексе с белком Hib. To obtain a preparation for immunization, a low molecular weight fraction containing an excretory polysaccharide and a high molecular weight fraction containing mainly a capsular polysaccharide in combination with the Hib protein are combined in a 1: 1 (w / w) ratio.

Таким образом, в реакции латекс-агглютинации подтверждается специфичность препарата, а в реакции диск - электрофореза подтверждается, что предлагаемый способ извлекает полисахарид Hib в комплексе с белком. Thus, the specificity of the drug is confirmed in the latex-agglutination reaction, and in the disk-electrophoresis reaction, it is confirmed that the proposed method extracts the Hib polysaccharide in complex with the protein.

Пример 2. Проверка антигенности препарата. Example 2. Check the antigenicity of the drug.

Антигенность препарата проверяют на белых мышах, которых иммунизируют 2-кратно внутрибрюшинно с интервалом в 20 дней препаратом, полученным по предлагаемому способу по весу, так, чтобы доза на одну мышь составила 50 мкг (человек-доза). The antigenicity of the drug is checked on white mice, which are immunized 2 times intraperitoneally with an interval of 20 days by the drug obtained by the proposed method by weight, so that the dose per mouse is 50 μg (human dose).

Для сравнения иммунизируют контрольную группу животных коммерческой конъюгированной вакциной в дозе 0,5 мл (человеко-доза) внутрибрюшинно, двухкратно с интервалом в 20 дней. For comparison, a control group of animals was immunized with a commercial conjugate vaccine at a dose of 0.5 ml (human dose) intraperitoneally, twice with an interval of 20 days.

Через 20 дней после 2-й инъекции проверяют наличие антител в прямом иммуноферментном методе, сенсибилизируя планшеты капсульным полисахаридом Hib. В качестве конъюгата используют белок А стафилококка, меченный пероксидазой хрена. 20 days after the 2nd injection, the presence of antibodies in the direct enzyme immunoassay is checked by sensitizing the plates with the Hib capsular polysaccharide. Staphylococcus A protein labeled with horseradish peroxidase is used as a conjugate.

Результаты представлены в табл.1. The results are presented in table 1.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить антигенный препарат, который обладает высокой антигенной активностью и может быть использован для иммунизации и создания иммунобиологического препарата. Thus, the proposed method allows to obtain an antigenic preparation that has high antigenic activity and can be used for immunization and the creation of an immunobiological preparation.

Пример 3. Проверка протеактивной активности при местном назальном применении. Example 3. Verification of the reactive activity with topical nasal administration.

Препарат антигенов Hib, полученный по предлагаемому способу, вводят в носоглотку белым крысам 1 раз в три дня в течение 21 дня - всего 6 раз. Контрольной группе животных назальную вакцинацию не производят. The Hib antigen preparation obtained by the proposed method is administered into the nasopharynx of white rats once every three days for 21 days - only 6 times. The control group of animals did not produce nasal vaccination.

После введения вакцинирующего препарата крыс содержат на липидной диете в течение 20 дней. По окончании липидной диеты в обе половинки носа и носоглотку вводят культуру Haemophilus influenzae тип В в объеме 0,4 мл, содержащей 400 млн. микробных тел. After administration of the vaccine preparation, rats are kept on a lipid diet for 20 days. At the end of the lipid diet, a Haemophilus influenzae type B culture in a volume of 0.4 ml containing 400 million microbial bodies is introduced into both halves of the nose and nasopharynx.

После 5, 7, 14 суток после заражения под эфирным наркозом проводят декапитацию животных и делают бактериологические посевы из слизистых носоглотки, пазух, крови, мозга. Одновременно изучают морфологические изменения в тканях экспериментальных животных. After 5, 7, 14 days after infection under ether anesthesia, animals are decapitated and bacteriological cultures are made from the mucous membranes of the nasopharynx, sinuses, blood, and brain. At the same time, morphological changes in the tissues of experimental animals are studied.

Результаты представлены в таблице 2. The results are presented in table 2.

Таким образом, на данной экспериментальной модели показано, что назальная вакцинация экспериментальных животных полученным по предлагаемому способу антигенным препаратом блокировала распространение вирулентной культуры Hib и защищала животных от инфекции, в том числе от генерализации процесса. Thus, in this experimental model, it was shown that nasal vaccination of experimental animals with the antigenic preparation obtained by the proposed method blocked the spread of the virulent Hib culture and protected the animals from infection, including the generalization of the process.

Пример 4. Проверка протективных свойств при парентеральной иммунизации экспериментальных животных. Example 4. Verification of protective properties during parenteral immunization of experimental animals.

Антигенным препаратом Hib, полученным по предлагаемому способу, в дозе 50 мкг в объеме 0,5 мл иммунизируют белых мышей внутрибрюшинно трехкратно с интервалом в 20 дней. Hib antigenic drug obtained by the proposed method, at a dose of 50 μg in a volume of 0.5 ml, immunize white mice intraperitoneally three times with an interval of 20 days.

Аналогично вакцинируют белых мышей конъюгированной вакциной против Hib инфекции по прототипу. Через 20 дней после вакцинации животных заражают внутрибрюшинно муцинизированной культурой Hib (10 ДЛМ). Similarly, white mice are vaccinated with the prototype Hib conjugate vaccine. Twenty days after vaccination, the animals are infected with an intraperitoneal mucinized Hib culture (10 DLM).

Результаты представлены в таблице 3. The results are presented in table 3.

Таким образом, препарат, полученный по предлагаемому способу, обладает выраженной протективной активностью, не уступающей конъюгированным препаратам. Thus, the drug obtained by the proposed method has a pronounced protective activity, not inferior to conjugated drugs.

Claims (1)

Способ получения антигенного препарата Haemophilus influenzae типа В (Hib) путем выращивания бактерий на жидких питательных средах с последующим выделением антигенов, отличающийся тем, что из биомассы бактерий Hib ультрафильтрацией на молекулярных волоконных фильтрах извлекают экзогенный полисахарид, а концентрат клеток обрабатывают 2,5%-ным раствором натрия хлорида с натриевой солью ЭДТА и из полученного экстракта ультрафильтрацией на молекулярных волоконных фильтрах выделяют капсульный полисахарид Hib в комплексе с белком, который соединяют с экзогенным полисахаридом Hib в соотношении 1: 1. A method of producing an antigenic preparation of Haemophilus influenzae type B (Hib) by growing bacteria on liquid nutrient media followed by the isolation of antigens, characterized in that an exogenous polysaccharide is extracted by ultrafiltration on molecular fiber filters from the biomass of Hib bacteria, and the cell concentrate is treated with 2.5% a solution of sodium chloride with EDTA sodium salt and the capsule polysaccharide Hib in complex with a protein which is combined with ex Hib Fire Polysaccharide in a 1: 1 ratio.
RU2001102923A 2001-02-01 2001-02-01 Method of preparing antigenic preparation haemophilus influenzae type b (hib) RU2185191C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2001102923A RU2185191C1 (en) 2001-02-01 2001-02-01 Method of preparing antigenic preparation haemophilus influenzae type b (hib)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2001102923A RU2185191C1 (en) 2001-02-01 2001-02-01 Method of preparing antigenic preparation haemophilus influenzae type b (hib)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2185191C1 true RU2185191C1 (en) 2002-07-20

Family

ID=20245481

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2001102923A RU2185191C1 (en) 2001-02-01 2001-02-01 Method of preparing antigenic preparation haemophilus influenzae type b (hib)

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2185191C1 (en)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2257412C1 (en) * 2004-04-01 2005-07-27 Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова Strain haemophilus influenzae b mech 1 as producer of capsule polysaccharide - polyribosyl ribitol phosphate
CN102633896A (en) * 2012-04-23 2012-08-15 成都欧林生物科技股份有限公司 Hib polysaccharide purifying technology
CN102735809A (en) * 2012-06-29 2012-10-17 成都欧林生物科技股份有限公司 Method for determining content of polymer conjugate in Hib conjugate vaccine
RU2542393C2 (en) * 2013-05-06 2015-02-20 Федеральное бюджетное учреждение науки "Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии" (ФБУН РостовНИИ микробиологии и паразитологии) METHOD OF PREPARING CONJUGATE OF CAPSULAR POLYSACCHARIDE Haemophilus influenzae TYPE b (Hib) C ANTIGENS FOR PREPARING IMMUNOBIOLOGICAL PREPARATIONS
RU2624014C1 (en) * 2016-04-08 2017-06-30 Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) Haemophilus influenzae spb strain type b - highly active producer of capsular polyribosylribitolphosphate polysaccharide
RU2770877C1 (en) * 2021-04-08 2022-04-22 Федеральное бюджетное учреждение науки "Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии" Method of producing antigenic conjugated substance of haemophilic type b microbe for creating vaccine preparations

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU98101249A (en) * 1995-06-27 1999-12-10 Кортекс Интернэшнл Лимитед OMR26 ANTIGEN HAEMOPHYLUS INFLUENZAE

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9513074D0 (en) * 1995-06-27 1995-08-30 Cortecs Ltd Novel anigen

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU98101249A (en) * 1995-06-27 1999-12-10 Кортекс Интернэшнл Лимитед OMR26 ANTIGEN HAEMOPHYLUS INFLUENZAE

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Schneerson R., Barrena O., Sutton A. et al. Preparation, characterisation and immunogenecity of Haemophilus influenzae type b polysaccharide-protein conjugates. The J. of experimental medicine. - 1980, v.152 p. 361-374. *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2257412C1 (en) * 2004-04-01 2005-07-27 Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова Strain haemophilus influenzae b mech 1 as producer of capsule polysaccharide - polyribosyl ribitol phosphate
CN102633896A (en) * 2012-04-23 2012-08-15 成都欧林生物科技股份有限公司 Hib polysaccharide purifying technology
CN102735809A (en) * 2012-06-29 2012-10-17 成都欧林生物科技股份有限公司 Method for determining content of polymer conjugate in Hib conjugate vaccine
CN102735809B (en) * 2012-06-29 2015-04-29 成都欧林生物科技股份有限公司 Method for determining content of polymer conjugate in Hib conjugate vaccine
RU2542393C2 (en) * 2013-05-06 2015-02-20 Федеральное бюджетное учреждение науки "Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии" (ФБУН РостовНИИ микробиологии и паразитологии) METHOD OF PREPARING CONJUGATE OF CAPSULAR POLYSACCHARIDE Haemophilus influenzae TYPE b (Hib) C ANTIGENS FOR PREPARING IMMUNOBIOLOGICAL PREPARATIONS
RU2624014C1 (en) * 2016-04-08 2017-06-30 Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) Haemophilus influenzae spb strain type b - highly active producer of capsular polyribosylribitolphosphate polysaccharide
RU2770877C1 (en) * 2021-04-08 2022-04-22 Федеральное бюджетное учреждение науки "Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии" Method of producing antigenic conjugated substance of haemophilic type b microbe for creating vaccine preparations

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4459286A (en) Coupled H. influenzae type B vaccine
RU2493870C2 (en) Multivalent composition of pneumococcal polysaccharide-protein conjugate
RU2194531C2 (en) Polyvalent associated diphtheria, tetanus toxoids and pertussis poliovirus vaccines
RU2484846C2 (en) Multivalent composition of pneumococcal polysaccharide-protein conjugate
JP2022000449A (en) Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
JP2002501387A (en) A culture medium containing yeast or soy extract as an amino acid source and free of protein complexes of animal origin
US10576138B2 (en) Vaccines and compositions for the prevention of Salmonella infections
RO122761B1 (en) Polysaccharide-protein-containing multivalent meningococcal vaccine
CN105267974A (en) Modified polysaccharides for conjugate vaccines
KR101161033B1 (en) Process for producing a capsular polysaccharide for use in conjugate vaccines
KR20010021953A (en) Immunogenic conjugates comprising a group b meningococcal porin and an h. influenzae polysaccharide
JPS58167517A (en) Bacteria toxoid and gram-negative immunogloblin
JP3169608B2 (en) Preparation and use of formalin-killed colony-forming factor antigen (CFA) -expressing E. coli for inoculation against enteric infections / diarrhea caused by enterotoxin-producing E. coli in humans
RU2185191C1 (en) Method of preparing antigenic preparation haemophilus influenzae type b (hib)
EP2809343B1 (en) Fermentation process
KR100649286B1 (en) Vaccine preparations containing supernatant toxin
IL165970A (en) Method of isolating biologically active fraction containing clinically acceptable native s-lipopolysaccharides obtained from bacteria producing endotoxic lipopolysaccharides
SU997599A3 (en) Process for preparing heterovaccine for treating trichomonas syndrome
RU2076734C1 (en) Method of oral chemical vaccine preparing
RU2098127C1 (en) Mixed vaccine for control over cattle necrobacteriosis
WO2016207744A1 (en) Improved process for production and purification of capsular pneumococcal polysaccharide from streptococcus pneumoniae and method for producing conjugate vaccine composition using said polysaccharide
RU2770877C1 (en) Method of producing antigenic conjugated substance of haemophilic type b microbe for creating vaccine preparations
US20250255948A1 (en) Pneumococcal conjugate vaccines and methods of use thereof
KR102493192B1 (en) Vaccine composition comprising conjugate of capsular polysaccharide derived from Salmonella typhi and protein
RU2148412C1 (en) Method of protective whooping cough antigen preparing

Legal Events

Date Code Title Description
TK4A Correction to the publication in the bulletin (patent)

Free format text: AMENDMENT TO CHAPTER -FG4A- IN JOURNAL: 20-2002 FOR TAG: (73)

PD4A Correction of name of patent owner
PD4A Correction of name of patent owner
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20141225

QB4A Licence on use of patent

Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20190206

Effective date: 20190206