RU2175558C1 - Способ получения сухого флуоресцирующего сальмонеллезного диагностикума - Google Patents
Способ получения сухого флуоресцирующего сальмонеллезного диагностикума Download PDFInfo
- Publication number
- RU2175558C1 RU2175558C1 RU2000129486/14A RU2000129486A RU2175558C1 RU 2175558 C1 RU2175558 C1 RU 2175558C1 RU 2000129486/14 A RU2000129486/14 A RU 2000129486/14A RU 2000129486 A RU2000129486 A RU 2000129486A RU 2175558 C1 RU2175558 C1 RU 2175558C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- salmonella
- diagnosticum
- suspension
- salmonellosis
- centrifuged
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 16
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 title abstract description 3
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 title abstract description 3
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims abstract description 51
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 5
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 29
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 7
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 6
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 abstract 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 244000000074 intestinal pathogen Species 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 229940043274 prophylactic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при производстве сальмонеллезных диагностических и профилактических препаратов. Способ заключается в том, что инактивацию сальмонелл осуществляют формалином, очищают хлороформом, центрифугируют и конъюгируют с изотиоционатом флуоресцина. Затем отмывают от непрореагировавшего красителя путем многократного центрифугирования, стандартизуют и лиофилизируют. Техническим результатом является повышение чистоты и специфичности получаемого препарата. 1 з.п. ф-лы, 2 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно иммунологии, и может быть использовано при производстве сальмонеллезных диагностических и профилактических препаратов.
В прикладной иммунологии, практической и научной бактериологической работе одним из наиболее распространенных тестов является реакция агглютинации (РА).
Известно получение сальмонеллезных жидких инактивированных (нагреванием, ацетоном, спиртом или формалином) корпускулярных антигенов, очищенных от среды культивирования центрифугированием с последующей стандартизацией [1].
Наиболее близким к заявляемому способу является способ, заключающийся в культивировании сальмонелл на мясопептонном агаре, получении взвеси микробов в 0,9% растворе натрия хлорида после смыва с питательной среды, инактивации их формалином (группы A, B, C, D, E) или спиртом (брюшнотифозные бактерии), центрифугировании инактивированной взвеси после осаждения сальмонелл, стандартизации по оптическому стандарту и изучении специфических свойств в РА [2] . При соответствии результатов исследования регламентированным требованиям взвеси сальмонелл разливали в ампулы и герметизировали.
Однако полученные по способу-прототипу сальмонеллы содержат антигенные структуры, обуславливающие ложноположительные результаты в РА с возбудителями кишечной группы.
Кроме того, для получения диагностикума по способу-прототипу требуются значительные затраты питательных сред и биомассы сальмонелл.
Исходя из этих негативных явлений был предложен экономичный способ получения сальмонеллезного диагностикума, повышающий качество препарата, сокращающий затраты.
Изобретение направлено на решение задачи - получение комплексного сальмонеллезного диагностикума за счет повышения чистоты и специфичности препарата, обусловленных способом очистки. (Таблица 1).
Решение данной задачи заключается в дополнительной обработке взвесей сальмонелл хлороформом, конъюгацией их с флуоресцентным красителем - изотиоцианатом флуоресцеина.
Существенные признаки заявляемого способа:
ограничительные - инактивация сальмонелл, центрифугирование, стандартизация;
отличительные - инактивация сальмонелл всех групп формалином, обработка хлороформом с последующей конъюгацией с флуоресцентным красителем - изотиоцианатом флуоресцеина, многократное центрифугирование до полного отсутствия красителя в надосадочной жидкости.
ограничительные - инактивация сальмонелл, центрифугирование, стандартизация;
отличительные - инактивация сальмонелл всех групп формалином, обработка хлороформом с последующей конъюгацией с флуоресцентным красителем - изотиоцианатом флуоресцеина, многократное центрифугирование до полного отсутствия красителя в надосадочной жидкости.
Способ осуществляется следующим образом: Культуры сальмонелл серогрупп A, B, C, D, E, выращенные на МПА, смывают (каждую в отдельности) 0,9% раствором натрия хлорида, стандартизируют и соединяют в комплексную взвесь. Взвесь сальмонелл A, B, C, D, E инактивируют формалином. После этого из взвеси сальмонелл путем низкоскоростного центрифугирования осаждают агаровые частицы. Надосадочную жидкость, содержащую сальмонеллы, декантируют и подвергают высокоскоростному центрифугированию для осаждения сальмонелл. Полученный осадок ресуспендируют в 0,9% растворе натрия хлорида и обрабатывают хлороформом для удаления денатурированных белков, а также липидов. Очищенную взвесь сальмонелл центрифугируют, а осадок ресуспендируют и коньюгируют с изотиоцианатом флуоресцеина. По истечении времени конъюгации меченые сальмонеллы отмывают от непрореагировавшего-красителя, стандартизируют и оценивают в иммунофлуоресцентной реакции микроагглютинации (ИФРМА). При получении результатов, соответствующих регламентированным данным, меченые сальмонеллы лиофилизируют. Для проведения исследований с приготовленным диагностикумом на 1000 проб сывороток потребуется 1 мл культуры сальмонелл с концентрацией 20•109 в 1 мл микробной взвеси.
ПРИМЕР 1. Получение целевого продукта по заявляемому способу.
С 1,5 мл скошенного МПА получали 1,0 мл взвесь сальмонелл группы А с концентрацией 20 млрд. в 1 мл микробной взвеси (табл. 1). Полученную взвесь доводили до концентрации 5•109 сальмонелл в 1 мл микробной взвеси. Приготовленные аналогичным образом взвеси сальмонелл групп B, C, D, E объединяли по 1 мл и получали комплексную взвесь. В 8 мл взвеси сальмонелл групп A, B, C, D, E добавляли 0,04 мл формалина и выдерживали в течение 7 суток при температуре +4-10oC. Из инактивированной взвеси осаждали крупные агаровые частицы путем центрифугирования при 1500 об/мин, в течение 10 мин. Надосадочную жидкость, содержащую сальмонеллы, декантировали и центрифугировали при 10000 об/мин, в течение 30 мин с целью осаждения сальмонелл. Полученный осадок ресуспендировали в 8,0 мл 0,9% раствора натрия хлорида. К полученной взвеси добавляли хлороформ до конечной концентрации 0,5%. Смесь встряхивали в течение 5 мин и центрифугировали при 1500 об/мин, в течение 10 мин для осаждения хлороформа и денатурированных белков. Надосадочную жидкость декантировали и центрифугировали при 10000 об/мин, в течение 30 мин. Осадок сальмонелл ресуспендировали в 8,0 мл забуферного физиологического раствора. В сальмонеллезную взвесь добавляли изотиоцианат флуоресцеина из расчета 2,5 мг на 1•109 микробов. Конъюгацию красителя с сальмонеллами проводили в течение 16 часов при постоянном перемешивании при температуре +4-10oC. После этого взвесь центрифугировали при 10000 об/мин, в течение 30 мин. Образовавшийся осадок ресуспендировали в 8,0 мл забуферного физиологического раствора. Процедуру отмывания путем центрифугирования повторяли до полного отсутствия красителя в надосадочной жидкости. Осадок очищенных меченых сальмонелл ресуспендировали в дистиллированной воде до концентрации 5•109 сальмонелл в 1 мл микробной взвеси и исследовали в ИФРМА на специфическую активность. (Таблица 2).
Как следует из данных, представленных в таблице, серии диагностикумов, полученные по заявленному способу, взаимодействуют со специфическими антителами сывороток крови людей, больных сальмонеллезом, моноспецифическими диагностическими сальмонеллезными сыворотками и не реагируют с гетерологичными и близкородственными антителами диагностических сывороток.
На постановку ИФРМА для скрининга 1000 сывороток потребуется 5 мл флуоресцирующего сальмонеллезного диагностикума с концентрацией 5•109 в 1 мл микробной взвеси.
Таким образом, меченый антиген сальмонелл, полученный по заявленному способу пригоден для применения в качестве диагностикума сальмонеллезного комплексного флуоресцирующего для ИФРМА.
ПРИМЕР 2. Получение целевого продукта по способу-прототипу.
Культуру сальмонелл группы A, выращенную на 45 мл мясопептонного агара, смывали 0,9% раствором натрия хлорида, стандартизировали до концентрации 20•109 сальмонелл в 1 мл. Получали 30 мл взвеси культуры сальмонелл группы A. Приготовленную взвесь инактивировали путем добавления формалина до конечной концентрации 0,5% и выдерживали 7 суток. Затем инактивированную взвесь центрифугировали при 1500 об/мин, в течение 10 мин, отделяли надосадочную жидкость и подвергали ее центрифугированию при 3000 об/мин, в течение 30 мин. Полученный осадок ресуспендировали в 250 мл 0,9% раствора натрия хлорида, стандартизировали до 2•109 сальмонелл в 1 мл микробной взвеси и исследовали в РА. (Таблица 2).
При соответствии результатов регламентированным данным препарат разливали в ампулы по 10 мл и герметизировали.
Аналогичным образом готовили другие сальмонеллезные диагностикумы серогрупп B, C, D, E. Получали по 250 мл диагностикумов групп B, C, D, E с концентрацией 2•109 в 1 мл микробной взвеси.
Как следует из данных таблицы 2, препарат взаимодействовал с сальмонеллезными сыворотками группы A и диагностической сывороткой группы A. Кроме этого, были отмечены ложно-положительные результаты с сыворотками к кишечной группе.
Использованные источники
1. Медуницин Н.В. Брюшнотифозные вакцины. Вакцинология. - М.: Триада - X. - 1999. - С. 172-173.
1. Медуницин Н.В. Брюшнотифозные вакцины. Вакцинология. - М.: Триада - X. - 1999. - С. 172-173.
2. Петросян E.А., Коссова А.К., Ефимова А.А. Разработка метода получения очищенных антигенов в производственных условиях. Поливакцины. - Москва, - 1956. - Т. 8. - С. 245-276.
Claims (2)
1. Способ получения сальмонеллезного диагностикума путем инактивации сальмонелл, их стандартизации и центрифугирования, отличающийся тем, что инактивацию сальмонелл всех групп осуществляют формалином, взвесь сальмонелл очищают хлороформом, очищенную взвесь центрифугируют, осадок, содержащий сальмонеллы, ресуспендируют и конъюгируют с флюоресцентным красителем из расчета 2,5 мг красителя на 1•109 микробных тел и затем отмывают от непрореагировавшего красителя путем многократного центрифугирования, стандартизуют жидкий препарат до концентрации 5•109 микроб.кл./мл, стандартизованный препарат, содержащий меченые сальмонеллы, лиофилизинуют с получением сухого флюоресцирующего сальмонеллезного диагностикума.
2. Способ получения сальмонеллезного диагностикума по п.1, отличающийся тем, что в качестве флюоресцирующего красителя используют изотиоцианат флуоресцина.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000129486/14A RU2175558C1 (ru) | 2000-11-27 | 2000-11-27 | Способ получения сухого флуоресцирующего сальмонеллезного диагностикума |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000129486/14A RU2175558C1 (ru) | 2000-11-27 | 2000-11-27 | Способ получения сухого флуоресцирующего сальмонеллезного диагностикума |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2175558C1 true RU2175558C1 (ru) | 2001-11-10 |
Family
ID=20242548
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000129486/14A RU2175558C1 (ru) | 2000-11-27 | 2000-11-27 | Способ получения сухого флуоресцирующего сальмонеллезного диагностикума |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2175558C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2224257C1 (ru) * | 2002-07-01 | 2004-02-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Пермское научно-производственное объединение "Биомед" | Способ диагностики сальмонеллеза |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1986004352A1 (en) * | 1985-01-15 | 1986-07-31 | Unisearch Limited | Immunoassay systems for the detection of salmonella |
-
2000
- 2000-11-27 RU RU2000129486/14A patent/RU2175558C1/ru active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1986004352A1 (en) * | 1985-01-15 | 1986-07-31 | Unisearch Limited | Immunoassay systems for the detection of salmonella |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| КОРОТЯЕВ А.И. Медицинская микробиология иммунология и вирусология. - Санкт-Петербург: СпецЛит 2000, с.387 и 388. * |
| ПЕТРОСЯН Е.А. и др. Разработка метода получения очищенных антигенов в производственных условиях. Поливакцины. - М., 1956, т.8, с.245 - 276. ХАЛИТОВА В.И. и др. Диагностика сальмонеллеза у детей с использованием иммунофлуоресцентного метода. Актуальные вопросы педиатрии. - Кишинев, 1988, с.141 и 142. ВОЙТЕНКОВА Е.В. Применение иммунологических методов для диагностики сальмонеллезов. Автореф. канд. дисс. - Л., 1988. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2224257C1 (ru) * | 2002-07-01 | 2004-02-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Пермское научно-производственное объединение "Биомед" | Способ диагностики сальмонеллеза |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Avery et al. | Studies on the chemical nature of the substance inducing transformation of pneumococcal types: induction of transformation by a desoxyribonucleic acid fraction isolated from pneumococcus type III | |
| Avery et al. | Studies on the Chemical Nature of the Substance Inducing Transformation of Pneumococcal Types: Induction of Transformation by a Desoxyribonucleic Acid Fraction Isolated from Pneumococcus Type III | |
| US4816253A (en) | Novel mutant strain of Listeria monocytogenes and its use in production of IgM antibodies and as an immunotherapeutic agent | |
| CA1180291A (en) | Process for the production of immunobiological preparations applicable in the diagnosis, prevention and/or treatment of candida guilliermondii infections | |
| SAKAZAKI et al. | Studies on so-called paracolon C27 (Ferguson) | |
| RU2175558C1 (ru) | Способ получения сухого флуоресцирующего сальмонеллезного диагностикума | |
| RU2086258C1 (ru) | Способ получения бруцеллезного антигена | |
| EP0389925B1 (en) | A method for purifying an outer membrane protein of Haemophilus influenzae | |
| RU2133470C1 (ru) | Способ получения антигена для диагностики бруцеллеза | |
| RU2143280C1 (ru) | Способ получения o-антигена холерного очищенного | |
| SU1692580A1 (ru) | Способ получени тул ремийного антигена | |
| RU2145353C1 (ru) | Штамм бактерий moraxella bovis "г97-вниви", используемый для изготовления диагностикумов и вакцин против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота | |
| RU2045959C1 (ru) | Аллерген для диагностики туберкулеза и способ его получения | |
| RU2084522C1 (ru) | Штамм бактерий yersinia pseudotuber culosis 7а, используемый в качестве антигена для сердодиагностики псевдотуберкулеза | |
| US3208909A (en) | Anaerobic process for production of a gel-adsorbed anthrax immunizing antigen | |
| RU2830065C1 (ru) | Способ получения секретируемых стресс-белков francisella tularensis | |
| RU2083663C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ KLEBSIELLA PNEUMONIAE 232 - ПРОДУЦЕНТ β -ГЕМОЛИЗИНА | |
| RU2174557C1 (ru) | Способ получения гиалуронидазы стрептококковой | |
| RU2483112C1 (ru) | Способ получения липополисахарида возбудителя чумы | |
| McCarty et al. | Studies on the chemical nature of the substance inducing transformation of pneumococcal types | |
| RU2080121C1 (ru) | Способ производства вакцины для профилактики холеры | |
| SU1400075A1 (ru) | Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае сноLеRае OGaWa, используемый дл получени холерного токсина | |
| SU1693061A1 (ru) | Способ внутривидовой идентификации менингококков | |
| RU2236867C1 (ru) | Способ получения антигена возбудителя лихорадки ку | |
| RU2141339C1 (ru) | Способ получения антигенов из культуральных бледных трепонем |