RU2169769C1

RU2169769C1 - Nutrient medium for culturing silene vulgaris (moench) garcke callus tissue

Info

Publication number: RU2169769C1
Application number: RU99123203/13A
Authority: RU
Inventors: Е.А. Гюнтер; Ю.С. Оводов
Original assignee: Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения РАН
Priority date: 1999-11-02
Filing date: 1999-11-02
Publication date: 2001-06-27

Abstract

FIELD: biotechnology. SUBSTANCE: invention relates to technology of growing transplanting cultures of vegetable tissues and can be used in medicinal industry for preparing new high-effective medicinal preparations. Agarized medium containing macrosalts and trace salts by Murasige-Skoog, vitamins and growth hormones is modified by hormonal composition 6- BAP and 2,4-D. Medium has additionally folic acid, riboflavin, biotin, pantothenate calcium and nicotine- -amide as the source of vitamin PP. Salts and vitamins used in proposed concentrations ensures to obtain callus tissue with culturing period 21 days and the yield of biomass 7.14-12.77 g/l. EFFECT: increased yield of biomass. 1 tbl

Description

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к технологии выращивания пересадочных культур растительных тканей. Область применения - медицинская промышленность (получение нового вида сырья биологически активных веществ растительного происхождения для получения новых высокоэффективных лекарственных препаратов). The invention relates to biotechnology, in particular to a technology for growing transplant cultures of plant tissues. The scope is the medical industry (obtaining a new type of raw material of biologically active substances of plant origin to produce new highly effective drugs).

Питательные среды для выращивания каллусной ткани Silene vulgaris (Moench) Garcke, из литературных источников нами не выявлены. Наиболее близкой к заявленному изобретению является питательная среда для культивирования каллусной ткани бегонии краснолистной (RU патент 1761799, МКИ C 12 N 5/04, A 01 H 4/00) следующего состава: макро- и микросоли по Мурасиге и Скугу; витамины, мг/л: пиридоксин 0,1; тиамин 0,1; никотиновая кислота 0,5; инозитол 40; сахароза 3%; 6-БАП 0,2; 2,4-Д 1; агар 6000. Nutrient media for growing callus tissue Silene vulgaris (Moench) Garcke, from literary sources, we have not identified. Closest to the claimed invention is a nutrient medium for the cultivation of callus tissue begonia red-leaved (RU patent 1761799, MKI C 12 N 5/04, A 01 H 4/00) of the following composition: macro and micro salts according to Murashiga and Skoog; vitamins, mg / l: pyridoxine 0.1; thiamine 0.1; nicotinic acid 0.5; inositol 40; sucrose 3%; 6-BAP 0.2; 2,4-D 1; agar 6000.

Задачей настоящего изобретения является ускорение роста каллусной ткани с высоким выходом биомассы. The present invention is to accelerate the growth of callus tissue with a high yield of biomass.

В этом состоит новый технический результат, находящийся в причинно-следственной связи с существенными признаками изобретения. This is a new technical result, which is in a causal relationship with the essential features of the invention.

Технический результат достигается тем, что питательная среда содержит компоненты в следующем количественном соотношении, мг/л:
KNO₃ - 1900
NH₄NO₃ - 1650
CaCl₂ - 332
MgSO₄•7H₂O - 370
KH₂PO₄ - 170
FeSO₄•7H₂O - 27,85
Na₂ЭДТА - 37,25
H₃BO₃ - 6,2
MnSO₄•5H₂O - 24,1
ZnSO₄•7H₂O - 8,6
Na₂MoO₄ - 0,25
KI - 0,83
CuSO₄•5H₂O - 0,025
CoCl₂•6H₂O - 0,025
Фолиевая кислота - 0,5
Рибофлавин - 0,5
Биотин - 1,0
Ca-пантотенат - 1,0
Пиридоксин - 1,0
Тиамин хлорид - 1,0
Никотинамид - 2,0
Кобаламин - 0,0015
6-БАП - 0,5
2,4-Д - 0,5-2,0
Сахароза - 15000
Глюкоза - 15000
Агар - 8000
Вода - До 1 л
Для получения в пересадочной культуре гомогенно растущей биомассы каллусной ткани Silene vulgaris (M.) G. использовали четыре модификации питательной среды предлагаемого нами состава с различным соотношением фитогормонов: 6-БАП 0,5 мг/л, 2,4-Д 0,5 мг/л; 6-БАП 0,5 мг/л, 2,4-Д 1,0 мг/л; 6-БАП 0,5 мг/л, 2,4-Д 1,5 мг/л; 6-БАП 0,5 мг/л, 2,4-Д 2,0 мг/л.The technical result is achieved in that the nutrient medium contains components in the following quantitative ratio, mg / l:
KNO ₃ - 1900
NH ₄ NO ₃ - 1650
CaCl ₂ - 332
MgSO ₄ • 7H ₂ O - 370
KH ₂ PO ₄ - 170
FeSO ₄ • 7H ₂ O - 27.85
Na ₂ EDTA - 37.25
H ₃ BO ₃ - 6.2
MnSO ₄ • 5H ₂ O - 24.1
ZnSO ₄ • 7H ₂ O - 8.6
Na ₂ MoO ₄ - 0.25
KI - 0.83
CuSO ₄ • 5H ₂ O - 0.025
CoCl ₂ • 6H ₂ O - 0.025
Folic Acid - 0.5
Riboflavin - 0.5
Biotin - 1.0
Ca-pantothenate - 1.0
Pyridoxine - 1.0
Thiamine chloride - 1.0
Nicotinamide - 2.0
Cobalamin - 0.0015
6-BAP - 0.5
2,4-D - 0.5-2.0
Sucrose - 15,000
Glucose - 15000
Agar - 8000
Water - Up to 1 L
To obtain a homogeneous growing biomass of callus tissue Silene vulgaris (M.) G. in a transplant culture, we used four modifications of the nutrient medium of our composition with different phytohormone ratios: 6-BAP 0.5 mg / l, 2.4-D 0.5 mg / l; 6-BAP 0.5 mg / L; 2.4-D 1.0 mg / L; 6-BAP 0.5 mg / L; 2.4-D 1.5 mg / L; 6-BAP 0.5 mg / L; 2.4-D 2.0 mg / L.

Для приготовления среды готовят концентрат макросолей, при этом каждая из макросолей растворяется последовательно в небольшом количестве воды, а затем объем доводится до 1 л. Аналогично готовятся концентраты микросолей, Fe-хелата, витаминов. Макро- и микросоли, Fe-хелат, витамины в виде концентратов смешивают в небольшом количестве воды. Затем к полученной смеси добавляют 6-БАП, 2,4-Д, сахарозу, глюкозу и все тщательно перемешивают. Раствор доводят дистиллированной водой до 1 л. В колбы на 250 мл насыпают по 2 г агара, разливают среду по 250 мл, закрывают фольгой и стерилизуют в автоклаве 10 мин при 1 атм. Чашки Петри стерилизуют в сухожаровом шкафу при 180^oC, завернутые в бумагу Крафт. Ткань высаживают в возрасте 21 суток, инокулюм - 200-300 мг. Культивирование каллусной ткани проводится в термостате при 26±1^oC в условиях непрерывной темноты.To prepare the medium, a macro-salt concentrate is prepared, with each of the macro-salts being sequentially dissolved in a small amount of water, and then the volume is brought up to 1 liter. Concentrates of micro salts, Fe-chelate, and vitamins are prepared in a similar way. Macro and micro salts, Fe-chelate, vitamins in the form of concentrates are mixed in a small amount of water. Then, 6-BAP, 2,4-D, sucrose, glucose are added to the resulting mixture and everything is thoroughly mixed. The solution was adjusted with distilled water to 1 liter. Pour 2 g of agar into 250 ml flasks, pour 250 ml of medium, cover with foil and sterilize in an autoclave for 10 minutes at 1 atm. Petri dishes are sterilized in a dry oven at 180 ^° C. wrapped in Kraft paper. The tissue is planted at the age of 21 days, the inoculum is 200-300 mg. The cultivation of callus tissue is carried out in a thermostat at 26 ± 1 ^o C in continuous darkness.

Результаты исследований представлены в таблице. The research results are presented in the table.

Основное количество биомассы накапливается между 21 и 23 сутками культивирования, затем ткань переходит к фазе замедленного роста и к 30 суткам ее рост практически прекращается, появляются некрозы, ткань теряет способность к дальнейшему росту. The main amount of biomass accumulates between 21 and 23 days of cultivation, then the tissue passes to the phase of slow growth and by 30 days its growth practically stops, necrosis appears, the tissue loses its ability to further growth.

Применение предложенных нами четырех модификаций состава питательной среды позволяет получить быстро растущую каллусную ткань с периодом субкультивирования 21 сутки Silene vulgaris (Moench) Garcke и с высоким выходом биомассы 7,14-12,77 г/л. The application of four modifications of the composition of the nutrient medium that we proposed allows us to obtain a rapidly growing callus tissue with a subculture period of 21 days Silene vulgaris (Moench) Garcke and a high biomass yield of 7.14-12.77 g / l.

Claims

Culture medium for the cultivation of callus tissue Silene vulgaris (Moench) Garcke, characterized in that it contains components in the following quantitative ratio, mg / l:
KNO ₃ - 1900
NH ₄ NO ₃ - 1650
CaCl ₂ - 332
MgSO ₄ 7H ₂ O - 370
KH ₂ PO ₄ - 170
FeSO ₄ 7H ₂ O - 27.85
Na ₂ EDTA - 37.25
H ₃ BO ₃ - 6.2
MnSO ₄ 5H ₂ O - 24.1
ZnSO ₄ 7H ₂ O - 8.6
Na ₂ MoO ₄ - 0.25
KI - 0.83
CuSO ₄ 5H ₂ O - 0.025
CoCl ₂ 6H ₂ O - 0.025
Folic Acid - 0.5
Riboflavin - 0.5
Biotin - 1.0
Sa pantothenate - 1.0
Pyridoxine - 1.0
Thiamine chloride - 1.0
Nicotinamide - 2.0
Cobalamin - 0.0015
6-BAP - 0.5
2,4-D - 0.5 - 2.0
Sucrose - 15,000
Glucose - 15000
Agar - 8000
Water - Up to 1 L