RU2164940C2 - Method of isolation of microalga axenic cultures - Google Patents
Method of isolation of microalga axenic cultures Download PDFInfo
- Publication number
- RU2164940C2 RU2164940C2 RU98122491A RU98122491A RU2164940C2 RU 2164940 C2 RU2164940 C2 RU 2164940C2 RU 98122491 A RU98122491 A RU 98122491A RU 98122491 A RU98122491 A RU 98122491A RU 2164940 C2 RU2164940 C2 RU 2164940C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- isolation
- microalgae
- nutrient medium
- cultures
- axenic
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 230000003816 axenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 31
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 16
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 11
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 10
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 5
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 abstract description 26
- 241000894007 species Species 0.000 abstract description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 7
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 abstract 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 abstract 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 32
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 10
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 5
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 4
- 241000192710 Microcystis aeruginosa Species 0.000 description 4
- 241000195663 Scenedesmus Species 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000009343 monoculture Methods 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000195649 Chlorella <Chlorellales> Species 0.000 description 1
- 241001075870 Coelastrum pseudomicroporum Species 0.000 description 1
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 1
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 1
- 206010028400 Mutagenic effect Diseases 0.000 description 1
- 241000603669 Oocystis lacustris Species 0.000 description 1
- 241000304538 Tetradesmus acuminatus Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000243 mutagenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 239000008239 natural water Substances 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выделения аксенических культур микроводорослей при проведении физиолого-биохимического, цитологического и генетического изучения микроскопических водорослей. The invention relates to microbiology and can be used to isolate axenic cultures of microalgae during physiological, biochemical, cytological and genetic studies of microscopic algae.
Под аксеничностью понимают присутствие в культуре единственного вида водорослей, свободного от прочих микроорганизмов. Использование чистых, аксенических, культур - необходимая предпосылка успешного физиолого-биохимического изучения микроскопических водорослей. Однако, как известно, в альгологии именно этот этап является наиболее сложным. Собранный в природе живой материал представляет собой смесь различных видов водорослей, к тому же загрязненых бактериальной микрофлорой, которые, обладая антагонизмом в отношении друг друга, могут искажать результаты изучения лизоцим-антилизоцимных взаимодействий. Разделение альгологической и бактериальной составляющих весьма трудоемкий процесс. Между водорослями и бактериями существуют плотные биоценотические связи. Слизистые "обертки" водорослей служат источником питания и укрытиями для микроорганизмов, что позволяет считать их идеальным местообитанием бактерий [1]. Водоросли, в свою очередь, используют бактерии как источник витаминов B2, B6, B12 [2]. Тесная мутуалистическая связь определяет трудность разделения альгобактериальных сообществ на изолированные культуры: водорослей и бактерий.By axenicity, we understand the presence in the culture of a single species of algae, free from other microorganisms. The use of pure, axenic, cultures is a necessary prerequisite for a successful physiological and biochemical study of microscopic algae. However, as you know, in algology, this stage is the most difficult. The living material collected in nature is a mixture of various types of algae, which are also contaminated with bacterial microflora, which, being antagonistic to each other, can distort the results of studies of lysozyme-antilysocyme interactions. Separation of the algological and bacterial components is a very time-consuming process. Between algae and bacteria there are dense biocenotic connections. The mucous “wrappers” of algae serve as a source of nutrition and shelters for microorganisms, which makes them an ideal habitat for bacteria [1]. Algae, in turn, use bacteria as a source of vitamins B 2 , B 6 , B 12 [2]. A close mutualistic relationship determines the difficulty of dividing algobacterial communities into isolated cultures: algae and bacteria.
Известен способ выделения аксенических культур микроводорослей путем применения ультрафиолетового облучения [3, 4]. Однако недостатком данного способа является то, что ультрафиолетовое облучение оказывает мутагенное действие и может вызвать необратимые генетические изменения изучаемой культуры. A known method of isolating axenic cultures of microalgae by applying ultraviolet radiation [3, 4]. However, the disadvantage of this method is that ultraviolet radiation has a mutagenic effect and can cause irreversible genetic changes in the studied culture.
Наиболее близким к заявляемому способу по назначению и совокупности существенных признаков является способ выделения аксенических культур микроводорослей методом агаровых пластинок [5]. Способ заключается в том, что микроводорослевую суспензию, средняя плотность которой составляет 1 клетка/1 мм3, вносят в объеме 0,1 мл в чашку Петри и равномерно распределяют микробиологической петлей по поверхности 0,5-2%-го мясопептонного агара (МПА) с последующей инкубацией в термостате. Затем отдельные микроколонии, выросшие на поверхности мясопептонного агара, снимают стерильными инструментами вместе с кусочками плотной питательной среды и вносят в пробирки с соответствующими стерильными элективными жидкими питательными средами для накопления биомассы водорослей. Аксенические культуры водорослей получают с помощью многократного повторного рассева по поверхности МПА в стерильных условиях.Closest to the claimed method for the intended purpose and the set of essential features is a method for isolating axenic cultures of microalgae by the method of agar plates [5]. The method consists in the fact that a microalgal suspension, the average density of which is 1 cell / 1 mm 3 , is added in a volume of 0.1 ml to a Petri dish and evenly distributed by a microbiological loop on the surface of 0.5-2% meat peptone agar (MPA) followed by incubation in a thermostat. Then, individual microcolonies grown on the surface of the meat-peptone agar are removed with sterile instruments together with pieces of a dense nutrient medium and introduced into test tubes with appropriate sterile elective liquid nutrient media for the accumulation of algae biomass. Axenic cultures of algae are obtained by repeated re-sieving on the MPA surface under sterile conditions.
Однако известный способ имеет ограниченный круг применения. Например, при выделении аксенических культур сине-зеленых водорослей не удается добиться их полной свободы от бактерий, т.к. последние очень прочно связаны со слизистыми обертками этих микроводорослей. Процесс разделения их трудоемок, длителен и порой неэффективен, т.к. требует многократного пересева. Кроме того, при использовании петли получить отдельно лежащие клетки не удается, т.к. при значительной концентрации водорослевой суспензии петля не позволяет равномерно распределить водоросли по поверхности плотной питательной среды, к тому же при ее использовании часто происходит травмирование клеточных структур микроводорослей. However, the known method has a limited range of applications. For example, when isolating axenic cultures of blue-green algae, it is not possible to achieve their complete freedom from bacteria, because the latter are very strongly associated with the mucous membranes of these microalgae. The process of separating them is time-consuming, time-consuming and sometimes inefficient, because requires multiple reseeding. In addition, when using the loop, it is not possible to obtain separately lying cells, because at a significant concentration of algal suspension, the loop does not allow even distribution of algae on the surface of a dense nutrient medium; moreover, when it is used, traumatic cellular structures of microalgae are often injured.
Заявляемый способ решает задачу повышения эффективности выделения аксенических микроводорослей и сокращение срока их выделения. The inventive method solves the problem of increasing the efficiency of allocation of axenic microalgae and reducing the time of their selection.
Для решения указанной задачи в заявляемом способе выделения аксенических культур микроводорослей путем рассева микроводорослевой суспензии по поверхности плотной питательной среды, инкубации и последующего пересева выросших единичных микроколоний с кусочками плотной питательной среды в стерильные элективные жидкие питательные среды рассев микроводорослевой суспензии осуществляют путем ее втирания стеклянным шпателем в поверхность 1,5%-ной агаризованной питательной среды Прата, в которую предварительно вводят водный раствор мертиолата так, чтобы его концентрация в питательной среде составила 2 · 10-6 г/мл.To solve this problem, in the claimed method of isolating axenic cultures of microalgae by sieving a microalgal suspension on the surface of a dense nutrient medium, incubating and subsequent reseeding the grown single microcolonies with pieces of dense nutrient medium in a sterile elective liquid nutrient medium, the microalgal suspension is sieved by rubbing it with a glass spatula into the surface Prata 1.5% agar nutrient medium into which the aqueous solution is pre-injected is dead Olathe so that its concentration in the culture medium was 2 × 10 -6 g / ml.
Достигаемый при осуществлении изобретения технический результат состоит в том, что разработанный способ выделения аксенических культур микроводорослей имеет широкий круг применения, т.к. позволяет получать аксенические культуры микроводорослей независимо от источника выделения и степени их бактериальной обсемененности. Также использование предлагаемого способа позволяет сократить сроки выделения чистых культур микроводорослей, повысить эффективность их выделения и надежность получения искомых видов чистых культур микроводорослей. Achievable during the implementation of the invention, the technical result consists in the fact that the developed method for isolating axenic cultures of microalgae has a wide range of applications, because allows to obtain axenic cultures of microalgae, regardless of the source of isolation and the degree of their bacterial contamination. Also, the use of the proposed method allows to reduce the time for isolation of pure microalgae cultures, to increase the efficiency of their isolation and the reliability of obtaining the desired species of pure microalgae cultures.
Разработка заявляемого способа стала возможна после определения ряда моментов:
Использование чистых аксенических культур - необходимая предпосылка успешного физиолого-биохимического изучения микроводорослей.The development of the proposed method became possible after determining a number of points:
The use of pure axenic cultures is a necessary prerequisite for a successful physiological and biochemical study of microalgae.
1. В предлагаемом способе в качестве основы для 1,5% плотной питательной среды используется среда Прата: KNO3 - 0,10 г/л, K2HPO4 - 0,01 г/л, MgSO4 · 7H2O - 0,01 г/л, FeCl3 · 6H2O - 0,001 г/л. Она является универсальной для всех видов водорослей и позволяет сохранять разделяемые альгокультуры физиологически активными.1. In the proposed method, as a basis for a 1.5% dense nutrient medium, Prata medium is used: KNO 3 - 0.10 g / l, K 2 HPO 4 - 0.01 g / l, MgSO 4 · 7H 2 O - 0 , 01 g / l, FeCl 3 · 6H 2 O - 0.001 g / l. It is universal for all types of algae and allows you to keep shared algocultures physiologically active.
2. Для разделения альгокультур рекомендуется использовать стеклянный шпатель и рассев приемом по Дригальскому (путем втирания в поверхность питательной среды), в этом случае методика рассева и использование стеклянного шпателя позволяют разбить смесь водорослей на единичные клетки, что сохраняет их целостность, а следовательно, значительно облегчает и ускоряет процесс выделения чистых культур. 2. For the separation of algocultures, it is recommended to use a glass spatula and sieving by Drigalski method (by rubbing the nutrient medium into the surface), in this case, the sieving technique and the use of a glass spatula make it possible to break the algae mixture into single cells, which preserves their integrity and, therefore, greatly facilitates and speeds up the process of isolating pure crops.
3. Мертиолат (Thimerosal) - натриевая соль этилмеркурисалициловой кислоты, кристаллический порошок желтого цвета, растворимый в воде [6], применяется как консервант белковых растворов [7, 8]. В иммунологических лабораторных исследованиях растворы мертиолата широко применяется для предупреждения контаминации клеток животных и человека бактериофлорой. 3. Merthiolate (Thimerosal) - sodium salt of ethyl mercurisalicylic acid, a crystalline yellow powder, soluble in water [6], is used as a preservative for protein solutions [7, 8]. In immunological laboratory studies, solutions of merthiolate are widely used to prevent contamination of animal and human cells with bacterioflora.
Авторами экспериментально установлено, что присутствие в агаризованной питательной среде Прата мертиолата в концентрации 2 · 10-6 г/мл способствует освобождению клеток микроводорослей от сопутствующей им бактериофлоры.The authors experimentally established that the presence in the agarized nutrient medium of Prat merthiolate at a concentration of 2 · 10 -6 g / ml promotes the release of microalgae cells from the associated bacterioflora.
Были приготовлены плотные питательные среды. Предварительно готовили водный раствор мертиолата с концентрацией вещества 2 · 10-3 г/мл. В расплавленную агаризованную питательную среду Прата пипеткой вносили приготовленный раствор мертиолата так, чтобы его концентрация в питательной среде составила: 2 · 10-8; 2 · 10-7; 2 · 10-6; 2 · 10-5; 2 · 10-4 г/мл. Затем приготовленные питательные среды разливали по 10 мл в чашки Петри и оставляли при комнатной температуре для застывания.Dense nutrient media were prepared. An aqueous solution of merthiolate with a concentration of 2 × 10 -3 g / ml was previously prepared. The prepared solution of merthiolate was pipetted into the molten agarized nutrient medium of Prat so that its concentration in the nutrient medium was: 2 · 10 -8 ; 2 · 10 -7 ; 2 · 10 -6 ; 2 · 10 -5 ; 2 · 10 -4 g / ml. Then, the prepared nutrient medium was poured into 10 ml into Petri dishes and left at room temperature for solidification.
Далее в чашки вносили по 0,1 мл концентрированной водорослевой суспензии и путем втирания стеклянным шпателем равномерно распределяли по поверхности питательной среды. После суточной инкубации в термостате при + 25oC с целью бактериологического контроля производили пересев исследуемых альгокультур на мясопептонный агар. Результаты исследований представлены в таблице.Then, 0.1 ml of concentrated algal suspension was added to the plates and evenly distributed over the surface of the growth medium by rubbing with a glass spatula. After daily incubation in a thermostat at + 25 o C for the purpose of bacteriological control, the studied algocultures were reseeded on meat and peptone agar. The research results are presented in the table.
Как видно из данных, представленных в таблице, содержание в агаризованой среде Прата мертиолота в концентрациях, меньших 2 · 10-6 г/мл (среды 1, 2), не освобождает клетки микроводорослей от сопутствующей им бактериофлоры. В тоже время при содержании мертиолата в питательной среде в дозах, превышающих 2 · 10-6 г/мл (среды 4, 5), начинается подавление роста всех изучаемых культур. Из этого следует, что эффект, связанный с освобождением микроводорослей от сопутствующей микрофлоры с сохранением жизнедеятельности изучаемых микроводорослевых клеток, достигается созданием в агаризованной среде Прата концентрации мертиолата 2 · 10-6 г/мл.As can be seen from the data presented in the table, the content in the agarized medium of Prat merthiolota in concentrations less than 2 · 10 -6 g / ml (medium 1, 2) does not release microalgae cells from the bacterioflora that accompanies them. At the same time, when the content of merthiolate in the nutrient medium in doses exceeding 2 · 10 -6 g / ml (medium 4, 5), the growth inhibition of all studied cultures begins. From this it follows that the effect associated with the release of microalgae from the concomitant microflora while maintaining the life of the studied microalgal cells is achieved by creating a concentration of 2 · 10 -6 g / ml of merthiolate in the Prat agar medium.
4. В работе при выделении чистых альгокультур была использована питательная среда, приготовленная на основе универсальной среды Прата: KNO3 - 0,10 г/л, K2HPO4 - 0,01 г/л, MgSO4 · 7 H2O - 0,01 г/л, FeCl3 · 6H2O - 0,001 г/л, агар-агар - 1,2 - 1,5%, которую используют в альгологии для хранения и культивирования водорослевых культур. Использование данной агаризованной среды позволило обеспечить альгокультурам необходимые условия для роста.4. In the study of the isolation of pure algocultures, we used a nutrient medium prepared on the basis of the universal Prata medium: KNO 3 - 0.10 g / l, K 2 HPO 4 - 0.01 g / l, MgSO 4 · 7 H 2 O - 0.01 g / l, FeCl 3 · 6H 2 O - 0.001 g / l, agar-agar - 1.2 - 1.5%, which is used in algology for storage and cultivation of algal cultures. The use of this agarized medium allowed algocultures to provide the necessary conditions for growth.
Способ осуществляется следующим образом. The method is as follows.
Собранный в природе живой материал объемом 500-100 мл концентрируют с помощью центрифугирования при 3000 об/мин в течение 3-5 минут до объема 1-2 мл. Полученный осадок, содержащий альгобактериальные культуры в объеме 0,1 мл, вносят в чашку Петри и втирают стеклянным шпателем в поверхность 1,5%-ной агаризованной среды Прата, в которую предварительно введен водный раствор мертиолата так, чтобы его концентрация в ней составляла 2 · 10-6 г/мл. Чашки с посевом помещают в термостат и инкубируют при температуре + 25oC в течение 24 часов для достижения подавляющего действия мертиолата на бактерии. Затем под микроскопом единичные микроколонии снимают с кусочками плотной питательной среды и помещают в соответствующие стерильные элективные жидкие питательные среды для накопления биомассы исследуемых микроводорослей.The living material collected in nature from 500-100 ml in volume is concentrated by centrifugation at 3000 rpm for 3-5 minutes to a volume of 1-2 ml. The resulting precipitate containing 0.1 ml algobacterial cultures was added to a Petri dish and rubbed with a glass spatula into the surface of a 1.5% Prat agar medium into which an aqueous solution of merthiolate was previously introduced so that its concentration in it was 2 10 -6 g / ml. Sowing cups are placed in a thermostat and incubated at a temperature of + 25 o C for 24 hours to achieve the inhibitory effect of merthiolate on bacteria. Then, under a microscope, single microcolonies are removed with pieces of a dense nutrient medium and placed in the appropriate sterile elective liquid nutrient medium to accumulate the biomass of the studied microalgae.
Приводим примеры конкретного выполнения заявляемого способа. We give examples of specific performance of the proposed method.
Пример 1. Из воды реки Урал для научных целей необходимо было выделить культуру водорослей Scenedesmus guadricauda. С этой целью из природной воды (объемом 0,5 литра) путем центрифугирования при 3000 об/мин в течение 3-5 мин была приготовлена водорослевая суспензия (объемом 1-2 мл), которая состояла из нескольких видов водорослей при бактериальной обсемененности 105 КОЕ/мл. Полученную суспензию, содержащую альгобактериальную ассоциацию, в объеме 0,1 мл внесли в чашку Петри и стеклянным шпателем равномерно растерли по поверхности агаризованной среды Прата, содержащую мертиолат в дозе 2 · 10-6 г/мл. После суточной инкубации чашек при +25oC микроколонии водорослей стерильным инструментом сняли вместе с кусочками плотной питательной среды и поместили в стерильную элективную жидкую среду Тамия [5] для накопления биомассы полученных водорослей.Example 1. From the water of the Ural River for scientific purposes it was necessary to isolate the algae culture Scenedesmus guadricauda. For this purpose, algal suspension (1-2 ml in volume) was prepared from natural water (0.5 liter volume) by centrifugation at 3000 rpm for 3-5 minutes, which consisted of several types of algae with bacterial contamination of 10 5 CFU / ml The resulting suspension containing the algobacterial association, in a volume of 0.1 ml, was added to the Petri dish and evenly rubbed with a glass spatula over the surface of the Prat agar medium containing merthiolate at a dose of 2 · 10 -6 g / ml. After daily incubation of the dishes at +25 ° C, the microcolonies of algae with a sterile instrument were removed together with pieces of a dense nutrient medium and placed in a sterile elective liquid medium of Tamiya [5] to accumulate the biomass of the obtained algae.
С помощью предлагаемого способа в результате одного пассажа удалось получить аксеничную культуру Scenedesmus guadricauda, содержащую один вид водоросли, свободный от сопутствующей бактериофлоры (на фиг. 1 - рост микроводорослей на плотной питательной среде, содержащей мертиолат в дозе 2 · 10-6 г/мл, ув. х20).Using the proposed method, as a result of one passage, it was possible to obtain an axenic culture of Scenedesmus guadricauda containing one species of algae, free of concomitant bacterioflora (in Fig. 1, the growth of microalgae on a dense nutrient medium containing 2 × 10 -6 g / ml merthiolate, sw. x20).
В результате использования способа-прототипа из суспензии в течение 2-х пассажей была получена культура, содержащая преимущественно вид Scenedesmus guadricauda. Однако кроме указанного вида в культуральной среде регистрировались единичные клетки микроводорослей Oocystis lacustris, Scenedesmus acuminatus и бактерии в количестве 101 КОЕ/мл. В результате повторных посевов удалось выделить Scenedesmus guadricauda в монокультуру, но избавиться от сопутствующих им бактерий так и не удалось (на фиг. 2 - рост микроводорослей на плотной питательной среде без добавления мертиолата).As a result of using the prototype method, a culture containing mainly the Scenedesmus guadricauda species was obtained from the suspension for 2 passages. However, in addition to the indicated species, single cells of microalgae Oocystis lacustris, Scenedesmus acuminatus, and bacteria in an amount of 10 1 CFU / ml were recorded in the culture medium. As a result of repeated sowing, it was possible to isolate Scenedesmus guadricauda into a monoculture, but it was not possible to get rid of the bacteria accompanying them (in Fig. 2 - the growth of microalgae in a dense nutrient medium without adding merthiolate).
Пример 2. Из воды реки Карагалки для научных целей необходимо было выделить культуру водорослей Microcystis aeruginosa. Полученная аналогично первому примеру микроводорослевая суспензия состояла из нескольких видов водорослей при бактериальной обсемененности 108 КОЕ/мл. Как и в первом случае, ее внесли в чашку Петри и стеклянным шпателем равномерно растерли по поверхности агаризованной среды Прата, содержащую мертиолат в дозе 2 · 10-6 г/мл. После суточной инкубации чашек при +25oC микроколонии водорослей стерильным инструментом сняли вместе с кусочками плотной питательной среды и поместили в стерильную элективную жидкую среду Чу [5] для накопления биомассы полученных водорослей.Example 2. From the water of the Karagalka River, for scientific purposes, it was necessary to isolate the microcystis aeruginosa algae culture. Obtained similarly to the first example, the microalgal suspension consisted of several species of algae with bacterial contamination of 10 8 CFU / ml. As in the first case, it was introduced into a Petri dish and evenly rubbed with a glass spatula on the surface of the Prat agar medium containing merthiolate at a dose of 2 · 10 -6 g / ml. After daily incubation of the dishes at +25 ° C, the microcolony of algae with a sterile instrument was removed together with pieces of a dense nutrient medium and placed in a sterile elective liquid medium Chu [5] to accumulate the biomass of the obtained algae.
С помощью предлагаемого способа в результате одного пассажа удалось получить аксеничную культуру Microcystis aeruginosa, содержащую один вид водоросли, свободный от сопутствующей бактериофлоры. Using the proposed method, as a result of one passage, it was possible to obtain an axenic culture of Microcystis aeruginosa containing one species of algae, free of the accompanying bacteriological flora.
В результате использования способа-прототипа из суспензии в течение 3-х пассажей была получена культура, содержащая преимущественно вид Microcystis aeruginosa. Однако кроме указанного вида в культуральной среде регистрировались единичные клетки микроводорослей Coelastrum pseudomicroporum, Coenacystis corschikoffii и бактерии в количестве 103 КОЕ/мл. В результате повторных посевов микроводоросли вида Microcystis aeruginosa удалось выделить в монокультуру, но избавиться от сопутствующих им бактерий так и не удалось.As a result of using the prototype method from a suspension for 3 passages, a culture was obtained containing mainly the species Microcystis aeruginosa. However, in addition to the indicated species, single microalgae cells Coelastrum pseudomicroporum, Coenacystis corschikoffii and bacteria in an amount of 10 3 CFU / ml were recorded in the culture medium. As a result of repeated sowing, the microalgae of the species Microcystis aeruginosa was able to isolate into a monoculture, but it was not possible to get rid of the bacteria accompanying them.
Таким образом, использование заявляемого способа выделения аксенических культур микроводорослей позволяет сократить сроки выделения чистых культур, повысить эффективность их выделения и надежность получения искомых видов чистых культур микроводорослей. Также способ имеет широкий круг применения, т. к. позволяет получать аксенические культуры микроводорослей независимо от источника выделения и степени их бактериальной обсемененности. Thus, the use of the proposed method for the isolation of axenic cultures of microalgae allows to reduce the time of isolation of pure cultures, to increase the efficiency of their isolation and the reliability of obtaining the desired species of pure cultures of microalgae. The method also has a wide range of applications, because it allows to obtain axenic cultures of microalgae, regardless of the source of isolation and the degree of their bacterial contamination.
Источники информации
1. Stewart W.D.P. Algae, men and environment, Syracuse - N.Y. - 1968. - 302 p.Sources of information
1. Stewart WDP Algae, men and environment, Syracuse - NY - 1968. - 302 p.
2. Юнг Л. А., Панкратова Е.М. //Труды Кировского сельскохозяйственного института, 1967. - N 20. - Вып.40. - 98 с. 2. Jung L. A., Pankratova E.M. // Proceedings of the Kirov Agricultural Institute, 1967. - N 20. - Issue 40. - 98 p.
3. Gerloff G.C., Fitzgerald G.P., Skoog F. // The isolation purification and culture of blue-green Amer. J., 1950. - Vol. 37. -N 3. - P. 216. 3. Gerloff G.C., Fitzgerald G.P., Skoog F. // The isolation purification and culture of blue-green Amer. J., 1950. - Vol. 37.-N 3. - P. 216.
4. Квитко К.В. Получение культур отдельных клеток хлореллы // Исследования по генетике. - Л.: Из-во Ленинградского университета, 1961. - Вып. 1. - С. 50-54. 4. Kvitko K.V. Obtaining cultures of individual chlorella cells // Studies in genetics. - L .: From the University of Leningrad, 1961. - Issue. 1. - S. 50-54.
5. Вассер С.П., Кондратьева Н.В., Масюк Н.П. и др. Водоросли. Справочник. - Киев: Наукова думка, 1989. - 608 с. (прототип). 5. Wasser S.P., Kondratyeva N.V., Masyuk N.P. and others. Algae. Directory. - Kiev: Naukova Dumka, 1989 .-- 608 p. (prototype).
6. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. / Под ред. Биргера М.О. - М.: Медицина, 1982. - 464 с. 6. Handbook of microbiological and virological research methods. / Ed. Birgera M.O. - M .: Medicine, 1982. - 464 p.
7. Газизова Г.P. Исследование токсичности консервантов в бактерийных и сывороточных препаратах на клеточной культуре //Препараты крови. - Горький, 1981. - С. 55-58. 7. Gazizova G.P. The study of the toxicity of preservatives in bacterial and serum preparations on cell culture // Blood preparations. - Gorky, 1981. - S. 55-58.
8. Волгарева Г.М. Цитогенетический контроль безвредности мертиолата // ЖМЭИ, 1989. - N 11. - С. 46-52. 8. Volgareva G.M. Cytogenetic control of the safety of merthiolate // ZhMEI, 1989. - N 11. - P. 46-52.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98122491A RU2164940C2 (en) | 1998-12-15 | 1998-12-15 | Method of isolation of microalga axenic cultures |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98122491A RU2164940C2 (en) | 1998-12-15 | 1998-12-15 | Method of isolation of microalga axenic cultures |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU98122491A RU98122491A (en) | 1999-06-20 |
| RU2164940C2 true RU2164940C2 (en) | 2001-04-10 |
Family
ID=20213341
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98122491A RU2164940C2 (en) | 1998-12-15 | 1998-12-15 | Method of isolation of microalga axenic cultures |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2164940C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110143670A (en) * | 2019-03-15 | 2019-08-20 | 河北经贸大学 | A kind of microalgae HC-2 processing milk cattle cultivating waste plant and method |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2627506B1 (en) * | 1988-02-19 | 1994-05-27 | Nat Inst Environmetal | PROCESS FOR PRODUCING AXENIC MASS CULTURES AND APPARATUS FOR CARRYING OUT SUCH A PROCESS |
-
1998
- 1998-12-15 RU RU98122491A patent/RU2164940C2/en active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2627506B1 (en) * | 1988-02-19 | 1994-05-27 | Nat Inst Environmetal | PROCESS FOR PRODUCING AXENIC MASS CULTURES AND APPARATUS FOR CARRYING OUT SUCH A PROCESS |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| БАБЬЕВА И.П. и др. Биология почв. - Изд-во Московского университета, 1989, с.103 и 107 - 112. * |
| ВАССЕР С.П. и др. Водоросли. Справочник. - Киев: Наукова Думка, 1089, с.608. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110143670A (en) * | 2019-03-15 | 2019-08-20 | 河北经贸大学 | A kind of microalgae HC-2 processing milk cattle cultivating waste plant and method |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Guillard | Purification methods for microalgae | |
| Onodera et al. | Growth factors of bacterial origin for the culture of the rumen oligotrich protozoon, Entodinium caudatum | |
| Gibor | Some ecological relationships between phyto-and zooplankton | |
| Archibald et al. | Phycological studies | |
| Dubos et al. | Media for tubercle bacilli | |
| Grilli Caiola et al. | Cytology of long-term desiccation in the desert cyanobacterium Chroococcidiopsis (Chroococcales) | |
| JPH06501623A (en) | Method of using porous calcium carbonate as a support material for in vitro culture of cells | |
| Rahat et al. | Cultivation of bacteria-free Hydra viridis: missing budding factor in nonsymbiotic hydra | |
| McLaughlin et al. | Studies in marine biology. II. In vitro culture of zooxanthellae. | |
| CN108048327A (en) | A kind of new method for efficiently separating diatom | |
| Sheffield et al. | Enhancement of fern spore germination and gametophyte growth in artificial media | |
| López-Ruiz et al. | Marine microalgae culture: Chaetoceros gracilis with zeolitic product Zestec-56 and a commercial fertilizer as a nutrient | |
| RU2164940C2 (en) | Method of isolation of microalga axenic cultures | |
| RU94026123A (en) | Method of preparation probiotic preparing | |
| US4449480A (en) | Culture of freshwater mussel glochidia in an artificial habitat utilizing complex liquid growth media | |
| Silverman jr et al. | Tissue-Culture Studies of Human Oral Carcinoma 1. Proliferative Capacities of Non-malignant and Malignant Oral Explants | |
| SANDVEN et al. | Improved medium for the transportation of gonococcal specimens | |
| RU2106879C1 (en) | Method for culturing slowly growing mycobacteria | |
| RU2542481C2 (en) | Method of production of bacteriologically pure cultures of marine blue-green microalgae | |
| Bbockelman et al. | Rhabditis maupasi: occurrence in food snails and cultivation | |
| Nester et al. | Antheridiogen activity of Anemia mexicana | |
| Coughlan | Comparative studies of glycollic acid uptake by four marine algae | |
| RU2209829C2 (en) | Method for culturing mycobacterium tuberculosis microorganisms | |
| Wolf et al. | An explanation of the principles and methods of tissue culture | |
| JP4096057B2 (en) | Coral larva settlement / transformation promoter and method for producing the same |