RU2162689C2

RU2162689C2 - Пролипосомные порошки для ингаляции

Info

Publication number: RU2162689C2
Application number: RU97112399/14A
Authority: RU
Inventors: Бюстрем Катарина; Нильссон Пер-Гуннар
Original assignee: Астра Актиеболаг
Priority date: 1994-12-22
Filing date: 1995-12-20
Publication date: 2001-02-10
Also published as: AU693632B2; UA43886C2; EP0800383B1; AR002009A1; SK284918B6; PT800383E; NZ298180A; DK0800383T3; CZ194897A3; IL116454A0; EE03592B1; DE69530792T2; FI972653A0; CA2208517A1; CZ286469B6; EP0800383A1; FI972653L; JPH10510830A; NO320434B1; ATE240095T1

Abstract

Изобретение относится к медицине. Пролипосомный порошок содержит монофазные дискретные частицы биологически активного компонента и липида или смеси липидов, а также кристаллический гидрофильный фармакологически приемлемый носитель. Липиды имеют температуру фазового перехода ниже 37°С. Липиды выбраны из натуральных и синтетических фосфоглицеролипидов, сфинголипидов и дигалактозилглицеролипидов. Пролипосомные порошки используются для ингаляции, являются стабильными в условиях длительного хранения и обеспечивают высокую биологическую доступность активного компонента. 5 с. и 36 з.п. ф-лы.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к пролипосомным порошкам, применяемым, в частности, для ингаляции, к способу получения пролипосомных порошков, к композициям, содержащим пролипосомные порошки, и к способам их применения.

Технические предпосылки создания изобретения
Липосомы относятся к мембраноподобным везикулам, состоящим из ряда липидных бислоев, чередующихся с гидрофильными участками. Они могут быть построены из множества натуральных и синтетических липидов, таких как натуральные и синтетические фосфоглицеролипиды, сфинголипиды и дигалактозилглицеролипиды. Одним из основных применений липосом является применение их в качестве носителей для различных видов фармацевтически активных компонентов с целью улучшения доставки лекарственных средств и сведения к минимуму побочных эффектов некоторых курсов лечения. Фармацевтически активные компоненты могут быть включены в липосомы либо путем инкапсулирования их в гидрофильные участки липосомы (в случае, когда активный компонент водорастворим), либо путем инкапсулирования их в липидные бислои, когда активный компонент является липофильным.

Одной из основных проблем, связанных с фармацевтическими липосомными препаратами, является стабильность в условиях длительного хранения. Водные липосомные дисперсии обладают ограниченной стабильностью, связанной с агрегацией, потерей активного компонента во внешней фазе, химической деградацией активного компонента или липидного материала и др.

Эти проблемы могут быть в значительной степени преодолены в случае использования твердой композиции. Такие твердые композиции могут включать липосомный порошок, т.е. высушенную липосомную дисперсную систему, или пролипосомный порошок.

Процесс высушивания липосомных дисперсий сопряжен с риском повреждения липосомных мембран. Для минимизации такого риска липосомы следует высушивать в присутствии защищающих сахаров, как описано, например, в публикации WO 86/01103.

В патенте США 4906476 раскрываются липосомные препараты для доставки стероидов методом ингаляции. В нем также раскрывается возможность доставки высушенных липосом в виде порошкообразного аэрозоля с использованием подходящего устройства. Кроме того, в этом документе раскрывается доставка путем распыления из распылителя, содержащего в качестве растворителя газ-вытеснитель с суспендированными в нем частицами сухого порошка липосом, а также распыление сухих частиц в легкие с помощью газа-вытеснителя.

При этом липосомы как таковые не присутствуют в пролипосомных порошках, а образуются в процессе гидратации при температуре, превышающей температуру фазового перехода липидов. Пролипосомные порошки обладают преимуществом в сравнении с препаратами высушенных липосом, поскольку в этом случае исключается риск повреждения липосомных мембран при дегидратации.

Пролипосомные порошки уже были описаны ранее.

Так, например, в патенте США 4311712 раскрывается лиофилизованная потенциально-липосомная смесь (обладающая способностью генерировать липосомы), которая была получена при растворении образующего липосомы амфипатического липида и липидорастворимого или липид-связанного биологически активного соединения в органическом растворителе, который остается твердым в ходе лиофилизации, с последующей лиофилизацией полученного раствора. Потенциально-липосомная смесь может храниться и затем при желании восстанавливаться в виде водного липосомного препарата. При этом биологически активное соединение может представлять собой любое соединение, обладающее свойствами биологического характера.

В публикации WO 90/00389 раскрывается лиофилизованная потенциально-липосомная смесь, включающая амфипатический липид и циклоспорин или его производное, для использования в процессе доставки в клетки циклоспорина с помощью образуемых липосом. Лиофилизованная смесь восстанавливается в волной среде с образованием липосом, в которые инкапсулирован практически весь циклоспорин, имевшийся в лиофилизованной смеси.

В публикации WO 92/11842 раскрывается пролипосомный порошок, который при восстановлении водой или солевым раствором образует суспензию липосом с включенным в них полиеновым лекарственным средством, например нистатином.

Все указанные выше патенты и заявки имели отношение к пролипосомным композициям, которые перед введением подвергают гидратации.

В ЕР 309464 раскрываются пролипосомные порошковые композиции, которые можно использовать при ингаляции. Указанные порошковые композиции включают твердые частицы, в которых биологически активный компонент содержится в виде дисперсии в липиде.

Цель изобретения
Авторы изобретения обнаружили, что, если предпочтительна доставка лекарственного средства путем ингаляции, то выгодно обеспечить пролипосомные порошки, которые включают только одну фазу. Поэтому одной из целей настоящего изобретения является обеспечение такого пролипосомного порошка.

Раскрытие изобретения
Вышеуказанная цель настоящего изобретения достигается при разработке пролипосомного порошка, который содержит только одну фазу, состоящую из дискретных частиц биологически активного компонента в сочетании с липидом или смесью липидов, имеющих температуру фазового перехода (Т_c) ниже 37^oC.

Рассматриваемый порошок наиболее удобен для введения его посредством ингаляции.

Единственная фаза порошка может быть также описана как включающая гомогенную молекулярную смесь биологически активного компонента и липида или смеси липидов, имеющих температуру фазового перехода (Т_c) ниже 37^oC.

Термины "одна, или единственная фаза" и "гомогенная молекулярная смесь" следует понимать таким образом, что в порошке настоящего изобретения отсутствует отдельная кристаллическая фаза активного компонента или липида.

Единственная фаза порошка может быть введена ингаляцией непосредственно, а также in situ, например, в верхнюю или нижнюю часть дыхательной системы, образуя липосомы, в которые полностью включен биологически активный компонент.

В целом, следует отметить, что в настоящем изобретении может использоваться любой амфипатический липид или смесь липидов, в отношении которых известно, что они пригодны для приготовления липосом с помощью уже существующих известных метолов. Такие липид или липидная смесь должны иметь температуру фазового перехода ниже температуры тела (37^oC) для того, чтобы продукт в форме пролипосомального порошка мог подвергаться гидратации в физиологических условиях (т.е. для того, чтобы такой продукт мог образовывать липосомы в дыхательной системе). Температуры фазового перехода для различных липидных смесей могут быть легко определены с использованием хорошо известных методов, таких как дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК) (см., например, J. Suurkuusk et аl., Biochemistry, 1976, 15, no. 7, p. 1393). В общем, в настоящем изобретении может использоваться любой натуральный или синтетический липид или смесь липидов, имеющие температуру фазового перехода ниже 37^oC.

В качестве примеров, пригодных для использования липидов, можно упомянуть натуральные и синтетические липиды, такие как натуральные и синтетические фосфоглицеролипиды, сфинголипиды и дигалактозилглицеролипиды. Среди натуральных липидов следует отметить сфинголипиды (СЛ), такие как сфингомиелин (СМ), церамид и цереброзид; галактозилглицеролипиды, такие как дигалактозилдиацилглицерин (ДГалДГ); фосфоглицеролипиды, такие как фосфатидилхолин яичного желтка (я-ФХ) и соевый фосфатидилхолин (с-ФХ); и лецитины, такие как лецитин яичного желтка (я-лецитин) и соевый лецитин (с-лецитин). Среди синтетических липидов следует отметить димиристоил фосфатидилхолин (ДМФХ), дипальмитоил фосфатидилхолин (ДПФХ), дистеароил фосфатидилхолин (ДСФХ), дилаурил фосфатидилхолин (ДЛФХ), 1-миристоил-2-пальмитоил фосфатидилхолин (МПФХ), 1-паль-митоил-2-миристоил фосфатидилхолин (ПМФХ) и диолеоил фосфатидилхолин (ДОФХ). Среди смесей липидов можно отметить следующие: СМ/ФХ, СМ/холестерин, яФХ/холестерин, сФХ/холестерин, ФХ/ФС/холестерин, ДМФХ/ДПФХ, ДМФХ/ДПФХ/Х, ДМФХ/Х, ДПФХ/ДОФХ, ДПФХ/ДОФХ/Х, ДЛФХ/ДПФХ, ДЛФХ/ДПФХ/Х, ДЛФХ/ДМФХ, ДЛФХ/ДМФХ/Х, ДОФХ/ДСФХ, ДПСМ/ДМСМ, я-лецитин/холестерин и с-лецитин/холестерин. В дополнение к любому из указанных выше продуктов может включаться заряженный липид, такой как димиристоил фосфатидилглицерин (ДМФГ), дифоспалмитоил фосфатидилглицерин (ДПФГ), димиристоил фосфатидиновая кислота (ДМФК), дипальмитоил фосфатидиновая кислота (ДПФХ) или стеариламин (СА).

Липидами, представляющими особый интерес в контексте настоящего изобретения, являются ДПФХ и/или ДМФХ. Предпочтительна смесь ДПФХ и ДМФХ, содержащая, по крайней мере, 10 мас. % ДМФХ, например, 10 - 50% ДМФХ. Наиболее предпочтительной является смесь ДПФХ и ДМФХ, содержащая вдобавок, по крайней мере, один заряженный липид, такой как ДМФГ, ДПФГ, ДМФК или СА, например, в количестве до 5 мас.%. Другие предпочтительные смеси включают ДПСМ и ДМСМ, не обязательно содержащие, по крайней мере, один заряженный липид, а также смеси холестерина с я-лецитином или с с-лецитином, не обязательно содержащие, по крайней мере, один заряженный липид и имеющие Т_с менее 37^oC. Другие смеси могут быть без труда отобраны любым специалистом со средним уровнем знаний в данной области при обращении к соответствующим руководствам (например, Gregor Cevc, Phospholipids Handbook, Marcel Dekker, New York (1993), pp 427- 435).

Активный компонент предпочтительно имеет молекулярную структуру, которая может быть включена в липидные бислои для облегчения процесса инкапсулирования в липосомы при гидратации. В качестве примера можно назвать эфир жирной кислоты с длинной углеводородной цепью, достаточной для того, чтобы действовать в качестве гидрофобного фиксатора.

Подходящие активные компоненты могут быть без труда определены любым специалистом со средним уровнем знаний в данной области, при этом указанные компоненты могут включать, например, противовоспалительные средства и бронхорелаксанты, а также антигистамины, ингибиторы циклооксигеназы, ингибиторы синтеза лейкотриена, антагонисты лейкотриена, ингибиторы фосфолипазы-А2 (ФЛА2), антагонисты фактора агрегации тромбоцитов (ФАТ) и средства профилактики астмы. В данном контексте могут представлять интерес также антиаритмические средства, транквилизаторы, сердечные гликозиды, гормоны, гипотензивные средства, антидиабетики, противопаразитарные и противораковые средства, селативные средства, анальгетики, антибиотики, противоревматические средства, средства, применяемые для иммунотерапии, противогрибковые препараты, гипертензивные средства, вакцины, антивирусные препараты, белки, пептиды и витамины.

Специфически в данном изобретении могут использоваться глюкокортикостероиды, такие как будезонид, дексаметазон, бетаметазон, флуоцинолон, флуметазон, триамцинолона ацетонид, флунизолид, беклометазон и 16,17-ацетали прегнановых производных и полученные из них соединения; а также β-2 агонисты, такие как тербуталин, салметерол, салбутамол, формотерол, фенотерол, кленбутерол, прокатерол, битолтерол и броксатерол. В качестве активного компонента может также применяться смесь фармацевтически активных веществ; например, смесь глюкокортикостероида с бронходилататором, таким как формотерол, салметерол, тербуталин или салбутамол. Во избежание разночтений в случаях ссылок на активные компоненты следует указать, что эти ссылки охватывают фармацевтически приемлемые эфиры, соли и гидраты активных компонентов.

Когда активный компонент представляет собой стероид, это предпочтительно стероидный эфир.

Активный компонент представляет собой предпочтительно стероид и предпочтительно стероид, этерифицированный в 21-ом положении жирной кислотой, включающей, по крайней мере, 8, например, по крайней мере, 10 или, по крайней мере, 12 атомов углерода. Жирная кислота может содержать до 24 атомов углерода, в частности, до 20 или до 18 атомов углерода. Более предпочтительно, чтобы активный компонент представлял собой стероид-21-пальмитат, миристат, лаурат, капрат, каприлат или стеарат. Наиболее предпочтительным активным компонентом настоящего изобретения является соединение (22R) -16α , 17 α-бутилидендиокси-6α, 9 α-дифтор-11 β-гидрокси-21-пальмитоилокси-прегнан-4-ен-3,20-дион, рофлепонида пальмитат.

В том случае когда активный ингредиент является эфиром, он должен быть гидролизован до активного начала. Было обнаружено, что применение монофазного пролипосомного порошка настоящего изобретения облегчает протекание необходимого in situ гидролиза, тогда как эфиры, находящиеся в кристаллическом состоянии, не гидролизуются.

При желательности доставки средства путем ингаляции, как можно большая часть пролипосомного порошка настоящего изобретения должна состоять из частиц, имеющих диаметр менее 10 микрон, например, 0,01-10 микрон, или 0,1-6 микрон, например, 0,1-5 микрон, или агломераты таких частиц. Предпочтительно, чтобы, по крайней мере, 50% порошка состояло из частиц, укладывающихся по размеру в указанный диапазон. Так, например, по крайней мере, 60%, предпочтительно, по крайней мере, 70%, более предпочтительно, по крайней мере, 80% и наиболее предпочтительно, по крайней мере, 90% порошка состояло либо из частиц с размерами, соответствующими желаемому диапазону, либо из агломератов таких частиц.

В пролипосомный порошок настоящего изобретения нет необходимости вводить другие ингредиенты. Однако фармацевтические композиции, содержащие порошки настоящего изобретения, могут также включать другие фармацевтически приемлемые добавки, в частности адъюванты, разбавители и носители. Они могут быть добавлены к пролипосомной композиции после проведения любого вида микронизации или перед ней при условии, что растворитель был полностью удален. Любой используемый носитель представляет собой предпочтительно кристаллическое гидрофильное вещество. Предпочтительным носителем является кристаллический моногидрат лактозы. Другие предпочтительные носители включают глюкозу, фруктозу, галактозу, трегалозу, сахарозу, мальтозу, раффинозу, мальтит, мелезитозу, стахиозу, лактит, палатинит, крахмал, ксилит, маннит, миоинозит и другие, включая их гидраты, а также аминокислоты, например, аланин и бетаин.

Количество имеющихся в препарате добавок может варьироваться в широком диапазоне. При некоторых обстоятельствах может требоваться внесение очень малого количества добавок, либо потребность в них может вовсе отсутствовать, а зачастую предпочтительно использование разбавителей для разведения порошка с целью улучшения его свойств, существенных для ингаляции. В последнем случае, например, по крайней мере, 50%, в частности, по крайней мере, 70% или, по крайней мере, 80% препарата может состоять из добавок, а лишь оставшаяся часть представлять пролипосомный порошок. Процентное содержание добавок может зависеть также от эффективности биологически активного соединения и оптимального количества порошка, применяемого для ингаляции.

Когда имеется добавка, в частности носитель, вся композиция может быть представлена в виде частиц, имеющих размеры, укладывающиеся в приемлемый для вдыхания диапазон. Альтернативно, носитель может включать крупнозернистые частицы со средним значением диаметра более 20 микрон, или он может включать агломераты более мелких частиц или агломераты со средним диаметром, к примеру более 20 микрон, но в любом случае образуется заданная смесь пролипосом и носителя.

Другим объектом настоящего изобретения является обеспечение способа приготовления пролипосомного порошка настоящего изобретения, т.е. способа, осуществление которого приводит к получению монофазного пролипосомного порошка.

В этой связи настоящее изобретение относится также к способу приготовления пролипосомного порошка для ингаляции, который включает растворение липида или смеси липидов и липофильного биологически активного компонента в растворителе, при этом упомянутый липид или смесь липидов должны иметь температуру фазового перехода ниже 37^oC; получение кристаллической матрицы растворителя с включенной в нее единственной липидной фазой, переходящей при замораживании в стекловидное состояние, при этом указанное замораживание осуществляется при температуре ниже температуры фазового перехода липидной фазы; и затем выпаривание замороженного растворителя при температуре ниже температуры фазового перехода липидной фазы.

Замораживание раствора и выпаривание растворителя может быть осуществлено с помощью стандартных методов, в частности посредством традиционной лиофилизации. Так, например, раствор липидов и биологически активного компонента можно влить на полки в камере для лиофилизации и снизить температуру для замораживания раствора. Выпарить растворитель можно далее, например, при снижении давления в камере для лиофилизации; полученный порошок соскребают с полок камеры с последующим необязательным пропусканием его через сито. Лиофилизованный порошок, если нужно, подвергают дальнейшей обработке с целью получения частиц, имеющих размер в диапазоне, приемлемом для вдыхания; так, например, лиофилизованный порошок может быть измельчен с получением пригодных для вдыхания частиц, и сделано это может быть с помощью, например, воздухоструйной мельницы.

Замораживание раствора биологически активного компонента и липидов осуществляется таким способом, чтобы получить единственную липидную фазу в матрице замороженного растворителя. Процесс образования монофазной липидной системы регулируется конечной температурой и скоростью замораживания раствора; оптимальная скорость замораживания любого используемого раствора должна представлять собой нечто среднее между временем, необходимым для кристаллизации имеющегося растворителя, и временем, необходимым для кристаллизации липидов и активного компонента, и может быть определена каждым специалистом со средним уровнем знаний в данной области просто методом проб и ошибок. Оптимальное значение конечной температуры должно быть на 10-20^oC ниже температуры перехода липидной фазы из стекловидного состояния. При этом для оценки кристаллического состояния может быть использован метод порошковой рентгенографии, а для отслеживания степени включения биологически активного компонента в липосомы после гидратации можно использовать дифференциальный сканирующий калориметр.

Растворитель должен обладать растворяющей способностью, достаточной для того, чтобы полностью растворить липиды и биологически активный компонент, поскольку очень важно, чтобы все компоненты перешли в раствор до начала замораживания с тем, чтобы избежать осаждения частиц или разделения фаз, которые могут привести к образованию порошка, включающего более чем одну фазу. Кроме того, растворитель должен обладать приемлемыми токсикологическими характеристиками, иметь подходящую точку замерзания и предпочтительно - высокое давление пара. Растворитель может представлять собой, например, органический растворитель, в частности спирт, или смесь водного и органического растворителей. Предпочтительным для использования в настоящем изобретении растворителем является третичный бутанол.

Можно, что не обязательно, создать условия для агломерации порошка в небольшие сферические частицы для того, чтобы регулировать когезионные свойства порошка. Размер сферических частиц должен быть предпочтительно не более 1 мм в диаметре; более крупные сферические частицы удаляются, например, при просеивании. При этом любой такой агломерат должен обладать рассыпчатостью, что означает его способность легко распадаться на отдельные частицы в соответствующих условиях, например в порошковом ингаляторе.

Пролипосомный порошок настоящего изобретения используется для местного или системного лечения заболеваний и может для этой цели вводиться через верхние и нижние дыхательные пути, включая назальный путь. Как таковое настоящее изобретение также относится к использованию упомянутого пролипосомного порошка в терапии; к использованию пролипосомного порошка в производстве медикамента, применяемого для лечения заболеваний через дыхательный тракт, и к способу лечения пациента, нуждающегося в такой терапии, который включает введение упомянутому пациенту терапевтически эффективного количества пролипосомного порошка настоящего изобретения.

Так, например, пролипосомный порошок настоящего изобретения может использоваться для лечения воспалительных заболеваний дыхательных путей, таких как астма, ринит, альвеолит, бронхиолит и бронхит.

Введение в дыхательные пути может осуществляться, в частности, с помощью ингалятора, содержащего либо сухой порошок, либо сжатый аэрозоль.

Подходящие порошковые ингаляторы включают дозированные ингаляторы, например ингалятор единственной дозы, известный пол торговой маркой Monohaler ^®, и ингаляторы с многократной дозой, например дозированные ингаляторы для сухого порошка с многократной дозой, активируемые дыханием, в частности ингаляторы с торговой маркой Turbuhaler ^®.
В том случае когда пролипосомный порошок настоящего изобретения наиболее приспособлен для введения путем ингаляции, он может быть включен в композиции, применяемые для других форм доставки. Так, например, для применения в курсе лечения, например воспалительных заболеваний суставов, таких как артриты, кожных заболеваний и заболеваний кишечника, могут изготавливаться пероральные формы, формы для местного применения и формы для инъекций.

Приведенные ниже примеры даны только с целью иллюстрации настоящего изобретения и никоим образом не ограничивают его объем.

Пример 1
Рофлепонида пальмитат (10 частей), ДПФХ (63 части), ДМФХ (24 части) и NaДПФГ (3 части) растворили в третичном бутаноле (1300 частей) при температуре 80^oC. Затем раствор вылили на полки в камере для лиофилизации, охлажденной до температуры -35^oC. Раствор приобрел эту температуру через 30 минут; после чего для индуцирования сублимации растворителя снизили давление в камере для лиофилизации. В то время как скорость сублимации регулируется снижением давления и повышением температуры, в ходе всего процесса температура не должна превышать -10^oC. Лиофилизацию продолжали до полного удаления растворителя. Полученный порошок соскребали с полок камеры для лиофилизации и пропускали через сито.

Порошок измельчали в воздухоструйной мельнице до получения частиц с размером менее 5 мкм. Микронизированный порошок затем смешивали с моногидратом лактозы (20 частей порошка: 80 частей моногидрата лактозы) при просеивании и дальнейшей гомогенизации смеси измельчением ее в воздухоструйной мельнице при сниженном давлении.

Проводили агломерирование порошковой смеси в сферические частицы размером не более 1 мм с использованием стандартной техники. Более крупные сферические частицы удаляли просеиванием. Агломерированным порошком наполняли порошковые ингаляторы Turbuhaler ^®.
Пример 2
Повторяли процедуру Примера 1 при использовании времени замораживания, равного 6 часам, 17 часам и 24 часам.

Сравнительный пример
Липиды и активный компонент из Примера 1 просто смешивают сухими друг с другом. Полученный порошок представляет собой многофазную систему, включающую отдельные частицы активного компонента и липидов.

Пример 3
Повторяют процедуру Примера 1, используя следующие смеси липидов, имеющих температуру фазового перехода ниже 37^oC.

ДПСМ/ДПСМ
я-лецитин/холестерин
с-лецитин/холестерин
Пример 4
Повторяют процедуру Примера 1, используя следующие активные компоненты:
рофлепонид-21-миристат
рофлепонид-21-лаурат
рофлепонид-21-капрат
рофлепонид-21-каприлат
рофлепонид-21-стеарат
Анализ порошка
Анализ методом порошковой дифракции рентгеновских лучей, проведенный на порошковой смеси Примеров 1 и 2, показал, что в указанных порошках отсутствовали компоненты в кристаллическом состоянии. Тогда как порошок из сравнительного примера содержал активный компонент в кристаллическом состоянии.

Включение активного компонента в липосомы
Проводили гидратацию пролипосомных порошков из Примеров 1 и 2 и измеряли степень включения активного компонента с использованием методов дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК). Результаты исследования с помощью ДСК показали, что активный компонент был полностью включен в липосомы. Тогда как ДСК-анализ порошка из сравнительного примера выявил, по существу, отсутствие включения активного компонента в липосомы.

Гидролиз эфиров
Исследовали уровень гидролиза пролипосомного порошка из Примера 1 и сравнительного примера до активного начала. Пролипосомные порошки из Примеров 1 и 2 и сравнительного примера (в каждом случае берут по 50 мкМ стероидного эфира) гидратировали добавлением воды и нагревали до температуры 50^oC в течение 15 минут. После этого образцы инкубировали при температуре 37^oC в присутствии липазы из поджелудочной железы свиньи (2 мг/мл) в буфере (1 мМ ЭДТА, 80 мM KCl, 10 мМ HEPES, pH 7,4) и периодически разрушали смесь ультразвуком сеансами с различной длительностью, вплоть до 120 минут. Далее образцы анализировали методами ВЭЖХ для определения уровня гидролиза эфира до активного начала.

94% пролипосомного порошка Примера 1 гидратировали до активного начала, тогда как в порошке из сравнительного примера эта величина составляла всего 2%.

Фармакологические исследования
Противоотечную эффективность препарата исследовали на крысах в рамках модели с использованием Сефадекса (Kallskrom L. еt al., Agents and Actions, 1985, 17 (3/4), 355).

Образцы порошков из Примера 1 и сравнительного примера суспендировали в холодном физрастворе и проводили интратрахеальную инъекцию в левое легкое самцам крыс Sprague-Dawley. Через один час после инъекции провоцировали воспалительный процесс путем интратрахеальной инстилляции гранул Сефадекса (5 мг/кг) и в левое и в правое легкое. Через 20 часов проводили количественную оценку развившегося интерстициального отека путем взвешивания правого и левого легких. Снижение веса легкого рассматривали как показатель фармакологического действия порошков. Вес легкого у животных, которым вводили пролипосомный порошок из Примера 1, был в 40 раз меньше, чем вес легкого у крыс, которых лечили порошком из сравнительного примера, а это означает, что эффективность пролипосомного порошка настоящего изобретения в 40 раз выше эффективности порошка из сравнительного примера.

Исследования ингаляция порошков
Собак Бигль анестезировали, интубировали и обрабатывали аэрозольным порошком, имеющим композицию Примера 1 или сравнительного примера. Аэрозоль образовывался из порошковых таблеток с помощью прибора Wright Dust Feed, работающего со скоростью 1800 об/мин. В процессе ингаляции регистрировали концентрацию аэрозоля (Casella 950 AMS), дыхательный объем, объем вдоха и частоту дыхания. Для ингаляции был использован рофлепонида пальмитат в дозе 25 мкг/кг веса тела. После ингаляции регулярно отбирали образцы плазмы. Биологическую доступность вычисляли путем сравнения плазменных концентраций рофлепонида с таковыми после его внутривенного введения. Биологическая доступность рофлепонида после введения порошка из Примера 1 была близка к 100%, тогда как биологическая доступность рофлепонида, определяемая в плазме после введения порошка из сравнительного примера 1, не поддавалась измерению.

Claims

1. Фармацевтическая композиция, включающая пролипосомный порошок, который содержит монофазные дискретные частицы биологически активного компонента и липида или смеси липидов, имеющих температуру фазового перехода ниже 37^oC, а также кристаллический гидрофильный фармакологически приемлемый носитель.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что упомянутый порошок включает один или более липидов, выбранных из натуральных и синтетических фосфоглицеролипидов, сфинголипидов и дигалактозилглицеролипидов.

3. Фармацевтическая композиция по п.1 или 2, отличающаяся тем, что упомянутый порошок включает смесь липидов, выбранных из смесей сфингомиелина/фосфатидилхолина, сфингомиелина/холестерина, фосфатидилхолина яичного желтка/холестерина, соевого фосфатидилхолина/холестерина, фосфатидилхолина/фосфатидилсерина/холестерина, димиристоил фосфатидилхолина/дипальмитоил фосфатидилхолина, димиристоил фосфатидилхолина/дипальмитоил фосфатидилхолина/холестерина, димиристоил фосфатидилхолина/холестерина, дипальмитоил фосфатидилхолина/диолеоил фосфатидилхолина, дипальмитоил фосфатидилхолина/диолеоил фосфатидилхолина/холестерина, дилаурил фосфатидилхолина/дипальмитоил фосфатидилхолина, дилаурил фосфатидилхолина/дипальмитоил фосфатидилхолина/холестерина, дилаурил фосфатидилхолина/димиристоил фосфатидилхолина, дилаурил фосфатидилхолина/димиристоил фосфатидилхолина/холестерина, и диолеоил фосфатидилхолина/дистеароил фосфатидилхолина.

4. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1 - 3, отличающаяся тем, что упомянутый порошок включает дипальмитоил фосфатидилхолин, димиристоил фосфатидилхолин или смесь дипальмитоил фосфатидилхолина и димиристоил фосфатидилхолина.

5. Фармацевтическая композиция по п.4, отличающаяся тем, что упомянутая смесь включает, по крайней мере, 10% димиристоил фосфатидилхолина.

6. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1 - 5, отличающаяся тем, что упомянутый порошок дополнительно включает заряженный липид.

7. Фармацевтическая композиция по п.6, отличающаяся тем, что упомянутый заряженный липид отбирают из димиристоил фосфатидилглицерина, дипальмитоил фосфатидилглицерина, димиристоил фосфатидиновой кислоты и стеариламина.

8. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что упомянутый активный компонент выбирают из противовоспалительных средств, бронхорелаксаторов, антигистаминов, ингибиторов циклооксигеназы, антагонистов лейкотриена, ингибиторов фосфолипазы-А2 (ФЛА2), антагонистов фактора агрегации тромбоцитов (ФАТ) и средств профилактики астмы.

9. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что упомянутый активный компонент включает глюкокортикостероид.

10. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что упомянутый активный компонент включает β-2 агонист.

11. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что упомянутый активный компонент включает стероид, этерифицированный в 21 положении жирной кислоты, содержащей, по крайней мере, 8 атомов углерода.

12. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что упомянутый активный компонент включает стероид, этерифицированный в 21 положении жирной кислоты содержащей, по крайней мере, 10 атомов углерода.

13. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что упомянутый активный компонент включает стероид, этерифицированный в 21 положении жирной кислоты, содержащей, по крайней мере, 12 атомов углерода.

14. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что упомянутый активный компонент включает стероид -21 пальмитат.

15. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что упомянутый активный компонент включает рофлепонида пальмитат.

16. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что, по крайней мере, 50% порошка включает частицы с диаметром менее 10 мкм.

17. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что, по крайней мере, 60% порошка включает частицы с диаметром менее 10 мкм.

18. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что, по крайней мере, 70% порошка включает частицы с диаметром менее 10 мкм.

19. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что, по крайней мере, 80% порошка включает частицы с диаметром менее 10 мкм.

20. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что, по крайней мере, 90% порошка включает частицы с диаметром менее 10 мкм.

21. Фармацевтическая композиция по любому из пп.16 - 20, в которой частицы пролипосомного порошка имеют диаметр 0,01 - 10 мкм.

22. Фармацевтическая композиция по любому из пп.16 - 20, в которой частицы пролипособмного порошка имеют диаметр 0,1 - 6 мкм.

23. Фармацевтическая композиция по любому из пп.16 - 20, в которой частицы пролипосомного порошка имеют диаметр 0,1 - 5 мкм.

24. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, которая включает агломерированные частицы пролипосомного порошка.

25. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что упомянутый носитель представляет собой кристаллический моногидрат лактозы.

26. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1 - 24, отличающаяся тем, что упомянутый носитель выбирают из глюкозы, фруктозы, галактозы, трегалозы, сахарозы, мальтозы, раффинозы, мальтита, мелезитозы, стахиозы, лактита, палатината, крахмала, ксилита, маннита, миоинозита и их гидратов и аминокислот.

27. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что упомянутый носитель включает частицы со средним диаметром более 20 мкм.

28. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1 - 26, отличающаяся тем, что упомянутый носитель включает частицы со средним диаметром менее 10 мкм.

29. Способ получения пролипосомного порошка по любому из пп.1 - 23, включающий растворение липида или смеси липидов и липофильного биологически активного компонента в растворителе, при этом упомянутый липид или смесь липидов имеют температуру фазового перехода ниже 37^oC, получение кристаллической матрицы растворителя с включенной в нее липидной монофазой в стекловидном состоянии путем замораживания раствора, при этом указанное замораживание осуществляется при температуре ниже температуры фазового перехода липидной фазы, и затем выпаривание замороженного растворителя при температуре ниже температуры фазового перехода липидной фазы.

30. Способ по п.29, отличающийся тем, что дополнительно включает стадию микронизации лиофилизованного порошка с получением частиц, соответствующих по размеру диапазону размеров частиц, приемлемых для вдыхания.

31. Способ по п.29 или 30, отличающийся тем, что упомянутые процессы замораживания и выпаривания растворителя осуществляют в камере для лиофилизации.

32. Способ по любому из пп.29 - 31, отличающийся тем, что упомянутый растворитель включает органический растворитель.

33. Способ по п.32, отличающийся тем, что упомянутый растворитель включает спирт.

34. Способ по 33, отличающийся тем, что упомянутый растворитель включает третичный бутанол.

35. Способ получения фармацевтической композиции по любому из пп.1 - 28, отличающийся тем, что включает способ получения пролипосомного порошка по любому из пп.29 - 34 с последующей стадией добавления к пролипосомному порошку, полученному указанным способом, кристаллического гидрофильного фармацевтически приемлемого носителя и, необязательно, стадию микронизации смеси порошка и носителя с получением частиц, соответствующих по размеру диапазону размеров частиц, приемлемых для вдыхания.

36. Способ по любому из пп.29 - 35, отличающийся тем, что включает дополнительную стадию агломерирования частиц в сферические образования с диаметром 1 мм или меньше.

37. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1 - 28 для использования в терапии пациентов, нуждающихся в ингаляции.

38. Способ лечения пациентов, нуждающихся в ингаляции, включающий введение упомянутому пациенту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп.1 - 28.

39. Порошковый ингалятор, содержащий фармацевтическую композицию по любому из пп.1 - 28.

40. Порошковый ингалятор по п.39, отличающийся тем, что упомянутый ингалятор является ингалятором с одноразовой дозой.

41. Порошковый ингалятор по п.39, отличающийся тем, что упомянутый ингалятор является ингалятором с многократной дозой.

Приоритет по признакам и пунктам:
22.12.1994 - по пп.1 и 29 (кроме признака "температура фазового перехода ниже 37^oC) 4-7, 11-15, 24, 25 и 30-41;
30.06.1995 - по пп.2, 3, 8-10, 16-19 (кроме признаков "50-80%"), 20-23, 26, 27 и признак "температура фазового перехода ниже 37^oC" по пп.1 и 29).

20.12.1995 - по п.28 и признак "50-80%" по пп.16-19.