[go: up one dir, main page]

RU2162101C1 - Test-system for neoplasm cell study - Google Patents

Test-system for neoplasm cell study Download PDF

Info

Publication number
RU2162101C1
RU2162101C1 RU99112808A RU99112808A RU2162101C1 RU 2162101 C1 RU2162101 C1 RU 2162101C1 RU 99112808 A RU99112808 A RU 99112808A RU 99112808 A RU99112808 A RU 99112808A RU 2162101 C1 RU2162101 C1 RU 2162101C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cells
tumor
study
neoplasm
cell
Prior art date
Application number
RU99112808A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Г.П. Гаенко
Е.Л. Водовозова
Ю.Г. Молотковский
Original Assignee
Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН filed Critical Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН
Priority to RU99112808A priority Critical patent/RU2162101C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2162101C1 publication Critical patent/RU2162101C1/en

Links

Images

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology, experimental oncology, cellular biology. SUBSTANCE: test-system for study of different neoplasm cells is the line of transplantable cells isolated from neoplasm tissues consisting of two lines of transplantable cells isolated from tumor tissues and Lewis's lung carcinoma metastatic cells. Invention can be used for comparative investigation of tumor and metastatic cells of a single cancer species. EFFECT: study of anticancer activity, screening of drugs. 2 tbl

Description

Изобретение относится к области биотехнологии, экспериментальной онкологии, клеточной биологии и может быть использовано для сравнительного изучения свойств клеток опухоли и метастаза одного вида рака, а также для изучения противораковой активности новых лекарственных средств,
Твердые опухоли, особенно опухоли легкого, содержат различные популяции клеток, что усложняет диагностику и лечение рака. Имеющееся в настоящее время незначительное число моделей ограничивает исследование in vitro.
The invention relates to the field of biotechnology, experimental oncology, cell biology and can be used to comparatively study the properties of tumor cells and metastasis of one type of cancer, as well as to study the anticancer activity of new drugs,
Solid tumors, especially lung tumors, contain various cell populations, which complicates the diagnosis and treatment of cancer. The current insignificant number of models limits the in vitro study.

Проблема создания тес-системы для сравнительного изучения in vitro и in vivo физиологических и биохимических свойств клеток опухоли и метастаза карциномы легкого Льюис, а также для изучения биологической активности новых лекарственных средств является актуальной. The problem of creating a tes-system for a comparative study of the in vitro and in vivo physiological and biochemical properties of tumor cells and metastasis of Lewis lung carcinoma, as well as to study the biological activity of new drugs is relevant.

Известна тест-система (Herrmann D.B. et. al. Antitumor activity of ilmofosine in the Lewis-Lung carcinoma model, Lipids, v. 26, 12, 1991). Для получения клеток карциномы легкого Льюис проводили серию перевивок внутримышечно опухоли. Затем опухоль иссекали. Механическим и ферментативным способом получали суспензию клеток, пригодную для трансплантации. A known test system (Herrmann D.B. et. Al. Antitumor activity of ilmofosine in the Lewis-Lung carcinoma model, Lipids, v. 26, 12, 1991). To obtain lung carcinoma cells, Lewis performed a series of inoculations of an intramuscular tumor. Then the tumor was excised. A suspension of cells suitable for transplantation was obtained mechanically and enzymatically.

Указанная тест-система не может быть использована для изучения клеток метастаза. Эта система не является устойчивой перевиваемой линией клеток. The indicated test system cannot be used to study metastasis cells. This system is not a stable transplantable cell line.

Известна более близкая к заявленной тест-система. Опухоль карциномы легкого иссекают, измельчают на мелкие куски. Измельченную ткань помещают в раствор ферментов: коллагеназы, ДНКазы и гиалуронидазы. Затем клетки отмывают и помещают в питательную среду, используя подложку из Matrygel. Линия клеток TL-1 прошла 100 пассажей и использовалась для исследования экспрессии клеточных адгезивных молекул, туморогенной активности и метастатического потенциала в SD-мышах. (Sakakibara T. , et al. Doxorubicin encapsulated in sterically stabilized liposomes is superior to free drug or drug-containing conventional liposomes at suppressing growth and metastases of human lung tumor Xenografts. Cancer Researsh 56, 15, 3743-3746, 1996). Эта тест-система также не может быть использована для сравнительного изучения клеток опухоли и метастаза. Known closer to the claimed test system. Tumor carcinoma of the lung is excised, crushed into small pieces. The crushed tissue is placed in a solution of enzymes: collagenase, DNase and hyaluronidase. Then the cells are washed and placed in a nutrient medium using a Matrygel substrate. The TL-1 cell line passed 100 passages and was used to study the expression of cell adhesive molecules, tumorigenic activity, and metastatic potential in SD mice. (Sakakibara T., et al. Doxorubicin encapsulated in sterically stabilized liposomes is superior to free drug or drug-containing conventional liposomes at suppressing growth and metastases of human lung tumor Xenografts. Cancer Researsh 56, 15, 3743-3746, 1996). This test system also cannot be used for a comparative study of tumor cells and metastasis.

Изобретение решает задачу создания тест-системы для изучения физиологических, биохимических различий клеток опухоли и метастаза карциномы легкого Льюис. The invention solves the problem of creating a test system for studying the physiological, biochemical differences of tumor cells and metastasis of Lewis lung carcinoma.

Поставленная задача решается за счет того, что тест-система для изучения различий клеток неоплазии (или новообразований), представляющая собой перевиваемые линии клеток, выделенных из тканей новообразований, состоит из двух линий перевиваемых клеток, выделенных из тканей опухоли и метастаза карциномы легкого Льюис. The problem is solved due to the fact that the test system for studying the differences in neoplasia cells (or neoplasms), which is a transplantable line of cells isolated from tumor tissue, consists of two lines of transplantable cells isolated from tumor tissue and Lewis lung carcinoma metastasis.

Предлагаемая тест-система отличается тем, что представляет собой линии клеток опухоли и метастаза карциномы легкого Льюис, полученных без помощи ферментов и культивируемых на обычных подложках. Обе линии прошли около двухсот пассажей и сохраняют туморогенность. Обе линии клеток депонированы во Всероссийской коллекции клеточных культур 12.01.1999 года под номерами ВСКК(П) N 652-Д и ВСКК(П) N 653-Д соответственно. The proposed test system is characterized in that it is a cell line of a tumor and metastasis of Lewis lung carcinoma obtained without enzymes and cultured on ordinary substrates. Both lines passed about two hundred passages and retain tumorigenicity. Both cell lines were deposited in the All-Russian collection of cell cultures 12.01.1999 under the numbers VSCK (P) N 652-D and VSCK (P) N 653-D, respectively.

Опухоль карциномы легкого Льюис возникла спонтанно и зарегестрирована в США 1951 году. A Lewis lung carcinoma tumor occurred spontaneously and was registered in the USA in 1951.

Тест-систему получают следующим образом. Иссекают опухоль и несколько метастазов. Отмывают в физрастворе, измельчают и помещают в раствор Версена (R. I. Freshney. Culture of animal cells. A manual of basic technique. New York. 1983). Затем клетки отмывают и помещают в питательную среду. The test system is obtained as follows. A tumor and several metastases are excised. Washed in saline, crushed and placed in Versen's solution (R. I. Freshney. Culture of animal cells. A manual of basic technique. New York. 1983). Then the cells are washed and placed in a nutrient medium.

Морфологические и культуральные свойства. Клетки культивируют на среде RPMI-1610 с добавлением 7% сыворотки крупного рогатого скота, 2 мМ глютамина, в атмосфере 5% CO2. Клетки субстратзависимые, могут образовывать сфероиды, обладают устойчивой туморогенностью.Morphological and cultural properties. Cells were cultured on RPMI-1610 medium supplemented with 7% cattle serum, 2 mM glutamine, in an atmosphere of 5% CO 2 . Cells are substrate dependent, can form spheroids, have stable tumorigenicity.

Контаминация. Контаминантов не обнаружено. Contamination. No contaminants found.

Криоконсервация. Клетки снимают с подложки с помощью раствора Версена. Осаждают при 800 об/мин. Готовят суспензию в питательной среде 106 кл/0,5 мл, пипетируют и переносят в ампулу для криоконсервации. Вносят 0,5 мл раствора 20% ДМСО в сыворотке и помещают на -70oC. Через 10-14 дней переносят на -160oC.Cryopreservation. Cells are removed from the substrate using a Versen solution. Precipitated at 800 rpm. A suspension in a nutrient medium of 10 6 cells / 0.5 ml is prepared, pipetted and transferred to an ampoule for cryopreservation. Contribute 0.5 ml of a solution of 20% DMSO in serum and placed at -70 o C. After 10-14 days, transferred to -160 o C.

Условия разморозки. Стандартные. Defrosting conditions. Standard.

Изобретение иллюстрируют примеры. The invention is illustrated by examples.

Пример 1. Отмытые от среды культивирования клетки суспендируют в фосфатном буфере. Каплю суспензии (106 кл/мл) наносят на предметное стекло. Препарат высушивают на воздухе, фиксируют в парах 10% формальдегида 3 минуты. Отмывают дистиллированной водой. Высушивают на воздухе. На фиксированные клетки наносят растворы углеводных векторов-флуоресцеинмеченых гликоконъюгатов на полиакриламидной матрице (50-60 мкл, Sug-PAA-Fl, 0,3 мг/мл) и инкубируют 1 час при 37oC. Отмывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Связывание клеток с вектором оценивают с помощью флюоресцентного микроскопа (495 nm, 530 nm). Результаты, полученные по определению лиганд-рецепторного связывания 25 углеводных векторов с поверхностью клеток опухоли и метастаза, выявили существенные различия среди адгезивных рецепторов обоих видов клеток (табл. 1)
Пример 2. Клетки отмывают от среды культивирования, суспендируют в фосфатном буфере, к 1 мл суспензии клеток добавляют 100 мкл флуоресцеинмеченых углеводных векторов (Sug-PAA-Fl), лиганд-рецепторное связывание определяют количественно с помощью проточной цитометрии. Результаты показали, что связывание, определяемое по среднестатическому значению флюоресценции одной клетки (mean), зонда SiaLex с клеткой опухоли составляет 3,45, а с клеткой метастаза - 7,45, связывание вектора Lex с клеткой опухоли - 14,4, с клеткой метастаза - 6,89.
Example 1. Cells washed from the culture medium are suspended in phosphate buffer. A drop of suspension (10 6 cells / ml) is applied to a glass slide. The drug is dried in air, fixed in pairs of 10% formaldehyde for 3 minutes. Wash with distilled water. Dried in air. Solutions of carbohydrate vectors-fluorescein-labeled glycoconjugates on a polyacrylamide matrix (50-60 μl, Sug-PAA-Fl, 0.3 mg / ml) are applied to fixed cells and incubated for 1 hour at 37 ° C. Wash with distilled water and air-dry. The binding of cells to the vector is evaluated using a fluorescence microscope (495 nm, 530 nm). The results obtained by determining the ligand-receptor binding of 25 carbohydrate vectors to the surface of tumor cells and metastasis revealed significant differences among the adhesive receptors of both types of cells (Table 1)
Example 2. Cells are washed from the culture medium, suspended in phosphate buffer, 100 μl of fluorescein-labeled carbohydrate vectors (Sug-PAA-Fl) are added to 1 ml of cell suspension, ligand-receptor binding is quantified by flow cytometry. The results showed that the binding determined by the mean statistical value of the fluorescence of one cell (mean), the SiaLe x probe with the tumor cell is 3.45, and with the metastasis cell - 7.45, the binding of the Le x vector to the tumor cell is 14.4, s metastasis cell - 6.89.

Пример 3. Для доставки лекарственных средств к клеткам новообразований предлагаются липосомы, оснащенные углеводным вектором, обеспечивающим специфическое связывание липосом с клеточными лектинами. Клетки снимают с подложки с помощью раствора Версена, отмывают от культуральной среды. В 1 мл, суспензии клеток в физиологическом растворе (106 кл/мл) вносят 100 мкл препарата флуоресцентномеченных липосом (препарата N 1 и препарата таких же липосом с углеводным вектором Lex (препарат N 2). С помощью проточной цитомстрии измеряют динамику связывания в течение 15 минут клеток опухоли и метастаза. В табл. 2 даны среднестатические значения флюоресценции одной клетки-mean.Example 3. For the delivery of drugs to neoplasm cells, liposomes are provided equipped with a carbohydrate vector that provides specific binding of liposomes to cell lectins. Cells are removed from the substrate using Versen's solution, washed from the culture medium. In 1 ml of cell suspension in physiological saline (10 6 cells / ml), 100 μl of the preparation of fluorescently labeled liposomes (preparation No. 1 and the preparation of the same liposomes with the carbohydrate vector Le x (preparation No. 2) are added. Flow dynamics is measured using flow cytometry within 15 minutes of tumor cells and metastasis Table 2 gives the average statistical values of the fluorescence of one mean cell.

Claims (1)

Тест-система для изучения клеток новообразований (неоплазии), представляющая собой линии перевиваемых клеток, полученных из тканей новообразований, отличающаяся тем, что тест-система состоит из двух линий клеток : опухоли ВСКК (П) 652-D и метастаза ВСКК (П) 653-D карциномы легкого Льюис. A test system for studying neoplasm cells (neoplasia), which is a line of transplantable cells obtained from neoplasm tissues, characterized in that the test system consists of two cell lines: HSCC (P) 652-D tumor and HSCC (P) metastasis (P) 653 -D Lewis lung carcinoma.
RU99112808A 1999-06-10 1999-06-10 Test-system for neoplasm cell study RU2162101C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU99112808A RU2162101C1 (en) 1999-06-10 1999-06-10 Test-system for neoplasm cell study

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU99112808A RU2162101C1 (en) 1999-06-10 1999-06-10 Test-system for neoplasm cell study

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2162101C1 true RU2162101C1 (en) 2001-01-20

Family

ID=20221298

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU99112808A RU2162101C1 (en) 1999-06-10 1999-06-10 Test-system for neoplasm cell study

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2162101C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2267532C1 (en) * 2004-06-25 2006-01-10 Государственное учреждение Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН Human t-lymphoblastic leucemia a4 cell line useful in screening of antitumor agents

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993024647A1 (en) * 1992-05-22 1993-12-09 Sandoz Ltd. Anti-idiotypic monoclonal antibodies against the lewis y-specific monoclonal antibody br55-2 and their uses
WO1995024484A1 (en) * 1994-03-08 1995-09-14 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Recombinant humanized anti-lewis y antibodies

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993024647A1 (en) * 1992-05-22 1993-12-09 Sandoz Ltd. Anti-idiotypic monoclonal antibodies against the lewis y-specific monoclonal antibody br55-2 and their uses
WO1995024484A1 (en) * 1994-03-08 1995-09-14 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Recombinant humanized anti-lewis y antibodies

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Sakakibara T. et.al., Cancer Research, v.56, p.3743-3746, 1996. *
Якубов А.С., Эльберт И.А. Бюлл. СО АМН СССР, 1989, N1, с.45-48. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2267532C1 (en) * 2004-06-25 2006-01-10 Государственное учреждение Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН Human t-lymphoblastic leucemia a4 cell line useful in screening of antitumor agents

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113481162B (en) Culture medium, method and kit for rapidly culturing tumor organoid
Carney et al. Establishment and identification of small cell lung cancer cell lines having classic and variant features
Osserman et al. Effects of lysozyme on normal and transformed mammalian cells
Pavelic et al. Growth of cell colonies in soft agar from biopsies of different human solid tumors
Lewis et al. Epithelial-mesenchymal crosstalk influences cellular behavior in a 3D alveolus-fibroblast model system
Currie et al. Monocytes and macrophages in malignant melanoma. I. Peripheral blood macrophage precursors
Chandrasekaran et al. Sweeping lymph node micrometastases off their feet: an engineered model to evaluate natural killer cell mediated therapeutic intervention of circulating tumor cells that disseminate to the lymph nodes
Bochkov et al. Chromosome variability of human multipotent mesenchymal stromal cells
Axelrad et al. Obtaining suspensions of animal cells in metaphase from cultures propagated on glass
CA1293216C (en) Methods for separating malignant cells from clinical specimens
JP3363445B1 (en) Biopsy cell culture method and animal cell culture kit
Louis et al. Lectin‐binding affinities of human breast tumors
CN104685051A (en) Method for culturing a subpopulation of circulating epithelial tumor cells from body fluids
RU2162101C1 (en) Test-system for neoplasm cell study
CN108715836A (en) The separation of pericyte and bionic culture method in a kind of tumor tissues
Niu et al. Intraesophageal MnSOD-plasmid liposome enhances engraftment and self-renewal of bone marrow derived progenitors of esophageal squamous epithelium
Wittek et al. Propagation and properties of Kaposi's sarcoma-derived cell lines obtained from patients with AIDS: similarity of cultured cells to smooth muscle cells
CN112695015A (en) Preparation method of immortalized umbilical cord mesenchymal stem cells and preparation method and application of exosomes thereof
Cobb et al. Effect of heterologous, homologous, and autologous serums on human normal and malignant cells in vitro
CN114763534B (en) Primary gastrointestinal stromal tumor cell culture medium, culture method and application thereof
US20180080006A1 (en) Cell culture medium
CN117004571A (en) A human hilar cholangiocarcinosarcoma cell line CBC2T-2 and its application
CN102199574B (en) Isolation method of cell clusters with tumorigenic potential in liver cancer tissue
Salmon Human tumor clonogenic assays: growth conditions and applications
Flaks et al. Fine structure of nuclear inclusions in murine pulmonary tumor cells

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20100611