[go: up one dir, main page]

RU2152800C1 - Способ культивирования и модификации гетерогенных клеток млекопитающих - Google Patents

Способ культивирования и модификации гетерогенных клеток млекопитающих Download PDF

Info

Publication number
RU2152800C1
RU2152800C1 RU99125349A RU99125349A RU2152800C1 RU 2152800 C1 RU2152800 C1 RU 2152800C1 RU 99125349 A RU99125349 A RU 99125349A RU 99125349 A RU99125349 A RU 99125349A RU 2152800 C1 RU2152800 C1 RU 2152800C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cells
heterogeneous
modification
culturing
animals
Prior art date
Application number
RU99125349A
Other languages
English (en)
Inventor
Д.В. Зыбин
А.Г. Котелевиц
С.Е. Северин
В.К. Сологуб
Original Assignee
Зыбин Дмитрий Владимирович
Котелевиц Алексей Геннадиевич
Северин Сергей Евгеньевич
Сологуб Владимир Константинович
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Зыбин Дмитрий Владимирович, Котелевиц Алексей Геннадиевич, Северин Сергей Евгеньевич, Сологуб Владимир Константинович filed Critical Зыбин Дмитрий Владимирович
Priority to RU99125349A priority Critical patent/RU2152800C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2152800C1 publication Critical patent/RU2152800C1/ru
Priority to JP2001543153A priority patent/JP2003516364A/ja
Priority to KR1020017009958A priority patent/KR20010093331A/ko
Priority to CNB008035644A priority patent/CN100408098C/zh
Priority to EP00981961A priority patent/EP1151756B1/en
Priority to AT00981961T priority patent/ATE355083T1/de
Priority to DE60033633T priority patent/DE60033633T2/de
Priority to PCT/RU2000/000477 priority patent/WO2001041809A1/ru
Priority to US09/890,496 priority patent/US6972194B1/en
Priority to CA002361563A priority patent/CA2361563A1/en

Links

Images

Landscapes

  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и иммуноонкологии, и касается проблемы вакцинации против опухолевых клеток и вакцинотерапии онкологических заболеваний. Сущность изобретения: в полиакриламидный гель (находящийся in vivo) вводят гетерогенные клетки млекопитающих, в том числе и опухолевые, что приводит к возможности длительного культивирования клеток в организме млекопитающих. Изобретение приводит к модификации гетерогенных клеток, заключающейся в снижении их пролиферативной активности и иммунизирующем эффекте на организм млекопитающего. 3 з.п. ф-лы, 3 табл., 1 ил.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и иммуноонкологии, и касается проблемы вакцинации против опухолевых клеток и вакцинотерапии онкологических заболеваний.
Известно, что проблема трансплантации органов, тканей, клеточных культур млекопитающих сопряжена с трудностями связанными с "приживляемостью" чужеродных тканево-клеточных агентов в организме реципиента. Существующие способы пересадки алло-, гетеро-, ксенотрансплантантов требуют или мощной иммуносупресивной терапии реципиента или оригинальных методик. К последним относятся способы трансплантации клеток различных органов плодов человека и животных, т.е. используется эффект несложившейся видовой специфичности. Таким образом проводят трансплантацию культур островковых клеток поджелудочной железы 24-26 недельных плодов человека в паренхиму печени или в воротную вену в эксперименте крысам.
Местом введения клеток может служить пульпа селезенки или мышцы передней брюшной стенки. Известны случаи лечения аналогичным методом людей, страдающих сахарным диабетом. (Скалецкий Н.М. "Влияние культивирования островковых клеток поджелудочной железы на их выживание в организме ксеногеного реципиента": Всесоюзная конференция по трансплантации органов 1995 г., стр. 219-220).
Представляет интерес пересадка клеток Лейдига в тестикулярную ткань мужским особям для лечения бесплодия, так как реакция отторжения не наступает из-за наличия гематотестикулярного барьера. (Зыбин Д.В. "Способ лечения больных с нарушением мужской половой сферы методом трансплантации". Патент РФ N 2026643 от 20.01.95).
В результате обоих описанных способов были получены хорошие результаты по сохранению жизнеспособности и активности трасплантируемых клеток. Но в первом случае определенным недостатком способа можно считать использование только эмбриональных клеток, а во втором - клеточной терапии подвергаются только мужские особи.
Известен способ вакцинации и вакцинотерапии опухолей с помощью живых клеток. Применяемые клетки являются гибридомами или трансфецированными клетками, аллогенными или аутогенными. Недостатками являются кратковременное существование клеток в организме и соответственно низкий иммунизирующий эффект. (В.Е. Souberbielle, M.Westby, S.Ganz, J.Kayaga. Comparison of four strategies for tumor vaccination in the B-16 FIO melanoma model. Gene therapy 1998, 1447-1454).
Наиболее близкими предложенному способу являются следующие способы.
Трансплантация ОКПЖ (островковых клеток поджелудочной железы) с использованием микрокапсуляции. Способ состоит в введении ОКПЖ (алло- или ксеногенных), инкапсулированных в сферы альгинатного геля. Сферы имплантируют интраперетониально. Имплантация сфер полностью заменяет терапию инсулином на 175 дней, но при этом одновременно применяется иммуносупрессивная терапия. Крысам с индуцированным диабетом вводят бычью ОКПЖ без иммуносупрессии. Нормогликемия поддерживается от нескольких недель до месяца.
Недостатком способа является необходимость применения иммуносупрессивной терапии, кроме того, определенные трудности представляет приготовление капсул in vitro. (Lanza R. P., Ecker D.M., Marsh J.P. Transplantation of islets using microencapsulation: studies in diabetic rodents and dogs. J. Mol.Med. 1999 Jan. 77(1): 206-10).
В результате обоих описанных способов были получены хорошие результаты по сохранению жизнеспособности и активности трасплантируемых клеток. Но в первом случае определенным недостатком способа можно считать использование только эмбриональных клеток, а во втором - клеточной терапии подвергаются только мужские особи.
Известен способ вакцинации и вакцинотерапии опухолей с помощью живых клеток. Применяемые клетки являются гибридомами или трансфецированными клетками, аллогенными или аутогенными. Недостатками являются кратковременное существование клеток в организме и соответственно низкий иммунизирующий эффект. (В. Е. Souberbielle, M.Westby, S.Ganz, J.Kayaga. Comparison of four strategies for tumor vaccination in the B-16 FIO melanoma model. Gene therapy 1998, 1447-1454).
Наиболее близкими предложенному способу являются следующие способы.
Трансплантация ОКПЖ (островковых клеток поджелудочной железы) с использованием микрокапсуляции.
Способ состоит в введении ОКПЖ (алло- или ксеногенных), инкапсулированных в сферы альгинатного геля. Сферы имплантируют интраперетониально. Имплантация сфер полностью заменяет терапию инсулином на 175 дней, но при этом одновременно применяется иммуносупрессивная терапия. Крысам с индуцированным диабетом вводят бычьи ОКПЖ без иммуносупрессии. Нормогликемия поддерживается от нескольких недель до месяца.
Недостатком способа является необходимость применения иммуносупрессивной терапии, кроме того, определенные трудности представляет приготовление капсул in vitro. (Lanza R. P., Ecker D.M., Marsh J.P. Transplantation of islets using microencapsulation: studies in diabetic rodents and dogs. J. Mol.Med. 1999 Jan. 77(1): 206-10).
Известен способ вакцинации и вакцинотерапии опухолей с помощью живых клеток. Методика состоит в получении гибридом опухолевых клеток и аллогенных дендритных клеток (или макрофагов). Полученные гибридомы используют как вакцинные препараты.
Недостатком является невысокий иммунизирующий эффект, обусловленный кратковременным существованием введенных клеток в организм реципиента. (Gajewski T.F., Fallarino F. Rational development of tumor antigen-specific immunization in melanoma. Theraputic Immunology, 1997,2,211-225).
Сущностью предложенного способа является обеспечение возможности длительного существования гетерогенных клеток в организме реципиента, что достигают путем предварительного введения млекопитающим полиакриламидного геля, с последующей инъекцией в образовавшуюся капсулу гетерогенных клеток млекопитающих. В качестве гетерогенных клеток используют опухолевые клетки и клетки Лейдига.
В общем виде способ осуществляют следующим образом.
Формируют соединительно-тканную капсулу путем подкожного введения полиакриламидного геля (ПААГ) объемом 1,0 мл крысам линии Wister и объемом 0,5 мл мышам линий C57BLACK и BALB/C.
В эксперименте участвуют разнополые особи. В гелевую капсулу вводят клетки Лейдига половозрелых поросят, крыс и зеленых мартышек или опухолевые клетки. Контролем служат животные, которым вводят клетки под кожу.
Суспензию жизнеспособных клеток Лейдинга тестикул половозрелых поросят, крыс и зеленых мартышек готовят, используя растворы, содержащие питательный субстрат для клеток, в частности составами стандартных сред Игла, среды 199, раствором Хэнкса и т.п.
Следующие примеры иллюстрируют осуществление изобретения.
Пример 1. Культуру клеток Лейдига новорожденных поросят в объеме 0,5 мл с концентрацией клеток 5 млн в 1 мл вводят в образованную полиакриламидным гелем капсулу самкам крыс Wister.
Контрольной группе животных той же линии, пола и антропологических данных вводят культуру клеток -Лейдига новорожденных поросят подкожно. Перед введением клеточной культуры измеряют содержание тестостерона в сыворотке крови животных. Последующие измерения тестостерона в сыворотке крови проводят с различными интервалами в течение 7 месяцев одновременно у экспериментальных и контрольных животных.
Количество животных в опыте и контроле по 2 особи.
Пример 2. Культуру клеток Лейдига половозрелых зеленых мартышек в объеме 0,5 мл с концентрацией клеток 5 мл в 1 мл вводят в образованную полиакриламидным гелем капсулу самкам крыс линии Wister.
Контрольной группе животных той же линии, пола и антропологических данных вводят культуру клеток Лейдига половозрелых зеленых мартышек подкожно. Перед введением клеточной культуры измеряют содержание тестостерона в сыворотке крови животных. Последующие измерения тестостерона в сыворотке крови проводят с различными интервалами в течение 7 месяцев, одновременно у экспериментальных и контрольных животных. Количество животных в опыте и контроле по 2 особи.
После 7 месяцев наблюдения животных забивают и проводят гистологическое исследование, которое показывает наличие большого количества жизнеспособных клеток Лейдига, что позволяет сделать вывод о возможности жизнедеятельности ксено- и гетерогенных клеток в организме реципиента с использованием геля.
Пример 3. Опытной партии мышей линии BALB/C (в количестве 6 особей), подкожно вводят ПААГ в объеме 0,5 мл. В гель вводят клетки опухоли меланомы мыши В-16 в объеме 1 мл с концентрацией клеток 1 млн.
Контрольной группе мышам линии BALB/C (в количестве 6 особей) подкожно вводят клетки меланомы мыши В-16 в объеме 1 мл. с концентрацией клеток 1 млн.
Известно что, у мышей линии BALB/C меланомы мышей В-16 не дают роста. В контрольной группе животных рост опухоли не обнаружен у всех 6 особей. В опытной группе животных, путем пальпаторного исследования, отмечен рост опухоли в ПААГ у всех 6 особей. На 60 день опытных животных с мышиной меланомой В-16 в геле забивают. Гель с опухолевыми клетками извлекают в асептических условиях и переводят в монослойную культуру на питательной среде РПМИ-1640 с 10% фитальной сывороткой. Фрагменты капсулы с опухолевыми клетками фиксируют в нейтральном растворе формалина и проводят гистологическое исследование, которое позволяет судить о более высокой дифференциации меланомных клеток и потере ими пролиферативной активности (табл.1 [1-2]).
Пример 4. Культуру клеток, полученную по примеру 1, в количестве 1 мл с концентрацией клеток 1 млн. вводят мышам линии С57 BLACK подкожно (количество особей 6).
Известно, что опухоль меланомы мышей В-16 у линии мышей С57 BLACK дает рост опухоли в 100% случаев, гибель животных наступает на 20-25 день в 100% случаев.
Контрольной группе мышей C57BLACK вводят культуру клеток меланомы мыши В-16 в количестве 1 мл с концентрацией клеток 1 млн.
У опытных мышей появление признаков роста опухоли отмечают через 30-33 дня, в контроле через 5-8 дней. Срок жизни опытных мышей составляет 60-65 дней, контрольных - 20-23 дня (табл. 2).
Пример 5. Мышам линии C57black (в количестве 6 особей) вводят ПААГ в объеме 0,5 мл подкожно. В гель вводят культуру клеток меланомы человека SKMEL28 в объеме 1 мл с концентрацией клеток 1 млн.
Контрольной группе мышей, той же линии, (в количестве 6 особей) вводят подкожно культуру клеток меланомы человека SKMEL28 в объеме 1 мл с концентрацией клеток 1 млн.
Известно что, культура клеток меланомы человека не дает роста у мышей в 100% случаев. В опытной группе животных в геле определяется пальпированием рост опухоли на 15-20 день после инъекции. У контрольных животных рост опухоли не отмечен (таблица 1 [3-4]).
Пример 6. Группе опытных животных (количество особей 6), описанных в примере 3, вводят культуру клеток меланомы мыши В-16 подкожно в объеме 1 мл с концентрацией клеток 1 млн. Контрольной группе мышей линии C57BLACK (количество особей 6) вводят подкожно культуру клеток меланомы мыши В-16 в объеме 1 мл с концентрацией клеток 1 млн.
У контрольных животных на 7-15 день развиваются подкожные меланомы в диаметре приблизительно 3-5 см. В это же время у опытных мышей признаков опухоли не обнаружено (табл.3).
Вывод: таким образом, полученные результаты позволяют предложить способ культивирования гетерогенных клеток в ПААГ in vivo, в результате чего снижается пролиферативная активность опухолевых клеток и культивируемые клетки оказывают на организм иммунизирующее действие, что может быть использовано для вакцинации и вакцинотерапии.

Claims (4)

1. Способ культивирования и модификации гетерогенных клеток млекопитающих с последующим использованием их для получения вакцинных препаратов, отличающийся тем, что культивирование гетерогенных клеток осуществляют длительное время в живом организме путем предварительного введения млекопитающему полиакриламидного геля с последующей инъекцией в него гетерогенных клеток млекопитающих.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве гетерогенных клеток используют опухолевые клетки.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве гетерогенных клеток используют клетки Лейдига.
4. Способ по любому из пп.1 - 3, отличающийся тем, что модификация клеток заключается в снижении их пролиферативной активности и иммунизирующем действии на организм.
RU99125349A 1999-12-08 1999-12-08 Способ культивирования и модификации гетерогенных клеток млекопитающих RU2152800C1 (ru)

Priority Applications (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU99125349A RU2152800C1 (ru) 1999-12-08 1999-12-08 Способ культивирования и модификации гетерогенных клеток млекопитающих
CA002361563A CA2361563A1 (en) 1999-12-08 2000-11-22 Use of polyacrylamide gel for forming a connective-tissue capsule in a mammal for cultivating allogenic or xenogenic cells
CNB008035644A CN100408098C (zh) 1999-12-08 2000-11-22 聚丙烯酰胺凝胶在哺乳动物的机体组织中形成胶囊的应用、培养细胞的方法和治疗肿瘤和糖尿病的方法
KR1020017009958A KR20010093331A (ko) 1999-12-08 2000-11-22 포유류의 생체 조직 내에서의 캡슐 형성을 위한폴리아크릴아미드 겔의 용도, 세포를 배양하는 방법, 및종양 질환과 당뇨병의 치료방법
JP2001543153A JP2003516364A (ja) 1999-12-08 2000-11-22 哺乳動物の生体組織内でカプセルを形成するためのポリアクリルアミドゲルの使用方法、細胞培養方法並びに癌及び真性糖尿病の治療法
EP00981961A EP1151756B1 (en) 1999-12-08 2000-11-22 Kit comprising polyacrylamide gel for forming a capsule in the tissue of a mammal organism and allogenic or xenogenous cells of an animal, method for therapy of oncological diseases and the diabetes mellitus
AT00981961T ATE355083T1 (de) 1999-12-08 2000-11-22 Kit aus polyakrylamidgel zur herstellung einer kapsel im gewebe eines säugetierorganismus und tierischen allogenen oder xenogenen zellen , zur behandlung von onkologischen krankheiten und der diabetes mellitus
DE60033633T DE60033633T2 (de) 1999-12-08 2000-11-22 Kit aus polyacrylamidgel zur herstellung einer kapsel im gewebe eines säugetierorganismus und tierischen allogenen oder xenogenen zellen , zur behandlung von onkologischen krankheiten und diabetes mellitus
PCT/RU2000/000477 WO2001041809A1 (en) 1999-12-08 2000-11-22 Application of polyacrylamide gel for forming a capsule in the tissue of a mammal organism, method for cultivating cells and method for therapy of oncological diseases and the diabetes mellitus
US09/890,496 US6972194B1 (en) 1999-12-08 2000-11-22 Use of polyacrylamide gel for forming a connective-tissue capsule in a mammal for cultivating allogenic and xenogenic cells

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU99125349A RU2152800C1 (ru) 1999-12-08 1999-12-08 Способ культивирования и модификации гетерогенных клеток млекопитающих

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2152800C1 true RU2152800C1 (ru) 2000-07-20

Family

ID=20227625

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU99125349A RU2152800C1 (ru) 1999-12-08 1999-12-08 Способ культивирования и модификации гетерогенных клеток млекопитающих

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2152800C1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2236868C1 (ru) * 2003-01-15 2004-09-27 ЗАО "Русские биотехнологии" Полиакриламидная капсула, содержащая антигенный материал, способ формирования иммунного ответа и способ иммунотерапии и иммунопрофилактики метастазирования раковых заболеваний
US7238761B2 (en) 2002-04-10 2007-07-03 Obschestvos Organichennoy Otvetstvennostyu “Vitagel” Multifunctional biocompatible hydrophilic gel and the method of gel manufacture

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4705677A (en) * 1977-05-03 1987-11-10 Makari Jack G Immunization
US4783313A (en) * 1977-05-03 1988-11-08 Makari Jack G Enhancing body defense mechanisms
US4877611A (en) * 1986-04-15 1989-10-31 Ribi Immunochem Research Inc. Vaccine containing tumor antigens and adjuvants
WO1990003183A1 (en) * 1988-09-23 1990-04-05 University Of Southern California Immunotherapy vaccine for melanoma tumors
US5290551A (en) * 1990-05-08 1994-03-01 Thomas Jefferson University Treatment of melanoma with a vaccine comprising irradiated autologous melanoma tumor cells conjugated to a hapten
WO1995005452A2 (en) * 1993-08-12 1995-02-23 Cytotherapeutics, Inc. Improved compositions and methods for the delivery of biologically active molecules using genetically altered cells contained in biocompatible immunoisolatory capsules
WO1999003507A1 (en) * 1997-07-17 1999-01-28 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Telomere mimetic compounds and methods of use for same

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4705677A (en) * 1977-05-03 1987-11-10 Makari Jack G Immunization
US4783313A (en) * 1977-05-03 1988-11-08 Makari Jack G Enhancing body defense mechanisms
US4877611A (en) * 1986-04-15 1989-10-31 Ribi Immunochem Research Inc. Vaccine containing tumor antigens and adjuvants
WO1990003183A1 (en) * 1988-09-23 1990-04-05 University Of Southern California Immunotherapy vaccine for melanoma tumors
US5290551A (en) * 1990-05-08 1994-03-01 Thomas Jefferson University Treatment of melanoma with a vaccine comprising irradiated autologous melanoma tumor cells conjugated to a hapten
WO1995005452A2 (en) * 1993-08-12 1995-02-23 Cytotherapeutics, Inc. Improved compositions and methods for the delivery of biologically active molecules using genetically altered cells contained in biocompatible immunoisolatory capsules
WO1999003507A1 (en) * 1997-07-17 1999-01-28 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Telomere mimetic compounds and methods of use for same

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GAJEWSKI T.F., FALLARINO F., Rational development of tumor antigen - specific immunization in melanoma. Therapevtic Immunology. - 1997, v.2, p.211-225. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7238761B2 (en) 2002-04-10 2007-07-03 Obschestvos Organichennoy Otvetstvennostyu “Vitagel” Multifunctional biocompatible hydrophilic gel and the method of gel manufacture
RU2236868C1 (ru) * 2003-01-15 2004-09-27 ЗАО "Русские биотехнологии" Полиакриламидная капсула, содержащая антигенный материал, способ формирования иммунного ответа и способ иммунотерапии и иммунопрофилактики метастазирования раковых заболеваний

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2187803C (en) Methods of treating disease using sertoli cells and allografts or xenografts
AU690548B2 (en) Use of neuro-derived fetal cell lines for transplantation therapy
Subramanian et al. Striatal xenotransplantation of human retinal pigment epithelial cells attached to microcarriers in hemiparkinsonian rats ameliorates behavioral deficits without provoking a host immune response
US5849285A (en) Autoimmune disease treatment with sertoli cells and in vitro co-culture of mammal cells with sertoli cells
ZA200503534B (en) Implantation of encapsulated biological materials for treating diseases
CN106214699B (zh) 不同亚型中国乳腺癌患者来源异种移植瘤模型的构建方法及应用
NZ310048A (en) Use of neuro-derived fetal cell lines for treating hosts by implanting genetically unrelated cell into the host by transplantation therapy
Dufour et al. Harnessing the immunomodulatory properties of Sertoli cells to enable xenotransplantation in type I diabetes
US20230256021A1 (en) Compositions for preventing or treating diabetic skin disease comprising exosome-derived from thrombin-treated stem cell
CA3096561A1 (en) Method for obtaining an animal model from conditionally reprogrammed cells and use of the animal model for screening anti-tumor drugs
Nie et al. A single-shot prophylactic tumor vaccine enabled by an injectable biomembrane hydrogel
CN109182272A (zh) 基于类器官方法的患者来源的肝癌正常免疫小鼠移植瘤模型的构建方法及其应用
ES2206696T3 (es) Perlas de agarosa-colageno implantables que contienen celulas que producen un producto biologico difundible, y sus usos.
CN109392843A (zh) 基于类器官方法构建卵巢癌移植瘤模型及应用
RU2152800C1 (ru) Способ культивирования и модификации гетерогенных клеток млекопитающих
CN101112330A (zh) 一种乳腺癌免疫缺陷型动物模型及其制备方法
CN104997718A (zh) 生物膜、具有生物膜性的闭合结构或细胞区室作为化妆品或化妆品载体的应用
US6972194B1 (en) Use of polyacrylamide gel for forming a connective-tissue capsule in a mammal for cultivating allogenic and xenogenic cells
CA2179341A1 (en) Methods for isolating, enriching and increasing the maturation of cells
AU784765B2 (en) Use of polyacrylamide gel for forming a capsule in the tissue of the organism of a mammal, a method of cultivating cells, and a method of treating oncological diseases and diabetes mellitus
EP4502143A1 (en) Medium composition for preparing intestinal organoid
CN118048300A (zh) 一种工程化线粒体及其制备方法和应用
CN105031661A (zh) 生物膜、具有生物膜性的闭合结构或细胞区室作为基因转染试剂或者基因治疗试剂的应用
Nakagawara et al. Insulin-releasing activity and successful transplantation of pancreatic islets preserved by tissue culture
KR101828696B1 (ko) 인슐린분비세포 이식용 조성물 및 이의 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20081209