RU2148970C1 - Способ восстановления кожного покрова - Google Patents
Способ восстановления кожного покрова Download PDFInfo
- Publication number
- RU2148970C1 RU2148970C1 RU99104434A RU99104434A RU2148970C1 RU 2148970 C1 RU2148970 C1 RU 2148970C1 RU 99104434 A RU99104434 A RU 99104434A RU 99104434 A RU99104434 A RU 99104434A RU 2148970 C1 RU2148970 C1 RU 2148970C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- keratinocytes
- substrate
- skin
- cultured
- cultivation
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 54
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims abstract description 39
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims abstract description 19
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 9
- -1 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 claims abstract description 6
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims abstract description 3
- 239000004642 Polyimide Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims abstract description 3
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229920001721 polyimide Polymers 0.000 claims abstract description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 32
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims description 13
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 5
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 4
- 229920000307 polymer substrate Polymers 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 31
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 30
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 23
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 16
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000002316 cosmetic surgery Methods 0.000 description 4
- 239000010408 film Substances 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 4
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 108010007093 dispase Proteins 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 2
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000003486 chemical etching Methods 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 2
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 2
- 229940071106 ethylenediaminetetraacetate Drugs 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000009043 Chemical Burns Diseases 0.000 description 1
- 208000018380 Chemical injury Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 description 1
- AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N Thyrolar Chemical compound IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 208000011312 Vector Borne disease Diseases 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 210000001217 buttock Anatomy 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000000512 collagen gel Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 210000001047 desmosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 210000005175 epidermal keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- VWQWXZAWFPZJDA-CGVGKPPMSA-N hydrocortisone succinate Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)COC(=O)CCC(O)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VWQWXZAWFPZJDA-CGVGKPPMSA-N 0.000 description 1
- 229950006240 hydrocortisone succinate Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 229910052743 krypton Inorganic materials 0.000 description 1
- DNNSSWSSYDEUBZ-UHFFFAOYSA-N krypton atom Chemical compound [Kr] DNNSSWSSYDEUBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 238000002690 local anesthesia Methods 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910052754 neon Inorganic materials 0.000 description 1
- GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N neon atom Chemical compound [Ne] GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000000554 physical therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000007390 skin biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 229910052724 xenon Inorganic materials 0.000 description 1
- FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N xenon atom Chemical compound [Xe] FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Способ может быть использован в медицине, а именно в хирургии, и может применяться для восстановления кожного покрова у пострадавших с обширными ожогами III-а и III-б степени и другими видами ран. Способ включает выделение и последующее культивирование кератиноцитов на полимерной пористой подложке из оптического прозрачного полимера со сквозными порами диаметром D = 0,01-3,0 мкм и плотностью пор N = (103-109) 1/см2 до формирования монослоя кератиноцитов. Кератиноциты могут культивироваться в присутствии фибробластов линии 3Т3 на противоположной стороне подложки. Подложка может быть выполнена из полиэтилентетрафталата, полиимида или карбоксиметилцеллюлозы. В качестве кератиноцитов могут культивироваться аллогенные кератиноциты. Способ повышает эффективность лечения и позволяет осуществить визуальный контроль за регенерацией кожного покрова на раневой поверхности. 5 з.п. ф-лы.
Description
Настоящее изобретение относится к медицине, а более конкретно к хирургии, и может быть использовано для восстановления кожного покрова у пострадавших с обширными ожогами III-a и III-б степени и другими видами ран.
К настоящему времени разработаны различные способы восстановления кожного покрова у обожженных путем пересадки выращенных in vitro кератиноцитов. Общими для всех известных способов являются следующие этапы: выделение из кожи кератиноцитов, культивирование их и последующая трансплантация на рану пострадавшего. Для выращивания кератиноцитов необходимо использовать ростовую среду сложного состава, в которую добавляют, помимо сыворотки, ряд ростовых добавок (эпидермальный фактор роста, холерный токсин, экстракт гипофиза крупного рогатого скота и другие добавки). Эффективность культивирования кератиноцитов повышается в случае использования фидерного слоя фибробластов, кондиционирующих ростовую среду биологически активными соединениями (см. Терских В.В., Васильева А.В. - Эпидермальные кератиноциты человека и животных. - М.: Наука, 1995, с. 103).
Так, известен способ восстановления кожного покрова у тяжелообожженных, включающий получение кератиноцитов из биоптата кожи обожженного посредством обработки последней коллагеназой, культивирование клеток на подложке во флаконах с плоским дном. После достижения конфлюентности культуры клеток (примерно на 7-е сутки) осуществляют пересев клеток, для чего клеточный пласт обрабатывают смесью трипсина и этилендиаминтетрацетата (ЭДТА) и пересевают в новые флаконы в виде суспензии, и далее выращивают вторичную культуру кератиноцитов. На 14-е сутки, после достижения конфлюентности пассируемой культуры клеток ее подвергают воздействию раствора трипсина, что приводит к образованию суспензии из единичных клеток - кератиноцитов, которые собирают центрифугированием и затем ресуспендируют в стерильной пробирке в бессывороточной среде. Суспензию выдерживают в термостате при температуре 37,0oC с содержанием в атмосфере 5% CO2 в течение 20 минут. Затем суспензию клеток кератиноцитов наносят на раневую поверхность, сверху рану покрывают стерильным неадгезивным покрытием (см. Khalfan H., Aziz Hamza A., Saeed Tat al. - Novel method of skin substitution in plastic surgery. // Burns - 1989, v. 15, p. 335-337).
Недостатком известного способа восстановления кожного покрова являются: высокая сложность и трудоемкость технологии, сравнительно низкая эффективность и высокая стоимость лечения. В связи с тем, что выращивание кератиноцитов осуществляют в культуральных флаконах с плоским дном, площадь формирующегося клеточного пласта ограничена размерами используемой посуды и для увеличения количества клеток необходимо осуществлять их пересев, в результате клетки повреждаются, жизнеспособность их снижается. Процедура выращивания и подготовки клеточной культуры к пластике ран многоэтапна и сложна, требует использования специального оборудования, больших количеств дорогостоящих реактивов, сред, сывороток и посуды. Длительность процедур выделения и выращивания кератиноцитов (10-14 суток), сложность распределения взвеси кератиноцитов по поверхности раны также ограничивает область применения известного способа.
Известен способ восстановления кожного покрова, включающий выращивание в искусственных условиях многослойных пластов кератиноцитов на поверхности культурального флакона, при этом для клеточного пласта ростовую среду добавляют в фермент диплазу и пересадку клеточной культуры на раневую поверхность осуществляют на поверхности парафинизированной марли (см. Green H., Kehinde O. , Thomas J. - Growth of cultured human epidermal cells into multiple epitelia suitable for grafting. // Proc. Nat. Acad. Sci. US. - 1979. - Vol. 76. - P. 5665-5668).
Известному способу восстановления кожного покрова присущи серьезные недостатки. Он весьма сложен в осуществлении, так как состоит из большого числа этапов. На первом из них осуществляют подготовку фидерного слоя фибробластов линии 3Т3, выделяющих ряд биологически активных веществ в среду, с последующим их облучением радиацией или обработкой митомицином. Поверх слоя фибробластов засевают кератиноциты, которые периодически пересевают через каждые 5-7 дней. На каждом этапе выращивания возможно инфицирование клеточной культуры микроорганизмами. Известный способ отличает и его высокая стоимость, которая складывается из затрат на большое количество одноразовой культуральной посуды, изготавливаемой из специальных видов пластика, а также из стоимости сред, сыворотки, ростовых факторов, ферментов. Известный способ не позволяет быстро восстанавливать кожный покров на больших площадях, культивирование клеток обычно занимает 3-4 недели. Пласт, пригодный для трансплантации, должен содержать не менее 8-12 слоев клеток, необходимо добиваться "синхронизации" работы хирургов и биологов, т.е. к моменту пересадки должны быть подготовлены раны и клеточные пласты. Эффективность пересадки "недозрелых" и "переросших" пластов низкая. В случае недостаточной подготовки раны к пластике приживление вообще не наступает. Другим недостатком известного способа является то, что в процессе открепления пласта от поверхности культурального флакона, происходящего под действием фермента диспазы, происходит повреждение клеточных связей ("десмосом"), а также самих клеток, преимущественно базального слоя. Следует отметить также техническую сложность процедуры закрепления многослойного пласта клеток на поверхности парафинированной марли, при которой нередко происходит повреждение клеточного пласта, его разрыв и неполное снятие, что в конечном итоге также ведет к снижению эффективности трансплантации.
Известен способ постановления кожного покрова у тяжелообожженных, включающий выделение и культивирование кератиноцитов на коллагеновых микроносителях в течение 1-7 дней, после чего суспензию микроносителей с прикрепленными к ним кератиноцитами наносят на раневую поверхность (см. патент РФ N 2010028 по кл. C 12 N 5/00, опубликован 30.04.94 г.).
Известный способ позволяет повысить эффективность культивирования кератиноцитов, однако для его реализации специальное оборудование (роллерные и другие биотехнические системы) и определенные виды микроносителей типа "Цитолар" или "Цитопол". Кроме того, при трансплантации выращенных кератиноцитов трудно достичь равномерного распределения микроносителей с прикрепленными к их поверхности клетками по раневой поверхности.
Известен способ восстановления кожного покрова, включающий получение так называемого "дермального эквивалента", представляющего собой коллагеновый гель с включенными в его состав живыми фибробластами, на поверхности которого выращивают кератиноциты и затем такой "живой эквивалент кожи" пересаживают на раневую поверхность (см. Bell E., Sher S., Hull B. et al. - The reconstitution of living skin // J. Invest. Dermatol. - 1983. - Vol. 81, N 1. - supp. - P. 2 - 10).
Известный способ восстановления кожного покрова путем пересадки "живого эквивалента кожи" является наиболее сложным и многоэтапным, к тому же при получении "дермального эквивалента" в результате функционирования фибробластов его площадь значительно уменьшается (иногда в 5 раз), что не позволяет получать большие по площади клеточные трансплантаты. В результате известный способ имеет ограниченное применение.
Наиболее близким по совокупности существенных признаков к заявляемому техническому решению является способ восстановления кожного покрова, принятый за прототип, включающий выделение кератиноцитов, селективное формирование межклеточного матрикса, а затем культивирование кератиноцитов на полимерной пористой подложке в виде пластины толщиной 4-6 мм с размерами пор 10 - 30 мкм с последующей пересадкой находящейся на пористой пластине выросшей клеточной культуры кератиноцитов на раневую поверхность наложением пластины в положении клеток, обращенных в раневой поверхности (см. патент РФ N 2014359 по кл. C 12 N 5/00, опубликован 15.06.94 г.).
Известный способ-прототип позволяет стимулировать пролиферацию, миграцию и функционирование кератиноцитов, при этом пористая структура полимерной пластины позволяет включать и длительно удерживать в порах растворы разнообразных цитокинов.
Однако известному способу-прототипу присущи и серьезные недостатки. Известный способ-прототип являются сложным и многоэтапным, а следовательно, и длительным, так как предусматривает предварительное формирование на полимерной пластине биооактивной поверхности из межклеточного матрикса. В случае неплоской раневой поверхности невозможно обеспечить плотное прилегание к ней всей поверхности пластины со слоем кератиноцитов, в результате чего не обеспечивается равномерное распределение клеток по раневой поверхности. Из-за непрозрачности пористой полимерной пластины отсутствует возможность визуального контроля за состоянием раны. Все это снижает эффективность применения способа-прототипа.
Задачей заявляемого изобретения являлась разработка такого способа восстановления кожного покрова, который был бы более простым по выполнению, обеспечивал повышение эффективности лечения при одновременном снижении стоимости его осуществления, а также позволял осуществлять визуальный контроль за регенерацией кожного покрова на раневой поверхности.
Поставленная задача решается тем, что в способе восстановления кожного покрова, включающем выделение и культивирование кератиноцитов на полимерной пористой подложке с последующей пересадкой их на раневую поверхность, кератиноциты культивируют на подложке из оптически прозрачного полимера со сквозными порами диаметром D, равным (0,01 - 3,0) мкм, и плотностью пор N, равной (103-109)1/см2, до формирования монослоя кератиноцитов. Кератиноциты можно культивировать в присутствии фибробластов линии 3Т3, размещенных на противоположной стороне подложки. Подложка может быть выполнена из полиэтилентерефталата, полиимида, карбоксиметилцеллюлозы и других подобных по своим физико-механическим, а также биоафинным свойствам химически инертных полимерных материалов. Указанные выше подложки обеспечивают высокую степень адгезии клеток к их поверхности и способствуют их дальнейшей пролиферации. При этом подложка имеет одинаковый электростатический заряд обеих ее поверхностей. Размеры в количестве сквозных пор (диаметр D от 0,01 мкм до 3,0 мкм, плотность распределения пор N от 103 1/см2 до 109 1/см2) делают возможным проникновение водорастворимых веществ через подложку, в то же время клетки через такие поры не проникают. Подложка может иметь толщину от 3 до 100 мкм. Подложка толщиной менее 3 мкм имеет недостаточную механическую прочность. Использовать подложку толщиной более 100 мкм нецелесообразно из-за недостаточной эластичности подложки. Разделение кератиноцитов и фибробластов полимерной пористой подложкой, через которую диффундируют продуцируемые фибробластами компоненты внеклеточного матрикса и цитокины, необходимые для стимуляции роста кератиноцитов, делают возможным не облучать фибробласты радиацией (сублетально) или не обрабатывать их митомицином.
Авторам из научно-технической, в том числе патентной литературы не известна совокупность признаков заявляемого технического решения, что, по мнению авторов, свидетельствует о соответствии заявляемого способа критерию "новизна".
Отличительные признаки заявляемого технического решения обеспечивают достижение нового технического результата - повышение эффективности способа восстановления кожного покрова и существенное снижение стоимости при одновременной возможности визуального контроля за регенерацией тканей, что соответствует критерию "изобретательский уровень".
Заявляемый способ восстановления кожного покрова осуществляют следующим образом.
На первом этапе отбирают и транспортируют кусочки кожи для последующего культивирования кератиноцитов. Аутологичные кератиноциты выделяют из кусочков интактной кожи. Аллогенные кератиноциты получают из кожи здоровых доноров (во время косметических операций) или плодов после осуществления по медицинским показаниям операции аборт. Культивирование клеток проводят только при условии отрицательных анализов на вирус СПИДа, герпеса, гепатита, реакции Вассермана и других трансмиссивных заболеваний. Кусочки кожи для выращивания клеток срезают в стерильных условиях различными способами (скальпелем, дерматомом, ножом Тирша или другим способом) под общей или местной анестезией. Жизнеспособность выделяемых из кусочков кожи кератиноцитов в определенной мере зависит от толщины срезаемых лоскутов кожи. Это связано с необходимостью проведения их ферментной обработки. При отборе кожных лоскутов для выращивания клеток кератиноцитов следует стремиться срезать кожные лоскуты толщиной не более 0,2-0,3 мм. Биоптаты кожи лучше всего отбирать в первые часы после травмы или непосредственно после выхода пострадавшего из состояния ожогового шока. После срезания кожные лоскуты помещают в ростовую среду (Игла, 199 или другую) и в охлажденном состоянии (при температуре не выше +4oC) доставляют в лабораторию. На следующем этапе осуществляют выделение клеток по одному из известных вариантов для последующего их культивирования. Приведем один из известных вариантов выделения клеток. Кожу промывают в солевом растворе Хенкса, содержащем 200 U/мл гентамицина, разрезают на мелкие кусочки площадью 0,2-0,5 см2. Кусочки кожи инкубируют в 0,5%-ном растворе диспазы (или смеси 0,5%-ного раствора диспазы с 0,2%-ным раствором коллагеназы), в сбалансированном солевом фосфатно-буферном растворе при температуре от 0oC до +4oC в течение 12-18 часов. Затем кусочки кожи переносят в фосфатный солевой буферный раствор Дульбекко и с помощью пинцета отделяют эпидермис от дермы. Эпидермис инкубируют в 0,125%-ном растворе трипсина в течение 10-15 минут при перемешивании со скоростью 50 об/мин, после чего действие ферментов останавливают добавлением 5%-ной эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота. Полученную суспензию клеток фильтруют через нейлоновую марлю и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 минут. Затем полученную взвесь клеток высевают на чашки Петри, на дно которых помещают предварительно простерилизованные (обработкой в автоклаве, кипячением или другим известным способом) полимерные пористые подложки. Культивирование кератиноцитов проводят на полимерной пористой подложке толщиной от 3 до 100 мкм с диаметром пор D от 0,01 мкм до 3,0 мкм и плотностью распределения пор N от 103 1/см до 109 1/см, которую получают по известной технологии изготовления ядерных мембран - облучением пленки высокоэнергетичными тяжелыми ионами (азота, кислорода, неона, аргона, криптона, ксенона), последующим облучением ультрафиолетовым излучением и химическим травлением в водном растворе гидроокиси натрия. Так, при облучении полиэтилентерефталатной пленки толщиной 10 мкм ионами семизарядного аргона, ускоренными до энергий 43 МэВ, последующим облучением в течение 40 минут ультрафиолетовым излучением и химическим травлением в 3,5 N водном растворе NaOH при температуре 75oC в течение 4 минут получают прозрачную подложку со сквозными цилиндрическими порами диаметром D=0,5 мкм и плотностью пор N = 107 1/см2. Культивирование в зависимости от используемой ростовой среды и добавок можно проводить по ряду известных вариантов. Например, один из них осуществляют следующим образом. Для выращивания клеток используют ростовую среду FAD, состоящую из смеси сред DMEM и F12 в соотношении 3:1, с добавлением 10%-ной эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, 50 мкг/мл инсулина (Sigma), 0,4 - 0,5 мкг/мл гидрокортизона гемисукцината (Sigma), аденина - 1,8•104М, трансферрина - 51 мкг/мл, лиотиронина - 2•10-10 М, холерного токсина - 10-10 М, эпидермального фактора роста (ЭФР) - 10 нг/мл. При этом культивирование кератиноцитов могут осуществлять как в присутствии фидерного слоя фибробластов 3Т3, так и без него. Чашки Петри размещают в термостате-инкубаторе при 37oC в атмосфере углекислоты (до 5%). Смену среды производят через каждые 48 часов. Интенсивность пролиферации клеточной культуры контролируют с помощью инвертированного микроскопа. Выращивание кератиноцитов на подложке и подготовку раны к пластике осуществляют параллельно. Подготовку ран к пластике осуществляют разными способами:
- выполнением радикальных и послойных (тангенциальных) некрэктомий;
- посредством проведения местного консервативного лечения с использованием растворов антисептиков и многокомпонентных мазей на водорастворимой основе ("Левосин", "Левомеколь", "Диоксидиновая" мазь и другие).
- выполнением радикальных и послойных (тангенциальных) некрэктомий;
- посредством проведения местного консервативного лечения с использованием растворов антисептиков и многокомпонентных мазей на водорастворимой основе ("Левосин", "Левомеколь", "Диоксидиновая" мазь и другие).
Критериями готовности ран к пересадке является отсутствие экссудации, кровоточивости, гноя, наличие красных мелкозернистых грануляций, наличие краевой эпителизации.
Следует стремиться к тому, чтобы готовность раны к пластике и клеточной культуры к пересадке совпали во времени между собой.
Выращенный на подложке монослой кератиноцитов пересаживают на различные виды ран. Раневая поверхность должна быть хорошо васкуляризирована. Подложку поворачивают к раневой поверхности стороной, на которой находится монослой кератиноцитов, и накладывают на рану. Поверх пленки накладывают сухие марлевые повязки, которые меняют по мере необходимости. После заживления раны подложку удаляют.
Пример 1. Больная Ч., 1938 г.р., история болезни N 99827, поступила в ожоговый центр ГНИИ скорой помощи им. Ю.Ю. Джанелидзе 25.05.1998 г. Диагноз: химический ожог II-IIIа 8% нижних конечностей. Проводилось местное консервативное лечение, направленное на очищение ран от омертвевших тканей, снятие воспалительных явлений, профилактику развития инфекционных осложнений. 03.06.1998 г. на раны в области колен и голеней пересажено 320 см2 аллогенных кератиноцитов, культивированных в виде монослоя на подложке из полиэтилентерефталата толщиной 10 мкм со сквозными порами диаметром D = 0,5 мкм и плотностью пор N = 107 1/см2 Поверх подложки были наложены сухие марлевые повязки. 10.06.1998 г. подложку удалили. Приживление клеточной культуры составило 100%. На участках, где осуществляли пересадку, имелся восстановленный кожный покров.
На контрольных участках, где лечение проводилось с использованием мазей, заживление ран завершилось на 10-12 дней позднее.
Пример 2. Больной П. , 1974 г.р., история болезни N 30257, поступил в клинику термических поражений Военно-медицинской академии 23.03.1998 г. с диагнозом: ожог пламенем II-IIIб 8% (2%) спины и бедер. Проводилось местное консервативное лечение, антибактериальная терапия, физиотерапевтическое лечение. 10.04.1998 г. на раны площадью 320 см2 в области ягодиц, имеющие "мозаичный характер" (чередование участков ожога III-а и III-б степени), трансплантировали культуру аллогенных кератиноцитов, выращенных на поверхности подложки из полиэтилентерефталата толщиной 50 мкм со сквозными порами диаметром D = 0,1 мкм и плотностью пор N = 108 1/см2. Поверх подложки были наложены сухие марлевые повязки. 14.04.1998 г. осуществили смену марлевых повязок, небольшие участки пленки (S=25 см2), где скопился экссудат, были удалены. 18.04.1998 г. во время перевязки удалили подложку, под которой отмечено наличие тонкой пленки вновь образованного эпителия. Местами пересаженная клеточная культура не прижилась, вместе с тем в этих участках отмечено развитие процесса краевой эпителизации. Приживление клеточной культуры составило около 80% от пересаженной на поверхности подложки.
Claims (6)
1. Способ восстановления кожного покрова, включающий выделение и последующее культивирование кератиноцитов на полимерной пористой подложке с последующей пересадкой их на раневую поверхность, отличающийся тем, что кератиноциты культивируют на подложке из оптически прозрачного полимера со сквозными порами диаметром D = 0,01 - 3,0 мкм и плотностью пор N = (103 - 109) 1/см2 до формирования монослоя кератиноцитов.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что кератиноциты культивируют в присутствии фибробластов линии 3Т3, размещенных на противоположной стороне подложки.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что кератиноциты культивируют на подложке из полиэтилентерефталата.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что кератиноциты культивируют на подложке из полиимида.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что кератиноциты культивируют на подложке из карбаксиметилцеллюлозы.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что культивируют аллогенные кератиноциты.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99104434A RU2148970C1 (ru) | 1999-02-26 | 1999-02-26 | Способ восстановления кожного покрова |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99104434A RU2148970C1 (ru) | 1999-02-26 | 1999-02-26 | Способ восстановления кожного покрова |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2148970C1 true RU2148970C1 (ru) | 2000-05-20 |
Family
ID=20216722
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU99104434A RU2148970C1 (ru) | 1999-02-26 | 1999-02-26 | Способ восстановления кожного покрова |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2148970C1 (ru) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2230500C2 (ru) * | 2002-06-18 | 2004-06-20 | Глинских Нина Поликарповна | Способ лечения ожоговых ран на основе применения культивированных клеток |
| RU2232551C2 (ru) * | 2002-01-08 | 2004-07-20 | Ковалев Алексей Вячеславович | Способ аутотрансплантации клеток кожи |
| RU2254146C2 (ru) * | 2003-02-14 | 2005-06-20 | Васильев Андрей Валентинович | Биологический активный комплекс для органогенеза |
| RU2281120C2 (ru) * | 2000-12-20 | 2006-08-10 | АУТОТИССЬЮ ГмбХ | Способ удаления клеток с чужеродного материала для получения биопротезов и аппарат для его осуществления |
| RU2320349C1 (ru) * | 2006-07-11 | 2008-03-27 | НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ СКОРОЙ ПОМОЩИ ИМ. Н.В. СКЛИФОСОВСКОГО ДЕПАРТАМЕНТА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ г. Москвы | Способ лечения ожоговых ран |
| WO2013163512A1 (en) * | 2012-04-26 | 2013-10-31 | The General Hospital Corporation | Agents and methods for treating and preventing seborrheic keratosis |
| RU2530614C2 (ru) * | 2012-05-04 | 2014-10-10 | Владимир Петрович Швецов | Биологический активный комплекс для органогенеза и продукт секреции клеток, содержащихся в этом комплексе |
| RU2658707C1 (ru) * | 2016-12-28 | 2018-06-22 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Способ восстановления кожного покрова |
| US10508309B2 (en) | 2013-05-17 | 2019-12-17 | The General Hospital Corporation | Methods for detecting and treating variants of seborrheic keratoses |
| RU2717312C1 (ru) * | 2019-09-09 | 2020-03-20 | Борис Алексеевич Парамонов | Пористая основа для перевязочного средства |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2010028C1 (ru) * | 1991-06-28 | 1994-03-30 | Васильев Андрей Валентинович | Способ восстановления кожного покрова у тяжелообожженных |
| RU2014359C1 (ru) * | 1992-02-12 | 1994-06-15 | Радюхин Виктор Алексеевич | Трехмерный биоактивный носитель для культивирования животных клеток и тканей |
-
1999
- 1999-02-26 RU RU99104434A patent/RU2148970C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2010028C1 (ru) * | 1991-06-28 | 1994-03-30 | Васильев Андрей Валентинович | Способ восстановления кожного покрова у тяжелообожженных |
| RU2014359C1 (ru) * | 1992-02-12 | 1994-06-15 | Радюхин Виктор Алексеевич | Трехмерный биоактивный носитель для культивирования животных клеток и тканей |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| RU 94046192 10.10.96. * |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2281120C2 (ru) * | 2000-12-20 | 2006-08-10 | АУТОТИССЬЮ ГмбХ | Способ удаления клеток с чужеродного материала для получения биопротезов и аппарат для его осуществления |
| RU2232551C2 (ru) * | 2002-01-08 | 2004-07-20 | Ковалев Алексей Вячеславович | Способ аутотрансплантации клеток кожи |
| RU2230500C2 (ru) * | 2002-06-18 | 2004-06-20 | Глинских Нина Поликарповна | Способ лечения ожоговых ран на основе применения культивированных клеток |
| RU2254146C2 (ru) * | 2003-02-14 | 2005-06-20 | Васильев Андрей Валентинович | Биологический активный комплекс для органогенеза |
| RU2320349C1 (ru) * | 2006-07-11 | 2008-03-27 | НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ СКОРОЙ ПОМОЩИ ИМ. Н.В. СКЛИФОСОВСКОГО ДЕПАРТАМЕНТА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ г. Москвы | Способ лечения ожоговых ран |
| US10443038B2 (en) | 2012-04-26 | 2019-10-15 | The General Hospital Corporation | Agents and methods for treating and preventing seborrheic keratosis |
| WO2013163512A1 (en) * | 2012-04-26 | 2013-10-31 | The General Hospital Corporation | Agents and methods for treating and preventing seborrheic keratosis |
| US9458462B2 (en) | 2012-04-26 | 2016-10-04 | The General Hospital Corporation | Agents and methods for treating and preventing seborrheic keratosis |
| US9658210B2 (en) | 2012-04-26 | 2017-05-23 | The General Hospital Corporation | Agents and methods for treating and preventing seborrheic keratosis |
| US10822586B2 (en) | 2012-04-26 | 2020-11-03 | The General Hospital Corporation | Agents and methods for treating and preventing seborrheic keratosis |
| RU2530614C2 (ru) * | 2012-05-04 | 2014-10-10 | Владимир Петрович Швецов | Биологический активный комплекс для органогенеза и продукт секреции клеток, содержащихся в этом комплексе |
| US10508309B2 (en) | 2013-05-17 | 2019-12-17 | The General Hospital Corporation | Methods for detecting and treating variants of seborrheic keratoses |
| RU2658707C1 (ru) * | 2016-12-28 | 2018-06-22 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Способ восстановления кожного покрова |
| RU2717312C1 (ru) * | 2019-09-09 | 2020-03-20 | Борис Алексеевич Парамонов | Пористая основа для перевязочного средства |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6043089A (en) | Skin culture and process for preparing the same | |
| US5015584A (en) | Epidermal graft system | |
| US6916655B2 (en) | Cultured skin and method of manufacturing the same | |
| US7741116B2 (en) | Surgical device for skin therapy or testing | |
| JP3311351B2 (ja) | 新規なケラチノサイト培養物，その調製方法及び創傷治療物質としてのその用途 | |
| KR101019916B1 (ko) | 상처 치료용 생물학적 활성 물질로서 사용될 수 있는각질세포 | |
| CN101954124B (zh) | 含基底膜的组织工程皮肤的构建方法 | |
| JPH02174848A (ja) | 表皮シート並びにその製法、貯蔵方法および用途 | |
| JPH05504497A (ja) | 細胞培養製品 | |
| RU2148970C1 (ru) | Способ восстановления кожного покрова | |
| CN105255822A (zh) | 临床治疗级细胞治疗用毛囊干细胞细胞外基质筛选培养方法 | |
| CN107254431B (zh) | 一种新型组织工程皮肤制备方法 | |
| AU760470B2 (en) | A living chimeric skin replacement | |
| CN105769381A (zh) | 一种用于组织损伤修复的生物补片 | |
| JPH0947503A (ja) | 培養皮膚用基材、培養皮膚およびその製造法 | |
| RU2010028C1 (ru) | Способ восстановления кожного покрова у тяжелообожженных | |
| US6585969B1 (en) | Non-viable keratinocyte cell composition or lysate for promoting wound healing | |
| Hakim et al. | Use of biodegradable mesh as a transport for a cultured uroepithelial graft an improved method using collagen gel | |
| JP2009225675A (ja) | 上皮系細胞シートの作製のための同種皮膚由来フィーダー細胞 | |
| RU2195889C2 (ru) | Способ дермабразии | |
| EP0013394A2 (en) | Process for growing human epidermal cells in tissue culture | |
| RU2526813C1 (ru) | Комбинированный трансплантат дермального матрикса с мезенхимальными мультипотентными стромальными клетками, способ его получения и способ лечения ран с его использованием | |
| Boschi et al. | Cutaneous tissue engineering and lower extremity wounds (part 1) | |
| CN100494361C (zh) | 具有抗炎活性的皮肤细胞及其制备方法和该细胞在皮肤感染创面中的应用 | |
| CN119752784A (zh) | 一种凋亡间充质干细胞来源的工程化纳米囊泡、复合水凝胶及制备方法和应用 |