RU2146372C1 - Способ определения парвовируса б19 - Google Patents
Способ определения парвовируса б19 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2146372C1 RU2146372C1 RU98107396A RU98107396A RU2146372C1 RU 2146372 C1 RU2146372 C1 RU 2146372C1 RU 98107396 A RU98107396 A RU 98107396A RU 98107396 A RU98107396 A RU 98107396A RU 2146372 C1 RU2146372 C1 RU 2146372C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- stage
- reaction
- pair
- polymerase chain
- parvovirus
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 241000702617 Human parvovirus B19 Species 0.000 title abstract description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 title abstract 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000000137 annealing Methods 0.000 claims abstract description 7
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 238000011109 contamination Methods 0.000 abstract description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 9
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 4
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 4
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003544 deproteinization Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, в частности вирусологии, и касается эффективных и высокоспецифичных способов определения парвовируса Б19 в сыворотке крови. Способ основан на постановке двухэтапной полимеразной цепной реакции, включающей предварительную тепловую обработку исследуемых сывороток при 95oC в течение 10 мин. При этом в качестве исследуемых используют сыворотки, не обработанные ферментом proleinase K. В качестве праймеров на первом этапе реакции используют пару с температурой отжига 44oC, состоящую из 5'-GACCTCCAAACCAC-3' и 5'-AATTGCTGATACACAG-3', а на втором этапе - пару с температурой отжига 56°С, состоящую из 5'-CAATTGTCACAGACACCАG-3' и 5'-TGCAATCCAGACAGGTAAG-3'. Два этапа реакции проводят в одной пробирке. Способ позволяет ускорить, удешевить постановку теста, снизить возможность контаминации образцов. 2 ил.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к созданию медицинских диагностикумов для определения наличия патогенных вирусов в крови человека. Нами разработан диагностикум для выделения паровируса Б19 в сыворотке крови на основе двухэтапной полимеразной цепной реакции.
На сегодняшний день существуют 2 основных метода идентификации ДНК парвовируса Б19. Первый из них - ДНК-гибридизация [1, 2, 3]. Однако этот метод требует много времени и достаточно трудоемок для скриннинга большого числа образцов. Второй метод - двухэтапная полимеразная цепная реакция (nested-PCR). Самая удачная на наш взгляд модификация определения ДНК ПВ Б19 описана авторами Musiani M., Gallinella G. et al. [4].
Методика, предложенная Musiani M., Gallinella G. et al.
1. К 50-ти мкл анализируемой сыворотки добавляют 100 мкл лизирующего раствора, содержащего 50 мМ KCl, 10 мМ Tris-HCl (pH 8,3), 25 мМ MgCl2, 0,1 мг/мл желатина, 0,45% NP-40; 0,45% Tween 20 и 0,06 мг Proteinase K. Смесь инкубируют при 56oC в течение одного часа, после чего прогревают в течение 10 мин при температуре 95oC для инактивации фермента и центрифугируют при 14000 об/мин 15 минут. Супернатант используют в PCR.
2. Готовят рабочую смесь для двухэтапной постановки полимеразной цепной реакции (цифры приведены в расчете на одну пробу):
I этап
а) Реакционный буфер (Tris-HCl (pH 8,3) - 100 мМ, MgCl2 - 15 мМ, KCl - 500 мМ, желатин 0,1%), мкл - 2,5
б) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-CTTTAGGTATAGCCAACTGG-3', 20 мкМ), мкл - 2
в) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-ACACTGAGTTTACTAGTGGC-3', 20 мкМ), мкл - 2
г) Смесь ATP, CTP, GTP, TTP (концентрация каждого компонента 2 мМ), мкл - 2,5
д) ДНК-полимераза, ед. активности - 1
е) Супернатант депротеинизированной и прогретой сыворотки, мкл - 5
ж) Деионизованная вода, мкл - До 25
I этап реакции амплификации проводят в программируемом термостате при следующем температурном режиме: 94oC - 30 сек; 55oC - 1 мин; 72oC - 1 мин, число последовательных циклов - 35.
I этап
а) Реакционный буфер (Tris-HCl (pH 8,3) - 100 мМ, MgCl2 - 15 мМ, KCl - 500 мМ, желатин 0,1%), мкл - 2,5
б) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-CTTTAGGTATAGCCAACTGG-3', 20 мкМ), мкл - 2
в) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-ACACTGAGTTTACTAGTGGC-3', 20 мкМ), мкл - 2
г) Смесь ATP, CTP, GTP, TTP (концентрация каждого компонента 2 мМ), мкл - 2,5
д) ДНК-полимераза, ед. активности - 1
е) Супернатант депротеинизированной и прогретой сыворотки, мкл - 5
ж) Деионизованная вода, мкл - До 25
I этап реакции амплификации проводят в программируемом термостате при следующем температурном режиме: 94oC - 30 сек; 55oC - 1 мин; 72oC - 1 мин, число последовательных циклов - 35.
II этап
а) Реакционный буфер (Tris-HCl (pH 8,3) - 100 мМ, MgCl2 - 15 мМ, KCl - 500 мМ, желатин 0,1%), мкл - 2,5
б) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-CTTTAGGTATAGCCAACTGG-3', 20 мкМ), мкл - 2
в) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-ACACTGAGTTTACTAGTGGC-3', 20 мкМ), мкл - 2
г) Смесь ATP, CTP, GTP, TTP (концентрация каждого компонента 2 мМ), мкл - 2,5
д) ДНК-полимераза, ед. активности - 1
е) Амплификат, полученный в результате проведения I этапа, мкл - 5
ж) Деионизованная вода, мкл - До 25
II этап реакции амплификации проводят в программируемом термостате при следующем температурном режиме: 94oC - 30 сек; 55oC - 1 мин; 72oC - 1 мин, число последовательных циклов - 35.
а) Реакционный буфер (Tris-HCl (pH 8,3) - 100 мМ, MgCl2 - 15 мМ, KCl - 500 мМ, желатин 0,1%), мкл - 2,5
б) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-CTTTAGGTATAGCCAACTGG-3', 20 мкМ), мкл - 2
в) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-ACACTGAGTTTACTAGTGGC-3', 20 мкМ), мкл - 2
г) Смесь ATP, CTP, GTP, TTP (концентрация каждого компонента 2 мМ), мкл - 2,5
д) ДНК-полимераза, ед. активности - 1
е) Амплификат, полученный в результате проведения I этапа, мкл - 5
ж) Деионизованная вода, мкл - До 25
II этап реакции амплификации проводят в программируемом термостате при следующем температурном режиме: 94oC - 30 сек; 55oC - 1 мин; 72oC - 1 мин, число последовательных циклов - 35.
Преимущество предлагаемого нами изобретения в том, что ДНК ПВ Б19 определяется непосредственно в сыворотке крови человека без предшествующей обработки ферментом proteinase K и последующей его инактивацией. Это ускоряет и удешевляет постановку теста, не уменьшая его чувствительности. Кроме того, разработанные нами две пары праймеров таковы, что за счет существенной разницы в температуре отжига внешней и внутренней пары исключено участие внешних праймеров на второй стадии реакции, что дает возможность проведения двух этапов в одной реакционной пробирке, а это, в свою очередь, также снижает вероятность контаминации образцов.
Описание предлагаемого способа определения парвовируса Б19.
1. К 50 мкл сыворотки крови больного добавляют 100 мкл физиологического раствора, содержащего 0,5% детергента NP-40, и смесь прогревают при температуре 95oC в течение 10 минут, после чего центрифугируют при 14000 об/мин в течение 10 мин. Полученный супернатант используют в PCR.
2. Готовят рабочую смесь для двухэтапной постановки полимеразной цепной реакции (цифры приведены в расчете на одну пробу):
I этап
а) Реакционный буфер (TРИС-HCl (pH 8,3) - 100 мМ, MgCl2 - 25 мМ, KCl - 500 мМ, формамид - 40%), мкл - 2,5
б) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-GACCTCCAAACCAC-3', 20 мкМ), мкл - 2
в) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-AATTGCTGATACACAG-3', 20 мкМ), мкл - 2
г) Смесь ATP, CTP, GTP, TTP (концентрация каждого компонента 2 мМ), мкл - 2,5
д) ДНК-полимераза, ед. активности - 1
е) Супернатант прогретой разведенной сыворотки, мкл - 5
ж) Деионизованная вода, мкл - До 25
I этап реакции амплификации проводят в программируемом термостате при следующем температурном режиме: 94oC - 1 мин; 44oC - 1 мин; 72oC - 1 мин, число последовательных циклов - 20.
I этап
а) Реакционный буфер (TРИС-HCl (pH 8,3) - 100 мМ, MgCl2 - 25 мМ, KCl - 500 мМ, формамид - 40%), мкл - 2,5
б) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-GACCTCCAAACCAC-3', 20 мкМ), мкл - 2
в) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-AATTGCTGATACACAG-3', 20 мкМ), мкл - 2
г) Смесь ATP, CTP, GTP, TTP (концентрация каждого компонента 2 мМ), мкл - 2,5
д) ДНК-полимераза, ед. активности - 1
е) Супернатант прогретой разведенной сыворотки, мкл - 5
ж) Деионизованная вода, мкл - До 25
I этап реакции амплификации проводят в программируемом термостате при следующем температурном режиме: 94oC - 1 мин; 44oC - 1 мин; 72oC - 1 мин, число последовательных циклов - 20.
II этап
а) Реакционный буфер (TРИС-HCl (pH 8,3) - 100 мМ, MgCl2 - 25 мМ, KCl - 500 мМ, формамид - 40%), мкл - 2,5
б) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-CAATTGTCACAGACACCAG-3', 20 мкМ), мкл - 2
в) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-TGCAATCCAGACAGGTAAG-3', 20 мкМ), мкл - 2
г) Смесь ATP, CTP, GTP, TTP (концентрация каждого компонента 2 мМ), мкл - 2,5
д) ДНК-полимераза, ед. активности - 1
е) Амплификат, полученный в результате проведения I этапа, мкл - 5
ж) Деионизованная вода, мкл - До 25
II этап реакции амплификации проводят в программируемом термостате при следующем температурном режиме: 94oC - 1 мин; 56oC - 1 мин; 72oC - 1 мин, число последовательных циклов - 35.
а) Реакционный буфер (TРИС-HCl (pH 8,3) - 100 мМ, MgCl2 - 25 мМ, KCl - 500 мМ, формамид - 40%), мкл - 2,5
б) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-CAATTGTCACAGACACCAG-3', 20 мкМ), мкл - 2
в) Праймер (нуклеотидная последовательность 5'-TGCAATCCAGACAGGTAAG-3', 20 мкМ), мкл - 2
г) Смесь ATP, CTP, GTP, TTP (концентрация каждого компонента 2 мМ), мкл - 2,5
д) ДНК-полимераза, ед. активности - 1
е) Амплификат, полученный в результате проведения I этапа, мкл - 5
ж) Деионизованная вода, мкл - До 25
II этап реакции амплификации проводят в программируемом термостате при следующем температурном режиме: 94oC - 1 мин; 56oC - 1 мин; 72oC - 1 мин, число последовательных циклов - 35.
После проведения двухэтапной полимеразной цепной реакции продукт подвергают электрофорезу в агарозном геле, содержащем бромистый этидий. О наличии ДНК ПВ Б19 в исследуемом образце судят по появлению полосы флюоресценции в УФ-свете на соответствующей дорожке в геле. Размер амплификата - 490 оснований.
Таким образом, предлагаемая нами методика отличается от прототипа следующим.
Во-первых, в предлагаемой методике длительный процесс депротеинизации образца сыворотки ферментом протеиназой K и его последующей инактивации заменен 10-минутным прогреванием образца при 95oC, что позволяет сократить трудоемкость, время выполнения, стоимость анализа, а также исключить возможность контаминации образца на стадии подготовки ПЦР, а следовательно, и возможность получения ложноположительной реакции.
Во-вторых, две пары праймеров подобраны так, что температура отжига для внешней пары праймеров (44oC) существенно ниже, чем для внутренней пары (56oC). Такая разница в температуре отжига позволяет исключить участие пары внешних праймеров на второй стадии реакции и получить амплификат без примеси неспецифических продуктов реакции. Кроме того, это дает возможность проведения двух этапов в одной реакционной пробирке, что, в свою очередь, также уменьшает вероятность контаминации образцов.
Примеры использования способа приведены на фиг. 1 и 2.
Список литературы
1. Shade R.O., Blundell M.C., Cotmore S.F., Tattersall P., Astell C.R. "Nucleotide Sequence and Genom Organization of Human Parvovirus B19 Isoleted from Serum of Child During Aplastic Crisis". J. Virol. 58: 921-936 (1986).
1. Shade R.O., Blundell M.C., Cotmore S.F., Tattersall P., Astell C.R. "Nucleotide Sequence and Genom Organization of Human Parvovirus B19 Isoleted from Serum of Child During Aplastic Crisis". J. Virol. 58: 921-936 (1986).
2. McOmish F., Yap P.L., Jordan A., Hart H., Cohen B.J. and Simmonds P. "Detection of Parvovirus B19 in Donnated Blood: a Model System for Screening by Polymerase Chain Reaсtion". J. Clin. Microbiol. 31: 323-328 (1993).
3. Patent: WO 9112269-A 10 22-AUG-1991.
4. Musiani M., Gallinella G. et al. "Persistent B19 Parvovirus Infection in Haemophilic HIV-1 Infected Patients", J. of Med. Virol., 46: 103-108, 1995.
5. Frickhofen N., Young N.S. "A Rapid Method of Sample Preparation for Detection of DNA Viruses in Human Serum by PCR", J. Virol. Meth., 35: 65-72 (1991).
Claims (1)
- Способ определения паровируса Б 19 при помощи двухэтапной полимеразной цепной реакции, включающий тепловую обработку образцов исследуемых сывороток при 95oС в течение 10 мин и непосредственно двухэтапную полимеразную цепную реакцию, отличающийся тем, что ДНК ПВ Б19 определяется непосредственно в сыворотке крови человека, не обработанной ферментом proteinase К, с последующей его инактивацией и в качестве праймеров на первом этапе реакции используют пару с температурой отжига 44oС, состоящую из 5'-GACCTCCAAACCAC-3' и 5'-AATTGCTGATACACAG-3', а на втором этапе - пару с температурой отжига 56oС, состоящую из 5'-CAATTGTCACAGACACCAG-3' и 5-TGCAATCCAGACAGGTAAG-3', при этом два этапа реакции проводят в одной пробирке.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98107396A RU2146372C1 (ru) | 1998-04-16 | 1998-04-16 | Способ определения парвовируса б19 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98107396A RU2146372C1 (ru) | 1998-04-16 | 1998-04-16 | Способ определения парвовируса б19 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU98107396A RU98107396A (ru) | 2000-02-10 |
| RU2146372C1 true RU2146372C1 (ru) | 2000-03-10 |
Family
ID=20204961
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98107396A RU2146372C1 (ru) | 1998-04-16 | 1998-04-16 | Способ определения парвовируса б19 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2146372C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2301263C2 (ru) * | 2001-06-28 | 2007-06-20 | Чирон Корпорейшн | Способ выявления парвовируса b19 человека в биологическом образце (варианты) и набор для его осуществления |
| RU2797020C1 (ru) * | 2022-08-26 | 2023-05-30 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук" (ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН) | Синтетические олигонуклеотидные праймеры для выявления парвовируса гусей в полимеразной цепной реакции |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1988002026A1 (en) * | 1986-09-08 | 1988-03-24 | Applied Biotechnology, Inc. | Empty viral capsid vaccines |
| WO1991012269A1 (de) * | 1990-02-08 | 1991-08-22 | Mikrogen Molekularbiologische Entwicklungs-Gmbh | Immunologisch aktive peptide bzw. polypeptide des parvovirus b19 |
| RU2049476C1 (ru) * | 1992-07-29 | 1995-12-10 | Научно-производственный кооператив "Биолам" Онкологического научного центра РАМН | Способ определения антител к ретровирусам человека |
| RU2051688C1 (ru) * | 1992-07-29 | 1996-01-10 | Научно-производственный кооператив "Биолам" Онкологического научного центра РАМН | Способ определения антител к индивидуальным белкам ретровирусов человека |
-
1998
- 1998-04-16 RU RU98107396A patent/RU2146372C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1988002026A1 (en) * | 1986-09-08 | 1988-03-24 | Applied Biotechnology, Inc. | Empty viral capsid vaccines |
| WO1991012269A1 (de) * | 1990-02-08 | 1991-08-22 | Mikrogen Molekularbiologische Entwicklungs-Gmbh | Immunologisch aktive peptide bzw. polypeptide des parvovirus b19 |
| RU2049476C1 (ru) * | 1992-07-29 | 1995-12-10 | Научно-производственный кооператив "Биолам" Онкологического научного центра РАМН | Способ определения антител к ретровирусам человека |
| RU2051688C1 (ru) * | 1992-07-29 | 1996-01-10 | Научно-производственный кооператив "Биолам" Онкологического научного центра РАМН | Способ определения антител к индивидуальным белкам ретровирусов человека |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MUSIANI M. et al., Persistent B19 Parvovirus Infection in Haemophilic HIV-1 Infected Patients, J.of Med.Virol. 1995, 46, p.103-108. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2301263C2 (ru) * | 2001-06-28 | 2007-06-20 | Чирон Корпорейшн | Способ выявления парвовируса b19 человека в биологическом образце (варианты) и набор для его осуществления |
| RU2797020C1 (ru) * | 2022-08-26 | 2023-05-30 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук" (ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН) | Синтетические олигонуклеотидные праймеры для выявления парвовируса гусей в полимеразной цепной реакции |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yapar et al. | Rapid and quantitative detection of Crimean-Congo hemorrhagic fever virus by one-step real-time reverse transcriptase-PCR | |
| Henson et al. | Amplification of JC virus DNA from brain and cerebrospinal fluid of patients with progressive multifocal leukoencephalopathy | |
| Sauvage et al. | Viral metagenomics applied to blood donors and recipients at high risk for blood-borne infections | |
| Satoh et al. | Virus concentration using polyethyleneimine-conjugated magnetic beads for improving the sensitivity of nucleic acid amplification tests | |
| CN115820889A (zh) | 一种用于幽门螺旋杆菌检测的crRNA、CRISPR Cas12a系统及其应用 | |
| CN103937884A (zh) | 一种用于结核分枝杆菌检测的环介导等温扩增试剂盒及其使用方法 | |
| CN111286559A (zh) | 检测非洲猪瘟病毒的引物、探针及试剂盒 | |
| CN114480690B (zh) | 金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸快速检测方法及试剂盒 | |
| CA2191475C (en) | A drug, containing one or more plasma derivatives | |
| RU2146372C1 (ru) | Способ определения парвовируса б19 | |
| CN110157837B (zh) | 一种检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒的引物及方法 | |
| CN113755646A (zh) | 一种用于新型布尼亚病毒检测的CrRNA、CRISPR-Cas12a系统及应用 | |
| RU2126048C1 (ru) | Способ определения генетической устойчивости обследуемых к инфицированию вирусом иммунодефицита человека первого типа (вич-1) | |
| JP4468534B2 (ja) | 血清又は血漿からｄｎａを調製するための改良法 | |
| US20230042039A1 (en) | Method For Detecting SARS-CoV-Related Betacoronaviruses | |
| CN101160410B (zh) | 使用病毒检测样本中活细胞的方法 | |
| Liu et al. | Advances in the Application of Molecular Diagnostic Techniques to Brucellosis | |
| RU2728342C1 (ru) | Набор олигонуклеотидных праймеров и зондов и способ выявления пестивируса Н крупного рогатого скота | |
| RU2031126C1 (ru) | Способ детекции рнк вируса гепатита а | |
| JP3334086B2 (ja) | Ｈｉｖ−１プロウイルスｄｎａの定量法および診断キット | |
| RU2823776C1 (ru) | Набор олигонуклеотидных праймеров для выявления ДНК ортопоксвирусов методом изотермической амплификации в режиме реального времени | |
| Kunchev et al. | LOOP-MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION FOR DETECTION OF C. BURNETII IN BULGARIA | |
| RU2818960C1 (ru) | Набор олигодезоксирибонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для идентификации РНК JMTV методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией | |
| RU2702240C1 (ru) | Способ и набор для генодиагностики коклюша и коклюшеподобных заболеваний | |
| RU2756924C2 (ru) | Способ ранней пцр-диагностики вируса алеутской болезни норок carnivore amdoparvovirus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090417 |