RU2036239C1 - Способ определения количества микроорганизмов в деионизированной воде - Google Patents
Способ определения количества микроорганизмов в деионизированной воде Download PDFInfo
- Publication number
- RU2036239C1 RU2036239C1 SU4932009A RU2036239C1 RU 2036239 C1 RU2036239 C1 RU 2036239C1 SU 4932009 A SU4932009 A SU 4932009A RU 2036239 C1 RU2036239 C1 RU 2036239C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- microorganisms
- determination
- deionized water
- indicator
- solution
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 8
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 title claims description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 title claims description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 6
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- FTZIQBGFCYJWKA-UHFFFAOYSA-N 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Chemical compound S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 FTZIQBGFCYJWKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004377 microelectronic Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- -1 monosubstituted potassium phosphate Chemical class 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical class [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: микробиологический контроль, а также микроэлектроника, био- и медицинская технология для контроля содержания бактерий в ультрачистой воде. Сущность: исследуемую пробу фильтруют через мембранный фильтр. На дно стерильной чашки Петри помещают обеззоленный фильтр, смоченный фосфатным буфером "Зеренсона" с растворенным в нем 0,15%-ным метилтиозолилтетразолием бромистным. Чашки Петри помещают в термостат при 39 - 41°С. Через 60 - 75 мин окрашенные живые клетки микроорганизмов подсчитывают под микроскопом в проходящем свете.
Description
Изобретение относится к микробиологическому контролю и может быть использовано в микроэлектронике, био- и медицинской технологии для контроля содержания бактерий в ультрачистой воде.
Для определения микроорганизмов в воде используют способ выращивания колоний бактерий на питательных средах с помощью мембранной фильтрации. Время инкубации не менее 24 ч при 37±0,5оС.
Для выявления колоний микроорганизмов используют индикатор вещество, окрашивающее колонии бактерий.
Недостатком данного метода является низкая чувствительность питательной среды и вследствие этого длительность анализа.
Целью изобретения является сокращение времени определения количества микроорганизмов в деионизированной воде.
Принципиальным отличием данного метода является отказ от использования стандартных сред (типа РПА, МПА, ДПА) и импортных Millipore, Gelman, Sartorius, а также использование в качестве питательной среды раствора фосфатного буфера "Зеренсона" (рН=8,2). В качестве индикатора метилтиозолилтетразолий бромистый (МТТ). Температура инкубации 39-41оС, длительность инкубации сокращается до 60-75 мин.
Олиготрофные бактерии, существующие в ультрачистой воде, довольствуются минимальным количеством питательных веществ для жизнедеятельности, причем питательными веществами для них могут служить не только органические вещества, но и неорганические, каковыми являются элементы калий, натрий, фосфор, входящие в состав буфера [1] Точный подбор рН и температурного режима инкубации обуславливает интенсивный рост микроорганизмов.
Индикатор метилтиозолилтетразолий бромистый (МТТ), легко проникая в живую клетку бактерии, взаимодействует с ферментом живой клетки С-оксидазой, при этом происходит восстановление бесцветной формы МТТ в формазан красного цвета [2-4]
При осуществлении способа определения количества микроорганизмов в деионизированной воде осуществляют отбор исследуемой пробы, фильтрацию ее через мембранный фильтр, введение последнего в питательную среду, содержащую индикатор, инкубирование микроорганизмов с последующим установлением их количества, в качестве питательной среды используют фосфатный буфер с рН=8,2, индикатор представляет собой водно-спиртовой раствор метилтиозолилтетразолия бромистого с концентрацией 0,15% при этом инкубирование микроорганизмов осуществляют при 39-41оС в течение 60-75 мин.
При осуществлении способа определения количества микроорганизмов в деионизированной воде осуществляют отбор исследуемой пробы, фильтрацию ее через мембранный фильтр, введение последнего в питательную среду, содержащую индикатор, инкубирование микроорганизмов с последующим установлением их количества, в качестве питательной среды используют фосфатный буфер с рН=8,2, индикатор представляет собой водно-спиртовой раствор метилтиозолилтетразолия бромистого с концентрацией 0,15% при этом инкубирование микроорганизмов осуществляют при 39-41оС в течение 60-75 мин.
П р и м е р конкретного осуществления способа. Приготовление 0,15%-ного раствора МТТ на фосфатном буфере "Зеренсона" (рН=8,2).
Реактивы готовят следующим образом:
1. Приготовление раствора "А".
1. Приготовление раствора "А".
9,09 г однозамещенного фосфата калия КН2РО4 растворяют в колбе на 1000 мл в дистиллированной воде и доводят до метки. Раствор должен соответствовать 1/15 М КН2РО4.
2. Приготовление раствора "Б".
11,88 г двузамещенного фосфата натрия Na2HPO4 ˙ H2O растворяют в мерной колбе на 1000 мл и доводят до метки дистиллированной водой. Раствор соответствует 1/15 M Na2HPO4 ˙ 2H2O.
3. Приготовление буферного раствора (рН=8,2).
В мерную колбу на 100 мл пипеткой отмеряют 3,3 мл раствора "А". Доводят до метки раствором "Б". Тщательно перемешивают.
4. Приготовление 0,15%-ного раствора МТТ.
0,15 г соли МТТ растворяют в 10 мл этилового спирта в мерной колбе на 100 мл. Доливают до метки раствором фосфатного буфера.
Способ осуществляют следующим образом.
250-500 мл испытуемой воды профильтровывают через мембранный фильтр. Фильтр переносят в стерильную чашку Петри, на дно которой помещают обеззоленный фильтр, смоченный 1,5-3,0 мл фосфатного буфера "Зеренсона" с растворенным в нем 0,15% МТТ.
Чашки Петри помещают в термостат при 39-41оС. Через 60-75 мин окрашенные живые клетки микроорганизмов подсчитывают под микроскопом в проходящем свете.
Claims (1)
- СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА МИКРООРГАНИЗМОВ В ДЕИОНИЗИРОВАННОЙ ВОДЕ, предусматривающий отбор исследуемой пробы, фильтрацию ее через мембранный фильтр, введение последнего в питательную среду, содержащую индикатор, инкубирование микроорганизмов с последующим установлением их количества, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени, в качестве питательной среды используют фосфатный буфер с рН 8,2, а индикатор представляет собой водно-спиртовой раствор метилтиозолилтетразолия бромистого с концентрацией 0,15% при этом инкубирование микроорганизмов осуществляют при 39 41oС в течение 60 75 мин.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4932009 RU2036239C1 (ru) | 1991-03-21 | 1991-03-21 | Способ определения количества микроорганизмов в деионизированной воде |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4932009 RU2036239C1 (ru) | 1991-03-21 | 1991-03-21 | Способ определения количества микроорганизмов в деионизированной воде |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2036239C1 true RU2036239C1 (ru) | 1995-05-27 |
Family
ID=21572270
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU4932009 RU2036239C1 (ru) | 1991-03-21 | 1991-03-21 | Способ определения количества микроорганизмов в деионизированной воде |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2036239C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2280692C2 (ru) * | 1999-12-30 | 2006-07-27 | Налко Кемикал Компани | Способ контроля прикрепленной и планктонной микробиологических популяций в промышленной водной системе (2 варианта) |
| RU2350656C2 (ru) * | 2006-02-14 | 2009-03-27 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ определения зараженности продовольствия патогенными биологическими агентами в условиях чрезвычайных ситуаций |
-
1991
- 1991-03-21 RU SU4932009 patent/RU2036239C1/ru active
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 1. Патент США N 4207394, кл. C 12Q 1/04, опублик. 1980. * |
| 2. Патент США N 4292405, кл. C 12Q 1/22, опублик. 1981. * |
| 3. Патент США N 4246339, кл. C 12Q 1/66, опублик. 1981. * |
| 4. Патент США N 4630421, кл. C 12Q 1/04, опублик. 1986. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2280692C2 (ru) * | 1999-12-30 | 2006-07-27 | Налко Кемикал Компани | Способ контроля прикрепленной и планктонной микробиологических популяций в промышленной водной системе (2 варианта) |
| RU2350656C2 (ru) * | 2006-02-14 | 2009-03-27 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ определения зараженности продовольствия патогенными биологическими агентами в условиях чрезвычайных ситуаций |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2176895C (en) | Test kit and method for the quantitative determination of coliform bacteria and e. coli | |
| FI67725C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av enheter avsedda foer bestaemning av antibiotika- och sulfarester i biologiska vaetskor och framstaellda enheter | |
| EP0871854A2 (en) | Medium for detecting enterococci in a sample | |
| FI57128B (fi) | Saett att identifiera mikroorganismer | |
| CA2186728A1 (en) | A rapid microbiological test for the detection of antibacterial compounds | |
| RU2433170C1 (ru) | Питательная среда жидкая для культивирования чумного микроба вакцинного штамма ев | |
| AU2005217026B2 (en) | Measuring contamination | |
| GB2059990A (en) | Enhancement of the sensitivity of viable microbial cell count by bioluminescent assay of ATP and its use for identification of microbes by means of a short incubation in nutrient media | |
| RU2036239C1 (ru) | Способ определения количества микроорганизмов в деионизированной воде | |
| Humphreys | Formation of acrolein from glycerol by B. welchii | |
| Rigby | An egg‐yolk agar diffusion assay for monitoring phospholipase C in cultures of Clostridium welchii | |
| CA1060764A (en) | E. coli detection broth for clinical use with automated microbial analyzer | |
| RU2042134C1 (ru) | Способ идентификации микобактерий м. tuberculosis и м. bovis | |
| RU2193061C1 (ru) | Питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза (мбт-бульон) | |
| Corper | Sodium Tellurite as a Rapid Test for the Viability of Tubercle Bacilli Studies on the Biochemistry and Chemotherapy of Tuberculosis, XIII | |
| RU2175671C1 (ru) | Питательная среда для выделения гемокультуры при диагностике брюшного тифа и паратифов | |
| RU2803258C1 (ru) | Способ ферментации углеводов бактериями escherichia coli | |
| SU1537689A1 (ru) | Штамм бактерий КLевSIеLLа рNеUмоNIае, используемый в качестве референс-штамма при определении антилизоцимной активности бактерий, и способ определени антилизоцимной активности бактерий | |
| CA1114270A (en) | Growth limiting media | |
| RU2425871C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
| RU2052816C1 (ru) | Способ прогнозирования состояния водных биоценозов | |
| Presnell et al. | Use of the membrane filter and a filter aid for concentrating and enumerating indicator bacteria and Salmonella from estuarine waters | |
| SU545671A1 (ru) | Способ выделени чистых культур холерных вибрионов | |
| SU990810A1 (ru) | Питательна среда дл культивировани менингококков | |
| RU2708029C1 (ru) | Питательная среда для культивирования yersinia pestis ev |