RU2032744C1 - Штамм streptomyces sp. - продуцент рифамиционоксидазы и способ получения рифамициноксидазы - Google Patents
Штамм streptomyces sp. - продуцент рифамиционоксидазы и способ получения рифамициноксидазы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2032744C1 RU2032744C1 SU925066229A SU5066229A RU2032744C1 RU 2032744 C1 RU2032744 C1 RU 2032744C1 SU 925066229 A SU925066229 A SU 925066229A SU 5066229 A SU5066229 A SU 5066229A RU 2032744 C1 RU2032744 C1 RU 2032744C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rifamycin
- oxidase
- enzyme
- producer
- strain
- Prior art date
Links
- 229930189077 Rifamycin Natural products 0.000 title claims abstract description 16
- 229960003292 rifamycin Drugs 0.000 title claims abstract description 16
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 title claims abstract description 14
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 title claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 title claims 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 20
- 241000187180 Streptomyces sp. Species 0.000 claims abstract description 11
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims abstract description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 claims description 3
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 abstract 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 12
- BTVYFIMKUHNOBZ-ZDHWWVNNSA-N Rifamycin S Natural products COC1C=COC2(C)Oc3c(C)c(O)c4C(=O)C(=CC(=O)c4c3C2=O)NC(=O)C(=C/C=C/C(C)C(O)C(C)C(O)C(C)C(OC(=O)C)C1C)C BTVYFIMKUHNOBZ-ZDHWWVNNSA-N 0.000 description 10
- BTVYFIMKUHNOBZ-ODRIEIDWSA-N Rifamycin S Chemical compound O=C1C(C(O)=C2C)=C3C(=O)C=C1NC(=O)\C(C)=C/C=C/[C@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@@H](OC)\C=C\O[C@@]1(C)OC2=C3C1=O BTVYFIMKUHNOBZ-ODRIEIDWSA-N 0.000 description 10
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- SQTCRTQCPJICLD-KTQDUKAHSA-N rifamycin B Chemical compound OC1=C(C(O)=C2C)C3=C(OCC(O)=O)C=C1NC(=O)\C(C)=C/C=C/[C@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@@H](OC)\C=C\O[C@@]1(C)OC2=C3C1=O SQTCRTQCPJICLD-KTQDUKAHSA-N 0.000 description 7
- SQTCRTQCPJICLD-OQQFTUDCSA-N rifomycin-B Natural products COC1C=COC2(C)Oc3c(C)c(O)c4c(O)c(NC(=O)C(=C/C=C/C(C)C(O)C(C)C(O)C(C)C(OC(=O)C)C1C)C)cc(OCC(=O)O)c4c3C2=O SQTCRTQCPJICLD-OQQFTUDCSA-N 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 241000223198 Humicola Species 0.000 description 2
- 241001576943 Monocillium Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 241000142915 Streptomyces diastatochromogenes Species 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- HJYYPODYNSCCOU-ODRIEIDWSA-N rifamycin SV Chemical compound OC1=C(C(O)=C2C)C3=C(O)C=C1NC(=O)\C(C)=C/C=C/[C@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@@H](OC)\C=C\O[C@@]1(C)OC2=C3C1=O HJYYPODYNSCCOU-ODRIEIDWSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241001468213 Amycolatopsis mediterranei Species 0.000 description 1
- 241000237074 Centris Species 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000544912 Melanoides Species 0.000 description 1
- 239000004936 P-84 Substances 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- RAFHKEAPVIWLJC-OQQFTUDCSA-N Rifamycin O Natural products COC1C=COC2(C)Oc3c(C)c(O)c4C(=O)C(=CC5(OCC(=O)O5)c4c3C2=O)NC(=O)C(=C/C=C/C(C)C(O)C(C)C(O)C(C)C(OC(=O)C)C1C)C RAFHKEAPVIWLJC-OQQFTUDCSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000813863 Streptomyces anandii Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000382509 Vania Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000007003 mineral medium Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- RAFHKEAPVIWLJC-TWYIRNIGSA-N z67lem9p1w Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)N2)C)OC)C(C(=C3O)C)=C1C1=C3C(=O)C2=C[C@]11OCC(=O)O1 RAFHKEAPVIWLJC-TWYIRNIGSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Использование: биотехнология, конкретно получение рифамицин оксидазы, осуществляющей трансформацию рифамицина B в рифамицин S. Сущность изобретения: изыскание штамма Streptomyces sp Г-473 ВНИИА 2143-продуцента рифамициноксидазы и создание способа получения фермента с использованием штамма Streptomyces sp Г-473, согласно которому выделение фермента ведут из культуральной жидкости концентрированием ультрафильтрацией до достижения активности 120 - 130 ед/мл. 2 с.п. ф-лы, 2 табл.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к получению фермента, осуществляющего трансформацию рифамици- на В в рифамицин S через промежуточную cтадию образования рифамицина О.
Известны штаммы Humicola spp. и Monocillium spp. продуценты рифамициноксидазы. Все эти штаммы относятся к грибам.
Известен способ получения рифамициноксидазы путем культивирования штаммов Monocillium spp. (например, штамма АТСС 20621) или Humicola spp. (например, штамма АТСС 20620) в жидкой питательной среде, содержащей источники азота (например, соевую муку, гидролизат казеина, пептон, дрожжевой экстракт), источники углерода (например, глюкозу, лактозу), источники фосфора и микроэлементов (кукурузный экстракт, дрожжевой экстракт) в течение трех дней при аэрации и перемешивании. Ферментная активность накапливается в мицелии. Клетки отфильтровывают, культуральную жидкость отбрасывают. Клетки или клеточный экстракт (клетки разрушают, например, действием ультразвука, супернатант после центрифугирования отделяют) хранят при 4оС.
Недостатком указанного способа получения фермента с использованием известных штаммов являются низкий выход ферментной активности на стадии биосинтеза и необходимость разрушения клеток для концентрации ферментной активности, что нетехнологично.
Целью настоящего изобретения являются поиски нового штамма продуцента рифамициноксидазы, позволяющего повы- сить выход ферментной активности на стадии биосинтеза, и разработка нового способа получения фермента, позволяющего упростить процедуру концентрации ферментной активности.
Цель достигается изысканием нового штамма продуцента рифамициноксидазы, а именно, штамма актиномицетов Streptomyces sp. Г-473 (депонированного в коллекции ВНИИА под номером 2143).
Неизвестно использование актиномицетов в качестве продуцентов рифамициноксидазы.
Штамм Streptomyces sp. Г-473 был выделен из образца серой лесной почвы Тульской области и характеризуется следую- щими культурально-морфологическими и физиологическими признаками.
Аэроб, оптимум роста 26-28оС.
Образует воздушный мицелий серого, серо-белого, желтовато-серого, розовато-серого или белого цвета.
Спороносцы спиральные (S), cпоры с гладкой оболочкой.
Зрелые спороносцы содержат 10-50 спор в цепочке.
Воздушный мицелий может быть слабо развит.
Субстратный мицелий бесцветный (не имеет определенного цвета) или буровато-желтый, бурый, коричневый.
Растворимый пигмент отсутствует или бурый, коричневый.
Меланоидные пигменты образует.
В качестве источников углерода усваивает D-глюкозу, L-арабинозу, D-ксилозу, D-фруктозу, сахарозу, раффинозу, D-маннит, i-инозит, слабо усваивает рамнозу.
Описание культурально-морфологических признаков проводилось на 14-е сутки роста при 28оС и приводится в табл.1.
Предлагаемый штамм Г-473 по описанным признакам близок к видам Streptomyces anandii и Streptomyces diastatochromogenes (определитель Гаузе Г.Ф. Преображенская Т.П. Свешникова М.А. Терехова Л.П. Максимова Т.С. "Определитель актиномицетов". М. Изд. "Наука", 1983), но отличается от них наличием желтовато-серого воздушного мицелия на овсяном агаре. От Streptomyces diastatoch- romogenes отличается также желтовато-серым воздушным мицелием на минеральной среде 1. На основании изложенного предложенный штамм Г-473 отнесен к неопределенному виду Streptomyces sp.
Цель достигается также и новым способом получения фермента.
Способ заключается в культивировании штамма Streptomyces sp. Г-473 в жидкой питательной среде, содержащей источники азота, углерода, микроэлементы, воду (например, пептон, дрожжевой экстракт, глюкозу и др.) при 28-30оС, аэрации и перемешивании, в отделении клеток центрифугированием или фильтрацией, в концентрировании и очистке фермента из фильтрата путем ультрафильтрации на мембранах.
Активность фермента определяют по скорости реакции трансформации рифамицина В в рифамицин S (см. примеры). Однако единице активности рифамицинокси- дазы соответствует образование одного микромоля рифамицина S в 1 ч.
Существенными отличиями предлагаемого способа получения фермента являются использование нового штамма продуцента (Streptomyces sp. Г-473), накопление фермента не в мицелии, а в культуральной жидкости, концентрирование и очистка фермента из культуральной жидкости с помощью ультрафильтрации.
Использование нового штамма продуцента рифамициноксидазы, Streptomyces sp. Г-473, и нового способа получения фермента позволяют повысить продуктивность процесса биосинтеза и упростить процесс выделения фермента (за счет исключения стадий разрушения клеток и центрифугирования), что делает возможным промышленное применение способа.
П р и м е р 1. Суспензию спор культуры Streptomyces sp. Г-473, выросшей на агаризованной среде, вносят в колбу Эрленмейера вместимостью 750 мл, содержащую 100 мл посевной среды следующего состава (мас.): глюкоза 1,0; гидролизат казеина 1,0; дрожжевой экстракт 1,0; медь сернокислая 0,005; вода остальное.
Инокулюм выращивают в течение 48 ч при 28оС на качалке с 220 об/мин и в количестве 10% используют для засева ферментационной среды того же состава (10 колб вместимостью 750 мл, содержащих по 100 мл питательной среды). Культивируют в течение 4 сут при 28оС на качалке с 220 об/мин. Получают 1 л культуральной жидкости с активностью 12 ед/мл.
Из 1 л культуральной жидкости отделяют мицелий центрифугированием при 3000 об/мин или фильтрацией. Путем ультрафильтрации надосадочную жидкость очищают и концентриpуют до 100 мл. Получают жидкий ферментный концентрат с активностью 120 ед/мл.
П р и м е р 2. Суспензию спор культуры Streptomyces sp. Г-473, выросшей на агаризованной среде, вносят в колбу Эрленмейера вместимостью 750 мл, содержащую 100 мл посевной среды следующего состава (мас.): кукурузный экстракт 2,0; соевая мука 1,0; медь сернокислая 0,005; дрожжевой экстракт 0,5; вода остальное.
Инокулюм выращивают в течение 48 ч при 28-30оС на качалке с 220 об/мин и в количестве 10% используют для засева ферментационной среды того же состава. Далее аналогично примеру 1 (культивируют при 30оС).
Получают 1 л культуральной жидкости с активностью 10 ед/мл и 100 мл ферментного концентрата с активностью 100 ед/мл.
Полученный ферментный концентрат используют в реакции трансформации рифамицина В в рифамицин S и по количеству образовавшегося рифамицина S определяют активность фермента. Реакцию трансформации осуществляют в соответствии с условиями примеров 2 и 8 известного способа (патент США 4431735, НКИ 435/119 опубл. 14.02.84).
П р и м е р 3. К 500 мл 0,16% раствора рифамицина В (10 мМ фосфатный буфер с рН 7,8) добавляют 1 мл ферментного концентрата, полученного по примеру 1. Реакцию осуществляют при 37оС, перемеши- вании и аэрации в течение 8 ч. По окончании реакции осадок рифамицина S отделяют центрифугированием, высушивают над безводным сульфатом натрия. Получают 0,64 г рифамицина S. По количеству образовавшегося рифамицина определяют ферментную активность. Активность фермента составляет 120 ед на 1 мл ферментного концентрата, или 12 ед на 1 мл исходной культуральной жидкости.
П р и м е р 4. Реакцию трансформации осуществляют согласно примеру 3, используя 1 мл ферментного концентрата, полученного по примеру 2. Получают 0,53 г рифамицина S. Активность фермента составляет 100 ед на 1 мл концентрата, или 10 ед на 1 мл исходной культуральной жидкости.
П р и м е р 5. 100 мл ферментного концентрата, полученного по примеру 1, добавляют к 3 л нативного раствора рифамицина В (содержание рифамицина В 8000 мкг/мл), полученного из культуральной жидкости продуцента Nocardia mediterranei Р-84 путем отделения мицелия центри- фугированием. Реакцию ведут при рН 7,8-8,2 в течение 8 ч при перемешивании и аэрации. Реакционную смесь охлаждают до 4оС, выпавший осадок (рифамицин S) отделяют фильтрацией через стеклянный фильтр и смывают 500 мл ацетона. Ацетон отгоняют. Получают 30,2 г неочищенного препарата рифамицина S. Чистота 74% выход 92% Активность фермента составляет 40 ед на 1 мл концентрата или 4 ед на 1 мл исходной культуральной жидкости.
Некоторые показатели сравниваемых способов дополнительно приводятся в табл.2.
Таким образом, полученные при использовании нового штамма продуцента и способа получения рифамициноксидазы культуральная жидкость и ферментный концентрат обладают повышенной (примерно в 1,6 раза) активностью рифамициноксидазы как в реакции с чистым субстратом, так и в реакции с использованием в качестве субстрата культуральной жидкости продуцента рифамицина В, содержащий помимо рифамицина В еще и ингибиторы фермента.
Claims (2)
1. Штамм Streptomyces sp. ВНИИА 2143-продуцент рифамициноксидазы.
2. Способ получения рифамициноксидазы, предусматривающий культивирование продуцента на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, микроэлементов и воду при 28 30oС, перемешивание и аэрацию, отделение мицелия и выделение целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве продуцента используют штамм Streptomyces sp. ВНИИА 2143, а выделение фермента ведут ультрафильтрацией до достижения активности 120-130 ед/мл.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU925066229A RU2032744C1 (ru) | 1992-08-20 | 1992-08-20 | Штамм streptomyces sp. - продуцент рифамиционоксидазы и способ получения рифамициноксидазы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU925066229A RU2032744C1 (ru) | 1992-08-20 | 1992-08-20 | Штамм streptomyces sp. - продуцент рифамиционоксидазы и способ получения рифамициноксидазы |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2032744C1 true RU2032744C1 (ru) | 1995-04-10 |
Family
ID=21615131
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU925066229A RU2032744C1 (ru) | 1992-08-20 | 1992-08-20 | Штамм streptomyces sp. - продуцент рифамиционоксидазы и способ получения рифамициноксидазы |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2032744C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2198673C2 (ru) * | 1996-04-05 | 2003-02-20 | Мишель Ореман | Лекарственный препарат для оптимизации вязкости слизи и стимулирования функции кишечника |
-
1992
- 1992-08-20 RU SU925066229A patent/RU2032744C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Патент США N 4431735, кл. 435/119, опублик. 1984. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2198673C2 (ru) * | 1996-04-05 | 2003-02-20 | Мишель Ореман | Лекарственный препарат для оптимизации вязкости слизи и стимулирования функции кишечника |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5641659A (en) | α-l-rhamnosidase for obtaining rhamnose, a process for its preparation and its use | |
| US4226941A (en) | Process for the optical resolution of d,l-2-amino-4-methylphosphinobutyric acid | |
| KR960016874B1 (ko) | 미생물에 의한 트랜스-4-히드록시-l-프롤린의 제조방법 | |
| Watanabe et al. | Actinosynnema mirum, a new producer of nocardicin antibiotics | |
| US4686185A (en) | Microorganism of new species of genus Streptomyces and use thereof for production of chitinase | |
| RU2032744C1 (ru) | Штамм streptomyces sp. - продуцент рифамиционоксидазы и способ получения рифамициноксидазы | |
| EP0414914B1 (en) | New substance trehalostatin and production thereof | |
| US4840907A (en) | Process for producing optically active dichloropropanol using microorganism | |
| US4550021A (en) | Antitumor antibiotic 81-484 and process for its production | |
| US4686308A (en) | Novel physiologically active substance MH435 | |
| DE69839248T2 (de) | VERFAHREN FÜR DIE HERSTELLUNG VON INHIBITOREN DER HMG-CoA-REDUKTASE. | |
| US3925155A (en) | Preparation of 6-aminopenicillanic acid 1-oxide | |
| KR100260837B1 (ko) | 광학활성 카본산 및 그 거울상 이성체 에스테르의 제조방법 | |
| SU1125250A1 (ru) | Штамм @ @ @ -82-продуцент холестериноксидазы | |
| JPH05310766A (ja) | 新規抗生物質ｍｉ４８１−４２ｆ４−ａ及びその製造方法 | |
| JP2844214B2 (ja) | ４ａ―ヒドロキシミルベマイシンα類の製造法 | |
| JP3327982B2 (ja) | 新規な抗生物質ｍｉ４８１−４２ｆ４−ａ関連物質 | |
| EP0216636A2 (en) | Process for producing oganomycin E | |
| JPH0547560B2 (ru) | ||
| JPH0515385A (ja) | 新規な抗生物質アリサマイシンおよびその製法 | |
| RU2031947C1 (ru) | Штамм streptomyces olivocinereus - продуцент глюкозоизомеразы | |
| JP3067322B2 (ja) | 抗かび性抗生物質３′−ヒドロキシベナノマイシンａの製造法 | |
| JPS63246388A (ja) | 抗生物質ｒｓ−４４ｂ及びその製造法 | |
| JPH0411535B2 (ru) | ||
| EP0205981A2 (en) | A novel anti-tumor and antimicrobial compound, its microbiological preparation and its use as medicament |