RU2027184C1

RU2027184C1 - Method of testing chemical identical drugs for biological inequivalence

Info

Publication number: RU2027184C1
Authority: RU
Inventors: Н.Б. Леонидов; Н.Г. Селезенев; С.И. Успенская
Original assignee: Успенская Светлана Игоревна
Priority date: 1990-11-22
Filing date: 1990-11-22
Publication date: 1995-01-20

Abstract

FIELD: analytical chemistry. SUBSTANCE: method involves the steps of: preparing solutions of a sample to be analyzed and standard one, placing the obtained solutions into a vessel with semipermeable membrane, measuring change in diffusion rate value, the information on biological inequivalence being derived from the presence of the difference of these values. EFFECT: enhanced reliability. 5 tbl

Description

Изобретение относится к области биофармации, касается методов определения неэквивалентности химически идентичных лекарственных средств и может быть использовано при контроле их качества. The invention relates to the field of biopharmacy, relates to methods for determining the nonequivalence of chemically identical drugs and can be used to control their quality.

Известно, что химически идентичные лекарственные средства разных изготовителей, а часто разные партии одного и того же изготовителя, могут проявлять неодинаковые физико-химические, биофармацевтические (in vivo, in vitro) и терапевтические свойства. Это явление получило название биологической неэквивалентности [1-3]. It is known that chemically identical drugs of different manufacturers, and often different batches of the same manufacturer, can exhibit different physicochemical, biopharmaceutical (in vivo, in vitro) and therapeutic properties. This phenomenon is called biological nonequivalence [1-3].

Бионеэквивалентность лекарственных средств приводит к тому, что препарат, отвечая всем требованиям соответствующей нормативно-технической документации, проявляет или снижение терапевтического эффекта, или гиперэффект [2.3]. Bioequivalence of drugs leads to the fact that the drug, meeting all the requirements of the relevant regulatory and technical documentation, shows either a decrease in the therapeutic effect or a hypereffect [2.3].

В связи с вышеизложенным необходимость разработки экспрессных методов выявления биологической неэквивалентности химически идентичных лекарственных веществ является чрезвычайно актуальной. In connection with the foregoing, the need to develop rapid methods for identifying the biological nonequivalence of chemically identical medicinal substances is extremely urgent.

Известен способ определения биологической неэквивалентности химически идентичных лекарственных средств, принятый за прототип [4]. Способ заключается в том, что готовят в равных условиях растворы испытуемого и стандартного образцов лекарственного вещества, затем помещают в эти растворы Paramecium caudatum и по различию двигательной активности простейших судят о наличии биологической неэквивалентности. A known method for determining the biological nonequivalence of chemically identical drugs, adopted as a prototype [4]. The method consists in preparing solutions of the test and standard samples of the drug substance under equal conditions, then placing them in these solutions of Paramecium caudatum, and judging by the difference in the motor activity of the protozoa, the presence of biological nonequivalence is judged.

Известный способ основан на принципе проникновения лекарственного вещества из раствора через живую ткань (биомембрану) в клетки простейшего организма Paramecium caudatum и сравнения действия на двигательную функцию испытуемого и стандартного химически идентичного лекарственного средства. The known method is based on the principle of penetration of a drug substance from a solution through living tissue (biomembrane) into the cells of the simplest organism Paramecium caudatum and comparing the effects on the motor function of the test and standard chemically identical drugs.

В связи с необходимостью использования простейших организмов известный способ сложен и неудобен при проведении повсеместного контроля качества лекарственных средств. Кроме того, указанный способ характеризуется невысокой надежностью определения биологической неэквивалентности, так как основан на субъективном методе анализа результатов по изменению двигательной активности простейших. Субъективная оценка ненадежная и не дает точных результатов. Due to the need to use the simplest organisms, the known method is complicated and inconvenient when conducting universal quality control of drugs. In addition, this method is characterized by low reliability of determining biological nonequivalence, as it is based on the subjective method of analyzing the results of changes in the motor activity of protozoa. Subjective assessment is unreliable and does not give accurate results.

Целью изобретения является устранение перечисленных недостатков, а именно упрощение и повышение надежности и точности способа определения биологической неэквивалентности химически идентичных лекарственных средств. The aim of the invention is to remedy these shortcomings, namely, simplifying and improving the reliability and accuracy of the method for determining the biological nonequivalence of chemically identical drugs.

Цель достигается за счет того, что в одинаковых условиях готовят растворы равной концентрации испытуемого и стандартного образцов лекарственного средства, помещают полученные растворы в емкости с полупроницаемой мембраной, измеряют величину изменения скорости диффузии и наличие разности указанных величин свидетельствует о биологической неэквивалентности образцов. The goal is achieved due to the fact that under the same conditions, solutions of equal concentration of the test and standard samples of the drug are prepared, the solutions obtained are placed in containers with a semi-permeable membrane, the magnitude of the change in the diffusion rate is measured, and the presence of the difference of the indicated values indicates the biological nonequivalence of the samples.

Предложенный способ контроля состоит в том, что в емкости с полупроницаемой мембраной помещают чистые растворы испытуемого и стандартного образцов химически идентичных лекарственных веществ, осуществляют диализ в жидкую среду, через равные промежутки времени определяют в жидкой среде концентрацию лекарственного вещества стандартного и испытуемого образцов и по разнице концентраций судят о наличии биологической неэквивалентности. The proposed control method consists in placing clean solutions of the test and standard samples of chemically identical medicinal substances in a container with a semipermeable membrane, dialyzing into a liquid medium, and at regular intervals, the concentration of the drug substance of the standard and test samples in the liquid medium is determined by the difference in concentrations judge the presence of biological nonequivalence.

Способ иллюстрируется следующими примерами. The method is illustrated by the following examples.

П р и м е р 1. Определение биологической неэквивалентности образцов метилурацила предложенным способом. PRI me R 1. Determination of biological nonequivalence of methyluracil samples by the proposed method.

Испытуемый образец метилурацила (2,4-диокси-6-метил-1,2,3,4-тетрагидропир- имидин) получают согласно методике [5], заключающейся в быстрой кристаллизации метилурацила из водного раствора. Испытуемый и стандартный образцы метилурацила химически идентичны и соответствуют требованиям ФС 42-2255-84. A test sample of methyluracil (2,4-dioxo-6-methyl-1,2,3,4-tetrahydropyr-imidine) was prepared according to the procedure [5], which consisted in the rapid crystallization of methyluracil from an aqueous solution. The test and standard samples of methyluracil are chemically identical and meet the requirements of FS 42-2255-84.

Испытуемый и стандартный образцы высушивают при 105^оС до постоянной массы; чистота 99,8%.The test and standard samples are dried at 105 ^about With to constant weight; purity 99.8%.

Растворяют точные навески испытуемого и стандартного образцов метилурацила, каждая по 0,05 г, в 25 мл воды и помещают каждый из растворов в отдельные емкости с мембраной из целлофана, площадью 706 мм². Затем опускают их в отдельные термостатированные сосуды с водой. Объем воды в сосуде составляет 25 мл, глубина погружения 3 мм. Через 15, 30, 60, 90, 120, 150 мин из сосудов проводят забор проб по 1 мл, возвращая туда же по 1 мл воды. Доводят объем взятых проб водой до 10 мл и определяют концентрацию метилурацила в пробах спектрофотометрическим методом при длине волны 231 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, контроль - вода. Расчет проводят по калибровочному графику зависимости оптической плотности растворов метилурацила от его концентрации.The exact weights of the test and standard samples of methyluracil, each of 0.05 g, are dissolved in 25 ml of water and each of the solutions is placed in separate containers with a cellophane membrane with an area of 706 mm ² . Then they are lowered into separate thermostatic vessels with water. The volume of water in the vessel is 25 ml, the immersion depth is 3 mm. After 15, 30, 60, 90, 120, 150 minutes, 1 ml samples are taken from the vessels, returning 1 ml of water there. The volume of samples taken was adjusted with water to 10 ml and the concentration of methyluracil in the samples was determined by spectrophotometric method at a wavelength of 231 nm in a cuvette with a layer thickness of 10 mm, the control was water. The calculation is carried out according to the calibration graph of the dependence of the optical density of methyluracil solutions on its concentration.

Построение калибровочного графика:
0,1 г (точная навеска) метилурацила растворяют в воде в колбе вместимостью 100 мл (раствор "А"). Затем 0,1; 0,3; 0,5; 0,7; 1,0. 2,0 мл раствора А помещают в колбу вместимостью 100 мл, доводят объем растворов водой до метки и тщательно перемешивают (раствор Б). Концентрация метилурацила в растворах Б составляла 1,0; 3,0; 5,0; 7,0; 10,0; 20,0 мкг/мл соответственно. Для каждой концентрации проводят 3 параллельных определения, каждый раз используя вновь приготовленный раствор Б.Building a calibration graph:
0.1 g (accurately weighed) of methyluracil is dissolved in water in a flask with a capacity of 100 ml (solution "A"). Then 0.1; 0.3; 0.5; 0.7; 1,0. 2.0 ml of solution A was placed in a flask with a capacity of 100 ml, the volume of solutions was adjusted to the mark with water and mixed thoroughly (solution B). The concentration of methyluracil in solutions B was 1.0; 3.0; 5.0; 7.0; 10.0; 20.0 μg / ml, respectively. For each concentration, 3 parallel determinations are carried out, each time using a newly prepared solution of B.

Растворы метилурацила в указанных концентрациях имели следующие средние значения оптической плотности: 1 мкг/мл - 0,022; 3 мкг/мл - 0 ,052; 5 мкг/мл - 0,088; 7 мкг/мл - 0,121; 10 мкг/мл - 0,173; 20 мкг/мл - 0,352. Methyluracil solutions in the indicated concentrations had the following average optical density values: 1 μg / ml - 0.022; 3 μg / ml - 0.052; 5 μg / ml - 0.088; 7 μg / ml - 0.121; 10 μg / ml - 0.173; 20 μg / ml - 0.352.

Расчет количества продифундированного метилурацила через мембрану во времени (на примере 15- и 30-минутной экспозиции). Calculation of the amount of diffused methyluracil through the membrane over time (for example, 15- and 30-minute exposure).

Для стандартного образца метилурацила значения оптических плотностей растворов составляли через 15 мин 0,23; 0,22; 0,17 (среднее 0,21); для испытуемого образца метилурацила - 0,26; 0,27; 0,25 (среднее 0,26). Указанным средним значениям оптических плотностей соответствовали, исходя из калибровочного графика, значения концентраций метилурацила стандартного образца - 11,43 мкг/мл; испытуемого образца - 15,06 мкг/мл. For a standard sample of methyluracil, the values of the optical densities of the solutions were 0.23 after 15 minutes; 0.22; 0.17 (average 0.21); for the test sample of methyluracil - 0.26; 0.27; 0.25 (average 0.26). The indicated average values of optical densities corresponded, based on the calibration graph, the concentration of methyluracil of the standard sample was 11.43 μg / ml; the test sample is 15.06 μg / ml.

Через 30 мин для стандартного образца значения оптических плотностей растворов составляли 0,31; 0,25; 0,36 (среднее 0,30); для испытуемого образца - 0,35; 0,40; 0,31 (среднее 0,35). After 30 minutes, for the standard sample, the values of the optical densities of the solutions were 0.31; 0.25; 0.36 (average 0.30); for the test sample - 0.35; 0.40; 0.31 (average 0.35).

Указанным средним значениям оптических плотностей соответствовали, исходя из графика, значения концентраций метилурацила стандартного образца 16,48 мкг/мл, испытуемого образца - 19,50 мкг/мл. The indicated average values of optical densities corresponded, based on the graph, to the concentration of methyluracil of the standard sample 16.48 μg / ml, of the test sample - 19.50 μg / ml.

Аналогично определяют количество продифундированного метилурацила из раствора стандартного и испытуемого образцов через остальные интервалы времени. Similarly, the amount of diffused methyluracil is determined from the solution of the standard and test samples at other time intervals.

Различия указанных концентраций свидетельствуют о биологической неэквивалентности испытуемого образца относительно стандартного. Differences in these concentrations indicate the biological nonequivalence of the test sample relative to the standard.

Данные эксперимента приведены в табл. 1. The experimental data are given in table. 1.

Из данных табл. 1 видно, что все значения концентраций испытуемого образца метилурацила имеют значительные отклонения от соответствующих значений стандартного образца. From the data table. Figure 1 shows that all concentrations of the test sample of methyluracil have significant deviations from the corresponding values of the standard sample.

Биологическую неэквивалентность двух образцов метилурацила определяли также путем диффузии раствором через биомембрану - изолированную прямую кишку крысы. The biological nonequivalence of the two methyluracil samples was also determined by solution diffusion through a biomembrane, an isolated rat rectum.

На проксимальный отдел кишки накладывали лигатуру, после чего внутрь кишки шприцем вводили раствор испытуемого или стандартного образца метилурацила (0,05 г в 0,5 мл воды). После заполнения кишки на дистальный отдел также накладывали лигатуру. Кишку с испытуемой пробой и кишку со стандартной помещали в отдельные стаканы, содержащие по 50 мл физиологического раствора. Вся система помещалась в термостат при 37^оС, содержимое стаканов периодически аэрировалось. Через определенные интервалы времени из стаканов брали пробы объемом по 3 мл, добавляя обратно в стаканы по 3 мл физиологического раствора. К взятым пробам добавляли по 1 мл 15%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, после чего проводили фильтрование раствора через бумажный фильтр. 1 мл фильтрата доводили водой до 10 мл и проводили измерение оптической плотности при длине волны 231 нм на двухлучевом спектрофотометре Schimadzu (Япония).A ligature was placed on the proximal part of the intestine, after which a solution of a test or standard sample of methyluracil (0.05 g in 0.5 ml of water) was injected into the intestine with a syringe. After filling the intestine, a ligature was also placed on the distal section. The intestine with the test sample and the standard intestine were placed in separate glasses containing 50 ml of physiological saline. The whole system is placed in an incubator at ³⁷ ° C, the contents of the cup periodically aerated. At certain time intervals, 3 ml samples were taken from the glasses, adding 3 ml of physiological saline back to the glasses. 1 ml of a 15% trichloroacetic acid solution was added to the samples taken, after which the solution was filtered through a paper filter. 1 ml of the filtrate was adjusted with water to 10 ml and optical density was measured at a wavelength of 231 nm on a Schimadzu double-beam spectrophotometer (Japan).

В качестве контроля использовали пробы из прямой кишки - плацебо, взятые и обработанные по вышеприведенной схеме. Samples from the rectum - placebo, taken and processed according to the above scheme were used as control.

Определение концентрации метилурацила вели аналогично предыдущему опыту по калибровочному графику. The determination of methyluracil concentration was carried out similarly to the previous experiment according to the calibration graph.

Данные эксперимента приведены в табл. 2. The experimental data are given in table. 2.

Полученные результаты свидетельствуют о биологической неэквивалентности испытуемого образца метилурацила стандартному. The results indicate a biological nonequivalence of the test sample of methyluracil standard.

Для подтверждения биологической неэквивалентности испытуемого образца стандартному образцу параллельно проведено изучение влияния этих образцов метилурацила на заживление линейных ран у крыс. To confirm the biological nonequivalence of the test sample to the standard sample, the effect of these methyluracil samples on the healing of linear wounds in rats was studied in parallel.

Определение биологической неэквивалентности образцов метилурацила на модели линейных ран [5]. Determination of biological nonequivalence of methyluracil samples on a linear wound model [5].

Опыты проводят на 21 белой беспородной крысе (самцы) массой 180-220 г. Экспериментальной моделью служат линейные раны длиной 50 мм, которые наносят на спины крыс. Животных разделяют на 3 серии. Первая серия - контрольная - раны обкалывают 1 раз в день физиологическим раствором в количестве 0,5 мл в течение 3 дней. Во второй серии раны обкалывают по той же методике 1% -ным раствором стандартного образца метилурацила в физиологическом растворе. В третьей серии раны обкалывают по той же методике 0,25%-ным раствором испытуемого образца метилурацила в физиологическом растворе. Выбор концентраций обусловлен предварительными испытаниями, где было показано, что ранозаживляющий эффект стандартного образца метилурацила проявляется лишь при использовании раствора с концентрацией 1%, а сравниваемый ранозаживляющий эффект испытуемого образца метилурацила проявляется при использовании раствора с концентрацией 0,25%. The experiments were carried out on 21 white outbred rats (males) weighing 180-220 g. Linear wounds 50 mm long, which are applied to the backs of rats, serve as the experimental model. Animals are divided into 3 series. The first series - control - wounds are punctured 1 time per day with physiological saline in an amount of 0.5 ml for 3 days. In the second series, the wounds are punctured according to the same procedure with a 1% solution of a standard sample of methyluracil in physiological saline. In the third series, the wounds are punctured according to the same procedure with a 0.25% solution of the test sample of methyluracil in physiological saline. The choice of concentrations is due to preliminary tests, where it was shown that the wound healing effect of a standard sample of methyluracil is manifested only when using a solution with a concentration of 1%, and the comparable wound healing effect of a test sample of methyluracil is manifested when using a solution with a concentration of 0.25%.

Ранозаживляющую активность образцов метилурацила оценивают по прочности рубца на растяжение. Получены следующие результаты: в 1 серии - 30,1±1,3 г/мм², во второй - 40,1±5,0 г/мм² и в 3 - 57,3±9,0 г/мм², из которых видно, что применение стандартного образца метилурацила увеличивает прочность рубца на 33,2% . а испытуемого образца в концентрации в 4 раза меньшей на 90,4%.The wound healing activity of methyluracil samples is evaluated by tensile strength of the scar. The following results were obtained: in the first series - 30.1 ± 1.3 g / mm ² , in the second - 40.1 ± 5.0 g / mm ² and in 3 - 57.3 ± 9.0 g / mm ² , from which it is seen that the use of a standard sample of methyluracil increases the strength of the scar by 33.2%. and the test sample at a concentration 4 times lower by 90.4%.

Полученные данные доказывают биологическую неэквивалентность испытуемого образца стандартному образцу метилурацила. The data obtained prove the biological nonequivalence of the test sample to the standard sample of methyluracil.

П р и м е р 2. Определение биологической неэквивалентности образцов стрептоцида предложенным способом. PRI me R 2. Determination of biological nonequivalence of streptocide samples by the proposed method.

Берут два образца: стандартный и испытуемый образцы химически идентичного лекарственного вещества - стрептоцида (п-аминобензолсульфамида). Стрептоцид, используемый в качестве испытуемого образца, получен из промышленного кристаллизацией его водного раствора в жидком гексане [6]. Испытуемый и стандартный образцы стрептоцида соответствуют требованиям ГФ СССР Х изд. Растворяют точные навески образцов стрептоцида каждая по 0,06 г в 12,5 мл воды, помещают каждый из растворов в емкости с мембраной из целлофана, площадью 706 мм², затем опускают их в сосуды, содержащие по 40 мл 0,01М раствора едкого натра. Сосуды помещают в термостат и через 15, 30, 60, 90, 120, 150 мин проводят забор проб по 0,2 мл, возвращая туда же 0,2 мл 0,01М раствора едкого натра. В пробах определяют концентрацию стрептоцида известным фотоколориметрическим методом [7].Two samples are taken: a standard and a test sample of a chemically identical drug substance - streptocide (p-aminobenzenesulfamide). Streptocide used as a test sample was obtained from industrial crystallization of its aqueous solution in liquid hexane [6]. The test and standard samples of streptocide meet the requirements of the GF USSR X ed. Accurate samples of streptocide samples of 0.06 g each were dissolved in 12.5 ml of water, each solution was placed in a container with a cellophane membrane with an area of 706 mm ² , then they were lowered into vessels containing 40 ml of 0.01 M sodium hydroxide solution . The vessels are placed in a thermostat and after 15, 30, 60, 90, 120, 150 minutes sampling of 0.2 ml is carried out, returning there the same 0.2 ml of 0.01 M sodium hydroxide solution. The samples determine the concentration of streptocide by the known photocolorimetric method [7].

Расчет количества продифундированного стрептоцида через мембрану во времени (на примере 15 и 30-минутной экспозиции). Calculation of the amount of diffused streptocide through the membrane over time (for example, 15 and 30-minute exposure).

Для стандартного образца значения оптических плотностей растворов составляли через 15 мин, 0,25; 0,18; 0,28 (среднее 0,24). Для испытуемого образца стрептоцида значения оптических плотностей растворов составляли через 15 мин 0,49; 0,39; 0,58 (среднее 0,48). Указанным средним значениям оптических плотностей соответствовали, исходя из калибровочного графика, значения концентраций стандартного образца стрептоцида 9,46 мкг/мл; испытуемого - 19,73 мкг/мл. For a standard sample, the values of the optical densities of the solutions were 15 minutes later, 0.25; 0.18; 0.28 (average 0.24). For the test sample of streptocide, the values of the optical densities of the solutions were 0.49 after 15 minutes; 0.39; 0.58 (average 0.48). The indicated average values of optical densities corresponded, based on the calibration graph, the concentrations of the standard sample of streptocide 9.46 μg / ml; test subject - 19.73 mcg / ml.

Через 30 мин для стандартного образца значения оптических плотностей растворов составляли 0,41; 0,34; 0,53 (среднее 0,42); для испытуемого образца - 0,59; 0,68; 0,66 (среднее 0,64). Указанным средним значениям оптических плотностей соответствовали, исходя из калибровочного графика, значения концентраций стрептоцида: стандартного - 16,92 мкг/мл; испытуемого - 26,25 мкг/мл. After 30 min, the optical densities of the solutions for the standard sample were 0.41; 0.34; 0.53 (average 0.42); for the test sample - 0.59; 0.68; 0.66 (average 0.64). The indicated average values of optical densities corresponded, based on the calibration graph, to the values of streptocide concentrations: standard — 16.92 μg / ml; test subject - 26.25 μg / ml.

Данные эксперимента представлены в табл. 3. The experimental data are presented in table. 3.

Из данных табл. 3 видно, что все значения концентраций испытуемого образца стрептоцида имеют значительные отклонения от соответствующих значений стандартного образца. Различия указанных концентраций свидетельствуют о биологической неэквивалентности испытуемого образца стрептоцида относительно стандартного. From the data table. Figure 3 shows that all concentrations of the tested streptocide sample have significant deviations from the corresponding values of the standard sample. Differences in these concentrations indicate the biological nonequivalence of the test sample of streptocide relative to the standard.

Биологическую неэквивалентность двух образцов стрептоцида определяли также путем диффузии через изолированную прямую кишку крысы - биомембрану. The biological nonequivalence of two streptocide samples was also determined by diffusion through an isolated rat rectum - a biomembrane.

На проксимальный отдел кишки накладывали лигатуру, после чего внутрь кишки шприцем вводили 0,05 г субстанций стрептоцида испытуемого или стандартного образцов в 1 мл воды. После заполнения кишки на дистальный отдел также накладывали лигатуру. Кишку с испытуемой пробой и кишку со стандартной помещали в отдельные стаканы, содержащие по 40 мл раствора Рингера. Всю систему помещали в термостат при температуре 37^оС. Содержимое стаканов периодически аэрировалось. Через определенные интервалы времени из стаканов брали пробы объемом по 1 мл, добавляя обратно в стаканы по 1 мл раствора Рингера.A ligature was applied to the proximal part of the intestine, after which 0.05 g of streptocide substances of the test or standard samples in 1 ml of water were injected into the intestine with a syringe. After filling the intestine, a ligature was also placed on the distal section. The intestine with the test sample and the intestine with the standard were placed in separate glasses containing 40 ml of Ringer's solution. The entire system was placed in a thermostat at a temperature of 37 ^C. The contents of cup periodically aerated. At certain intervals, 1 ml samples were taken from the glasses, adding 1 ml of Ringer's solution back to the glasses.

В 0,2 мл из взятой пробы вели определение стрептоцида известным фотоколориметрическим методом [7]. In 0.2 ml of the sample taken, streptocide was determined by the known photocolorimetric method [7].

В качестве контроля использовали пробы из прямой кишки - плацебо, взятые по вышеприведенной схеме. Samples from the rectum, a placebo taken according to the above scheme, were used as control.

Определение концентраций стрептоцида вели по калибровочному графику. The determination of streptocide concentrations was carried out according to a calibration graph.

Данные приведены в табл. 4. The data are given in table. 4.

Полученные результаты свидетельствуют о наличии биологической неэквивалентности испытуемого и стандартного образцов стрептоцида. The results obtained indicate the presence of biological nonequivalence of the test and standard samples of streptocide.

Для подтверждения биологической неэквивалентности испытуемого образца стрептоцида стандартному образцу параллельно проведено определение их фармакокинетики на кроликах. To confirm the biological nonequivalence of the test sample of streptocide to the standard sample, their pharmacokinetics in rabbits was determined in parallel.

Определение бионеэквивалентности образцов стрептоцида в фармакокинетических опытах на кроликах. Determination of bioequivalence of streptocide samples in pharmacokinetic experiments on rabbits.

В двух сериях опытов (по 5 кроликов в каждой) животным перорально вводят 21 мл 0,46%-ного водного раствора испытуемого и стандартного образцов стрептоцида. Растворы готовят непосредственно перед введением. Через 0,5; 1; 2; 4; 6 ч после введения растворов из краевой ушной вены кроликов берут по 1 мл крови в 15 мл воды. По окончании гемолиза добавляют 4 мл 15%-ной трихлоруксусной кислоты. Смесь перемешивают и фильтруют. В 2,5 мл фильтрата фотоколориметрическим методом при зеленом светофильтре определяют оптическую плотность раствора, а затем по калибровочному графику содержание стрептоцида. In two series of experiments (5 rabbits each), animals were orally administered with 21 ml of a 0.46% aqueous solution of the test and standard samples of streptocide. Solutions are prepared immediately before administration. After 0.5; 1; 2; 4; 6 hours after the introduction of solutions from the marginal ear vein of rabbits take 1 ml of blood in 15 ml of water. At the end of hemolysis, 4 ml of 15% trichloroacetic acid are added. The mixture is stirred and filtered. The optical density of the solution is determined in 2.5 ml of the filtrate by the photocolorimetric method with a green filter, and then the content of streptocide is determined from the calibration graph.

Содержание стрептоцида в 1 мл крови вычисляют по формуле
X,мкг/мл =

С - концентрация стрептоцида, найденная по графику;
b - общий объем раствора (15 мл воды + 1 мл крови + 4 мл 15%-ной трихлоруксусной кислоты);
К - количество крови, на которое проводят расчет;
b₁ - объем фильтрата, взятый на анализ (2,5 мл);
а - объем крови в опыте (1 мл).The content of streptocide in 1 ml of blood is calculated by the formula
X, μg / ml =

C is the concentration of streptocide found according to the schedule;
b - the total volume of the solution (15 ml of water + 1 ml of blood + 4 ml of 15% trichloroacetic acid);
K is the amount of blood to be calculated;
b ₁ - the volume of the filtrate taken for analysis (2.5 ml);
a - blood volume in the experiment (1 ml).

Результаты экспериментов представлены в таблице 5. The experimental results are presented in table 5.

Анализ экспериментальных данных показывает существенные различия в фармакокинетических показателях, особенно на стадии всасывания. В период всасывания концентрации стрептоцида в крови испытуемого образца значительно превышают таковые у стандартного образца. Кроме того, время достижения максимальной концентрации для стандартного образца составляет 2 часа, в то время как для испытуемого образца оно составляет 1 час. The analysis of experimental data shows significant differences in pharmacokinetic parameters, especially at the absorption stage. During the absorption period, the concentration of streptocide in the blood of the test sample is significantly higher than those of the standard sample. In addition, the time to reach the maximum concentration for the standard sample is 2 hours, while for the test sample it is 1 hour.

Полученные данные доказывают биологическую неэквивалентность испытуемого и стандартного образцов и подтверждают вышеуказанные результаты заявляемого способа. The data obtained prove the biological nonequivalence of the test and standard samples and confirm the above results of the proposed method.

Применение заявляемого способа позволяет повысить точность методики определения биологической неэквивалентности химически идентичных лекарственных веществ, так как основывается на сопоставительном анализе измеряемых цифровых величин, а не на субъективной оценке результатов по двигательной активности простейших, что имеет место в известном способе (прототипе). Кроме того, заявляемый способ характеризуется упрощенной методикой определения биологической неэквивалентности, так как исключает использование живых организмов, применяемых в известном способе. The application of the proposed method allows to increase the accuracy of the methodology for determining the biological nonequivalence of chemically identical medicinal substances, as it is based on a comparative analysis of measured digital values, and not on a subjective assessment of the results of locomotor activity of protozoa, which takes place in the known method (prototype). In addition, the inventive method is characterized by a simplified method for determining biological nonequivalence, as it excludes the use of living organisms used in the known method.

Claims

METHOD FOR CONTROLING BIOLOGICAL NON-EQUIVALENCE OF CHEMICALLY IDENTICAL MEDICINES, including preparation of solutions of the analyzed and standard samples, characterized in that, in order to simplify and improve the accuracy of the method, the obtained solutions are placed in a container with a semipermeable membrane, the magnitude of the variation in the diffusion speed is measured, the difference about biological nonequivalence of samples.