RU2024874C1

RU2024874C1 - Method for diagnosing echinococcosis

Info

Publication number: RU2024874C1
Authority: RU
Inventors: Доктурбек Адамбекович Адамбеков; Валерий Леонидович Морозов; Бекболот Акматович Акматов; Жусуп Бейшекадырович Бошкоев; Эрик Рыскулович Рыскулов; Мухамеджан Гафурович Кенжаев; Алгадай Мухамеджанов
Original assignee: Киргизский государственный медицинский институт
Priority date: 1990-07-12
Filing date: 1990-07-12
Publication date: 1994-12-15

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: method involves adding 0.008 ml of blood to 0.02 ml of echinococcous liquid, incubating it for 2 h at 37 C and introducing 0.9 ml of isotonic solution of sodium chloride. Then the mixture is centrifuged for 10 min at 1500 rpm and potassium content is determined in supernatant liquid. If the content of potassium is 45% and over as compared with antigen-free control, echinococcosis is diagnosed. Accuracy of diagnosing echinococcosis is increased by 6.2%. EFFECT: higher accuracy of method. 2 tbl

Description

Изобретение относится к медицине, а именно иммунологической диагностике эхинококкоза. The invention relates to medicine, namely the immunological diagnosis of echinococcosis.

Известен способ диагностики путем введения внутрикожно эхинококкового антигена с последующим измерением зоны инфильтрации (реакция Казони) - 1. Однако этот метод малоинформативен. Кроме того, визуальный способ учета неизменно порождает субъективизм в оценке реакции, а самое главное, имеется опасность развития аллергических реакций, вплоть до анафилактического шока 2. A known diagnostic method by introducing intradermal echinococcal antigen with subsequent measurement of the infiltration zone (Cazoni reaction) - 1. However, this method is uninformative. In addition, the visual method of accounting invariably gives rise to subjectivity in assessing the reaction, and most importantly, there is a risk of developing allergic reactions, up to anaphylactic shock 2.

Известен также другой способ диагностики эхинококкоза с помощью реакции латекс-агглютинации (РЛА) 3. Однако метод очень трудоемок (ставится в течение 24 ч), необходимо брать большое количество крови (не менее 5 мл из вены), а главное, дает часто ложноположительные результаты при циррозе и раке печени, туберкулезе и других инфекциях. There is also another method for diagnosing echinococcosis using the latex agglutination reaction (RLA) 3. However, the method is very time-consuming (set within 24 hours), it is necessary to take a large amount of blood (at least 5 ml from a vein), and most importantly, often gives false positive results with cirrhosis and liver cancer, tuberculosis and other infections.

Цель изобретения - повышение точности способа диагностики. The purpose of the invention is to improve the accuracy of the diagnostic method.

Эта цель достигается тем, что цитратную кровь инкубируют в течение 2-х ч с эхинококковой жидкостью (опыт), одновременно проводят также пробу без антигена (контроль). После этого определяют в надосадочной жидкости содержание калия. This goal is achieved by the fact that citrated blood is incubated for 2 hours with echinococcal fluid (experiment), at the same time they also conduct a test without antigen (control). Then determine the potassium content in the supernatant.

При возрастании содержания калия в опытной пробе по отношению к контрольной пробе на 45% и более диагностируют эхинококкоз. With an increase in the potassium content in the experimental sample in relation to the control sample by 45% or more, echinococcosis is diagnosed.

Данная совокупность существенных признаков в источниках информации не обнаружена, что подтверждает новизну изобретения. This set of essential features in the information sources is not found, which confirms the novelty of the invention.

Способ осуществляется следующим образом. В центрифужную пробирку помещают 0,02 мл эхинококковой жидкости, разведенной 5%-ным цитратом натрия. Для контроля в другую пробирку наливают 0,02 мл цитрата натрия. Добавляют в обе пробирки 0,08 мл крови из пальца, взятой микропипеткой, и содержимое перемешивают. Инкубируют 2 ч при 37^оС. Затем в каждую пробирку добавляют по 0,9 мл изотонического раствора хлористого натрия, содержимое перемешивают, центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин, 0,5 мл надосадочной жидкости отсасывают и определяют содержание калия в жидкости. Диагностический коэффициент (ДК) рассчитывают по формуле
ДК =

100, где О - содержание калия в опытной пробе, К - содержание калия в контрольной пробе.The method is as follows. 0.02 ml of echinococcal fluid diluted with 5% sodium citrate is placed in a centrifuge tube. For control, 0.02 ml of sodium citrate is poured into another tube. 0.08 ml of blood from a finger taken with a micropipette is added to both tubes, and the contents are mixed. Incubate 2 h at 37 ^C. Then to each tube was added 0.9 ml isotonic sodium chloride solution, the contents were stirred, centrifuged 10 min at 1500 rev / min, 0.5 ml of the supernatant was aspirated and define the content of potassium in the liquid. Diagnostic coefficient (DC) is calculated by the formula
DK =

100, where O is the potassium content in the test sample, K is the potassium content in the control sample.

Способ испытан при эхинококкозе. В качестве антигена была использована эхинококковая жидкость. The method was tested with echinococcosis. Echinococcal fluid was used as antigen.

П р и м е р 1. Больной Б., 39 лет. Диагноз: эхинококкоз печени, вызванный Echinococcus granulosis. PRI me R 1. Patient B., 39 years old. Diagnosis: echinococcosis of the liver caused by Echinococcus granulosis.

6.01.1989 г. у больного из пальца была взята кровь, 0,08 мл крови было помещено в пробирку с 0,02 мл эхинококковой жидкости на 5%-ном растворе лимоннокислого натрия (опыт), параллельно 0,08 мл крови поместили в пробирку с 0,02 мл лимоннокислого натрия (контроль). Пробирки помещали в термостат при 37^о С на 2 ч, затем в обе пробирки добавляли по 0,9 мл изотонического раствора хлористого натрия, пробирки центрифугировали 10 мин при 1500 об/мин, отсасывали 0,5 мл надосадочной жидкости и определяли там содержание калия на пламенном фотометре в соответствии с инструкцией к прибору.01/06/1989, blood was taken from a patient from a finger, 0.08 ml of blood was placed in a test tube with 0.02 ml of echinococcal fluid in a 5% solution of sodium citrate (experiment), in parallel 0.08 ml of blood was placed in a test tube with 0.02 ml sodium citrate (control). The tubes were placed in an incubator at ³⁷ ° C for 2 h, then both tubes were added 0.9 ml isotonic sodium chloride solution, the tubes were centrifuged 10 min at 1500 rev / min, 0.5 mL aspirated supernatant, and there was determined the content of potassium in flame photometer in accordance with the instructions for the device.

Результаты: опытная проба - 53, контрольная проба - 25. Results: experimental test - 53, control test - 25.

Показатель повреждения клеток (ППК)
ППК =

100=112%
П р и м е р 2. Больная Д., 47 лет. Диагноз: хронический холецистит. 25.01.1989 г. из пальца была взята кровь. 0,08 мл крови было помещено в пробирку с 0,02 мл эхинококковой жидкости на 5%-ном цитрате натрия, то же количество поместили в пробирку с 0,02 мл 5%-ного цитрата натрия. Дальнейшее выполнение реакции проводили по выше описанной методике.Cell Damage Index (PPC)
PPK =

100 = 112%
PRI me R 2. Patient D., 47 years old. Diagnosis: chronic cholecystitis. 01/25/1989, blood was taken from a finger. 0.08 ml of blood was placed in a test tube with 0.02 ml of echinococcal fluid in 5% sodium citrate, the same amount was placed in a test tube with 0.02 ml of 5% sodium citrate. Further reaction was carried out according to the method described above.

Результаты: опытная проба - 39, контрольная - 32. Results: experimental test - 39, control - 32.

ППК =

100=21,8%.PPK =

100 = 21.8%.

П р и м е р 3. Здоровый донор, 28 лет. 29.01.1989 г. из пальца была взята кровь и 0,08 мл крови было помещено в пробирку с 0,02 мл эхинококковой жидкости, то же количество крови поместили с 0,02 мл раствора цитрата натрия. Дальнейшее выполнение реакции проводили по выше описанной методике. PRI me R 3. Healthy donor, 28 years old. 01/29/1989, blood was taken from a finger and 0.08 ml of blood was placed in a test tube with 0.02 ml of echinococcal fluid, the same amount of blood was placed with 0.02 ml of sodium citrate solution. Further reaction was carried out according to the method described above.

Результаты: опытная проба - 39, контрольная проба - 30. Results: experimental test - 39, control test - 30.

ППК =

100=30%.PPK =

100 = 30%.

В табл.1 представлены результаты определения повышенной чувствительности к эхинококковой жидкости с помощью предлагаемого метода. Table 1 presents the results of determining increased sensitivity to echinococcal fluid using the proposed method.

При расчете доверительного интервала при Р = 0,05 установлено, что верхней гpаницей нормы чувствительности к эхинококковому антигену является 45%. При значениях, превышающих этот показатель, диагностируют эхинококкоз. When calculating the confidence interval at P = 0.05, it was found that the upper limit of the norm of sensitivity to echinococcal antigen is 45%. With values exceeding this indicator, echinococcosis is diagnosed.

Как следует из табл. 2, предлагаемый метод (ППК) у 53 больных эхинококкозом в 100% случаев давал положительный результат, а известный способ (РЛА) у 53 больных в 3 случаях давал отрицательный результат, что составляет 5,7% . Среди больных с эхинококковыми заболеваниями, сходно протекающими с эхинококкозом (рак легкого, цирроз печени и др.), а также у здоровых лиц, предлагаемый способ (ППК) во всех случаях был ниже диагностического критерия, т.е. < чем 45, тогда как известный способ (РЛА) у двух больных с не эхинококковыми заболеваниями при отсутствии эхинококкоза давал положительный результат, что составило 5,7% от числа обследованных. Кроме того известный способ у одного здорового донора дал положительный результат, что составило 5% от числа обследованных (20 человек). As follows from the table. 2, the proposed method (AUC) in 53 patients with echinococcosis in 100% of cases gave a positive result, and the known method (RLA) in 53 patients in 3 cases gave a negative result, which is 5.7%. Among patients with echinococcal diseases similar to those with echinococcosis (lung cancer, cirrhosis of the liver, etc.), as well as in healthy individuals, the proposed method (AUC) in all cases was below the diagnostic criterion, i.e. <45, while the known method (RLA) in two patients with non-echinococcal diseases in the absence of echinococcosis gave a positive result, which amounted to 5.7% of the number examined. In addition, the known method in one healthy donor gave a positive result, which amounted to 5% of the number examined (20 people).

Предложенный способ отличается от прототипа тем, что:
1. По новизне - предложен новый иммунологический метод диагностики эхинококкоза в отличие от учета инфицированности по титру реакции агглютинации прототипа, основанный на иммунном повреждении клеток при контакте с антигеном (эхинококковой жидкостью).The proposed method differs from the prototype in that:
1. By novelty, a new immunological method for the diagnosis of echinococcosis is proposed, in contrast to taking into account infection by titer of the agglutination reaction of the prototype, based on immune damage to cells in contact with antigen (echinococcal fluid).

2. По существенным отличиям показатель повреждения клеток отражает механизм специфического процесса взаимодействия антиген-антитело, которое происходит на поверхности клеток крови и сопровождается иммунным цитолизом клеток с выделением ионов калия. Известно, что концентрация калия в клетках крови в 20 раз превышает таковую в плазме 4, иммунохимическая реакция более точно определяет характер специфических изменений при эхинококкозе, чем реакция Латекс-агглютинации, дающая нередко ложноположительные или ложноотрицательные результаты. 2. According to significant differences, the cell damage index reflects the mechanism of a specific antigen-antibody interaction process that occurs on the surface of blood cells and is accompanied by immune cytolysis of cells with the release of potassium ions. It is known that the concentration of potassium in blood cells is 20 times higher than that in plasma 4, the immunochemical reaction more accurately determines the nature of specific changes in echinococcosis than the Latex agglutination reaction, which often gives false positive or false negative results.

3. По положительному эффекту - предложенный способ позволяет диагностировать наличие эхинококкоза на 6,2% точнее, чем прототип. 3. For a positive effect - the proposed method allows you to diagnose the presence of echinococcosis 6.2% more accurately than the prototype.

Claims

METHOD FOR ECHINOCOCCOSIS DIAGNOSTICS by incubating blood with echinococcal fluid with subsequent registration of an immunological reaction, characterized in that, in order to increase the accuracy of the method, the reaction is recorded in the supernatant according to the potassium content and when the potassium content exceeds 45% or more compared to the control without antigen is diagnosed with echinococcosis.