Claims (14)
1. Бесклеточный ферментативный коктейль для применения в способе получения аллюлозы, где бесклеточный ферментативный коктейль содержит:1. A cell-free enzyme cocktail for use in a method for producing allulose, where the cell-free enzyme cocktail contains:
аллюлозо-6-фосфат-3-эпимеразу (А6РЕ); иallulose 6-phosphate 3-epimerase (A6PE); And
аллюлозо-6-фосфат-фосфатазу (А6РР).allulose-6-phosphate phosphatase (A6PP).
2. Бесклеточный ферментативный коктейль по п. 1, дополнительно содержащий фосфоглюкоизомеразу (PGI).2. Cell-free enzyme cocktail according to claim 1, additionally containing phosphoglucoisomerase (PGI).
3. Бесклеточный ферментативный коктейль по п. 2, дополнительно содержащий фосфоглюкомутазу (PGM).3. Cell-free enzyme cocktail according to claim 2, additionally containing phosphoglucomutase (PGM).
4. Бесклеточный ферментативный коктейль по п. 3, дополнительно содержащий по меньшей мереодин фермент, выбранный из группы, состоящей из α-глюканфосфорилазу (αGP), мальтозофосфорилазу, сахарозофосфорилазу, целлодекстринфосфорилазу, целлобиозофосфорилазу и целлюлозофосфорилазу.4. The cell-free enzyme cocktail according to claim 3, further comprising at least one enzyme selected from the group consisting of α-glucan phosphorylase (αGP), maltose phosphorylase, sucrose phosphorylase, cellodextrin phosphorylase, cellobiose phosphorylase and cellulose phosphorylase.
5. Бесклеточный ферментативный коктейль по п. 4, дополнительно содержащий изоамилазу, пуллуланазу, α-амилазу или их сочетания.5. A cell-free enzyme cocktail according to claim 4, additionally containing isoamylase, pullulanase, α-amylase or combinations thereof.
6. Бесклеточный ферментативный коктейль по п. 4, дополнительно содержащий 4-глюкантрансферазу (4GT).6. Cell-free enzyme cocktail according to claim 4, additionally containing 4-glucan transferase (4GT).
7. Бесклеточный ферментативный коктейль по п. 1, дополнительно содержащий полифосфатфруктокиназу.7. Cell-free enzymatic cocktail according to claim 1, additionally containing polyphosphate fructokinase.
8. Бесклеточный ферментативный коктейль по п. 2, дополнительно содержащий полифосфатглюкокиназу (PPGK).8. Cell-free enzyme cocktail according to claim 2, additionally containing polyphosphate glucokinase (PPGK).
9. Бесклеточный ферментативный коктейль по п. 1, где А6РЕ содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 100% идентичностью последовательностей с SEQ ID №№3 или 6, где указанная эпимераза катализирует превращение F6P в А6Р.9. The cell-free enzyme cocktail according to claim 1, where A6PE contains an amino acid sequence having at least 45%, at least 50%, at least 55%, at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, or at least 100% sequence identity to SEQ ID No. 3 or 6, where this epimerase catalyzes the conversion of F6P to A6P.
10. Бесклеточный ферментативный коктейль по п. 1, где А6РЕ содержит домен (α/β)8-бочонка для катализа, Ser на конце 7-го β-тяжа бочонка, Ser на конце 8-го β-тяжа бочонка, Gly в петле активного центра, His во 2-м и 3-м β-тяжах бочонка, Asp во 2-м и 7-м β-тяже бочонка и сигнатуру His-гидрофобный остаток-Asp во 2-м β-тяже бочонка.10. Cell-free enzyme cocktail according to claim 1, where A6PE contains an (α/β) 8 -barrel domain for catalysis, Ser at the end of the 7th β-strand of the barrel, Ser at the end of the 8th β-strand of the barrel, Gly in the loop active site, His in the 2nd and 3rd barrel β-strands, Asp in the 2nd and 7th barrel β-strands, and the His-hydrophobic residue-Asp signature in the 2nd barrel β-strand.
11. Бесклеточный ферментативный коктейль по п. 1, где А6РР содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 100% идентичностью последовательностей с SEQ ID №9, где указанная фосфатаза катализирует превращение А6Р в аллюлозу.11. The cell-free enzyme cocktail according to claim 1, where A6PP contains an amino acid sequence having at least 45%, at least 50%, at least 55%, at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, or at least 100% sequence identity with SEQ ID No. 9, where the specified phosphatase catalyzes conversion of A6P to allulose.
12. Бесклеточный ферментативный коктейль по п. 1, где А6РР содержит домен с Россман-подобной укладкой для катализа, домен кэппирования С1, сигнатуру DxD в 1-м β-тяже Россман-подобной укладки, Thr или Ser на конце 2-го β-тяжа Россман-подобной укладки, Lys на N-конце α-спирали ближе к С-концу относительно 3-го β-тяжа Россман-подобной укладки и сигнатуру GDxxxD на конце 4-го β-тяжа Россман-подобной укладки.12. The cell-free enzyme cocktail according to claim 1, where A6PP contains a domain with a Rossmann-like fold for catalysis, a C1 capping domain, a DxD signature in the 1st β-strand of the Rossmann-like fold, Thr or Ser at the end of the 2nd β-strand strand of the Rossmann-like fold, Lys at the N-terminus of the α-helix closer to the C-terminus relative to the 3rd β-strand of the Rossmann-like fold, and the GDxxxD signature at the end of the 4th β-strand of the Rossmann-like fold.