Claims (13)
1. Способ получения биомедицинского клеточного продукта для лечения онкологических, нейродегенеративных, аутоимунных и эндокринных заболеваний и продления жизни млекопитающего и человека, включающий 1. A method of obtaining a biomedical cell product for the treatment of oncological, neurodegenerative, autoimmune and endocrine diseases and prolonging the life of a mammal and a human, including
получение аутологичного лейкоконцентрата мононкулеаров (МНК) из эксфузата костного мозга или из лейкоферезного продукта мобилизованных мононуклеаров (ЛК МНК) периферической крови; obtaining an autologous leucoconcentrate of mononuclear cells (MNC) from a bone marrow exfusate or from a leukopheresis product of mobilized mononuclear cells (MNC MNC) of peripheral blood;
получение линии аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) с маркерами CD34+, CD45+, HLA DR+ и/или гемопоэтических клеток-предшественников (ГКП) с маркерами CD34+, CD45-, HLA DR- путем их выделения из ЛК МНК иммуносепарацией и культивирования в среде, препятствующей дифференцировке;obtaining a line of autologous hematopoietic stem cells (HSC) with markers CD34 +, CD45 +, HLA DR + and / or hematopoietic progenitor cells (HCP) with markers CD34 +, CD45-, HLA DR- by isolating them from LK MNCs by immunoseparation and culturing in an environment that prevents differentiation;
получение линии неповрежденных заболеванием аутологичных региональных мультипотентных стволовых клеток или соматических клеток и наращивание их клеточной массы;obtaining a line of intact autologous regional multipotent stem cells or somatic cells and increasing their cell mass;
перепрограммирование указанных аутологичных региональных мультипотентных стволовых клеток или соматических клеток в XEN-подобные плюрипотентные клетки посредством химической индукции;reprogramming said autologous regional multipotent stem cells or somatic cells into XEN-like pluripotent cells by chemical induction;
проведение клеточно-инженерной гомотопной замены ядер ГСК и/или ГКП на ядра XEN-подобных клеток или на целые XEN-подобные клетки путем получения цитопластов из нативных ГСК и/или ГКП посредством обработки этих клеток цитохолазином В и трансплантации кариопластов, полученных из XEN-подобных клеток посредством их обработки цитохолазином В, или целых XEN-подобных клеток в цитопласты ГСК и/или ГКП с получением за счет этого восстановленных ГСК и/или ГКП, содержащих мультипотентные цитопласты ГСК и плюрипотентные кариопласты XEN-подобных клеток;carrying out cell-engineered homotopic replacement of nuclei of HSCs and / or HCPs with nuclei of XEN-like cells or whole XEN-like cells by obtaining cytoplasts from native HSCs and / or HCPs by treating these cells with cytocholazine B and transplanting karyoplasts derived from XEN-like cells cells by treating them with cytocholazine B, or whole XEN-like cells into the cytoplasts of HSCs and / or HSCs, thereby obtaining reduced HSCs and / or HSCs containing multipotent HSC cytoplasts and pluripotent karyoplasts of XEN-like cells;
соединение восстановленных ГСК и/или ГКП с ЛК МНК, из которого были выделены первоначальные ГСК и/или ГКП, для получения целевого биомедицинского клеточного продукта, содержащего линию постгеномно восстановленных мультипотентных генетически однородных аутологичных ГСК с маркерами
CD34+Lin-, CD38", HLA-DR+, СD45+.combination of reduced HSCs and / or HSCs with LC MNCs, from which the original HSCs and / or HSCs were isolated, to obtain the target biomedical cell product containing a line of postgenomically restored multipotent genetically homogeneous autologous HSCs with markers
CD34 + Lin-, CD38 ", HLA-DR +, CD45 +.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что восстановленные ГСК и/или ГКП, соединенные с ЛК МНК, культивируют в среде, препятствующей дифференцировке, для увеличения их клеточной массы, формирования и созревания их свойств мультипотентности в гемопоэтическом направлении и контролируют эти свойства проточной цитофлориметрией. 2. The method according to claim 1, characterized in that the reduced HSCs and / or HSCs, combined with LA MNCs, are cultivated in an environment that prevents differentiation, to increase their cell mass, form and mature their multipotency properties in the hematopoietic direction, and control these properties flow cytoflorimetry.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в случае онкологии или нейродегенеративных болезней головного и спинного мозга, а также в случае аутоимунных болезней в качестве неповрежденных заболеванием клеток используют мезенхимальные стромальные стволовые клетки (МССК) с маркерами CD10+, CD13+,CD44+, CD90+ (Thy-1), CD105+, CD34-, CD45- и CD117- и/или мезенхимальные стромальные клетки предшественники (МСКП) с маркерами CD10+,CD13+, CD44-, CD90+ (Thy-1), CD105+, CD34+, CD45+ и CD117+.3. The method according to claim 1, characterized in that in the case of oncology or neurodegenerative diseases of the brain and spinal cord, as well as in the case of autoimmune diseases, mesenchymal stromal stem cells (MSSK) with markers CD10 +, CD13 +, CD44 + are used as cells intact by the disease. CD90 + (Thy-1), CD105 +, CD34-, CD45- and CD117- and / or mesenchymal stromal progenitor cells (MSCP) with markers CD10 +, CD13 +, CD44-, CD90 + (Thy-1), CD105 +, CD34 +, CD45 + and CD117 + ...
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в случае онкологии солидных органов в качестве неповрежденных заболеванием клеток используют нейральные стволовые клетки (НСК) с маркером СD 133+ и/или нейральные клетки-предшественники (НКП) с маркером СD 133+.4. The method according to claim 1, characterized in that in the case of oncology of solid organs, neural stem cells (NSC) with a CD 133+ marker and / or neural progenitor cells (NPC) with a CD 133+ marker are used as cells intact.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что перепрограммирование посредством химической индукции проводят коктейлем, содержащим низкомолекулярные вещества, выбранные из группы, состоящей из VPA, TD114-2, CHIR, 616452, транилципромина, формсколина, AM580, EPZ004777, CH55 и витамина C (VC).5. The method according to claim 1, characterized in that the reprogramming by chemical induction is carried out with a cocktail containing low molecular weight substances selected from the group consisting of VPA, TD114-2, CHIR, 616452, tranylcypromine, formskolin, AM580, EPZ004777, CH55 and vitamin C (VC).
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что трансплантацию полученных из XEN-подобных клеток кариопластов или целых XEN-подобных клеток в цитопласты ГСК и/или ГКП проводят in vitro путем электропорации или лазерно-оптическим методом.6. The method according to claim 1, characterized in that the transplantation of karyoplasts or whole XEN-like cells obtained from XEN-like cells into the cytoplasts of HSC and / or HCP is carried out in vitro by electroporation or laser-optical method.
7. Биомедицинский клеточный продукт, полученный способом по одному из пп. 1-6 и содержащий аутологичный лейкоконцентрат мобилизованных мононуклеаров, обедненный собственными ГСК и/или ГКП в результате их иммуносепарации, с линией генетически однородных аутологичных гемопоэтических клеток с маркерами CD34+Lin–, CD38", HLA-DR+СD45+.7. Biomedical cell product obtained by the method according to one of paragraphs. 1-6 and containing an autologous leucoconcentrate of mobilized mononuclear cells, depleted in own HSC and / or HSC as a result of their immunoseparation, with a line of genetically homogeneous autologous hematopoietic cells with markers CD34 + Lin–, CD38 ", HLA-DR + CD45 +.