RU2019190C1 - Method of monospecific antiserum preparing - Google Patents
Method of monospecific antiserum preparing Download PDFInfo
- Publication number
- RU2019190C1 RU2019190C1 SU5040865A RU2019190C1 RU 2019190 C1 RU2019190 C1 RU 2019190C1 SU 5040865 A SU5040865 A SU 5040865A RU 2019190 C1 RU2019190 C1 RU 2019190C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- serum
- blood
- antigenic material
- centrifuged
- filtered
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 44
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 22
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 18
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 15
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims abstract description 9
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 9
- IYLLULUTZPKQBW-UHFFFAOYSA-N Acrinol Chemical compound CC(O)C(O)=O.C1=C(N)C=CC2=C(N)C3=CC(OCC)=CC=C3N=C21 IYLLULUTZPKQBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 claims 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 abstract description 5
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 abstract description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 4
- 241000894007 species Species 0.000 abstract description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 3
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 abstract 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 7
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 7
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 4
- 108010068307 Alpha-Globulins Proteins 0.000 description 4
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002572 Alpha-Globulins Human genes 0.000 description 2
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004404 adrenal cortex Anatomy 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 210000003372 endocrine gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 1
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 1
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биологии и может быть использовано для стимуляции жизнедеятельности клеток органов и тканей человека и животных. The invention relates to biology and can be used to stimulate the activity of cells of organs and tissues of humans and animals.
Известна сыворотка серотрансфузин, содержащая водно-солевой раствор, включающий, г: NaCl 7,5; KCl 0,4; MCl 0,4; NaH2PO4 0,0518; Na2HPO4 0,467 и глюкозу 10,0 на 1000 мл воды, причем к солевому раствору добавлена сыворотка крови человека в 20%-ной концентрации.Known serotransfusine serum containing aqueous saline solution, including, g: NaCl 7.5; KCl 0.4; MCl 0.4; NaH 2 PO 4 0.0518; Na 2 HPO 4 0.467 and glucose 10.0 per 1000 ml of water, and human blood serum in a 20% concentration was added to the saline solution.
Недостатком этой сыворотки является вызываемая ею опасность развития аллергических осложнений. The disadvantage of this serum is the risk of allergic complications caused by it.
Известен способ получения сыворотки, включающий приготовление водно-солевого раствора заданной концентрации и добавление к нему сыворотки человеческой крови. A known method for producing serum, including the preparation of a water-salt solution of a given concentration and adding to it human serum.
Недостатком данного способа является невозможность обеспечения с его помощью сложных технологий, требуемых для изготовления сывороток с заданной видовой специфичностью. The disadvantage of this method is the inability to provide with it the sophisticated technologies required for the manufacture of sera with a given species specificity.
Прототипом изобретения является способ получения сыворотки, включающий изготовление однородного в смысле последующего применения антигенного материала, иммунизацию животного-донора этим однородным антигенным материалом с последующей эксфузией крови у этого донора, отделение полученной иммунной сыворотки и последующую ее сублимацию. The prototype of the invention is a method for producing serum, including the manufacture of a homogeneous in the sense of subsequent use of antigenic material, immunization of the animal donor with this homogeneous antigenic material, followed by blood exfusion from this donor, separation of the resulting immune serum and its subsequent sublimation.
Недостатком прототипа является невозможность получения с его помощью моноспецифической антисыворотки с антисупраренальной направленностью. The disadvantage of the prototype is the impossibility of obtaining with its help a monospecific antiserum with antisuprarenal orientation.
Сущность изобретения состоит в том, что в противотканевой сыворотке, включающей иммунные α, β и γ глобулины, альбумины и прочие белки, α,β и γ глобулины выполнены в виде антител моноспецифической направленности действия на надпочечники человека и животных при следующем соотношении компонентов, мас.%: α глобулин 6,0-10,0; β глобулин 20,0-25,0; γ глобулин 60,0-70,0; альбумин и прочие белки - 0,0-3,5. The essence of the invention lies in the fact that in anti-tissue serum, including immune α, β and γ globulins, albumin and other proteins, α, β and γ globulins are made in the form of antibodies with a monospecific orientation to the adrenal glands of humans and animals in the following ratio of components, wt. %: α globulin 6.0-10.0; β globulin 20.0-25.0; γ globulin 60.0-70.0; albumin and other proteins - 0.0-3.5.
Сущность изобретения состоит также в том, что в способе получения противотканевой сыворотки, включающем получение однородного антигенного материала из органа-мишени, иммунизацию животного-донора этим антигенным материалом с последующей эксфузией крови иммунизи- рованного животного и отделение сыворотки, после эксфузии крови иммунизированного животного производства отделение жидкой фракции крови, а затем проводят абсорбцию этой отделенной фракции крови белками плазмы крови и форменными элементами крови видовой принадлежности источника антигенного материала. The invention also consists in the fact that in a method for producing anti-tissue serum, which comprises obtaining a homogeneous antigenic material from a target organ, immunizing an animal donor with this antigenic material, followed by exfusion of the blood of the immunized animal and separation of serum, after exfusion of the blood of the immunized animal production, separation liquid blood fraction, and then the absorption of this separated blood fraction is carried out with blood plasma proteins and blood cells of the species origin nick antigenic material.
Далее в способе получения противотканевой сыворотки после отделения сыворотки проводят очищение ее от абсорбента, а затем определяют активность очищенной сыворотки. Further, in the method for producing anti-tissue serum, after separation of the whey, it is purified from the absorbent, and then the activity of the purified serum is determined.
При этом абсорбцию проводят 3-5 раз, а антигенный материал изготавливают в виде водно-солевого экстракта из разрушенных до уровней органелл клеток тканей надпочечников организма видовой принадлежности соответственно последующему применению и 0,9-0,95%-ного раствора NaCl, причем экстракт выполняют с содержанием белка 1,5-2,5 г/л, а конечное содержание белка в сыворотке получают в концентрации 6,0-10,0 г/л, причем иммунизацию животного-донора принимают завершенно после 5-7 введений ему антигенного материала, второе введение антигенного материала осуществляют через 10-15 дней после первого введения, а третье и каждое следующее введение антигенного материала проводят через 3-5 дней предыдущего. In this case, absorption is carried out 3-5 times, and the antigenic material is made in the form of a water-salt extract from species of adrenal tissue of the adrenal gland tissue of organisms destroyed to levels of organelles, respectively, for subsequent use and a 0.9-0.95% NaCl solution, and the extract is performed with a protein content of 1.5-2.5 g / l, and the final serum protein content is obtained at a concentration of 6.0-10.0 g / l, and immunization of the donor animal is completed after 5-7 injections of antigenic material, the second introduction of antigenic material is carried out strain 10-15 days after the first injection, and the third and each subsequent administration of antigenic material is carried out after 3-5 days of the previous one.
Далее в способе получения противотканевой сыворотки перед разрушением клеток тканей донорского органа (надпочечника) проводят его механическую очистку от жировых тканей, соединительных тяжей и кровеносных сосудов и последующую их фильтрацию, в качестве форменных элементов при абсорбции используют лейкоциты крови, а активность очищенной сыворотки определяют в реакции пассивной гемаглютинации. Further, in the method for producing anti-tissue serum, before the destruction of the cells of the tissues of the donor organ (adrenal gland), it is mechanically cleaned of fatty tissues, connective cords and blood vessels and their subsequent filtration, blood leukocytes are used as absorption elements, and the activity of purified serum is determined in the reaction passive hemagglutination.
При этом разрушение клеток тканей надпочечников производят путем трех- и более кратной процедуры в виде механической гомогенизации, последующего замораживания, выдерживания в замороженном состоянии и оттаивания, причем после выполнения последней процедуры гомогенизацию повторяют еще раз, а полученный материал центрифугируют. Кроме того, замораживание разрушаемых клеток тканей осуществляют в интервале температур (-15) - (-20)оС, выдерживание в замороженном состоянии проводят в течении 10-24 ч, оттаивание производят при температуре 25-35оС, а центрифугирование проводят в течение 40-60 мин.In this case, the destruction of adrenal tissue cells is carried out by a three- or more-fold procedure in the form of mechanical homogenization, subsequent freezing, keeping in a frozen state and thawing, moreover, after the last procedure, homogenization is repeated again, and the resulting material is centrifuged. Furthermore, freezing destroyed tissue cells is carried out in a temperature range of (-15) - (-20) ° C, maintaining the frozen state is performed during 10-24 hours, thawing is carried out at a temperature of 25-35 ° C, and centrifugation was carried out for 40-60 minutes
Предложенный состав противотканевой сыворотки обеспечивает локализацию действия препарата на взаимодействии с надпочечниками организма человека и животных и регуляцию функций надпочечниковых клеток. The proposed composition of the anti-tissue serum provides the localization of the action of the drug on the interaction with the adrenal glands of the human and animal body and the regulation of the functions of the adrenal cells.
Предлагаемый способ получения противотканевой сыворотки обеспечивает возможность создания моноспецифической антисыворотки с антисупраренальной направленностью и приводит к требуемой очистке антисупраренальной антисыворотки от остальных противоорганных антител, кроме моноспецифических антител к тканям надпочечников. The proposed method for producing anti-tissue serum provides the possibility of creating a monospecific antiserum with an antisuprarenal orientation and leads to the required purification of the antisuprarenal antiserum from the remaining antiorgan antibodies, except for monospecific antibodies to adrenal tissues.
П р и м е р. Антигенный материал приготовляют из ткани надпочечника трупа человека, погибшего от механической травмы без повреждения внутренних органов тела. Надпочечники очищают от жировой ткани, соединительных тканных тяжей и крупных сосудов. Очищенные таким образом ткани надпочечников промывают 0,9-0,95%-ным раствором хлорида натрия, измельчают ножницами, заливают равным объемом того же раствора хлорида натрия и гомогенизирут в ротационном гомогенизаторе с тефлоновым пестиком при 1500 об/мин в течение 5-10 мин поpциями объемом 5 мл. После этого гомогенат сливают в общую емкость, фильтруют через марлевый (8-10 слоев марли) фильтр и замораживают при температуре (-15)-(-20)оС. После замерзания гомогената его выдерживают при той же температуре в течение 10-24 ч, а затем размораживают, помещая под струю теплой воды (температура 25-35оС). Оттаявший гомогенат снова гомогенизируют в том же режиме и снова замораживают. Процедуру повторяют от трех до семи раз, после чего снова гомогенизируют гомогенат, а затем материал центрифугируют при 6000 об/мин в течение 40-60 мин. После этого осадок отбрасывают, а надосадочную жидкость используют в качестве антигенного материала, предварительно доведя содержание в ней белка до 1,5-2,5 г/л.PRI me R. Antigenic material is prepared from the adrenal tissue of a corpse of a person who died from mechanical injury without damaging the internal organs of the body. The adrenal glands are cleaned of adipose tissue, connective tissue cords and large vessels. The adrenal tissues cleaned in this way are washed with 0.9-0.95% sodium chloride solution, ground with scissors, poured with an equal volume of the same sodium chloride solution and homogenized in a rotational homogenizer with a teflon pestle at 1500 rpm for 5-10 minutes 5 ml portions. Thereafter, the homogenate is poured into a common vessel, filtered through a gauze (8-10 layers of gauze) filter and frozen at a temperature of (-15) - (- 20) ° C. After freezing the homogenate was kept at the same temperature for 10-24 h and then thawed, placed under a stream of warm water (temperature 25-35 about C). The thawed homogenate is homogenized again in the same mode and frozen again. The procedure is repeated three to seven times, after which the homogenate is homogenized again, and then the material is centrifuged at 6000 rpm for 40-60 minutes. After this, the precipitate is discarded, and the supernatant is used as an antigenic material, previously bringing the protein content in it to 1.5-2.5 g / l.
Иммунизируют здоровых беспородных кроликов массой тела не менее 2,5 кг. Цикл иммунизации состоит из 5-47 инъекций, причем первая состоит из введения животным части антигенного материала вместе с полным адъювантом Фрейнда в подушечки всех четырех лап, а остальную часть антигена при первой инъекции проводят внутривенно, в краевую вену уха. Инъекцию в лапы готовят из расчета 0,4 мл/кг антигена, 0,2 г/кг ланолина, 0,4 г/кг вазелина, 0,02 г/кг туберкулина, а в краевую вену уха вводят 0,6 мл/кг антигена. Healthy outbred rabbits are immunized with a body weight of at least 2.5 kg. The immunization cycle consists of 5-47 injections, the first consisting of introducing the animal part of the antigenic material together with Freund's complete adjuvant into the pads of all four paws, and the rest of the antigen during the first injection is administered intravenously into the marginal vein of the ear. Injection into the paws is prepared at the rate of 0.4 ml / kg antigen, 0.2 g / kg lanolin, 0.4 g / kg vaseline, 0.02 g / kg tuberculin, and 0.6 ml / kg is injected into the marginal vein of the ear antigen.
Спустя 14 дней после первой иммунизации животных реиммунизируют внутривенным введением антигенного материала из расчета 1 мл/кг массы тела. Последующие инъекции осуществляют с интервалом 3-5 дней внутривенно. Через 14 дней после заключительного введения антигенного материала проводят тотальную эксфузию крови. 14 days after the first immunization, animals are re-immunized with intravenous antigenic material at a rate of 1 ml / kg body weight. Subsequent injections are carried out at intervals of 3-5 days intravenously. 14 days after the final administration of antigenic material, total blood exfusion is performed.
Кровь собирают в стеклянные емкости, оставляют на сутки при 12-15оС, а затем сыворотку крови переносят в центрифужные стаканы и центрифугируют при 2500 об/мин в течение 20 мин. Сгустки, оставшиеся после снятия сыворотки, разрезают стеклянными палочками и центрифугируют в том же режиме. Осадок отбрасывают, отснятую сыворотку хранят в замороженном виде при (-20оС) до абсорбции не более 3 месяцев. Абсорбцию иммунной сыворотки форменными элементами и белками плазмы крови человека производят в стеклянных емкоcтях достаточного объема. Размороженную при 18оС сыворотку смешивают с плазмой крови доноров всех групп крови в соотношении: 50 мл смешанной плазмы на 1000 мл иммунной сыворотки. После пятнадцати минутной экспозиции при комнатной температуре смесь разливают в центрифужные стаканы и центрифугируют при 2500 об/мин в течение 15-25 мин. Надосадочную часть переносят в чистую емкость, куда добавляют отмытые от консерванта форменные элементы крови человека каждой из четырех групп крови поровну, таким образом, чтобы суммарный объем форменных элементов крови равнялся объему абсорбируемой сыворотки. Сразу после перемешивания смесь разливают в центрифужные стаканы и центрифугируют на рефрижераторной центрифуге типа К-70 при 10-15оС в течение 15-25 мин при 2500 об/мин.Blood was collected in glass containers, allowed to stand overnight at 12-15 ° C, and then transferred to a blood serum centrifuge jars and centrifuged at 2500 rev / min for 20 min. The clots remaining after removing the serum are cut with glass rods and centrifuged in the same mode. The precipitate was discarded photographed serum was stored frozen at (-20 ° C) until the absorption of no more than 3 months. The absorption of immune serum by human cells and plasma proteins is carried out in glass containers of sufficient volume. Thawed at 18 C. Serum is mixed with the blood plasma of donors of blood groups in a ratio of 50 ml plasma mixed in 1000 ml of immune serum. After a fifteen minute exposure at room temperature, the mixture is poured into centrifuge cups and centrifuged at 2500 rpm for 15-25 minutes. The supernatant is transferred to a clean container, where the human blood cells of each of the four blood groups are washed equally from the preservative, so that the total volume of the blood cells is equal to the volume of absorbed serum. Immediately after stirring, the mixture is poured into centrifuge jars and centrifuged in refrigerated centrifuge K-70 at 10-15 ° C for 15-25 min at 2500 rev / min.
Описанную процедуру абсорбции форменными элементами крови человека повторяют еще 3-4 раза. После последнего центрифугирования сыворотку подвергают абсорбции заранее приготовленными лейкоцитами из плазмы крови доноров всех четырех групп крови. The described procedure for absorption by human blood cells is repeated 3-4 more times. After the last centrifugation, the serum is absorbed by pre-prepared leukocytes from the blood plasma of donors of all four blood groups.
После проведения реакции пассивной гемаглютинации сыворотку подвергают риванольному фракционированию. В стерильную емкость достаточного объема помещают все количество абсорбированной сыворотки и по каплям добавляют 3,4% -ный риванол в объеме, составляющим половину объема сыворотки. Фракционирование происходит при рН=8,3-8,5, что обеспечивается добавлением 10% -ного гидрокарбоната натрия. Ингредиенты тщательно перемешивают. Процесс фракционирования происходит при комнатной температуре. После добавления последней порции риванола смесь продолжают перемешивать еще 25-30 мин, после чего дают отстояться в течение 30-40 мин до образования плотного слоя альбуминов над раствором глобулинов. Раствор глобулинов переносят в отдельную емкость и, с целью удаления излишков риванола, смешивают с активированным углем ОУ марки А, добавляя последний из расчета 160 г/л раствора глобулинов при тщательном перемешивании. Затем смеси дают отстояться при комнатной температуре в течение часа, жидкую часть переносят в центрифужные стаканы и центрифугируют при 2500 об/мин в течение 25-30 мин. Осветленный раствор полученной противотканевой сыворотки проверяют на отсутствие риванола, а после отрицательной пробы подвергают стерилизационной фильтрации через миллипоровские фильтры с диаметром пор 0,25 мкм на установке "Millipor" (США). After the passive hemagglutination reaction, the serum is subjected to rivanol fractionation. The entire amount of absorbed serum is placed in a sterile container of sufficient volume and 3.4% rivanol is added dropwise in a volume of half the volume of the serum. Fractionation occurs at pH = 8.3-8.5, which is ensured by the addition of 10% sodium bicarbonate. The ingredients are thoroughly mixed. The fractionation process occurs at room temperature. After adding the last portion of rivanol, the mixture is continued to mix for another 25-30 minutes, after which it is allowed to stand for 30-40 minutes until a dense layer of albumin is formed over the globulin solution. The globulin solution is transferred to a separate container and, in order to remove excess rivanol, mixed with activated charcoal OA grade A, adding the latter at the rate of 160 g / l globulin solution with thorough mixing. Then the mixture was allowed to stand at room temperature for one hour, the liquid part was transferred to centrifuge cups and centrifuged at 2500 rpm for 25-30 minutes. The clarified solution of the obtained anti-tissue serum is checked for the absence of rivanol, and after a negative sample, it is subjected to sterilization filtration through Millipor filters with a pore diameter of 0.25 μm at the Millipor installation (USA).
Для определения концентрации белка применяли биуретовый метод. Результаты исследований свидетельствовали о том, что концентрация белка в растворах после фракционирования составляла от 6,9 до 8,5 г/л. Для более удобного использования препарата концентрацию белка повышали до 10-30 г/л. Для этого после выделения глобулиновых фракций из противо-надпочечниковых сывороток препарат лиофилизировали и растворяли в дистил- лированной воде в меньшем объеме, чем тот, из которого они были лиофилизированы. Препараты для контрольного исследования, полученные из неиммунных кроличьих сывороток, концентрировали до соответствующей величины глобулинов противонадпочечниковой специфичности. A biuret method was used to determine protein concentration. The research results showed that the concentration of protein in solutions after fractionation ranged from 6.9 to 8.5 g / L. For more convenient use of the drug, the protein concentration was increased to 10-30 g / l. For this, after isolation of globulin fractions from anti-adrenal serums, the drug was lyophilized and dissolved in distilled water to a lesser extent than the one from which they were lyophilized. Preparations for the control study, obtained from non-immune rabbit sera, were concentrated to the appropriate size of globulins of anti-adrenal specificity.
Анализ глобулинов производили методом электрофореза в полиакридном геле (ПАГ-200) по показателю рН. Объемы препаратов для разгонки составляли (0,01-0,02) ˙ 10-3 л. Образцы окрашивали амидочерным -В (5 г/л в спиртовом растворе ледяной уксусной кислоты) и после остывания - денситометрировали.The analysis of globulins was carried out by polyacrid gel electrophoresis (PAG-200) in terms of pH. The volumes of preparations for dispersal were (0.01-0.02) ˙ 10 -3 l. Samples were stained with amidochemistry-B (5 g / l in an alcoholic solution of glacial acetic acid) and, after cooling, were densitometrized.
Результаты денситометрии показали, что в исследуемом составе альбумины либо полностью отсутствовали, либо сохранялись лишь в количествах, обозначаемых как "следы". Densitometry results showed that in the test composition albumin was either completely absent or retained only in amounts designated as “traces”.
При этом в противонадпочечниковых сыворотках в результате риванольного фракционирования указанным способом относительное содержание α-глобулинов составляло 6-10%, β - глобулинов для 20-25%, γ-глобулинов - 40-70%. Moreover, in anti-adrenal sera as a result of rivanol fractionation by the indicated method, the relative content of α-globulins was 6-10%, β - globulins for 20-25%, γ-globulins - 40-70%.
Таким образом, полученные противонадпочечниковые сыворотки представляют собой смесь глобулиновых фракций с преобладающим содержанием β и γ фракций, имеют рН в пределах 7,8-8,2 при конечной концентрации белка в разных сериях от 7,5 до 30,0 г/л. Thus, the obtained anti-adrenal serums are a mixture of globulin fractions with a predominant content of β and γ fractions, have a pH in the range of 7.8-8.2 at a final protein concentration in different series from 7.5 to 30.0 g / L.
В таблице приведены данные, показывающие влияние абсорбции иммунных сывороток белками плазмы и форменными элементами крови на титры специфических и неспецифических тел в них, характеризующие активность и избирательность действия полученной противотканевой сыворотки. Токсичность полученной противотканевой сыворотки определяли в соответствии с утвержденным МЗ СССР приказом N 31 от 13.01.83 г. "Об унификации методов контроля медицинских иммуно-биологических препаратов" методичес- кими рекомендациями "Требования к доклиническому применению общетоксического действия новых фармокологических средств" М.: 1985. The table shows data showing the effect of the absorption of immune serum by plasma proteins and blood cells on the titers of specific and non-specific bodies in them, characterizing the activity and selectivity of the obtained anti-tissue serum. The toxicity of the obtained anti-tissue serum was determined in accordance with the order approved by the Ministry of Health of the USSR No. 31 dated January 13, 83 “On the unification of control methods for medical immunobiological preparations” with the methodological recommendations “Requirements for the preclinical use of the general toxic effect of new pharmacological agents” M .: 1985 .
Испытания проводили на двух видах животных. The tests were carried out on two types of animals.
Белые мыши. Выбирали 5 здоровых животных массой 17-22 г при регламентированном рационе, ранее не использованных ни в каких исследованиях. Противотканевую сыворотку вводили внутривенно в объеме не более 0,5 мл со скоростью не более 0,1 мл/с. White mice. Five healthy animals weighing 17-22 g were selected with a regulated diet, previously not used in any studies. Anti-tissue serum was administered intravenously in a volume of not more than 0.5 ml at a rate of not more than 0.1 ml / s.
Морские свинки. Выбирали 3 здоровых животных массой 250-350 г, находящихся на регламентированном рационе и не использованных ранее ни в одном эксперименте. Противотканевую сыворотку вводили внутрибрюшинно в объеме не превышающем 5 мл. Guinea pigs. We selected 3 healthy animals weighing 250-350 g on a regulated diet and not previously used in any experiment. Anti-tissue serum was administered intraperitoneally in a volume not exceeding 5 ml.
Наблюдения проводили в течение семи дней после инъекции. Observations were carried out for seven days after the injection.
Поскольку все животные остались живы, ни у одного из них не наблюдалось появления признаков какого-либо заболевания, масса тела ни у одного животного за период наблюдения не снизилась, и отсутствовали воспалительные изменения в месте инъекции, было сделано заключение о нетоксичности полученной противотканевой сыворотки. Since all animals remained alive, none of them showed signs of any disease, the body weight of any animal did not decrease during the observation period, and there were no inflammatory changes at the injection site, it was concluded that the obtained anti-tissue serum was non-toxic.
Приведенные данные свидетельствуют о том, что противотканевая сыворотка и способ ее получения дают возможность выделения лекарственного препарата, обеспечивающего моноспецифическое воздействие на надпочечники человека и животных и позволяющего менять функционирование этой железы внутренней секреции в требуемом направлении, а, поскольку участие иммунной системы в защитно-приспособительных реакциях организма путем перераспределения иммунокомпетентных клеток зависит от деятельности коры надпочечников, предполагаемое изобретение предоставляет возможность оказывать в терапевтических целях регуляторное воздействие на иммунную реактивность организма. The data presented indicate that the anti-tissue serum and the method for its preparation make it possible to isolate a drug that provides a monospecific effect on the adrenal glands of humans and animals and allows changing the functioning of this endocrine gland in the required direction, and, since the participation of the immune system in protective and adaptive reactions organism by redistributing immunocompetent cells depends on the activity of the adrenal cortex, alleged invention provides an opportunity to exert a therapeutic effect on the immune response of the body for therapeutic purposes.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5040865 RU2019190C1 (en) | 1992-04-22 | 1992-04-22 | Method of monospecific antiserum preparing |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5040865 RU2019190C1 (en) | 1992-04-22 | 1992-04-22 | Method of monospecific antiserum preparing |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2019190C1 true RU2019190C1 (en) | 1994-09-15 |
Family
ID=21603582
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU5040865 RU2019190C1 (en) | 1992-04-22 | 1992-04-22 | Method of monospecific antiserum preparing |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2019190C1 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2123862C1 (en) * | 1996-03-28 | 1998-12-27 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Method of preparing standard positive sera for control over quality of test-systems designed for antibody assay |
| RU2145503C1 (en) * | 1997-12-24 | 2000-02-20 | Кубанский государственный аграрный университет | Method of preparing precipitating sera for assay of domestic and wild animal species meet |
| RU2215294C2 (en) * | 2001-10-23 | 2003-10-27 | Государственное учреждение Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского | Method for preparing monospecific polyclonal antisera to antigen-related proteins |
| RU2410395C2 (en) * | 2008-05-04 | 2011-01-27 | Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов Российской Академии наук | Method of producing monospecific antibodies to plant cell proteins |
-
1992
- 1992-04-22 RU SU5040865 patent/RU2019190C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Авторское свидетельство СССР N 1079246, кл. A 61K 39/50, 1977. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2123862C1 (en) * | 1996-03-28 | 1998-12-27 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Method of preparing standard positive sera for control over quality of test-systems designed for antibody assay |
| RU2145503C1 (en) * | 1997-12-24 | 2000-02-20 | Кубанский государственный аграрный университет | Method of preparing precipitating sera for assay of domestic and wild animal species meet |
| RU2215294C2 (en) * | 2001-10-23 | 2003-10-27 | Государственное учреждение Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского | Method for preparing monospecific polyclonal antisera to antigen-related proteins |
| RU2410395C2 (en) * | 2008-05-04 | 2011-01-27 | Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов Российской Академии наук | Method of producing monospecific antibodies to plant cell proteins |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hill et al. | Studies of bactericidal activity to Escherichia coli of porcine serum and colostral immunoglobulins and the role of lysozyme with secretory IgA | |
| US6770278B1 (en) | Methods of making and using immunoglobulin (Ig) compositions | |
| BG64350B1 (en) | Universally applicable blood plasma | |
| Ramalho‐Pinto et al. | Murine Schistosomiasis mansoni: anti‐schistosomula antibodies and the IgG subclasses involved in the complement‐and eosinophilmediated killing of schistosomula in vitro | |
| Dwyer | Thirty years of supplying the missing link: History of gamma globulin therapy for immunodeficient states | |
| Sutherland | Antivenom to the Venom of the Male Sydney Funnel‐Web Spider Atrax Robustus: Preliminary Report | |
| DE59008883D1 (en) | Process for the preparation of unmodified intravenous IgM and / or IgA-containing immunoglobulin preparations. | |
| Musoke et al. | The immunological response of the rat to infection with taeniaeformis. IV. Immunoglobulins involved in passive transfer of resistance from mother to offspring | |
| RU2019190C1 (en) | Method of monospecific antiserum preparing | |
| RU2114636C1 (en) | Antidote, method of its preparing, pharmaceutical composition, method of counteraction to venom and a set | |
| Harkins | Recent advances in the study of burns | |
| US20090181043A1 (en) | Method for Producing Human Anti-Thymocyte Immunoglobulins | |
| AT410636B (en) | METHOD FOR PRODUCING A VACCINE | |
| RU2178309C2 (en) | Antithymocytic globulin for intravenous injection and method for its obtaining | |
| US4676982A (en) | Treatment of chronic inflammatory disease with polyvalent immunoglobulins | |
| US3591677A (en) | Allergenic extract and process for preparing same | |
| Light | The antigenicity of bovine thrombin: clinical evaluation | |
| Mun | Toxic effects of normal sera and homologous antisera on the chick embryo | |
| EP0705110B1 (en) | Immunoglobulin infusion in xenotransplantation | |
| US20220079999A1 (en) | Antivenom compositions and uses thereof | |
| SHARMA et al. | PRODUCTION OF POLYCLONAL ANTIBODIES AGAINST INDIAN PAPER WASP ROPALIDIA MARGINATA VENOM TOXINS AND THEIR EFFICACY IN THE REVERSAL OF TOXIC EFFECTS | |
| Yadav et al. | PRODUCTION OF POLYCLONAL ANTIBODIES AGAINST INDIAN CATTLE TICK RHIPICEPHALUS MICROPLUS SALIVA TOXINS AND ITS EFFICACY IN REVERSAL OF TOXIC EFFECTS IN ALBINO MICE | |
| RU2264826C1 (en) | Method for obtaining antithymocytic globulin for intravenous injection | |
| RU2287345C2 (en) | Agent for stimulation of producing blood coagulation viii factor | |
| RU2283666C2 (en) | Agent for accelerated repairing of structure and function of damaged tissues and organs |