RU2017118157A - Новая фитаза, способ ее получения и ее применение - Google Patents
Новая фитаза, способ ее получения и ее применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2017118157A RU2017118157A RU2017118157A RU2017118157A RU2017118157A RU 2017118157 A RU2017118157 A RU 2017118157A RU 2017118157 A RU2017118157 A RU 2017118157A RU 2017118157 A RU2017118157 A RU 2017118157A RU 2017118157 A RU2017118157 A RU 2017118157A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- protein
- nucleic acid
- acid molecule
- host cell
- paragraphs
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims 11
- 108010011619 6-Phytase Proteins 0.000 title claims 6
- 229940085127 phytase Drugs 0.000 title claims 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 14
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 13
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 13
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 7
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims 4
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 claims 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/189—Enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
- C12N15/815—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts for yeasts other than Saccharomyces
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/03—Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
- C12Y301/03008—3-Phytase (3.1.3.8)
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Botany (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Claims (28)
1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты
i) содержащая нуклеотидную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 1, кодирующую белок с фитазной активностью, или
ii) обладающая идентичностью последовательности по меньшей мере 83% с нуклеотидной последовательностью, показанной в SEQ ID NO: 1, кодирующей белок с фитазной активностью.
2. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что молекула нуклеиновой кислоты не включает нуклеотидную последовательность, кодирующую N-концевой сигнальный пептид.
3. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что дополнительно содержит кодон-оптимизирующие мутации, учитывающие особенности организма клетки-хозяина.
4. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 3, отличающаяся тем, что организм клетки-хозяина представляет собой Pichia pastoris.
5. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 3, отличающаяся тем, что молекула нуклеиновой кислоты отличается от соответствующей кодирующей нуклеотидной последовательности дикого типа наличием не менее 50 кодон-оптимизирующих мутаций.
6. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 3, отличающаяся тем, что по меньшей мере 50% кодонов соответствующей нуклеотидной последовательности дикого типа заменены на кодоны, наиболее часто используемые организмом клетки-хозяина.
7. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 3, отличающаяся тем, что все кодоны выделенной молекулы нуклеиновой кислоты заменены на кодоны, наиболее часто используемые организмом клетки-хозяина.
8. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, кодирующая аминокислотную последовательность белка с фитазной активностью в соответствии с SEQ ID NO: 3.
9. Экспрессирующая конструкция, содержащая нуклеотидную последовательность по любому из пп. 1-8, функционально связанную с элементами, регулирующими экспрессию нуклеотидной последовательности.
10. Экспрессирующая конструкция по п. 9, отличающаяся тем, что элементы, регулирующие экспрессию, включают промотер, функционирующий в клетке-хозяине и, необязательно, терминирующую последовательность.
11. Экспрессирующая конструкция по п. 9 или 10, отличающаяся тем, что клетка-хозяин является клеткой гриба.
12. Экспрессирующая конструкция по п. 11, отличающаяся тем, что клетка гриба является клеткой Pichia pastoris.
13. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по пп. 1-8 или экспрессирующую конструкцию по любому из пп. 9-12.
14. Способ получения белка, имеющего фитазную ферментативную активность, включающий этапы:
a) введение в клетку-хозяина вектора, i) содержащего элементы, регулирующие экспрессию, функционирующие в клетке-хозяине; и ii) функционально связанного с молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1 или 2;
b) культивирование клеток-хозяев, полученных на этапе a) в условиях, подходящих для экспрессии белка, и, при необходимости,
c) выделение белка, полученного на этапе b), из культуры клеток.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что элементы, регулирующие экспрессию, включают в себя промотор, функционирующий в клетке-хозяине и, при необходимости, терминирующую последовательность.
16. Способ по п. 14, отличающийся тем, что клетка-хозяин является дрожжевой клеткой.
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что дрожжевая клетка является клеткой Pichia pastoris.
18. Способ по п. 17, в котором экспрессия белка осуществляется с использованием метанольной системы экспрессии.
19. Способ по п. 14, отличающийся тем, что белок, выделенный на этапе c), обладает фитазной активностью по меньшей мере 1000 единиц/л.
20. Способ по любому из пп. 14-19, отличающийся тем, что этап выделения включает a) отделение секретируемого белка от компонентов среды и/или b) отделение белка от компонентов клетки-хозяина.
21. Белок, полученный способом по любому из пп. 14-20.
22. Применение белка по п. 21 или полученного способом по любому из пп. 14-20 для изготовления добавок в корм для животных.
23. Добавки в корм для животных, содержащие белок по п. 21 или содержащие белок, полученный способом по любому из пп. 14-20.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP14192111.4A EP3018203A1 (en) | 2014-11-06 | 2014-11-06 | Novel phytase, method for obtaining the same and use thereof |
| EP14192111.4 | 2014-11-06 | ||
| PCT/EP2015/075834 WO2016071458A1 (en) | 2014-11-06 | 2015-11-05 | Novel phytase, method for obtaining the same and use thereof |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017118157A true RU2017118157A (ru) | 2018-12-06 |
| RU2017118157A3 RU2017118157A3 (ru) | 2019-03-07 |
| RU2712881C2 RU2712881C2 (ru) | 2020-01-31 |
Family
ID=51932186
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017118157A RU2712881C2 (ru) | 2014-11-06 | 2015-11-05 | Новая фитаза, способ ее получения и ее применение |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10494618B2 (ru) |
| EP (2) | EP3018203A1 (ru) |
| JP (1) | JP2018500928A (ru) |
| CN (1) | CN107208104A (ru) |
| DK (1) | DK3215610T3 (ru) |
| ES (1) | ES2725705T3 (ru) |
| MA (1) | MA40903A (ru) |
| RU (1) | RU2712881C2 (ru) |
| WO (1) | WO2016071458A1 (ru) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105969750B (zh) * | 2016-06-24 | 2019-04-26 | 北京昕大洋科技发展有限公司 | 一种植酸酶突变体及其应用 |
| CN114921374B (zh) * | 2022-05-27 | 2023-11-17 | 中国计量大学 | 产蛋白酶及植酸酶的假单胞菌其应用和应用方法 |
| CN114807087B (zh) * | 2022-06-28 | 2022-09-27 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 一种提高植酸酶热稳定性的方法及突变体和应用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100375673B1 (ko) * | 2000-01-29 | 2003-03-15 | 대한민국 | 피타제 생산 효모 균주를 함유하는 사료용 조성물 |
| FR2888250B1 (fr) | 2005-07-08 | 2007-08-17 | Adisseo France Sas Soc Par Act | Phytase de debaryomyces castellii |
| WO2007128160A1 (en) | 2006-04-30 | 2007-11-15 | Feed Research Institute Chinese Academy Of Agricultural Sciences | Cloning and expression of a novel phytase |
| AU2010249500B2 (en) * | 2009-05-21 | 2016-03-24 | Basf Enzymes Llc | Phytases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them |
| FR2947435B1 (fr) | 2009-07-03 | 2011-08-26 | Oreal | Article cosmetique incluant une structure multicouche electrochromique. |
| EP2743347A2 (en) * | 2011-08-08 | 2014-06-18 | Fertinagro Nutrientes, S.L. | Novel phytase, method for obtaining same and use thereof |
-
2014
- 2014-11-06 EP EP14192111.4A patent/EP3018203A1/en not_active Withdrawn
-
2015
- 2015-11-04 MA MA040903A patent/MA40903A/fr unknown
- 2015-11-05 ES ES15791583T patent/ES2725705T3/es active Active
- 2015-11-05 JP JP2017543885A patent/JP2018500928A/ja active Pending
- 2015-11-05 RU RU2017118157A patent/RU2712881C2/ru active
- 2015-11-05 EP EP15791583.6A patent/EP3215610B1/en active Active
- 2015-11-05 DK DK15791583.6T patent/DK3215610T3/en active
- 2015-11-05 WO PCT/EP2015/075834 patent/WO2016071458A1/en not_active Ceased
- 2015-11-05 US US15/524,885 patent/US10494618B2/en active Active
- 2015-11-05 CN CN201580060469.7A patent/CN107208104A/zh active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3018203A1 (en) | 2016-05-11 |
| ES2725705T3 (es) | 2019-09-26 |
| EP3215610A1 (en) | 2017-09-13 |
| MA40903A (fr) | 2017-09-12 |
| CN107208104A (zh) | 2017-09-26 |
| DK3215610T3 (en) | 2019-04-23 |
| BR112017009515A2 (pt) | 2017-12-19 |
| JP2018500928A (ja) | 2018-01-18 |
| RU2017118157A3 (ru) | 2019-03-07 |
| US10494618B2 (en) | 2019-12-03 |
| US20190071654A1 (en) | 2019-03-07 |
| BR112017009515A8 (pt) | 2018-02-06 |
| WO2016071458A1 (en) | 2016-05-12 |
| RU2712881C2 (ru) | 2020-01-31 |
| EP3215610B1 (en) | 2019-03-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI4011908T3 (fi) | Ultrapitkävaikutteiset insuliini-Fc-fuusioproteiinit ja niiden käyttömenetelmät | |
| MX2015017110A (es) | Integracion dirigida. | |
| IN2012DN03823A (ru) | ||
| FI3091073T4 (fi) | Ksylanaasiaktiivisuutta omaavia polypeptidejä ja niitä koodaavia polynukleotideja | |
| EA201300054A1 (ru) | Полипептид, обладающий активностью бета-глюкозидазы, и его применение | |
| EA200901110A1 (ru) | Рекомбинантная клетка-хозяин для получения соединения, представляющего интерес | |
| EP3527667A3 (en) | Yeast promoters for protein expression | |
| JP2020509751A5 (ru) | ||
| WO2013189972A3 (en) | Use of polypeptides having protease activity in animal feed and detergents | |
| MX358963B (es) | Polipeptidos con actividad proteasa. | |
| MY159074A (en) | Polypeptide having d-lactate dehydrogenase activity, polynucleotide encoding the polypeptide, and process for production of d-lactic acid | |
| MX2019003360A (es) | Vectores de expresion para una secrecion de proteina mejorada. | |
| MX2014015277A (es) | Elementos de adn baculoviral para la expresion de proteinas recombinantes en una celula huesped. | |
| WO2012175708A3 (en) | Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same | |
| MX2018007677A (es) | Operaciones de cosecha mejoradas para proteinas recombinadas. | |
| RU2017118157A (ru) | Новая фитаза, способ ее получения и ее применение | |
| EA201300057A1 (ru) | Полипептид, обладающий углеводдеградирующей активностью, и его применения | |
| WO2015185592A3 (en) | Proline-specific endoprotease and use thereof | |
| MX2010009071A (es) | Peptidos aislados que tienen actividad inhibitoria de fosfolipasa. | |
| WO2017058884A3 (en) | Modified bacterial protein expression system | |
| MX2017013174A (es) | Fusiones de variante iii del receptor de factor de crecimiento epidermico-mesotelina y métodos para usar los mismos. | |
| WO2013052814A8 (en) | E1 enzyme mutants and uses thereof | |
| RU2018137305A (ru) | Способ продуцирования рекомбинантного белка | |
| Madhavan et al. | Signal peptides from filamentous fungi efficiently mediate the secretion of recombinant proteins in Kluyveromyces lactis | |
| EA201300059A1 (ru) | Полипептид, обладающий активностью сволленина, и его применение |