RU2016119489A - Способ культивирования клеток - Google Patents

Claims (25)

1. Способ культивирования клеток для применения в терапии, включающий следующие стадии:

(1) культивирование образца клеток в первой среде для культивирования, содержащей первую сыворотку, заменитель первой сыворотки и/или фракцию первой сыворотки, в течение времени, достаточного для того, чтобы позволить клеткам достичь необходимого уровня размножения; и

(2) перед сбором клеток для применения в терапии замена указанной первой среды для культивирования клеток второй средой для культивирования клеток, содержащей вторую сыворотку, заменитель второй сыворотки и/или фракцию второй сыворотки, где сыворотка или фракция сыворотки имеет такое же видовое происхождение, что и культивируемые клетки, или заменитель второй сыворотки имитирует такое же видовое происхождение, и культивирование клеток в течение менее чем 48 часов до сбора клеток для применения.

2. Способ по п. 1, где первая сыворотка, заменитель первой сыворотки и/или первая фракция сыворотки выбраны из группы, состоящей из эмбриональной телячьей сыворотки (FCS), инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сыворотки (HIFCS), тромбоцитарного лизата, сывороточного альбумина и факторов роста.

3. Способ по п. 1, где образец клеток содержит клетку, выбранную из группы, состоящей из гепатоцита, гемопоэтической клетки, фибробласта, жировой клетки, мезенхимальной стромальной клетки, сердечной клетки, эндотелиальной клетки, эпителиальной клетки, нейрона, глиальной клетки, эндокринной клетки или их предшественников.

4. Способ по п. 3, где клетка представляет собой мезенхимальную стромальную клетку (MSC) или мезенхимальную клетку-предшественника (МРС).

5. Способ по п. 1, где образец клеток выделен из человека, верблюда, лошади, собаки и кошки.

6. Способ по п. 1, где первая среда и/или вторая среда содержит основную среду, выбранную из группы, состоящей из DMEM (с высоким или низким уровнем глюкозы), базальной среды Игла (MEM), среды Хама F10 (F10), среды Хама F-12 (F12), среды Дульбекко в модификации Исков, М-199, среды для роста мезенхимальных стволовых клеток (MSCGM), среды Лейбовиц L-15, MCDB, DMEM/F12, RPMI 1640, улучшенной DMEM (Gibco), DMEM/MCDB201 (Sigma) и CELL-GRO FREE или их комбинации, предпочтительно, среда на стадии (1) представляет собой DMEM, и среда на стадии (2) представляет собой DMEM без фенолового красного.

7. Способ по п. 6, где основная среда первой среды на стадии (1) дополнена инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой (HIFCS).

8. Способ по п. 1, где образец клеток на стадии (1) содержит от 1,0×10³ клеток на см² сосуда для культивирования до 1,0×10¹⁰ клеток на см² сосуда для культивирования, предпочтительно от 1,0×10³ клеток на см² сосуда для культивирования до 1,0×10⁷ клеток на см² сосуда для культивирования.

9. Способ по п. 1, где образец клеток на стадии (1) культивируют вплоть до достижения необходимого уровня размножения клеток, который составляет приблизительно 70-85%-ную конфлюэнтность.

10. Способ по п. 1, где стадию (2) выполняют в диапазоне от примерно 24 часов до примерно 36 часов до сбора клеток для применения в клеточной терапии.

11. Способ по п. 6, где основная среда второй среды на стадии (2) дополнена человеческой сывороткой или человеческим сывороточным альбумином, предпочтительно в концентрации примерно 2% об./об.

12. Способ получения клеток для аллогенной клеточной терапии пациента, включающий следующие стадии:

(1) получение образца клеток от здорового донора;

(2) культивирование указанного образца клеток в первой среде для культивирования клеток, содержащей первую сыворотку, заменитель первой сыворотки и/или фракцию первой сыворотки в течение времени, достаточного для того, чтобы позволить клеткам достичь необходимого уровня размножения; и

(3) перед сбором клеток для применения в терапии замена указанной первой среды для культивирования клеток второй средой для культивирования клеток, содержащей вторую сыворотку, заменитель второй сыворотки и/или фракцию второй сыворотки, где сыворотка или фракция сыворотки имеет такое же видовое происхождение, что и культивируемые клетки, или заменитель второй сыворотки имитирует такое же видовое происхождение, и культивирование клеток в течение менее чем примерно 48 часов; и

(4) сбор указанных клеток.

13. Композиция для применения в клеточной терапии, содержащая клетки, полученные способом по п. 1, где указанные клетки экспрессируют один или более маркеров клеточной поверхности, выбранных из группы, состоящей из CD54, CD61, CD140A и CD201.

14. Композиция по п. 13, где клетки суспендированы в шприце или в складном контейнере.

15. Композиция по п. 13, где клетки суспендированы в среде, подходящей для терапевтического введения пациенту.

16. Набор, содержащий:

(1) композицию по п. 13, где указанная композиция содержится в шприце или в складном контейнере; и

(2) инструкции по применению.

17. Имплантируемое медицинское устройство, содержащее композицию по п. 13.