RU2007170C1 - Means for intensifying antiaggregation effect of aspirin - Google Patents
Means for intensifying antiaggregation effect of aspirin Download PDFInfo
- Publication number
- RU2007170C1 RU2007170C1 SU4899622A RU2007170C1 RU 2007170 C1 RU2007170 C1 RU 2007170C1 SU 4899622 A SU4899622 A SU 4899622A RU 2007170 C1 RU2007170 C1 RU 2007170C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- blood
- aspirin
- effect
- platelet
- platelets
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 27
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 23
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 23
- 230000002744 anti-aggregatory effect Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 28
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims abstract description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 32
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 23
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 23
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 21
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 21
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 21
- 238000001994 activation Methods 0.000 description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 18
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 17
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 16
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 15
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 description 13
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 12
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 12
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 11
- 230000008859 change Effects 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 9
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 description 9
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 7
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 7
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 4
- XQYZDYMELSJDRZ-UHFFFAOYSA-N papaverine Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1CC1=NC=CC2=CC(OC)=C(OC)C=C12 XQYZDYMELSJDRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- FMNQRUKVXAQEAZ-JNRFBPFXSA-N (5z,8s,9r,10e,12s)-9,12-dihydroxy-8-[(1s)-1-hydroxy-3-oxopropyl]heptadeca-5,10-dienoic acid Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@@H](O)[C@H]([C@@H](O)CC=O)C\C=C/CCCC(O)=O FMNQRUKVXAQEAZ-JNRFBPFXSA-N 0.000 description 3
- XNRNNGPBEPRNAR-UHFFFAOYSA-N Thromboxane B2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1OC(O)CC(O)C1CC=CCCCC(O)=O XNRNNGPBEPRNAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010047163 Vasospasm Diseases 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 239000000106 platelet aggregation inhibitor Substances 0.000 description 3
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 3
- 229930008281 A03AD01 - Papaverine Natural products 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 2
- 102000004861 Phosphoric Diester Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108090001050 Phosphoric Diester Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003727 cerebral blood flow Effects 0.000 description 2
- 210000003040 circulating cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 229960001789 papaverine Drugs 0.000 description 2
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 2
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- DSNBHJFQCNUKMA-SCKDECHMSA-N thromboxane A2 Chemical compound OC(=O)CCC\C=C/C[C@@H]1[C@@H](/C=C/[C@@H](O)CCCCC)O[C@@H]2O[C@H]1C2 DSNBHJFQCNUKMA-SCKDECHMSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JJBCTCGUOQYZHK-ZSCHJXSPSA-N 2-acetyloxybenzoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O.CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O JJBCTCGUOQYZHK-ZSCHJXSPSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 206010002329 Aneurysm Diseases 0.000 description 1
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010014513 Embolism arterial Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000916644 Homo sapiens Macrophage colony-stimulating factor 1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100028198 Macrophage colony-stimulating factor 1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 206010073734 Microembolism Diseases 0.000 description 1
- 108010008211 N-Formylmethionine Leucyl-Phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000000489 anti-atherogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 239000003633 blood substitute Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- PRQROPMIIGLWRP-BZSNNMDCSA-N chemotactic peptide Chemical compound CSCC[C@H](NC=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PRQROPMIIGLWRP-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000001 effect on platelet aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000171 higher toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 230000008316 intracellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000009919 sequestration Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002446 thrombocytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000000411 transmission spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 239000005526 vasoconstrictor agent Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, в частности может быть применено при разработке новых средств профилактики и лечения артерио-артериальных эмболий, ангиоспазмок, коронарных и церебральных дисциркуляций. The invention relates to medicine, in particular, can be applied in the development of new means of prevention and treatment of arterio-arterial embolism, angiospasm, coronary and cerebral discirculation.
В связи с увеличением числа сосудистых заболеваний, обусловленных атеросклеротическими изменениями сосудов мозга, ангиоспазмами, формированием микроэмболического синдрома, в настоящее время актуальным является изучение различных аспектов регуляции мозгового кровотока, определение характера потока крови, а также состояние гемореологии. Due to the increase in the number of vascular diseases caused by atherosclerotic changes in the blood vessels of the brain, angiospasm, the formation of microembolic syndrome, it is currently relevant to study various aspects of the regulation of cerebral blood flow, determine the nature of the blood flow, as well as the state of hemorheology.
Одной из причин вышеперечисленных заболеваний является усиление агрегационной способности клеток крови, а также повышение гидродинамического сопротивления крови в результате турбулизации ее потока. One of the causes of the above diseases is an increase in the aggregation ability of blood cells, as well as an increase in the hydrodynamic resistance of blood as a result of turbulization of its flow.
Закономерно встает вопрос, в какой мере существующие лекарственные средства могут обеспечить профилактику и лечение указанных патологических процессов. The question naturally arises of the extent to which existing drugs can provide the prevention and treatment of these pathological processes.
Ранее в подобных случаях, связанных с повышением агрегационной способности клеток крови, применяли антиагрегационные средства (в том числе аспирин), которые в обычных дозах были недостаточно эффективными. Это объясняется тем, что исследование агрегации тромбоцитов и других клеток крови, а также подбор дозировок антиагрегантов ранее осуществляли в условиях микрокюветы агрегометра, где частота столкновений клеток задается вращением мешалки. В реальных условиях агрегация определяется гораздо более сложным процессом, тесно связанным с турбулизацией потока крови (в местах сосудистых разветвлений, аневризм, в постстенотических зонах и т. д. ), вызывающей мощную активацию тромбоцитов, которая в присутствии даже низких концентраций ее индукторов может привести к развитию секреции из них физиологически активных агентов, вовлекающих в процесс активации новые массы тромбоцитов и других клеток крови. Все это формирует замкнутый круг цепной реакции само- и взаимоактивации клеток крови, которая обычно влечет за собой развитие микроэмболического синдрома, тромбоза и т. д. При этом, влияя на внутриклеточные механизмы активации тромбоцитов, аспирин в достаточной степени активно подавляет их агрегацию в кювете, но не устраняет активацию клеток крови, обусловленную гидродинамическими факторами в потоке крови. Таким образом действие обычных доз аспирина в условиях турбулизованного при патологии потока крови нуждается в усиление. Previously, in similar cases associated with an increase in the aggregation ability of blood cells, anti-aggregation agents (including aspirin) were used, which in normal doses were not effective enough. This is due to the fact that the study of platelet aggregation and other blood cells, as well as the selection of dosages of antiplatelet agents, were previously carried out under the conditions of an aggregometer microcuvette, where the frequency of cell collisions is determined by the rotation of the mixer. Under real conditions, aggregation is determined by a much more complex process, closely associated with turbulization of the blood flow (in places of vascular branches, aneurysms, in post-stenotic zones, etc.), which causes powerful platelet activation, which in the presence of even low concentrations of its inducers can lead to the development of the secretion of physiologically active agents from them, involving new masses of platelets and other blood cells in the activation process. All this forms a vicious circle of a chain reaction of self-and mutual activation of blood cells, which usually entails the development of microembolic syndrome, thrombosis, etc. Moreover, influencing the intracellular mechanisms of platelet activation, aspirin sufficiently actively suppresses their aggregation in the cell, but does not eliminate the activation of blood cells due to hydrodynamic factors in the blood stream. Thus, the effect of conventional doses of aspirin in conditions of blood flow turbulized during pathology needs to be enhanced.
До сих пор использовалась только одна возможность усилить действие аспирина посредством воздействия на фосфодиэстеразу, например, папаверином. Простое же увеличение дозы препарата или назначение одновременно нескольких антиагрегантов не всегда приемлемо ввиду повышения токсичности и появления побочных эффектов. Поэтому особенно привлекательной представляется возможность применения средств, реализующих принципиально иную возможность влияния на процесс внутрисосудистой агрегации и взаимоактивации клеток крови, а именно посредством уменьшения турбилизации кровотока в соответствии с эффектом Томса. So far, only one opportunity has been used to enhance the effect of aspirin by acting on phosphodiesterase, for example, papaverine. A simple increase in the dose of the drug or the appointment of several antiplatelet agents at the same time is not always acceptable due to increased toxicity and the appearance of side effects. Therefore, the possibility of using agents that implement a fundamentally different possibility of influencing the process of intravascular aggregation and mutual activation of blood cells, particularly by reducing the turbulence of blood flow in accordance with the Toms effect, is especially attractive.
Известен целый ряд высокомолекулярных линейных полимеров, обладающих способностью снижать гидродинамическое сопротивление жидкостей, в том числе крови. К ним относятся: А. Вещества искусственного происхождения - 1) полиакрил- амиды: а) Separan АР-30 - в эксперименте на животных показан антиатерогенный эффект, б) Separan AP-273 - вызывает у животных увеличение сердечного выброса; 2) полиэтиленоксиды: а) полиэтиленоксид WSR-301 предложен в качестве снижающих турбулентное трение добавок к жидкостям-кровезаменителям, для снижения системного артериального давления у животных, для восстановления мозгового кровотока при ишемии мозга животных, б) Бадимол - действие, аналогичное полиэтиленоксиду WSR-301. Б. Некоторые природные соединения: ДНК тимуса теленка, слизи рыб, полисахариды некоторых растений, белковые компоненты крови. Общими свойствами веществ, обладающих способностью снижать гидродинамическое сопротивление, являются длинноцепные структуры полимерных молекул с немногочисленными боковыми группами или полным их отсутствием; высокая мол. масса порядка 106 и более; большая гибкость молекулы и способность к растворению. There are a number of high molecular weight linear polymers with the ability to reduce the hydrodynamic resistance of liquids, including blood. These include: A. Substances of artificial origin - 1) polyacrylamides: a) Separan AP-30 - an anti-atherogenic effect is shown in an animal experiment, b) Separan AP-273 - causes an increase in cardiac output in animals; 2) polyethylene oxides: a) polyethylene oxide WSR-301 was proposed as reducing turbulent friction additives to blood substitute fluids, to reduce systemic blood pressure in animals, to restore cerebral blood flow during animal brain ischemia, b) Badimol - an action similar to polyethylene oxide WSR-301 . B. Some natural compounds: calf thymus DNA, fish mucus, polysaccharides of some plants, protein components of the blood. The general properties of substances with the ability to reduce hydrodynamic resistance are long-chain structures of polymer molecules with few lateral groups or their complete absence; high pier. mass of the order of 106 or more; greater flexibility of the molecule and the ability to dissolve.
Нами были проведены экспериментальные исследования с использованием нейтральных добавок полиэтиленоксида WSR-301 (Union Carbide, USA), которые модифицировали условия потока крови, в частности снижали его турбилизацию. We conducted experimental studies using neutral additives of polyethylene oxide WSR-301 (Union Carbide, USA), which modified the conditions of blood flow, in particular, reduced its turbulence.
Целью изобретения является усиление антиагрегационного эффекта аспирина. The aim of the invention is to enhance the antiaggregatory effect of aspirin.
Поставленная цель достигалась путем одновременного введения растворимой формы аспирина - лизин-аспирина (Synthelabo, France) и раствора полиэтиленоксида WSR-301, нормализующего гидродинамические характеристики потока крови. The goal was achieved by the simultaneous introduction of a soluble form of aspirin - lysine-aspirin (Synthelabo, France) and a solution of polyethylene oxide WSR-301, normalizing the hydrodynamic characteristics of the blood flow.
Экспериментальные исследования проводили следующим образом. Experimental studies were carried out as follows.
Была использована установка, обеспечивающая течение крови в системе соединительных трубок, средний диаметр которых равнялся 5 мм, с наличием участков, моделирующих зону стеноза (см. фиг. 8). Функцию стенозированного участка выполняла проточная микрокювета от спектрофлюориметра RF-540 (Shimutzu, Japan), позволяющая вести ряд измерений непосредственно в потоке. В цепь был включен капиллярный диализатор BL-612 (BELKO, Italy), общая площадь которого равнялась 1,2 м2. Движение крови и контроль объемной скорости кровотока (расход) осуществляли с использованием системы BL 759В (BELKO, Italy). Система включала одну воздушную ловушку. Перфузию проводили с расходом 200 мл/мин, число Рейнольдса в участке стеноза Re = 4700, в области насоса Re = 3200-3400. Дополнительный контур осуществлял инфузию омывающей жидкости через диализатор. Одновременно контролировали давление до диализатора и после него (в воздушной ловушке), а также давление внешнего контура. Контроль давления осуществляли с использованием датчика давления этой системы и двух датчиков давления (Elema, FRG), данные регистрировали на самописце SE 120 (ВВС Goerz Netrawatt, USA). Исследования проводили при температуре 32оС, обеспечиваемой термостатом МLW 8 (ЧСФР).An apparatus was used to ensure blood flow in the system of connecting tubes, the average diameter of which was 5 mm, with the presence of sections simulating the stenosis zone (see Fig. 8). The function of the stenosed area was performed by a flow microcuvette from an RF-540 spectrofluorimeter (Shimutzu, Japan), which made it possible to conduct a series of measurements directly in the stream. A BL-612 capillary dialyzer (BELKO, Italy) was included in the chain, with a total area of 1.2 m 2 . Blood movement and volumetric blood flow velocity control (flow rate) were carried out using the BL 759B system (BELKO, Italy). The system included one air trap. Perfusion was carried out at a flow rate of 200 ml / min, the Reynolds number in the stenosis area R e = 4700, in the pump area R e = 3200-3400. An additional circuit infused the washer fluid through the dialyzer. At the same time, the pressure was monitored before and after the dialyzer (in an air trap), as well as the pressure of the external circuit. Pressure control was carried out using the pressure sensor of this system and two pressure sensors (Elema, FRG), data were recorded on a SE 120 recorder (Air Force Goerz Netrawatt, USA). Studies were carried out at 32 ° C afforded
В работе использовали: богатую тромбоцитами плазму (БТП) здоровых доноров, не получавших антиагрегантов, которую разводили с целью уменьшения концентрации тромбоцитов примерно до 80-100 тыс. клеток/мкл; суспензию отмытых по описанной ранее известной методике тромбоцитов (100000 клеток/мкл); суспензию отмытых полиморфноядерных лейкоцитов (ПМЯЛ) (2 х 106 клеток/мл), выделенных из цитратстабилизированной крови доноров осаждением эритроцитов декстраном Т-500. Отмытые клетки насыщали флюоресцирующим кальциевым хелатором - квином (quin - 2АМ, Amercham) путем его добавления к суспензии клеток на предпоследнем этапе отмывки в конечной концентрации 200 мкМ и инкубации в течение 30 мин. Затем клетки отмывали от незахваченного индикатора и ресуспендировали в рабочем буфере.The following were used in the work: platelet-rich plasma (BTP) of healthy donors who did not receive antiplatelet agents, which was diluted to reduce the platelet concentration to about 80-100 thousand cells / μl; a suspension washed according to the previously described platelet technique (100,000 cells / μl); a suspension of washed polymorphonuclear leukocytes (PMNL) (2 x 10 6 cells / ml) isolated from citrate-stabilized donor blood by erythrocyte sedimentation with T-500 dextran. The washed cells were saturated with a fluorescent calcium chelator - quin (quin - 2AM, Amercham) by adding it to the cell suspension at the penultimate stage of washing at a final concentration of 200 μM and incubation for 30 min. Then the cells were washed from an unoccupied indicator and resuspended in the working buffer.
Селективную активацию тромбоцитов осуществляли коллагеном (1 мкг/мл), а селективную активацию ПМЯЛ - формил-метионил-лейцил-фенилаланином (ФМЛФ) (10-7 М). Полиэтиленоксид WSR-301 вводили в канал перфузии в виде матричного раствора с концентрацией 10-3 г/мл (10 г полимера в 10 мл физиологического раствора) до получения конечной концентрации 2 х 10 г/мл циркулирующей крови. Лизин-аспирин использовали в концентрации 10-6 М (ЕС50).Selective platelet activation was performed with collagen (1 μg / ml), and selective activation of PMNL was performed with formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine (FMLF) (10 -7 M). WSR-301 polyethylene oxide was introduced into the perfusion channel in the form of a matrix solution with a concentration of 10 -3 g / ml (10 g of polymer in 10 ml of physiological saline) to obtain a final concentration of 2 x 10 g / ml of circulating blood. Lysine-aspirin was used at a concentration of 10 -6 M (EC 50 ).
Изобретение иллюстрируется фиг. 1-8. The invention is illustrated in FIG. 1-8.
На фиг. 1 показано изменение количества одиночных тромбоцитов в ходе рециркуляции крови. 1 - рециркуляция без инфузии коллагена; 2 - рециркуляция при введении коллагена на 20-25 минуте; 3 - рециркуляция при введении коллагена на фоне полимера; 4 - то же на фоне бадимола (другой полимер с аналогичным действием). По оси ординат - изменение числа одиночных тромбоцитов в % от исходной величины; по оси абсцисс - время рециркуляции в мин. In FIG. 1 shows the change in the number of single platelets during blood recirculation. 1 - recirculation without collagen infusion; 2 - recirculation with the introduction of collagen at 20-25 minutes; 3 - recycling with the introduction of collagen on the background of the polymer; 4 - the same against badimole (another polymer with a similar effect). The ordinate axis is the change in the number of single platelets in% of the initial value; abscissa - recirculation time in minutes.
На фиг. 2 - изменение уровня свободного гемоглобина в ходе рециркуляции крови. Обозначение кривых смотри на фиг. 1. По оси абсцисс - уровень гемоглобина в отн. ед. In FIG. 2 - change in the level of free hemoglobin during blood recirculation. Curve designation see fig. 1. On the x-axis - the level of hemoglobin in the rel. units
На фиг. 3 - динамика изменения разности давления на диализаторе в ходе рециркуляции крови (линией обозначен период инфузии коллагена), 1 - контроль; 2 - на фоне полимера. In FIG. 3 - dynamics of changes in the pressure difference on the dialyzer during blood recirculation (the line indicates the period of collagen infusion), 1 - control; 2 - against the background of the polymer.
На фиг. 4 - изменение уровня свободного метаболита ТХА - ТХВ в ходе рециркуляции крови. Обозначение кривых смотри на фиг. 1. По оси ординат - концентрация ТХВ в пг/мл. In FIG. 4 - change in the level of the free metabolite TXA - TXB during blood recirculation. Curve designation see fig. 1. On the ordinate axis - the concentration of TXB in pg / ml.
На фиг. 5 - динамика накопления АТФ в ходе 30-минутной циркуляции БТП при стимуляции тромбоцитов коллагеном (1 мкг/мл). 1 - контроль; 2 - на фоне аспирина (5 х 10-5 М); 3 - на фоне полимера; 4 - при одновременном введении аспирина и полимера. По оси ординат - интенсивность люминесценции люциферин-люциферазы в усл. ед. ; по оси абсцисс - время в мин.In FIG. 5 - dynamics of ATP accumulation during a 30-minute BTP circulation during platelet stimulation with collagen (1 μg / ml). 1 - control; 2 - against the background of aspirin (5 x 10 -5 M); 3 - against the background of the polymer; 4 - with the simultaneous administration of aspirin and polymer. On the ordinate axis is the luminescence intensity of luciferin-luciferase in conv. units ; abscissa - time in minutes.
На фиг. 6 - влияние активированной в ходе циркуляции БТП на уровень Са2+ в цитозоле тромбоцитов. Обозначение кривых такое же, как на фиг. 5. По оси ординат - концентрация Са2+ в тромбоцитах до (1) и после (2) воздействия плазмы. **- при Р < 0,01.In FIG. 6 - the effect of activated during the circulation of BTP on the level of Ca 2+ in the cytosol of platelets. The designation of the curves is the same as in FIG. 5. The ordinate shows the concentration of Ca 2+ in platelets before (1) and after (2) plasma exposure. ** - at P <0.01.
На фиг. 7 - тромбоцитарно-лейкоцитарные взаимодействия в потоке А. Влияние активации тромбоцитов коллагенов (2 мкг/мл) на уровень Са2+ в цитозоле ПМЯЛ при их совместной циркуляции. В. Влияние активации ПМЯЛ ФМЛФ (10-7) на уровень Са2+ в цитозоле тромбоцитов при их совместной циркуляции. Обозначения такие же, как на фиг. 6. *- при Р < 0,05; **- при Р < <0,01.In FIG. 7 - platelet-leukocyte interactions in stream A. Effect of platelet activation of collagen (2 μg / ml) on the level of Ca 2+ in the cytosol of PMNL during their joint circulation. B. Effect of activation of PMNL PMLF (10 -7 ) on the level of Ca 2+ in the cytosol of platelets during their joint circulation. The designations are the same as in FIG. 6. * - at P <0.05; ** - at P <<0.01.
На фиг. 8 - экспериментальная установка, моделирующая реальное кровообращение. In FIG. 8 is an experimental setup simulating real blood circulation.
Регистрировали следующие параметры:
1. Перепад давления на диализаторе по датчикам Elema;
2. Количество заблокированных капилляров диализатора по перепаду давления на диализаторе в условиях инфузии раствора до и после эксперимента;
3. Число одиночных тромбоцитов в системе циркуляции по Wu и Hook (1975). Подсчет одиночных клеток велся по McGade и Clark (1982);
4. Уровень гемолиза - стандартным оптическим методом;
5. Уровень тромбоксана В2 (ТХВ2) в диализной жидкости наружного контура - методом радиоиммунного анализа с использованием наборов Института изотопов ВНР на сцинтилляционном счетчике МАRK (USA) с использованием сцинтиллятора Брэя;
6. Уровень внутриклеточного кальция рассчитывали по изменению флюоресценции квина, измеренному в кювете спектрофлюориметра по общепринятой методике;
7. Количество высвободившейся из плотных гранул активированных тромбоцитов в БТВ АТФ с помощью люциферин-люциферазы (Colbiochem, USA) по описанной методике.The following parameters were recorded:
1. Differential pressure on the dialyzer according to Elema sensors;
2. The number of blocked dialyzer capillaries according to the differential pressure on the dialyzer in the conditions of solution infusion before and after the experiment;
3. The number of single platelets in the circulation system according to Wu and Hook (1975). Single cell counts were done by McGade and Clark (1982);
4. The level of hemolysis - a standard optical method;
5. The level of thromboxane B2 (TXB2) in the dialysis fluid of the external circuit - by the method of radioimmunoassay using kits of the Institute of isotopes of the Hungarian People's Republic on a MARK scintillation counter (USA) using a Bray scintillator;
6. The level of intracellular calcium was calculated by the change in the fluorescence of quin, measured in a cuvette of a spectrofluorimeter according to the generally accepted method;
7. The amount of activated platelets released from the dense granules in BTB ATP using luciferin luciferase (Colbiochem, USA) according to the described method.
Процедура исследования. Research procedure.
1. Исследовали возможную флюоресценцию полимера при длине волны возбуждения 280-350. При этом в диапазоне волн флюоресценции 300-600 в растворе полимера концентрации 2 х 10-6 г/мл флюоресценции не обнаружено. В диапазоне волн 400-450 по сравнению с физиологическим раствором имелось увеличение светорассеивания, не превышающее 50% исходной интенсивности сигнала. В диапазоне волн выше 450 (длина волны возбуждения 340) изменений интенсивности не обнаружено. Из этого был сделан следующим вывод: при исследовании уровня интрацеллюлярной концентрации Са2+ при волне возбуждения 340 и волне флюоресценции 495 полимер не создает помех ввиду отсутствия собственной флюоресценции и низкого уровня светорассеивания. Следовательно, эффектом внутреннего фильтра можно пренебречь.1. Investigated the possible fluorescence of the polymer at an excitation wavelength of 280-350. Moreover, in the fluorescence wavelength range of 300-600 in a polymer solution, a concentration of 2 x 10 -6 g / ml of fluorescence was not detected. In the wavelength range 400-450, compared with physiological saline, there was an increase in light scattering not exceeding 50% of the initial signal intensity. In the wavelength range above 450 (excitation wavelength 340), no changes in intensity were detected. The conclusion was drawn from this: when studying the level of intracellular Ca 2+ concentration at an excitation wave of 340 and a fluorescence wave of 495, the polymer does not interfere due to the absence of intrinsic fluorescence and a low level of light scattering. Therefore, the effect of the internal filter can be neglected.
2. Исследовали возможность взаимодействия полимера с сывороточным альбумином человека (САЧ). Показали, что в спектре флюоресценции САЧ в присутствии полимера изменений максимальной флюоресценции не выявляется, что указывает на отсутствие связывания. 2. Investigated the possibility of interaction of the polymer with human serum albumin (HSA). It was shown that no changes in the maximum fluorescence were detected in the fluorescence spectrum of HAS in the presence of the polymer, which indicates the absence of binding.
3. Проверили спектр поглощения (пропускания) полиэтиленоксида WSR-301 в матричном растворе с концентрацией 10-3 г/мл (10 мг полимера в 10 мл физиологического раствора). Показали, что собственного спектра пропускания полиэтиленоксид WSR-301 не имеет.3. We checked the absorption spectrum (transmission) of WSR-301 polyethylene oxide in a matrix solution with a concentration of 10 -3 g / ml (10 mg of polymer in 10 ml of physiological saline). It was shown that polyethylene oxide WSR-301 does not have its own transmission spectrum.
4. Изучили влияние полимера на гидродинамическое сопротивление при 30-минутной прокачке дистиллированной воды в вышеописанной установке (расход 200 мл/мин) по регистрируемому перфузионному давлению до и после диализатора (модели микроциркуляторного русла). Полимер вводили в виде болюса из расчета конечной концентрации 2 х 10-6 г/мл. При этом изменения гидродинамического сопротивления на диализаторе не обнаружено. При повторном введении того же количества полимера на протяжении 30 последующих минут изменения гидродинамического сопротивления также не обнаружено. Вывод: при прокачке дистиллированной воды в системе циркуляции полиэтиленоксид WSR-301 не влияет на гидродинамическое сопротивление.4. We studied the effect of the polymer on the hydrodynamic resistance during a 30-minute pumping of distilled water in the above installation (flow rate of 200 ml / min) by the recorded perfusion pressure before and after the dialyzer (microvasculature models). The polymer was administered as a bolus based on a final concentration of 2 x 10 -6 g / ml. In this case, changes in hydrodynamic resistance on the dialyzer are not detected. When reintroducing the same amount of polymer over the next 30 minutes, no change in hydrodynamic resistance was detected either. Conclusion: when pumping distilled water in the circulation system, polyethylene oxide WSR-301 does not affect the hydrodynamic resistance.
5. Исследовали влияние полиэтиленоксида на агрегацию тромбоцитов in vitro по методу Борн, а также на агрегационный эффект аспирина в условиях микрокюветы агрегометра (Payton, USA). Скорость вращения мешалки равнялась 800 об/мин. Объем исследуемой БТП крови составлял 450 мкл. В качестве проагреганта использовали 20 мкл раствора АДФ в концентрации 10-6 г/мл. Агрегацию осуществляли при температуре 37оС. Подсчитывали процентное отношение агрегации, представленное в табл. 1.5. The effect of polyethylene oxide on platelet aggregation in vitro by the Born method, as well as on the aggregation effect of aspirin under microcuvette aggregometer conditions (Payton, USA), was investigated. The rotation speed of the mixer was 800 rpm. The volume of studied BTP blood was 450 μl. As a proaggregant, 20 μl of an ADP solution at a concentration of 10-6 g / ml was used. Aggregation was carried out at a temperature of 37 about C. The percentage of aggregation, presented in table. 1.
В условиях микрокюветы агрегометра полиэтиленоксид WSR-301 не оказывает действия на агрегацию тромбоцитов и на антиагрегационный эффект аспирина. Under microcuvette aggregometer conditions, WSR-301 polyethylene oxide has no effect on platelet aggregation and the anti-aggregation effect of aspirin.
6. Исследовали влияние полиэтиленоксида WSR-301 на функциональное состояние элементов крови в условиях системы циркуляции крови, моделирующих реальный кровоток. Для этого после эквилибрации системы в поток 100 мл забуференного физиологического раствора вводили 100 мл цельной крови здорового донора и по достижении перемешивания, контролируемого по уровню перфузионного (до диализатора) давления, осуществляли забор крови и диализной жидкости. Заборы повторяли на 5, 15, 30, 60 и 90 минутах циркуляции. Для стимуляции микроэмболии после 15 минуты в систему осуществляли 10-минутная инфузия раствора коллагена с помощью инфузомата Perfuser E (B: BRAUN, FRG). Конечная концентрация коллагена в крови достигала 2 мгк/мл. 6. The effect of WSR-301 polyethylene oxide on the functional state of blood elements under the conditions of a blood circulation system simulating real blood flow was investigated. To do this, after equilibrating the system, 100 ml of whole blood of a healthy donor was injected into a stream of 100 ml of buffered saline, and after mixing, controlled by the level of perfusion (before the dialyzer) pressure, blood and dialysis fluid were taken. Fences were repeated at 5, 15, 30, 60 and 90 minutes of circulation. To stimulate microembolism after 15 minutes, a 10-minute infusion of a collagen solution was carried out using a Perfuser E infusomat (B: BRAUN, FRG). The final concentration of collagen in the blood reached 2 mgk / ml.
Пассивная прокачка в течение 90 мин разведенной крови без введения коллагена не приводила к значительному понижению числа циркулирующих клеток и гемолизу эритроцитов. Перфузионное давление в ходе циркуляции существенно не менялось. Инфузия коллагена приводила к развитию тромбоцитарного тромбоообразования и к увеличению гемолиза эритроцитов (см. фиг. 1 и 2). Одновременно наблюдалось увеличение разности давлений до и после диализатора (см. фиг. 3), свидетельствующее о повышении сопротивления вследствие частичной блокады капилляров. Это сопровождалось процессом агрегации клеток, сопряженным с резким убыванием числа одиночных тромбоцитов в крови, и секвестрацией по крайней мере части агрегатов в капиллярах диализатора. К 90 минуте появилась тенденция к некоторому повышению числа тромбоцитов, что, по-видимому, связано с дезагрегацией части агрегатов. Этим же можно объяснять и тенденцию к понижению разности давлений на диализаторе (фиг. 1, 2 и 3). Уровень высвобождения тромбоксана А2, определяемый по накоплению стабильного его метаболита ТХВ2, повышался и при фоновой циркуляции крови, однако, после введения коллагена его концентрация скачкообразно увеличивалась и продолжала нарастать до конца циркуляции (см. фиг. 4). Это свидетельствует об интенсивной секреции тромбоцитами этого агента. Причем развитие реакции высвобож- дения тромбоцитов, очевидно, может происходить независимо от их агрегации (табл. 2). Passive pumping of diluted blood for 90 min without collagen administration did not lead to a significant decrease in the number of circulating cells and erythrocyte hemolysis. Perfusion pressure during circulation did not change significantly. Collagen infusion led to the development of platelet thrombosis and to an increase in erythrocyte hemolysis (see Figs. 1 and 2). At the same time, an increase in the pressure difference before and after the dialyzer was observed (see Fig. 3), indicating an increase in resistance due to a partial blockade of capillaries. This was accompanied by a process of cell aggregation, associated with a sharp decrease in the number of single platelets in the blood, and sequestration of at least part of the aggregates in the capillaries of the dialyzer. By the 90th minute, there was a tendency to a slight increase in the number of platelets, which, apparently, is associated with the disaggregation of some of the aggregates. The same can explain the tendency towards a decrease in the pressure difference on the dialyzer (Figs. 1, 2, and 3). The level of thromboxane A2 release, determined by the accumulation of its stable metabolite TXB2, increased with background blood circulation, however, after the administration of collagen, its concentration increased stepwise and continued to increase until the end of circulation (see Fig. 4). This indicates an intense platelet secretion of this agent. Moreover, the development of the platelet release reaction, obviously, can occur regardless of their aggregation (Table 2).
Таким образом, в условиях инфузии коллагена в системе циркуляции происходит формирование развернутого микроэмболического синдрома, сопровождающегося накоплением в среде вазоконстрикторов. Thus, under the conditions of collagen infusion in the circulation system, the formation of an expanded microembolic syndrome occurs, accompanied by the accumulation of vasoconstrictors in the medium.
Действие полиэтиленоксида WSR-301 на развитие коллагениндуцированного микроэмболического синдрома. The effect of polyethylene oxide WSR-301 on the development of collagen-induced microembolic syndrome.
Введение в канал перфузии раствора полиэтиленоксида WSR-301 в начале циркуляции не приводило к выраженному понижению перфузионного давления. Оно понижалось всего на 3-4 мм рт. ст. (фиг. 3). Однако при индуцировании на его фоне коллагеном микроэмболического синдрома наблюдался значительно меньший подъем давления, которое очень быстро возвращалось к исходному уровню. При этом гемолиз эритроцитов был существенно ниже, чем в контроле; в значительной степени предотвращался процесс уменьшения числа одиночных эритроцитов в крови (фиг. 1 и 2); наблюдался более значительный рост одиночных клеток к 90 минуте циркуляции, что свидетельствует о меньшей прочности образовавшихся агрегатов и их распаде; имело место значительное снижение продукции ТХА2 (фиг. 4), уровень которого падал даже ниже, чем при фоновой прокачке крови без полимера. Это, по-видимому, указывает на особое значение гемодинамических условий для активации каскада арахидоновой кислоты в клетках и развития их реакции высвобождения (табл. 3). The introduction of a solution of polyethylene oxide WSR-301 into the perfusion channel at the beginning of circulation did not lead to a marked decrease in perfusion pressure. It decreased by only 3-4 mm RT. Art. (Fig. 3). However, when the collagen of the microembolic syndrome was induced against it, a significantly lower pressure rise was observed, which very quickly returned to its initial level. Moreover, erythrocyte hemolysis was significantly lower than in the control; the process of reducing the number of single red blood cells in the blood was largely prevented (Fig. 1 and 2); there was a more significant growth of single cells by 90 minutes of circulation, which indicates a lower strength of the formed aggregates and their decay; there was a significant decrease in the production of TXA2 (Fig. 4), the level of which fell even lower than with the background pumping of blood without polymer. This, apparently, indicates the special importance of hemodynamic conditions for the activation of the arachidonic acid cascade in cells and the development of their release reaction (Table 3).
Таким образом, введение раствора полиэтиленоксида WSR-301 в систему циркуляции крови весьма эффективно предотвращает развитие коллагениндуцированного микроэмболического синдрома. Thus, the introduction of a solution of polyethylene oxide WSR-301 into the blood circulation system very effectively prevents the development of collagen-induced microembolic syndrome.
Действие полиэтиленоксила WSR-301 на высвобождение АТФ из активированных тромбоцитов в циркулирующей БТП
Циркуляция разведенной до 80-100 тыс. клеток в 1 мкл БТП длительностью 90 мин при выключенной из потока проточной кюветы, моделирующей стенозированный участок сосуда, и диализатора, моделирующего микроциркуляторное русло, показала, что накопление АТФ в этих условиях не происходит. В присутствии коллагена в используемых подпороговых концентрациях увеличение уровня АТФ было незначительным (менее 5 усл. ед. люминесценции). При включении в цепь кюветы увеличение АТФ было недостаточно для количественных измерений, однако, после введения в канал перфузии коллагена уровень АТФ резко возрастал, что соответствует литературным данным.The effect of polyethyleneoxyl WSR-301 on the release of ATP from activated platelets in a circulating BTP
Circulation of diluted up to 80-100 thousand cells in 1 μl of BTP for 90 minutes with the flow cell, simulating the stenosed portion of the vessel, and the dialyzer simulating the microvasculature turned off from the flow, showed that ATP accumulation does not occur under these conditions. In the presence of collagen in the used subthreshold concentrations, the increase in ATP level was insignificant (less than 5 conventional units of luminescence). When a cuvette was included in the chain, the increase in ATP was not enough for quantitative measurements, however, after the collagen was introduced into the perfusion channel, the ATP level increased sharply, which is consistent with published data.
При введении в циркуляторное русло аспирина в дозе 2,1 х 10 М, соответствующей ЕС50 для способности этого препарата предотвращать агрегацию и секрецию тромбоцитов в кювете агрегометра, изменения количества высвобождаемой АТФ в потоке практически не наблюдалось. Эффект удалось зарегистрировать только при создании концентрации препарата в потоке не ниже 8 х 10-6 М. Введение в циркуляторное русло полимера вызвало снижение скорости накопления АТФ почти вдвое, причем одновременное введение аспирина с полимером почти полностью устраняло реакцию высвобождения кровяных пластинок (фиг. 5).When aspirin was introduced into the circulatory bed at a dose of 2.1 x 10 M corresponding to the EC50 for the ability of this drug to prevent platelet aggregation and secretion in an aggregometer cuvette, there was practically no change in the amount of ATP released in the stream. The effect was recorded only when the concentration of the drug in the flow was not lower than 8 x 10 -6 M. The introduction of the polymer into the circulatory bed caused a decrease in the rate of ATP accumulation by almost half, and the simultaneous administration of aspirin with the polymer almost completely eliminated the reaction of the release of blood plates (Fig. 5) .
Перепад люминесценции, характеризующий изменение уровня внеклеточного АТФ (отн. ед. ), показан в табл. 4. The luminescence difference characterizing the change in the level of extracellular ATP (rel. Units) is shown in table. 4.
Действие полиэтиленоксида WSR-301 на образование тромбоцитоактивных агентов при циркуляции. The effect of polyethylene oxide WSR-301 on the formation of platelet-forming agents during circulation.
Был исследован суммарный уровень высвобождения из циркулирующих клеток в плазму тромбоцитоактивных агентов. Тестирование проводили на суспензии отмытых аутологичных тромбоцитов (100 тыс. клеток в 1 мкл), насыщенных квином. Мерой активации кровяных пластинок тромбоцитоактивными агентами служило изменение уровня внутриклеточного Са2+. Тестируемые образцы плазмы добавляли к суспензии тромбоцитов в 20-кратном разведении.The total release of circulating cells into plasma of platelet-active agents was investigated. Testing was carried out on a suspension of washed autologous platelets (100 thousand cells in 1 μl) saturated with quin. A measure of platelet activation by thrombocytic agents was a change in the level of intracellular Ca 2+ . Test plasma samples were added to a platelet suspension in a 20-fold dilution.
Богатая тромбоцитами плазма, взятая до ее прокачки в системе циркуляции, не влияла на уровень Са2+ в тромбоцитах. Добавление же разведенной в 20 раз, взятой после циркуляции, БТП к суспензии отмытых тромбоцитов приводило к немедленному и резкому повышению уровня Са2+ в цитозоле клеток. Аспирин в использованных концентрациях не приводил к достоверному понижению степени прироста Са2+ в цитозоле кровяных пластинок. Введение полимера само по себе в значительной степени нивелировало это явление. Вместе с тем, сочетанное добавление полимера и аспирина почти полностью устраняло эффект активации тромбоцитов ТБП, превосходя в этом смысле изолированное действие полимера (фиг. 6).Platelet-rich plasma taken before it was pumped in the circulation system did not affect the level of Ca 2+ in platelets. The addition of 20 times diluted BTP taken after circulation to the suspension of washed platelets led to an immediate and sharp increase in the level of Ca 2+ in the cell cytosol. Aspirin in the used concentrations did not lead to a significant decrease in the degree of Ca 2+ increase in the cytosol of blood platelets. The introduction of the polymer in itself largely leveled off this phenomenon. However, the combined addition of polymer and aspirin almost completely eliminated the effect of platelet activation of TBP, exceeding in this sense the isolated action of the polymer (Fig. 6).
Содержание Са2+ в тромбоцитах при активации их предварительно активированной коллагеном БТП (нМ) показано в табл. 5.The content of Ca 2+ in platelets upon activation of their pre-activated collagen BTP (nM) is shown in table. 5.
Действие полиэтиленоксида WSR-301 на тромбоцитарно-лейкоцитарные взаимодействия
Исследовали способность секрета активированных тромбоцитов стимулировать активацию ПМЯЛ и наоборот. Для этого создавали поток тромбоцитарно-лейкоцитарной суспензии (100 тыс. тромбоцитов в 1 мкл - 2 х 106 лейкоцитов в 1 мл), причем квином насыщали либо тромбоциты, либо ПМЯЛ. В канал перфузии вводили селективный активатор либо тромбоцитов при насыщении квином ПМЯЛ, либо - наоборот. Очевидно, что контрольный уровень Са2+ в цитозоле ПМЯЛ в первом случае, или в цитозоле тромбоцитов во втором случае, позволяет проконтролировать возможность выброса из клеток агентов, обладающих перекрестной активностью и способных обеспечить перекрестную тромбоцитарно-лейкоцитарную активацию. Поскольку измерения проводили непосредственно в проточной кювете (при выключенном диализаторе), можно было зарегистрировать динамичный процесс взаимодействия клеток. Регистрация максимального изменения флюоресценции клеток после введения активатора осуществляли компьютером прибора и выводили на дисплей.The effect of polyethylene oxide WSR-301 on platelet-leukocyte interactions
We investigated the ability of the secretion of activated platelets to stimulate the activation of PMNL and vice versa. For this, a platelet-leukocyte suspension flow was created (100 thousand platelets in 1 μl - 2
Показано, что при добавлении к тромбоцитарно-лейкоцитарной суспензии коллагена, который сам по себе влияет на уровень Са2+ в ПМЯЛ, имеет место увеличение содержания этого катиона. Аналогичная ситуация наблюдается и в случае селективной активации ПМЯЛ ФМЛФ. Аспирин, прямо не влияющий на ПМЯЛ, достоверно не ограничивал стимулирующее воздействие со стороны активированных тромбоцитов. Поскольку селективным ингибитором активации ПМЯЛ авторы не располагали, попытку ограничить активирующий эффект ПМЯЛ на тромбоциты не проводили.It was shown that when collagen is added to a platelet-leukocyte suspension, which in itself affects the level of Ca 2+ in PMNL, an increase in the content of this cation takes place. A similar situation is observed in the case of selective activation of PMNL PMLF. Aspirin, which does not directly affect PMNL, did not significantly limit the stimulating effect of activated platelets. Since the authors did not have a selective inhibitor of activation of PMNL, no attempt was made to limit the activating effect of PMNL on platelets.
При осуществлении циркуляции тромбоцитарно-лейкоцитарной суспензии на фоне полимера было установлено, что в этих условиях из взаимоактивация уменьшается, что проявляется в снижении уровня прироста Са2+ в цитозоле клеток при перекрестной активации. Добавка аспирина на фоне полимера еще более снижала активирующий ПМЯЛ эффект тромбоцитов, и уровень Са2+ в их цитозоле практически не повышался (см. фиг. 7).When circulating platelet-leukocyte suspension against the background of the polymer, it was found that under these conditions the mutual activation decreases, which manifests itself in a decrease in the level of Ca 2+ increase in the cytosol of cells upon cross-activation. The addition of aspirin against the background of the polymer further reduced the activating PMNL effect of platelets, and the level of Ca 2+ in their cytosol practically did not increase (see Fig. 7).
Содержание Са2+ в тромбоцитах при активации лейкоцитов (нМ) представлено в табл. 6.The content of Ca 2+ in platelets upon activation of leukocytes (nM) is presented in table. 6.
Содержание Са2+ в лейкоцитах при активации тромбоцитов (нМ) представлено в табл. 7.The content of Ca 2+ in leukocytes during platelet activation (nM) is presented in table. 7.
Таким образом, на модели реального кровообращения показано, что введение в поток крови раствора полиэтиленоксида WSR-301 весьма эффективно предотвращает развитие коллагениндуцированного микроэмболического синдрома, что проявля- ется в подавлении активации, агрегации клеток крови и высвобождения из них физиологически активных агентов, вызывающих само- и взаимоактивацию клеток крови, а также ангиоспазмы. Thus, the model of real blood circulation showed that the introduction of a solution of WSR-301 polyethylene oxide into the blood stream very effectively prevents the development of collagen-induced microembolic syndrome, which manifests itself in the suppression of activation, aggregation of blood cells and the release of physiologically active agents from them, causing self- and mutual activation of blood cells, as well as angiospasm.
Одновременное введение раствора полимера с аспирином практически полностью подавляет эти процессы, что вдвое превышает индивидуальный эффект аспирина. The simultaneous administration of a polymer solution with aspirin almost completely suppresses these processes, which is twice the individual effect of aspirin.
В литературе нет данных о существовании аналогичных препаратов, используемых в медицине с целью подавления активации клеток крови, развития их реакции высвобождения и агрегации, вследствие воздействия на них изменившихся гидродинамических условий потока крови. Используется только одна возможность усилить антиагрегационный эффект аспирина посредством воздействия опять же на клеточные механизмы (на другой фермент - фосфодиэстеразу) папаверином, что также не устраняет активацию клеток крови, обусловленную гидродинамическими факторами в потоке крови. There is no data in the literature on the existence of similar drugs used in medicine to suppress the activation of blood cells, develop their release and aggregation reaction, due to the impact on them of the changed hydrodynamic conditions of blood flow. There is only one opportunity to enhance the antiaggregatory effect of aspirin by acting again on the cellular mechanisms (on another enzyme, phosphodiesterase) with papaverine, which also does not eliminate the activation of blood cells due to hydrodynamic factors in the blood stream.
(56) Патент США N 3590124, кл. 424-78, 1978. (56) U.S. Patent No. 3,590,124, cl. 424-78, 1978.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4899622 RU2007170C1 (en) | 1991-01-04 | 1991-01-04 | Means for intensifying antiaggregation effect of aspirin |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4899622 RU2007170C1 (en) | 1991-01-04 | 1991-01-04 | Means for intensifying antiaggregation effect of aspirin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2007170C1 true RU2007170C1 (en) | 1994-02-15 |
Family
ID=21553917
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU4899622 RU2007170C1 (en) | 1991-01-04 | 1991-01-04 | Means for intensifying antiaggregation effect of aspirin |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2007170C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2255741C2 (en) * | 2000-03-14 | 2005-07-10 | Феррер Интернасионал, С.А. | Cdp-choline - prophylactic agent for treatment of cerebral ischemia and method for treatment with its using |
-
1991
- 1991-01-04 RU SU4899622 patent/RU2007170C1/en active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2255741C2 (en) * | 2000-03-14 | 2005-07-10 | Феррер Интернасионал, С.А. | Cdp-choline - prophylactic agent for treatment of cerebral ischemia and method for treatment with its using |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hussain et al. | Potentiating glymphatic drainage minimizes post-traumatic cerebral oedema | |
| Kim et al. | Hyperacute direct thrombus imaging using computed tomography and gold nanoparticles | |
| Sundt et al. | Experimental cerebral infarction: modification by treatment with hemodiluting, hemoconcentrating, and dehydrating agents | |
| Reinhold et al. | Tumour microcirculation as a target for hyperthermia | |
| Brennan et al. | Cerebral blood flow and metabolism during cardiopulmonary bypass: Evidence of micro embolic encephalopathy | |
| Galanzha et al. | Advances in small animal mesentery models for in vivo flow cytometry, dynamic microscopy, and drug screening | |
| JP2005538383A (en) | Method and apparatus for monitoring platelet function | |
| JPH09501066A (en) | Removal of selected factors from whole blood or its components | |
| Wang et al. | Ultrasound responsive erythrocyte membrane-derived hybrid nanovesicles with controlled drug release for tumor therapy | |
| Govender et al. | Extracorporeal circulation impairs microcirculation perfusion and organ function | |
| Eppihimer et al. | Effects of leukocyte-capillary plugging on the resistance to flow in the microvasculature of cremaster muscle for normal and activated leukocytes | |
| Tsai | Influence of cell‐free Hb on local tissue perfusion and oxygenation in acute anemia after isovolemic hemodilution | |
| van Raath et al. | Tranexamic acid-encapsulating thermosensitive liposomes for site-specific pharmaco-laser therapy of port wine stains | |
| Yamaguchi et al. | Cell-free plasma layer in cerebral microvessels | |
| US20050019744A1 (en) | Ultrasound-assisted ischemic reperfusion | |
| Hinshaw | Release of vasoactive agents and the vascular effects of endotoxin | |
| Ohhashi et al. | Proposed new lymphology combined with lymphatic physiology, innate immunology, and oncology | |
| RU2007170C1 (en) | Means for intensifying antiaggregation effect of aspirin | |
| Granger et al. | Intestinal microvascular exchange in the rat during luminal perfusion with formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine | |
| Symon et al. | Calcium ions and calcium antagonists in ischaemia | |
| Rittenhouse et al. | Effect of dipyridamole on microaggregate formation in the pump oxygenator | |
| RU2420534C2 (en) | Method of producing stabiliser molecules depleted aqueous solution of albumin, adsorbent and its application in method, application of aqueous solution of albumin (versions) | |
| Lee et al. | Ozagrel reverses streptozotocin-induced constriction of arterioles in rat retina | |
| Pantely et al. | Increased vascular resistance due to a reduction in red cell deformability in the isolated hind limb of swine | |
| Bernstein et al. | Extracorporeal enzymatic heparin removal: Use in a sheep dialysis model |