RU2004133761A - Модифицированный фактор viii - Google Patents

Claims (16)

1. Модифицированная молекула фактора VIII человека, являющаяся существенно неиммуногенной или менее иммуногенной, чем немодифицированный фактор VIII человека, и имеющая существенно такую же биологическую специфичность и активность при использовании в условиях in vivo, которая включает специфически измененные аминокислотные остатки по сравнению с немодифицированной исходной молекулой, при этом указанные измененные аминокислотные остатки вызывают снижение количества или устранение одного или более эпитопов Т-клеток, которые действуют в исходной немодифицированной молекуле как связывающие лиганды класса II МНС и стимулируют Т-клетки.

2. Модифицированная молекула фактора VIII человека в соответствии с п.1, в которой указанные изменения осуществлены в одном или более положениях в пределах одной или более цепочек соседних аминокислотных остатков, которые присутствуют в исходной молекуле, как показано в таблице 1.

3. Модифицированная молекула фактора VIII человека в соответствии с п.2, в которой указанные изменения осуществлены в одном или более положениях в пределах одной или более цепочек соседних аминокислотных остатков, которые присутствуют в исходной молекуле, как показано в таблице 2.

4. Модифицированная молекула фактора VIII человека в соответствии с п.3, в которой указанные изменения представляют собой замены 1-9 аминокислотных остатков.

5. Модифицированная молекула фактора VIII человека в соответствии с п.3, в которой один, более или все аминокислотные остатки в следующих положениях последовательности, как показано в таблице 1, были заменены

197, 198, 199, 201, 202, 407, 411, 412, 419, 515, 517, 613,

617, 636, 637, 638, 639, 823, 1011, 1013, 1208, 1209, 1210,

1254, 1255, 1257, 1262, 1264, 1268, 1119, 1120, 1121, 1122,

1123.

6. Модифицированная молекула фактора VIII человека в соответствии с п.3, в которой в цепочке Р10 таблицы 2 была осуществлена одна, более или все из следующих замен аминокислотных остатков:

I1208A, I1208T, I1208N;

I1209C;

M1210K, M1210N.

7. Модифицированная молекула фактора VIII человека в соответствии с п.3, в которой в пептиде Р8 таблицы 2 осуществлена одна, более или все из следующих замен аминокислотных остатков:

М1013К;

I1011А, I1011C, I1011D, I1011E, I1011G, I1011H, I1011K,

I1011P, I1011Q, I1011R, I1011S, I1011T.

8. Модифицированная молекула фактора VIII человека в соответствии с п.3, в которой в пептиде Р7 таблицы 2 осуществлена одна, более или все из следующих замен аминокислотных остатков:

V823A, V823D, V823E, V823G, V823H, VN, V823P,

V823S, V823T.

9. Модифицированная молекула фактора VIII человека в соответствии с любым из пп.1-8, которая при исследовании как цельного белка в биологическом анализе индуцированной клеточной пролиферации Т-клеток человека демонстрирует индекс стимуляции (SI), меньший, чем исходная молекула, и меньший, чем 2, при исследовании в параллельном опыте при использовании клеток того же донора, при этом указанный индекс взят как значение клеточной пролиферации, подсчитанное после стимуляции с помощью белка, и разделенное на значение клеточной пролиферации, подсчитанное в контрольных клетках, которые не получали белка, при этом указанную клеточную пролиферацию измеряют с помощью любого из приемлемых способов.

10. Последовательность ДНК, кодирующая молекулу фактора VIII, определенную в любом из пп.1-9.

11. Фармацевтическая композиция, содержащая модифицированную молекулу фактора VIII, определенную в любом из пп.1-9, необязательно вместе с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или наполнителем.

12. Пептидная молекула, выбранная из таблицы 1, которая имеет потенциальную активность связывания с классом II МНС и получена из первичной последовательности немодифицированного фактора VIII, при этом указанная пептидная молекула имеет индекс стимуляции > 1,8 в биологическом анализе клеточной пролиферации, причем указанный индекс взят как значение клеточной пролиферации, подсчитанное после стимуляции с помощью пептида, и разделенное на значение клеточной пролиферации, подсчитанное в контрольных клетках, которые не получали пептида, при этом указанную клеточную пролиферацию измеряют с помощью любого из приемлемых способов.

13. Модифицированная молекула пептида, полученная из пептидной молекулы, определенной в п.12, путем аминокислотных замен, и которая имеет сниженный или отсутствующий потенциал связывающей активности с классом II МНС, который выражается индексом стимуляции, меньшим, чем 2, при этом указанный индекс взят как значение клеточной пролиферации, подсчитанное после стимуляции с помощью пептида, и разделенное на значение клеточной пролиферации, подсчитанное в контрольных клетках, которые не получали пептида, при этом указанную клеточную пролиферацию измеряют с помощью любого из приемлемых способов.

14. Последовательность ДНК, кодирующая пептид, определенный в соответствии с п.12 или 13.

15. Применение пептида, определенного в соответствии с п.13, для производства модифицированной молекулы фактора VIII, определенной в п.1.

16. Применение пептида, определенного в соответствии с п.12, для получения вакцины для того, чтобы снизить иммуногенность фактора VIII у пациента.