Claims (21)
1. Белок YdhL из Bacillus amyloliquefaciens, выбранный из группы, состоящей из1. Protein YdhL from Bacillus amyloliquefaciens selected from the group consisting of
(А) белок, включающий последовательность аминокислот, приведенную в писке последовательностей под номером 2 (SEQ ID N0:2); и(A) a protein comprising the amino acid sequence shown in the list of sequences at number 2 (SEQ ID N0: 2); and
(В) белок, включающий последовательность аминокислот, содержащую делеции, замены, вставки или добавление одной или нескольких аминокислот в последовательности аминокислот, приведенной в списке последовательностей под номером 2 (SEQ ID N0:2), и обладающий активностью, придающей бактерии, принадлежащей к роду Bacillus или к роду Escherichia, устойчивость к пурину, выбранному из группы, состоящей из аналогов пуринового основания, инозина и гуанозина, когда активность указанного белка в указанной бактерии повышена.(B) a protein comprising an amino acid sequence containing deletions, substitutions, insertions, or addition of one or more amino acids in the amino acid sequence shown in the sequence list under number 2 (SEQ ID N0: 2), and having activity giving bacteria belonging to the genus Bacillus or to the genus Escherichia, resistance to purine selected from the group consisting of analogues of purine base, inosine and guanosine, when the activity of the specified protein in the specified bacteria is increased.
2. Белок по п.1, отличающийся тем, что указанным пурином является инозин.2. The protein according to claim 1, characterized in that said purine is inosine.
3. Фрагмент ДНК, кодирующий белок YdhL по п.1.3. A DNA fragment encoding a YdhL protein according to claim 1.
4. Фрагмент ДНК по п.3, включающий нуклеотидную последовательность, приведенную в списке последовательностей под номером 1 (SEQ ID N0:l).4. The DNA fragment according to claim 3, including the nucleotide sequence shown in the list of sequences under the number 1 (SEQ ID N0: l).
5. Бактерия, принадлежащая к роду Bacillus или к роду Escherichia, обладающая способностью к продукции пуринового нуклеозида, отличающаяся тем, что указанная бактерия обладает повышенной активностью белка, выбранного из группы, состоящей из5. A bacterium belonging to the genus Bacillus or to the genus Escherichia, with the ability to produce purine nucleoside, characterized in that said bacterium has increased activity of a protein selected from the group consisting of
(A) белок, кодируемый геном ydhL из Bacillus amyloliquefaciens,(A) a protein encoded by the ydhL gene from Bacillus amyloliquefaciens,
(B) белок, кодируемый геном ydhL из Bacillus subtilis, и(B) a protein encoded by the ydhL gene from Bacillus subtilis, and
(C) белок, кодируемый ортологом любого из генов ydhL, указанных в (А) или (В).(C) a protein encoded by the ortholog of any of the ydhL genes indicated in (A) or (B).
6. Бактерия по п.5, отличающаяся тем, что пуриновый нуклеозид выбран из группы, состоящей из инозина, ксантозина и гуанозина.6. The bacterium according to claim 5, characterized in that the purine nucleoside is selected from the group consisting of inosine, xanthosine and guanosine.
7. Бактерия по п.5, отличающаяся тем, что активность указанного белка повышена путем трансформации указанной бактерии фрагментом ДНК, кодирующим указанный белок.7. The bacterium according to claim 5, characterized in that the activity of the specified protein is increased by transforming the specified bacteria with a DNA fragment encoding the specified protein.
8. Бактерия по п.5, отличающаяся тем, что активность указанного белка повышена путем изменения последовательности, регулирующей экспрессию фрагмента ДНК, кодирующим указаный белок, в хромосоме бактерии.8. The bacterium according to claim 5, characterized in that the activity of the specified protein is increased by changing the sequence that regulates the expression of the DNA fragment encoding the specified protein in the bacterial chromosome.
9. Бактерия по п.7, отличающаяся тем, что указанная трансформация осуществляется с помощью низкокопийного вектора.9. The bacterium according to claim 7, characterized in that said transformation is carried out using a low copy vector.
10. Способ получения пуринового нуклеозида, включающий следующие стадии:10. A method of obtaining a purine nucleoside, comprising the following stages:
(а) выращивание бактерии по любому из пп.5-9 в питательной среде, и(a) growing bacteria according to any one of claims 5 to 9 in a nutrient medium, and
(б) сбор пуринового нуклеозида из культуральной жидкости.(b) collecting purine nucleoside from the culture fluid.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что указанным пуриновым нуклеозидом является инозин.11. The method according to claim 10, characterized in that said purine nucleoside is inosine.
12. Способ по п.10, отличающийся тем, что указанным пуриновым нуклеозидом является ксантозин.12. The method according to claim 10, characterized in that said purine nucleoside is xanthosine.
13. Способ по п.10, отличающийся тем, что указанным пуриновым нуклеозидом является гуанозин.13. The method according to claim 10, characterized in that the specified purine nucleoside is guanosine.
14. Способ по любому из пп.10-13, отличающийся тем, что бактерия модифицированна таким образом, что экспрессия генов биосинтеза пуриновых нуклеозидов у указанной бактерии усилена.14. The method according to any one of claims 10 to 13, characterized in that the bacterium is modified in such a way that the expression of purine nucleoside biosynthesis genes in said bacterium is enhanced.
15. Способ получения пуринового нуклеотида, включающий следующие стадии:15. A method of obtaining a purine nucleotide, comprising the following stages:
(а) выращивание бактерии по любому из пп.5-9 в питательной среде и выделение полученного пуринового нуклеозида,(a) growing the bacteria according to any one of claims 5 to 9 in a nutrient medium and isolating the resulting purine nucleoside,
(б) фосфорилирование полученного пуринового нуклеозида, и(b) phosphorylation of the resulting purine nucleoside, and
(в) сбор пуринового нуклеотида.(c) collection of purine nucleotide.
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что пуриновым нуклеотидом является 5'-инозиновая кислота.16. The method according to clause 15, wherein the purine nucleotide is 5'-inosinic acid.
17. Способ по п.15, отличающийся тем, что пуриновым нуклеотидом является 5'-ксантиловая кислота.17. The method according to clause 15, wherein the purine nucleotide is 5'-xanthyl acid.
18. Способ по п.15, отличающийся тем, что пуриновым нуклеотидом является 5'-гуаниловая кислота.18. The method according to clause 15, wherein the purine nucleotide is 5'-guanilic acid.
19. Способ по любому из пп.15-18, отличающийся тем, что бактерия модифицированна таким образом, что экспрессия генов биосинтеза пуриновых нуклеозидов у указанной бактерии усилена.19. The method according to any one of claims 15-18, characterized in that the bacterium is modified in such a way that the expression of purine nucleoside biosynthesis genes in said bacterium is enhanced.
20. Способ получения 5'-гуаниловой кислоты, включающий следующие стадии:20. A method of obtaining 5'-guanilic acid, comprising the following stages:
(а) выращивание бактерии по п.5 в питательной среде и выделение полученного ксантозина,(a) growing the bacteria according to claim 5 in a nutrient medium and isolating the resulting xanthosine,
(б) фосфорилирование ксантозина,(b) xanthosine phosphorylation,
(в) аминирование 5'-ксантиловой кислоты, и(c) amination of 5'-xanthyl acid, and
(г) сбор 5'-гуаниловой кислоты.(g) collection of 5'-guanilic acid.
21. Способ по п.20, отличающийся тем, что бактерия модифицированна таким образом, что экспрессия генов биосинтеза пуриновых нуклеозидов у указанной бактерии усилена.21. The method according to claim 20, characterized in that the bacterium is modified in such a way that the expression of purine nucleoside biosynthesis genes in said bacterium is enhanced.