Claims (1)
Способ количественного определения концентрации антител, специфичных к антигенам стероид-продуцирующих клеток человека, в биологических жидкостях человека, содержащих специфичные антитела, путем проведения твердофазного иммуноферментного анализа, включающий нанесение на микропланшет антигена с последующим помещением исследуемой биологической жидкости на планшет, инкубирование, проведение цветной реакции и спектрофотометрическую оценку показателей цветной реакции, отличающийся тем, что целевой антиген стероид-продуцирующих клеток человека получают, подвергая соответствующие образцы нормальных тканей человека, содержащих стероид-продуцирующие клетки, ферментативному гидролизу в стандартном режиме до появления видимых признаков мацерации, с последующей обработкой тканей хелатирующим агентом, из полученной смешанной суспензии клеток центрифугированием в ступенчатом градиенте плотности изолируют стероид-продуцирующие клетки, которые подвергают деструкции путем повторения процедуры “замораживание-оттаивание” не менее четырех раз и процедуру “оттаивание” сочетают с обработкой ультразвуком, из полученной в результате деструкции взвеси клеточных компонентов центрифугированием отделяют микросомальную фракцию стероид-продуцирующих клеток, которую используют в качестве целевого антигена, который в выбранных разведениях ковалентно связывают с поверхностью лунок микропланшета, затем в серию лунок вносят в заданных разведениях калибровочный материал, приготовленный на основе стандартного препарата антител соответствующей специфичности, в другую серию лунок - исследуемые пробы биологической жидкости, и после проведения твердофазного иммуноферментного анализа по спектрофотометрическим показателям строят калибровочную кривую и по ней определяют концентрацию специфичных антител.A method for quantitatively determining the concentration of antibodies specific for antigens of steroid-producing human cells in human biological fluids containing specific antibodies by conducting an enzyme-linked immunosorbent assay, including applying an antigen to a microplate, followed by placing the test biological fluid on a plate, incubating, carrying out a color reaction and spectrophotometric evaluation of color reaction parameters, characterized in that the target antigen of steroid-producing adhesives human ok is obtained by subjecting appropriate samples of normal human tissues containing steroid-producing cells to enzymatic hydrolysis in a standard mode until visible signs of maceration appear, followed by treating the tissues with a chelating agent, steroid-producing cells are isolated from the obtained mixed cell suspension by centrifugation in a stepwise density gradient that are subjected to destruction by repeating the procedure “freezing-thawing” at least four times and the procedure “thawing” ”Is combined with sonication, the microsomal fraction of steroid-producing cells is separated from the suspension of cell components by centrifugation, which is used as the target antigen, which is covalently linked to the surface of the microplate wells in the selected dilutions, then a calibration calibrator is introduced into the series of wells in the specified dilutions material prepared on the basis of a standard preparation of antibodies of the corresponding specificity, into another series of wells — biology samples under study fluid, and after conducting an enzyme-linked immunosorbent assay by spectrophotometric indicators, a calibration curve is constructed and the concentration of specific antibodies is determined from it.