RU2097060C1 - Method of preparing the preparation for the directed delivery of antitumor drug in cancer cells - Google Patents
Method of preparing the preparation for the directed delivery of antitumor drug in cancer cells Download PDFInfo
- Publication number
- RU2097060C1 RU2097060C1 RU96113903A RU96113903A RU2097060C1 RU 2097060 C1 RU2097060 C1 RU 2097060C1 RU 96113903 A RU96113903 A RU 96113903A RU 96113903 A RU96113903 A RU 96113903A RU 2097060 C1 RU2097060 C1 RU 2097060C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- fetoprotein
- antitumor drug
- alpha
- mixture
- drug substance
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 title claims abstract description 15
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims description 5
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 24
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract 5
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 6
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 claims description 5
- HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N Epirubicin Natural products COc1cccc2C(=O)c3c(O)c4CC(O)(CC(OC5CC(N)C(=O)C(C)O5)c4c(O)c3C(=O)c12)C(=O)CO HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960001904 epirubicin Drugs 0.000 claims description 5
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 claims description 4
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 claims description 3
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 2
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 claims 4
- 101001044869 Shewanella frigidimarina (strain NCIMB 400) Ice-binding protein 1 Proteins 0.000 claims 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 claims 1
- 235000004213 low-fat Nutrition 0.000 claims 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims 1
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 abstract description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 15
- 239000012620 biological material Substances 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 13
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- NTBLHFFUSJRJQO-DOFZRALJSA-N (5z,8z,11z,14z)-icosa-5,8,11,14-tetraenoyl chloride Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(Cl)=O NTBLHFFUSJRJQO-DOFZRALJSA-N 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003817 anthracycline antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 229960003399 estrone Drugs 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины и в частности онкологии. The invention relates to the field of medicine and in particular oncology.
Известен способ получения препарата для направленной доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку, включающий измельчение абортивного материала человека, экстракцию бутиловым спиртом, диализ против 0,05 М раствора NaCl, концентрирование до содержания альфа-фетопротеина 100 Мкг/мг стерилизацию и прединкубацию стерилизованного продукта с 20 мг конъюгата доксорубицин-эстрон за 1-2 ч, до внутривенного введения препарата (патент RU N 2026688, A 61 K 38/00, 1995). A known method of producing a drug for targeted delivery of antitumor drugs to a cancer cell, including grinding abortive human material, extraction with butyl alcohol, dialysis against a 0.05 M NaCl solution, concentration to 100 μg / mg alpha-fetoprotein sterilization and pre-incubation of a sterilized product with 20 mg doxorubicin-estrone conjugate 1-2 hours before the intravenous administration of the drug (patent RU N 2026688, A 61 K 38/00, 1995).
Недостатком способа является то, что известный препарат не подлежит хранению более 2 ч. The disadvantage of this method is that the known drug cannot be stored for more than 2 hours
Известен также способ получения для направленной доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку, включающий смешение сыворотки из пуповинной крови человека, предварительно подвергнутой фильтрации, центрифугированию и стерилизации, с конъюгатом доксорубицинарахидоновая кислота, при этом смешение проводят из расчета до 8 мг альфа-фетопротеина сыворотки с 20 мг конъюгата за 1-2 ч до внутривенного введения (патент RU N 2026687, A 61 K 38/00, 1995). There is also a method of obtaining for targeted delivery of antitumor drugs to a cancer cell, comprising mixing serum from human umbilical cord blood, previously filtered, centrifuged and sterilized, with a conjugate of doxorubicin arachidonic acid, the mixture being carried out at a rate of up to 8 mg of serum alpha-fetoprotein with 20 mg conjugate 1-2 hours before intravenous administration (patent RU N 2026687, A 61 K 38/00, 1995).
Недостатком способа также является невозможность хранения препарата более 2 ч, а также недостаточная степень его чистоты. The disadvantage of this method is the inability to store the drug for more than 2 hours, as well as an insufficient degree of purity.
Задача изобретения создание лекарственного средства высокой степени чистоты и подлежащего хранению длительное время. The objective of the invention is the creation of a drug of high purity and subject to storage for a long time.
Поставленная задача решается описываемым способом получения лекарственного средства для направленной доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку, включающим конъюгацию противоопухолевого лекарственного вещества с арахидоновой кислотой, смешение конъюгата с обезжиренным раствором альфа-фетопротеина в физиологическом растворе при массовом соотношении конъюгата к альфа-фетопротеину равном 1:(1-2), выдержку смеси при 4oC±0,5, фильтрацию и замораживание.The problem is solved by the described method for producing a drug for the targeted delivery of antitumor drugs to a cancer cell, including conjugation of an antitumor drug with arachidonic acid, mixing the conjugate with a fat-free solution of alpha-fetoprotein in physiological solution with a mass ratio of conjugate to alpha-fetoprotein (1: -2), holding the mixture at 4 o C ± 0.5, filtering and freezing.
При этом рекомендуется использовать альфа-фетопротеин, выделенный из абортальной или плацентарной сыворотки или пуповинной крови путем двух ступенчатой афинной хроматографии, вначале на иммуносорбенте с иммобилизованными моноспецифическими к альфа-фетопротеину антителами, а затем на сорбенте с иммобилизованными полиспецифическими антителами к балластным белкам. In this case, it is recommended to use alpha-fetoprotein isolated from abortal or placental serum or umbilical cord blood by two step affinity chromatography, first on an immunosorbent with immobilized monospecific alpha-fetoprotein antibodies, and then on a sorbent with immobilized polyspecific antibodies to ballast.
Предпочтительно, выдерживать смесь при 4oC±5 в течение 10-12 ч, или смесь замораживать и выдерживать для хранения до минус 30oC. В качестве противоопухолевых лекарственных веществ рекомендованы эпирубицин, адриамицин, доксорубицин.Preferably, the mixture is kept at 4 ° C ± 5 for 10-12 hours, or the mixture is frozen and stored for minus 30 ° C. Epirubicin, adriamycin, doxorubicin are recommended as anticancer drugs.
Предпочтительно проводить конъюгацию противоопухолевых лекарственных веществ с арахидоновой кислотой при их мольном соотношении 1:(1-1,5). It is preferable to conjugate anticancer drugs with arachidonic acid at a molar ratio of 1: (1-1.5).
Пример. Выделение альфа-фетопротеина (АФП) из абортальной или плацентарной сыворотки или пуповинной крови проводят следующим образом. Example. Isolation of alpha-fetoprotein (AFP) from abortal or placental serum or umbilical cord blood is carried out as follows.
Сыворотку, например, абортальной крови подают на хроматографическую колонку, заполненную сефарозой с иммобилизованными кроличьими моноспецифическими к АФП антителами. Далее колонку элюируют раствором Na2CO3 и элюат подают на вторую хроматографическую колонку, заполненную софарозой иммобилизованной кроличьими полиспецифическими антителами к балластным белкам. Таким образом получают альфа-фетопротеин с 98%-ной чистотой.Serum, for example, abortion blood is fed to a chromatographic column filled with Sepharose with immobilized rabbit monospecific anti-AFP antibodies. The column is then eluted with a Na 2 CO 3 solution, and the eluate is fed to a second chromatographic column filled with sofarose immobilized rabbit multispecific anti-ballast protein antibodies. Thus, an alpha-fetoprotein of 98% purity is obtained.
Получение конъюгата противоопухолевого лекарственного вещества с арахидоновой кислотой проводят следующим образом. Obtaining a conjugate of an antitumor drug with arachidonic acid is carried out as follows.
Хлорангидрид арахидоновой кислоты растворяют в 1 мл сухого бензола, добавляют суспензию эпирубицина (1,5 моль) в том же растворителе и перемешивают встряхиванием в течение 6-8 ч при комнатной температуре. Arachidonic acid chloride is dissolved in 1 ml of dry benzene, a suspension of epirubicin (1.5 mol) in the same solvent is added and stirred by shaking for 6-8 hours at room temperature.
Непрореагировавший эпирубицин экстрагируют 0,001 N раствором соляной кислоты. Органический слой отделяют на делительной воронке и упаривают на роторном испарителе и сушат под вакуумом до постоянного веса. Unreacted epirubicin is extracted with a 0.001 N hydrochloric acid solution. The organic layer was separated on a separatory funnel and evaporated on a rotary evaporator and dried under vacuum to constant weight.
Получен конъюгат с мольным соотношением эпирубицин:арахидоновая кислота 1:1. A conjugate with a molar ratio of epirubicin: arachidonic acid of 1: 1 was obtained.
Получение комплекса конъюгата с АФП (альфа-фетопротеин). Один мг конъюгата суспендируют в 0,2 мл этанола, отбирают 20 мкл и прибавляют к предварительно обезжиренному раствору АФП (1 мг в 1 мл физраствора), тщательно перемешивают и оставляют на ночь при 4oC. Далее раствор фильтруют и замораживают для хранения (-30oC). Массовое соотношение конъюгата к АФП 1:1.Obtaining a complex of conjugate with AFP (alpha-fetoprotein). One mg of the conjugate is suspended in 0.2 ml of ethanol, 20 μl is taken and added to a pre-fat-free solution of AFP (1 mg in 1 ml of saline), mixed thoroughly and left overnight at 4 o C. Next, the solution is filtered and frozen for storage (- 30 o C). The mass ratio of conjugate to AFP is 1: 1.
Аналогичным образом получены лекарственные средства: альфа-фетопротеин с конъюгатами арахидоновой кислоты с адриамицином, доксорубицином и некоторыми другими антрациклиновыми антибиотиками, имеющими первичную аминогруппу, при мольном отношении конъюгата к альфе-фетопротеину 1:1 и 1:2. Similarly obtained drugs: alpha-fetoprotein with conjugates of arachidonic acid with adriamycin, doxorubicin and some other anthracycline antibiotics having a primary amino group, with a molar ratio of conjugate to alpha-fetoprotein of 1: 1 and 1: 2.
Все полученные средства отличаются высокой степенью чистоты не менее 99% поскольку предложенный способ предусматривает использование чистого альфа-фетопротеина (≈98% чистоты). All funds obtained are characterized by a high degree of purity of at least 99% since the proposed method involves the use of pure alpha-fetoprotein (≈98% purity).
Срок хранения полученных лекарственных средств составляет не менее 1 мес, что позволяет избежать их приготовления за 1-2 ч перед введением. The shelf life of the obtained drugs is at least 1 month, which allows them to be avoided 1-2 hours before administration.
Оценка цитотоксических эффектов полученных средств: конъюгатов альфа-фетопротеина с арахидоновой кислотой и некоторых из исследованных противоопухолевых лекарств проведена in vitro. В качестве модели использована культура клеток карциномы яичника человека (линия CaOv). Assessment of the cytotoxic effects of the obtained drugs: conjugates of alpha-fetoprotein with arachidonic acid and some of the studied antitumor drugs was carried out in vitro. A human ovarian carcinoma cell culture (CaOv line) was used as a model.
Соединение считают цитотоксичным при CE50 1•10-4 M. CE вычисляли методом проб и анализа.The compound was considered cytotoxic at
Цитотоксическое действие лекарственных средств АФП с конъюгатами противоопухолевых лекарственных веществ и арахидоновой кислоты относительно клеток культуры карциномы яичника человека. The cytotoxic effect of AFP drugs with conjugates of antitumor drugs and arachidonic acid relative to human ovarian carcinoma culture cells.
Из таблицы видно, что цитотоксичность лекарственных средств достаточно высока. The table shows that the cytotoxicity of drugs is quite high.
Проведено сравнение полученных препаратов с препаратами, полученными по способу-прототипу. A comparison of the obtained drugs with drugs obtained by the prototype method.
Обнаружено, что их цитототоксическая активность находится на одном уровне, CE50 1•10-9 M, однако, срок хранения средств, полученных предложенным способом значительно выше.It was found that their cytototoxic activity is on the same level,
Claims (6)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU96113903A RU2097060C1 (en) | 1996-07-23 | 1996-07-23 | Method of preparing the preparation for the directed delivery of antitumor drug in cancer cells |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU96113903A RU2097060C1 (en) | 1996-07-23 | 1996-07-23 | Method of preparing the preparation for the directed delivery of antitumor drug in cancer cells |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2097060C1 true RU2097060C1 (en) | 1997-11-27 |
| RU96113903A RU96113903A (en) | 1998-01-20 |
Family
ID=20183054
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU96113903A RU2097060C1 (en) | 1996-07-23 | 1996-07-23 | Method of preparing the preparation for the directed delivery of antitumor drug in cancer cells |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2097060C1 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2154468C1 (en) * | 1999-11-09 | 2000-08-20 | Родионов Сергей Юрьевич | Method of alpha-fetoprotein-containing tablet making |
| RU2179452C1 (en) * | 2000-06-22 | 2002-02-20 | Пак Владимир Николаевич | Method to treat malignant neoplasms and combined preparation of antitumor action to perform the method |
| RU2192884C2 (en) * | 2000-11-09 | 2002-11-20 | Государственное учреждение Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН | Vaccine for antitumor immunity stimulation |
| RU2341530C2 (en) * | 2003-07-02 | 2008-12-20 | Солакс Корпорейшн | Thermostable crystal epirubicine hydrochloride and method of production thereof |
-
1996
- 1996-07-23 RU RU96113903A patent/RU2097060C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| RU, патент, 2026687, кл.A 61K 38/00, 1995. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2154468C1 (en) * | 1999-11-09 | 2000-08-20 | Родионов Сергей Юрьевич | Method of alpha-fetoprotein-containing tablet making |
| RU2179452C1 (en) * | 2000-06-22 | 2002-02-20 | Пак Владимир Николаевич | Method to treat malignant neoplasms and combined preparation of antitumor action to perform the method |
| RU2192884C2 (en) * | 2000-11-09 | 2002-11-20 | Государственное учреждение Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН | Vaccine for antitumor immunity stimulation |
| RU2341530C2 (en) * | 2003-07-02 | 2008-12-20 | Солакс Корпорейшн | Thermostable crystal epirubicine hydrochloride and method of production thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6310039B1 (en) | Antineoplastic conjugates of transferrin, albumin and polyethylene glycol | |
| US5106951A (en) | Antibody conjugates | |
| JPH05502886A (en) | Conjugates and complexes that contain intracellularly cleavable residues and can be taken up by cells | |
| EP1859811B1 (en) | Use of conjugates of amatoxins or phallotoxins with macromolecules for tumor and inflammation therapy | |
| HU208161B (en) | Process for producing cytotoxic active ingredient - antibody conjugates and pharmaceutical compositions | |
| BG108274A (en) | Conjugate of hydroxyalkyl starch and an active agent | |
| BR112018014759B1 (en) | Maitasinoid-derived compounds and their conjugates, composition comprising the same, their methods of manufacture and use | |
| JP2007513122A (en) | Drug delivery vehicle and use thereof | |
| JP2001501173A (en) | Liposomes containing cisplatin compounds | |
| PT99954B (en) | PROCESS FOR THE PREPARATION OF LABOR LIGACATION MOLECULES FOR ACIDS AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS | |
| EP0366770B1 (en) | Liposomes coupled to hormones | |
| US20160279253A1 (en) | N-terminal modified peg-trail | |
| Winger et al. | Lipopeptide conjugates: biomolecular building blocks for receptor activating membrane-mimetic structures | |
| JPH02191300A (en) | Antibody-drug combination | |
| CN118203658A (en) | Recombinant Claudin18.2 fully human monoclonal antibody injection preparation and preparation method thereof | |
| RU2097060C1 (en) | Method of preparing the preparation for the directed delivery of antitumor drug in cancer cells | |
| US20070140972A1 (en) | Targeting compositions and preparation therof | |
| JP5069920B2 (en) | Mannose 6-phosphate-polyethylene glycol conjugate | |
| CN110840844A (en) | Preparation and application of breast cancer-targeting liposomes modified with biotin and glucose | |
| RU2196604C1 (en) | Polypeptide displaying analog of receptor-binding epidermal growth factor fragment from 21 to 31 amino acids, its conjugate with doxorubicin and pharmaceutical composition based on thereof | |
| JPWO2000023476A1 (en) | Neovascularization-specific peptides | |
| CN105315350A (en) | Anti-tumor angiogenesis polypeptide mPEG-Mal-Cys-AS16 | |
| JP4643009B2 (en) | Novel compounds for cancer treatment | |
| EP4653012A1 (en) | Pharmaceutical composition containing eribulin derivative drug conjugate | |
| CN110917139A (en) | Preparation and application of multi-branch biotin modified breast cancer targeted liposome |