RU2091389C1 - Пептид, обладающий иммуномодулирующей активностью - Google Patents
Пептид, обладающий иммуномодулирующей активностью Download PDFInfo
- Publication number
- RU2091389C1 RU2091389C1 RU95120266/04A RU95120266A RU2091389C1 RU 2091389 C1 RU2091389 C1 RU 2091389C1 RU 95120266/04 A RU95120266/04 A RU 95120266/04A RU 95120266 A RU95120266 A RU 95120266A RU 2091389 C1 RU2091389 C1 RU 2091389C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptide
- synthesis
- peptides
- amino acid
- added
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 43
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 title claims description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title abstract description 15
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title description 2
- -1 heteroaromatic amino acid Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 17
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 4
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 5
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 4
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 4
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 4
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 4
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 4
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N tetraphosphorus decaoxide Chemical compound O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical compound C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 229940100630 metacresol Drugs 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- PVFCXMDXBIEMQG-JTQLQIEISA-N (2s)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)pentanedioic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 PVFCXMDXBIEMQG-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- AQTUACKQXJNHFQ-LURJTMIESA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanedioic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O AQTUACKQXJNHFQ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- LIFNDDBLJFPEAN-BPSSIEEOSA-N (2s)-4-amino-2-[[(2s)-2-[[2-[[2-[[(2s)-5-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-5-oxopyrrolidine-2-carbonyl]amino]propanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 LIFNDDBLJFPEAN-BPSSIEEOSA-N 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 240000004784 Cymbopogon citratus Species 0.000 description 1
- 235000017897 Cymbopogon citratus Nutrition 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical class OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 1
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010044279 T-activin Proteins 0.000 description 1
- 102000007501 Thymosin Human genes 0.000 description 1
- 108010046075 Thymosin Proteins 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- DOKDMGOWZOTZRA-NTISSMGPSA-N benzyl (2s)-2-amino-3-(1h-indol-3-yl)propanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.O=C([C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)OCC1=CC=CC=C1 DOKDMGOWZOTZRA-NTISSMGPSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N dibenzyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1COCC1=CC=CC=C1 MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- QEWYKACRFQMRMB-UHFFFAOYSA-N fluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)CF QEWYKACRFQMRMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 238000009958 sewing Methods 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PSWFFKRAVBDQEG-YGQNSOCVSA-N thymopentin Chemical class NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PSWFFKRAVBDQEG-YGQNSOCVSA-N 0.000 description 1
- LCJVIYPJPCBWKS-NXPQJCNCSA-N thymosin Chemical compound SC[C@@H](N)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H]([C@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(O)=O LCJVIYPJPCBWKS-NXPQJCNCSA-N 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к соединениям, обладающим иммуномодулирующими свойствами. В качестве иммуномодулятора предлагается пептид структуры
где R - H, низший ацил или низший алкил, а X - ароматическая или гетероароматическая аминокислота или ее производное. 3 табл.
где R - H, низший ацил или низший алкил, а X - ароматическая или гетероароматическая аминокислота или ее производное. 3 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к новым пептидным структурам, обладающим иммуномодулирующими свойствами.
Известно применение в медицине большого количества иммуностимуляторов, таких как препараты женьшеня и лимонника, производные никотиновой кислоты, тималин и т.д. (Машковский М.Д. Лекарственные средства, т. 11, М. Медицина, 1988, с. 169).
Недостатком большинства природных препаратов является невысокая активность в связи с низким содержанием активного начала, наличие подобных эффектов.
Известно значительное количество иммуностимуляторов пептидной природы, например, тактивин (патент Франции N 2570278б, кл. A 61 K 39/41), тимозин (Goldstein A. L. et al, Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1972, v. 69, p. 1856-1863), полученных из природного сырья. Эти препараты представляют собой набор полипептидов различной длины, воздействующих на различные звенья иммунного ответа, а также на ряд других физиологических функций организма, что ведет к появлению нежелательных побочных эффектов. Кроме того, практическое использование таких препаратов затруднено в связи со сложностью способов их извлечения из природного сырья, малым выходом, значительной вариабельностью их физико-химических свойств.
Поиск синтетических пептидов с селективной активностью на счет изменений структуры представляется более целесообразным. Синтетическими пептидными иммуностимуляторами являются пептид Glu-Asp-Ser-Ser-Thr-Gly-Trp-Asp-OH (патент США N 4478828, кл. A 61 K 37/00, C 07 C 103/52, 1984), аналоги тимопентина (Европейский патент, кл. C 07 K 7/64, 1985, патент США N 5013723, кл. A 61 K 37/02, 1991) и т.п.
Еще больше интерес представляет создание пептидных иммуностимуляторов на основе коротких, селективно действующих высоко активных пептидов, синтез которых является экономически выгодным.
Прототипом заявляемого изобретения являлся пептид H-α-L-Glu-L-Trp-OH, недостатком которого является менее высокая иммуномодулирующая активность.
Задачей, стоящей перед авторами при создании настоящего изобретения, являлось разработка более эффективных и безопасных иммуномодуляторов на основе коротких пептидов.
Было найдено, что данная задача решается путем использования хотя бы одного из пептидов общей формулы:
где R H, низший ацил или низший алкил,
X ароматическая или гетероароматическая аминокислота или ее производное, например эфир, амид, гидразид и т.д.
где R H, низший ацил или низший алкил,
X ароматическая или гетероароматическая аминокислота или ее производное, например эфир, амид, гидразид и т.д.
Пептиды получают стандартной технологией пептидного синтеза на твердой фазе (J. M. Steward and J. D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co. San Francisco, 1969), или путем синтеза в растворе (E. Schroder and K. Lubke, The Peptides, Vol. 1, Academic Press (New York), 1965) с последующим отщеплением защитных групп и очисткой конечного продукта.
В качестве промежуточной защиты α-аминогруппы аминокислот при твердофазном методе синтеза используют трет-бутилоксикарбонильную группу. Для защиты боковых радикалов аминокислот используют следующие группы: для гистидина бензилоксиметильную; тирозина 2,6-дихлорбензильную; для триптофана формильную и т. д. Для конденсации используют дициклогексилкарбодиимид или дициклогексилкарбодиимид с добавкой 1-гидроксибензотриазола. Деблокирование ведут 50% -ным раствором трифторуксусной кислоты в хлористом метилене, а нейтрализацию 5%-ным раствором диизопропилэтиламина в хлористом метилене.
Отщепление полученных пептидов от полимера и деблокирование боковых защитных групп ведут с помощью безводного фтористого водорода, а очистку - гель- и обращеннофазовой хроматографией.
Пример 1. Синтез пептида g-L-глутамил-L-триптофана (1)
0,6 г (0,0018 моль) a-бензилового эфира N-трет.-бутилоксикарбонил-L-глутаминовой кислоты растворяют в 2,0 см3 диметилформамида, добавляют 0,2 г (0,0018 моль) N-оксисукцинимида, охлаждают до минус 5oC и при сильном перемешивании приливают к реакционной смеси раствор 0,37 г (0,0018 моль) N,N-дициклогексилкарбодиимида в 2,0 см3 диметилформамида. Смесь перемешивают при 0oC 1 ч и оставляют на 12 ч при комнатной температуре. Отфильтровывают дициклогексилмочевину, прибавляют к фильтрату 0,72 г (0,0022 моль) гидрохлорида бензилового эфира L-триптофана и 0,3 см3 (0,0023 моль) триэтиламина и перемешивают реакционную смесь 16 ч при комнатной температуре. Раствор фильтруют, разбавляют 50,0 см3 воды и экстрагируют три раза 40 см3 этилацетата. Объединенные органические экстракты промывают последовательно 20,0 см3 воды, два раза по 20,0 см3 2 н серной кислоты, два раза по 20,0 см3 насыщенного раствора хлористого натрия и сушат безводным сернокислым натрием.
0,6 г (0,0018 моль) a-бензилового эфира N-трет.-бутилоксикарбонил-L-глутаминовой кислоты растворяют в 2,0 см3 диметилформамида, добавляют 0,2 г (0,0018 моль) N-оксисукцинимида, охлаждают до минус 5oC и при сильном перемешивании приливают к реакционной смеси раствор 0,37 г (0,0018 моль) N,N-дициклогексилкарбодиимида в 2,0 см3 диметилформамида. Смесь перемешивают при 0oC 1 ч и оставляют на 12 ч при комнатной температуре. Отфильтровывают дициклогексилмочевину, прибавляют к фильтрату 0,72 г (0,0022 моль) гидрохлорида бензилового эфира L-триптофана и 0,3 см3 (0,0023 моль) триэтиламина и перемешивают реакционную смесь 16 ч при комнатной температуре. Раствор фильтруют, разбавляют 50,0 см3 воды и экстрагируют три раза 40 см3 этилацетата. Объединенные органические экстракты промывают последовательно 20,0 см3 воды, два раза по 20,0 см3 2 н серной кислоты, два раза по 20,0 см3 насыщенного раствора хлористого натрия и сушат безводным сернокислым натрием.
Упаривают полученный органический раствор при пониженном давлении, остаток обрабатывают 16,0 см3 50%-ного раствора трифторуксусной кислоты в хлористом метилене в течение 45 мин, снова упаривают при пониженном давлении и прибавляют 25,0 см3 изопропилового спирта.
К полученному раствору 0,3 г (0,00048 моль) фторацетата дибензилового эфира g-дипептида прибавляют 0,16 г (0,00096 моль) кислого углекислого натрия и 0,18 г (0,0024 моль) формиата аммония. Реакционную смесь нагревают до 50oC, прибавляют небольшими порциями 5,0 г 10% палладия на угле, суспензированного в 25,0 см3 воды, и перемешивают в течение 30 мин. Отфильтровывают катализатор, упаривают изопропиловый спирт при пониженном давлении, водный раствор лиофилизуют, прибавляют к остатку 20,0 см3 воды и снова лиофилизуют.
Полученный лиофилизат очищают обращенно-фазовой хроматографией на колонке Ultraprep C18, в градиенте (10-30%) ацетонитрила в 0,1% трифторуксусной кислоте. Содержание основного вещества по данным оптической плотности не менее 97% Структура подтверждается данными аминокислотного анализа гидролизата пептида, полученного в результате гидролиза в 3 н паратолуолсульфокислоте. Анализ выявил следующее соотношение аминокислотных остатков: Glu 1,0(1); Trp 0,9(1).
Пример 2. Синтез пептида g-L-глутамил-Nin-формил-L-триптофана (II)
Для синтеза пептида g-L-глутамил-Nin-формил-L-триптофана загружают в реакционный сосуд 0,6 г трет-бутилоксикарбонил-Nin-формил-L-триптофил-полимера. Содержание триптофана 0,50 ммоль/г полимера. Пептидную цепь далее наращивают по следующей программе (см. табл.1).
Для синтеза пептида g-L-глутамил-Nin-формил-L-триптофана загружают в реакционный сосуд 0,6 г трет-бутилоксикарбонил-Nin-формил-L-триптофил-полимера. Содержание триптофана 0,50 ммоль/г полимера. Пептидную цепь далее наращивают по следующей программе (см. табл.1).
Если нингидриновый тест положителен, повторяют конденсацию, начиная с п. 5.
Для синтеза пептида в качестве присоединяемого аминокислотного остатка используют a-бензиловый эфир N-карбобензокси-L-глутаминовой кислоты.
По завершении синтеза пептидил-полимер высушивают в вакуум-эксикаторе над пятиокисью фосфора до постоянной массы. 1 г пептидил-полимера переносят в реактор установки для работы с жидким фтористым водородом, добавляют 1 мл тиоанизола и 1 мл мета-крезола, охлаждают до температуры -78oC и в течение 10 мин перегоняют 10 мл безводного фтористого водорода. Реакционную смесь нагревают до 0oC и перемешивают в течение 60 мин, затем отгоняют фтористый водород. Остаток переносят на фильтр Шотта и промывают этилацетатом и эфиром. Пептид экстрагируют 50 мл 25%-ной уксусной кислоты, разбавляют водой и лиофилизируют.
После обессоливания на колонке с Sephadex G-10 полученный лиофилизат очищают обращенно-фазовой хроматографией на колонке Ultraprep C18, в градиенте (10-30%) ацетонитрила в 0,1% трифтроуксусной кислоте. Содержание основного вещества, по данным оптической плотности, не менее 96% Аминокислотный состав пептида соответствует теоретическому.
Пример 3. Синтез пептида g-L-глутамил-b-тиенил-D-аланил-амида (III).
Синтез, блокирование, очистка и характеристика пептида осуществляются теми же способами, что и пептида примера 2, за исключением того, что реакционный сосуд загружают 0,6 г третбутилоксикарбонил-b-тиенил-D-аланил-бензгидриламинополимера и выдерживают реакционную смесь при деблокировании в среде безводного фтористого водорода в течение 2 ч. Содержание b-тиенил-D-аланина 0,5 ммоль/г полимера.
Содержание основного вещества, по данным оптической плотности, не менее 97%
Пример 4. Синтез пептида N-метил-g-L-глутамил-L-триптофана (IV).
Пример 4. Синтез пептида N-метил-g-L-глутамил-L-триптофана (IV).
Синтез пептида (IV) осуществляется теми же способами, что и пептида (II) из примера 2, за исключением того, что на стадии конденсации в качестве присоединяемого аминокислотного остатка используют a-бензиловый эфир N-третбутилоксикарбонил N-метил-L-глютаминовой кислоты.
По завершении синтеза пептидил-полимер высушивают в вакуум-эксикаторе над пятиокисью фосфора до постоянной массы. 1 г пептидил-полимера переносят в реактор установки для работы с жидким фтористым водородом, добавляют 6,5 мл диметилсульфида, 0,8 мл мета-крезола и 0,4 мл этандитиола, охлаждают до температуры -78oC и в течение 10 мин перегоняют 2,5 мл безводного фтористого водорода. Реакционную смесь нагревают до 0oC и перемешивают в течение 120 мин, затем отгоняют фтористый водород и диметилсульфид. Остаток переносят на фильтр Шотта и промывают этилацетатом и эфиром. Пептид экстрагируют 50 мл 25%-ной уксусной кислоты, разбавляют водой и лиофилизируют.
После обессоливания на колонке с Sephadex G-10 полученный лиофилизат очищают обращенно-фазовой хроматографией на колонке Ultraprep C18, в градиенте (10-30%) ацетонитрила в 0,1% трифтроуксусной кислоте. Содержание основного вещества, по данным оптической плотности, не менее 97% Строение вещества доказывалось условиями синтеза и аминокислотным составом. Аминокислотный состав пептида соответствует теоретическому.
Пример 5. Синтез пептида N-ацетил- g-L-глутамил-L-триптофана (V).
Синтез пептида (IV) осуществляется теми же способами, что и пептида (II) из примера 2, за исключением того, на стадии конденсации в качестве присоединяемого аминокислотного остатка используют a-бензиловый эфир N-третбутилоксикарбонил L-глютаминовой кислоты. Дипептидил-полимер обрабатывают 50% трифторуксусной кислотой в хлористом метилене (2 раза, 2 и 30 мин), промывают хлористым метиленом (4 раза, по 2 мин) и инкубируют в смеси, содержащей 0,11 мл триэтиламина, 0,28 мл уксусного ангидрида и 5 мл хлористого метилена.
По завершении пептидил-полимер промывают хлористым метиленом (6 раз по 2 мин), высушивают в вакууме, деблокируют и очищают, как показано в примере 4 (пептид IV). Содержание основного вещества, по данным оптической плотности, не менее 96% Аминокислотный состав пептида соответствует теоретическому.
Иммуномодулирующая активность заявляемых пептидов оценивалась в тестах их влияния на уровень экспрессии маркера дифференцировки T-лимфоцитов q-антигена и по их влиянию на индукцию синтеза главного ростового фактора T-лимфоцитов-интерлейкина-2.
Пример 6. Влияние пептидов на дифференцировку предшественников Т-лимфоцитов костного мозга мышей.
Взвесь клеток костного мозга мышей, умерщвленных дислокацией швейных позвонков, получают путем промывания бедренных костей физиологическим раствором. Пептиды в различных концентрациях добавляют к полученным клеткам в среде Игла и инкубируют в течение часа при 37oC. Уровень экспрессии маркера дифференцировки Т-лимфоцитов q-антигена определяют методом комплементзависимого цитолиза с помощью антител к q-антигену (Terasabi P.I. et al. in Manual of Tissue Typing Techniques, Nathional Institute of Health, Bethesda, 1972, p. 50-55). Данные приведены в табл.2.
Пример 7. Влияние пептидов на продукцию интерлейкина-2 мышиными спленоцитами.
Данные по влиянию пептидов на индукцию синтеза главного ростового фактора Т-лимфоцитов-интерлейкина-2 (Gillis S. et. al. J. Immunol. 1978, v. 120, p. 2027-2032) приведены в табл. 3.
Препараты не токсичны, так как при 1000-кратном превышении терапевтической дозы (1 мг/кг) летальный исход не был обнаружен ни у одного животного.
Claims (1)
- Пептид общей формулы
где R Н, низший ацил или низший алкил;
а Х ароматическая или гетероароматическая аминокислота или ее производное,
обладающий иммуномодулирующей активностью.
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95120266/04A RU2091389C1 (ru) | 1995-11-28 | 1995-11-28 | Пептид, обладающий иммуномодулирующей активностью |
| US08/634,718 US5744452A (en) | 1995-11-28 | 1996-04-18 | γ-L-glutamyl containing immunomodulator compounds and methods therewith |
| PCT/US1996/017913 WO1997019691A1 (en) | 1995-11-28 | 1996-11-13 | Gamma-l-glutamyl containing immunomodulator compounds and methods therewith |
| US09/031,842 US5916878A (en) | 1995-11-28 | 1998-02-27 | γ-glutamyl and β-aspartyl containing immunomodulator compounds and methods therewith |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95120266/04A RU2091389C1 (ru) | 1995-11-28 | 1995-11-28 | Пептид, обладающий иммуномодулирующей активностью |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU95120266A RU95120266A (ru) | 1997-08-20 |
| RU2091389C1 true RU2091389C1 (ru) | 1997-09-27 |
Family
ID=20174241
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU95120266/04A RU2091389C1 (ru) | 1995-11-28 | 1995-11-28 | Пептид, обладающий иммуномодулирующей активностью |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2091389C1 (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999001103A3 (en) * | 1997-07-04 | 1999-03-25 | Vladimir Evgenievich Nebolsin | Peptide derivatives or pharmaceutically acceptable salts thereof, method for producing the same, use of said derivatives and pharmaceutical composition |
| RU2181124C2 (ru) * | 1998-03-20 | 2002-04-10 | Акционерное общество закрытого типа "Фармацевтическая фирма МЛК" | Глутамилтриптофан металлокомплексы, проявляющие иммуностимулирующие свойства, и способ их получения |
| RU2309730C2 (ru) * | 2006-04-18 | 2007-11-10 | Леонид Юрьевич Брежнев | Средство для стимуляции роста волос, его варианты и способ его получения |
| US8163702B2 (en) | 2006-04-20 | 2012-04-24 | Sciclone Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of melanoma |
-
1995
- 1995-11-28 RU RU95120266/04A patent/RU2091389C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1988, т.2, с.169. 2. Патент Франции N 2570278, кл. A 61 K 39/41, 1986. 3. Патент США N 4478823, кл. A 61 K 37/00, 1984. 4. Goldstein A.L. et al, Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 1972, v.69, p.1856-1863; 5. Шредер Э., Любке К. Пептиды. - М.:Мир, 1967, т.1, с.116, 398. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999001103A3 (en) * | 1997-07-04 | 1999-03-25 | Vladimir Evgenievich Nebolsin | Peptide derivatives or pharmaceutically acceptable salts thereof, method for producing the same, use of said derivatives and pharmaceutical composition |
| RU2181124C2 (ru) * | 1998-03-20 | 2002-04-10 | Акционерное общество закрытого типа "Фармацевтическая фирма МЛК" | Глутамилтриптофан металлокомплексы, проявляющие иммуностимулирующие свойства, и способ их получения |
| RU2309730C2 (ru) * | 2006-04-18 | 2007-11-10 | Леонид Юрьевич Брежнев | Средство для стимуляции роста волос, его варианты и способ его получения |
| US8163702B2 (en) | 2006-04-20 | 2012-04-24 | Sciclone Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of melanoma |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4737487A (en) | VIP type peptides | |
| CA1241643A (en) | Peptides affecting the immune regulation and a process for their preparation | |
| AU625598B2 (en) | Peptides having t cell helper activity | |
| US4190646A (en) | Polypeptide compositions and methods | |
| AU724781B2 (en) | Peptide and method of obtaining it | |
| NL8020195A (nl) | Werkwijze ter bereiding van thymosine alfa1 en derivaten daarvan. | |
| RU2107691C1 (ru) | Пептид и способ его получения | |
| EP0025897A2 (de) | Neue Peptide und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| CA1267996A (en) | Peptides which are active on the central nervous system and have an action on the cholinergic system | |
| CA1246055A (en) | N-.omega.-substituted hormonogens of vasopressin and its synthetic analogs | |
| CN101591377A (zh) | 氨基酰苯丙氨酰色氨酸或其衍生物、其合成方法和应用 | |
| RU2091389C1 (ru) | Пептид, обладающий иммуномодулирующей активностью | |
| RU2120298C1 (ru) | Иммуностимулятор и препарат на его основе | |
| Li et al. | The Synthesis of L-Histidyl-L-phenylalanyl-L-ornithyl-L-tryptophyl-glycine and L-Histidyl-D-phenylalanyl-L-ornithyl-L-tryptophyl-glycine and their Melanocyte-stimulating Activity | |
| US3749703A (en) | Asn15-bovine thyrocalcitonin | |
| RU2142958C1 (ru) | Пептид, обладающий иммуномодулирующей активностью, и препарат на его основе | |
| CA1105925A (en) | Pentapeptide compositions and methods | |
| CA1250400A (en) | Peptides having influence on memory processes, processes for producing them and pharmaceutical compositions containing them | |
| JPH09503200A (ja) | Ｃ反応性タンパク質断片から誘導されたオリゴペプチド | |
| JPH07188285A (ja) | Ｄ−グルコピラヌロン酸及びその誘導体、該化合物の製法並びに該化合物を構成成分として含有する薬理作用を有するペプチド | |
| JPH0137400B2 (ru) | ||
| JPS6365680B2 (ru) | ||
| EP0406931B1 (en) | New analogues of all-bond retroinverted thymopentin, the method for the synthesis of the same and their employment for the preparation of pharmaceutical compositions | |
| US3847892A (en) | Octapeptide solid phase-fragment process and pentapeptide intermediates | |
| US4258152A (en) | Pentapeptide modified resin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20050325 |
|
| QZ4A | Changes in the licence of a patent |
Effective date: 20050325 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20141129 |